刚地弓形虫DNA疫苗的研究进展

疫苗是防治弓形虫病的有效手段之一。弓形虫疫苗研制经历了全虫疫苗、虫体特异组分疫苗、基因工程疫苗、DNA疫苗等4个发展阶段。弓形虫DNA疫苗较传统疫苗虽有诸多优势,但尚处于研究起步阶段,单价DNA疫苗和佐剂增强型DNA疫苗可诱导机体对弓形虫感染产生细胞免疫和体液免疫,但免疫效果并不理想,复合多重DNA疫苗将是弓形虫疫苗今后的发展趋势。此外,弓形虫DNA疫苗的免疫保护机制和安全性还不十分清楚,进一步探讨疫苗免疫机制和弓形虫免疫逃避机制,将有助于研制高效、安全、实用的弓形虫DNA疫苗。     

弓形虫棒状体蛋白及其核酸疫苗研究现状

弓形虫病目前尚无理想的特效治疗药物和防治措施,研制安全便捷、保护力强的核酸疫苗是弓形虫病防治的有效策略。棒状体蛋白（Rhoptry protein, ROPs）是弓形虫在入侵宿主细胞过程中所分泌的一类蛋白,其在弓形虫入侵宿主细胞、纳虫空泡（Parsitophorous vacuole, PV）形成及胞内弓形虫的增殖调控等方面发挥着重要作用,是最具潜力的疫苗候选抗原分子之一。本文就ROPs家族重要成员特性、表达载体选择及其核酸疫苗在动物实验中的免疫原性,以及免疫保护作用等方面进行了概述。     

弓形虫病核酸疫苗研究进展

弓形虫病防制策略之一是研制安全有效的疫苗。弓形虫速殖子表面膜蛋白、棒状体蛋白、致密颗粒蛋白和微线体蛋白是重要的弓形虫抗原,这些抗原物质与弓形虫的侵袭性有关,且能诱导宿主的免疫反应。本文就近年来弓形虫病核酸疫苗研究现状作一综述。     

弓形虫表面抗原SAG1基因自杀性DNA疫苗的构建及免疫原性检测

目的 构建表达弓形虫表面抗原SAG1的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1并检测其免疫原性。方法 以弓形虫RH株基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1基因(GenBank No.HM776940.1),克隆至甲病毒复制子载体pDREP-eGFP中替换原有的eGFP基因,菌液PCR、双酶切及测序鉴定重组质粒。重组的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1经股四头肌注射并联合瞬时电穿孔免疫BALB/c小鼠,同时以原质粒pDREP-eGFP作为对照组,间隔3周后以相同条件再免疫1次,收集小鼠血清,以弓形虫裂解抗原Western blotting检测其诱导产生的特异性抗体。结果 从弓形虫基因组中PCR扩增得到1 011 bp长度的SAG1基因,成功构建重组质粒pDREP-SAG1。Western blotting结果显示,重组质粒免疫的小鼠血清能特异性地识别虫体抗原中的SAG1抗原。结论 成功构建了弓形虫自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1,能诱导小鼠产生特异性的抗体,具有免疫原性。     

弓形虫多表位抗原基因DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护性研究

目的以弓形虫多表位抗原基因DNA疫苗免疫小鼠,评价该疫苗对弓形虫感染产生的免疫保护作用。方法利用PCR技术和亚克隆技术,构建弓形虫多表位抗原基因真核表达重组质粒pcDNA3-MAG,以质粒纯化试剂盒大量制备质粒,同时分别以载体质粒pcDNA3和PBS液为空质粒对照和空白对照,与lipofectin按5∶2的比例混合后,经股四头肌注射免疫小鼠,间隔两周,连续免疫3次,通过检测小鼠血清中特异的IgG抗体、IFN-γ和IL-4含量,评价疫苗产生的体液免疫和细胞免疫水平。以强毒型RH株弓形虫感染免疫小鼠,统计小鼠的存活时间,评价疫苗产生的免疫保护性。结果经双酶切及DNA测序鉴定,所构建的重组质粒pcDNA3-MAG读码框架正确。与免疫前及载体质粒和空白对照组相比,小鼠免疫后产生特异性IgG抗体,并引发高水平IFN-γ。攻虫后,实验组较对照组小鼠存活时间明显延长。结论弓形虫多表位抗原基因DNA能诱导BALB/c系小鼠产生特异的细胞免疫和体液免疫,对弓形虫感染可产生一定的免疫保护性。     

日本血吸虫病核酸疫苗研究进展

血吸虫病是严重危害人类健康的寄生虫病,寻找新的杀虫药物和开发研制有效抗血吸虫疫苗已成为刻不容缓的工作。随着现代分子生物学及免疫学的发展,血吸虫病疫苗已由减毒活疫苗、基因重组抗原疫苗发展到核酸疫苗等阶段[1-2]。疫苗是20世纪最重要的公共卫生成就之一[3]。传统的疫苗研究策略是模拟自然感染,成功的疫苗多依赖于中和抗体的产生;虽然减毒活疫苗的免疫保护作用效果显著,但缺乏足够的虫源,且多种抗原成分不一定全部产生保护力,甚至可能导致免疫性病变或免疫抑制。基因重组抗原疫苗应用安全,但只能引起体液免疫,且蛋白的提取纯化步骤…     

弓形虫SAG1单基因疫苗与SAG1-ROP2复合基因疫苗的免疫效果观察

目的构建弓形虫主要表面抗原SAG1单价基因疫苗及其与棒状体蛋白ROP2的复合基因疫苗,接种BALB/c小鼠,观察疫苗的免疫保护性。方法构建重组质粒pcDNA3.1SAG1及pcDNA3.1SAG1ROP2。将两核酸疫苗分别免疫小鼠,ELISA法检测血清IgG抗体、IFNγ、IL4;流式细胞仪测定T细胞亚群;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。结果获得pcDNA3.1SAG1、pcDNA3.1SAG1ROP2重组质粒;pcDNA3.1SAG1ROP2组小鼠IgG抗体(P<0.05)、IFNγ(P<0.01)及CD8+细胞比例(P<0.05)均高于pcDNA3.1SAG1组;实验组组均未测到IL4;复合基因组感染弓形虫后生存时间较单基因组延长(P<0.01)。结论弓形虫不同生活阶段的抗原基因复合疫苗较单基因疫苗具有更好的免疫保护性。     

弓形虫抗原表位研究进展

弓形虫是一种呈全球分布的专性细胞内寄生原虫,广泛寄生于人和动物的有核细胞内,能引起严重的人兽共患寄生虫病。因此,对弓形虫及弓形虫病的研究日趋得到学者们的重视。由于弓形虫生活史较复杂,抗原成分多,每种抗原在体内诱导的免疫效应不同,实验证明,单价亚单位疫苗免疫效果和单一抗原诊断试剂检测效果均不理想,研制多表位疫苗和诊断试剂必然是一个新的发展趋势。     

弓形虫黏膜疫苗研究进展

弓形虫主要通过自然感染途径经口感染,引起人和温血动物的弓形虫病。弓形虫可能是世界上人类感染最普遍的寄生虫之一。弓形虫入侵宿主首先要通过黏膜组织的严密防御系统,即黏膜免疫系统,这是机体抗感染的第一道免疫屏障,诱导黏膜免疫应答。在共同黏膜免疫系统（CMIS）的作用下,全身多处黏膜相关淋巴组织（MALT）的免疫活性细胞被激活,黏膜部位产生大量的sIgA抗体,并形成庞大的免疫应答网络,发挥抗虫效应。该文将就近几年来弓形虫抗原诱导的黏膜免疫和黏膜疫苗的研究进行综述。     

弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗的研制

目的 研究廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2基因片段,克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备抗弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗。应用该疫苗免疫小鼠,通过ELISA检测血清抗体,Western blot鉴定该疫苗的免疫原性;应用RH株弓形虫进行动物攻击实验,评价其安全性及免疫保护性。结果 以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段,克隆于pc-DNA3质粒中,成功构建了pc-DNA3-ROP2重组质粒。测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。应用该疫苗免疫小鼠,能诱导产生强烈的细胞、体液免疫反应,使实验组小鼠攻虫感染后的存活时间明显延长,攻虫感染192 h后的存活率为77.8%,空质粒及PBS对照组存活率为0,差异有统计学意义（P〈0.001）;实验全程免疫小鼠未发生毒性及异常反应。结论 该核酸疫苗具有很强的免疫原性,安全可靠,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用,具有很好的开发应用价值。     

弓形虫病疫苗研究进展概述

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,能引起人畜共患弓形虫病,严重威胁着人类健康且对畜牧业的发展造成巨大的经济损失。研制安全有效的疫苗是防制弓形虫病的策略之一。目前,弓形虫病疫苗包括灭活疫苗、减毒活疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗和卡介苗。本文对弓形虫病疫苗的研究现状进行了综述。     

从卡介苗到核酸疫苗谈结核病的预防

目的讨论结核病的最佳预防手段。方法综述传统卡介苗和多种基因工程疫苗对结核病的保护作用和面临的问题。结果卡介苗作为一种传统的预防结核病的疫苗，在学术界其保护作用有争议，研发新的结核病疫苗已经成为趋势。结论基因工程疫苗将是下一个安全、有效、有可能代替卡介苗的结核病疫苗。     

结核病DNA疫苗及其作用机制研究进展

为实现到2050年在全球范围内根除结核病(Tuberculosis,TB)这一宏伟目标,迫切需要开发新的TB疫苗和疫苗接种策略.虽然卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)在保护儿童免受粟粒性结核和结核性脑膜炎等方面获得了成功,但其对成人肺结核(Pulmonary tuberculosis,PT...     

Nanoparticles in influenza subunit vaccine development: Immunogenicity enhancement

The threat of novel influenza infections has sparked research efforts to develop subunit vaccines that can induce a more broadly protective immunity by targeting selected regions of the virus. In general, subunit vaccines are safer but may be less immunogenic than whole cell inactivated or live attenuated vaccines. Hence, novel adjuvants that boost immunogenicity are increasingly needed as we move toward the era of modern vaccines. In addition, targeting, delivery, and display of the selected antigens on the surface of professional antigen‐presenting cells are also important in vaccine design and development. The use of nanosized particles can be one of the strategies to enhance immunogenicity as they can be efficiently recognized by antigen‐presenting cells. They can act as both immunopotentiators and delivery system for the selected antigens. This review will discuss on the applications, advantages, limitations, and types of nanoparticles (NPs) used in the preparation of influenza subunit vaccine candidates to enhance humoral and cellular immune responses.     

布鲁氏菌病新型疫苗研究进展北大核心CSCD

布鲁氏菌病(简称布病)是一种严重危害人类及动物健康的人兽共患传染性疾病,接种疫苗是控制布病流行的有效手段之一,而目前还没有获得许可的疫苗来预防人类布病,兽用疫苗存在毒力恢复及不能区分疫苗接种与野菌株感染的不足。随着基因工程、分子克隆等技术的日益发展,重组蛋白疫苗、DNA疫苗、纳米颗粒疫苗、载体疫苗等新型疫苗相关研究逐渐成为布病疫苗领域的研究热点。本文就近十年出现的新型布病疫苗研究进展情况作一综述,以期为开发更为有效、安全的布鲁氏菌病新型疫苗提供新的思路。     

人轮状病毒疫苗的研究进展

轮状病毒(RV)是引起全球5岁以下婴幼儿腹泻最重要的病原之一,普遍流行于发达国家和发展中国家,然而在发展中国家该病的病死率较高。由于目前RV腹泻尚无有效治疗药物,并且改善卫生条件对预防RV感染并无明显的效果。因此,疫苗是目前证实能预防和控制RV腹泻唯一有效的手段。尽管RV疫苗研制已取得很大的进展,由于轮状病毒毒株的多样化和流行分布很广,故而继续研制一种新的适合的安全、有效的RV疫苗显得尤为重要。本文针对人RV疫苗的研究进展、质量控制、保护效力及安全性评价作一综述,以期促进后期相关研究。     

Evaluation of the immune response in BALB/c mice induced by a novel DNA vaccine expressing GRA14 against Toxoplasma gondii

Toxoplasma gondii can cause severe and even fatal disease in human beings and animals. Effective vaccines may contribute to control toxoplasmosis. GRA14, a novel secreted dense granule protein of T. gondii, has been proposed as a vaccine candidate due to its intervacuolar transport and unique topology in the parasitophorous vacuole membrane. In this study, we constructed a DNA vaccine encoding GRA14 of T. gondii. BALB/c mice were immunized intramuscularly three times at 2 week intervals and challenged with T. gondii RH strain 5 weeks later. The immune responses were evaluated using lymphocyte proliferation assay, cytokine and antibody measurements. In addition, the survival times and parasite load of mice challenged with the virulent T. gondii RH strain were evaluated. The results showed that the mice immunized with pcGRA14 induced both enhanced specific humoral and Th1 cellular immune responses, and also mice immunized with the pcGRA14 showed an increased survival time and decreased parasite load compared with control groups (P<.05). The results indicated, for the first time, that the GRA14 is a potential DNA vaccine against toxoplasmosis.     

DNA疫苗免疫途径的研究现状

核酸疫苗的接种有多种途径,包括肌内、皮内、皮下注射途径、基因枪免疫、黏膜免疫途径等。不同免疫途径的免疫机制不同,所诱导的免疫保护力的强弱和维持的时间也不尽相同。该文对DNA疫苗免疫各种途径的研究现状作一综述。