姜黄素对大鼠肝纤维化的保护作用及其对肝脏NADPH氧化酶4表达的影响

目的：探讨姜黄素对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的影响及姜黄素能否抑制肝脏NADPH 氧化酶4（NADPH oxidase 4,NOX4）的表达.方法：腹腔注射CCl4（每周2次,共6周）诱导SD大鼠肝纤维化模型.将SD大鼠随机分成4组：正常对照组（n=10）、单纯给药组（n=10）、模型对照组（n=15）和姜黄素预防组（n=1 5）,姜黄素给药剂量为200 mg/kg体质量.检测血清中ALT、AST及活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）的水平;肝损伤和肝纤维化评估采用肝组织HE染色与天狼星红染色;分别用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测肝组织NOX4的表达.结果：姜黄素能减轻CCl4诱导后大鼠的肝损伤与肝纤维化,抑制血清ROS的产生.与模型对照组相比,姜黄素预防组的肝纤维化大鼠肝脏中NOX4 mRNA与蛋白表达水平显著降低.结论：姜黄素能减轻CCl4诱导大鼠发生的肝损伤与肝纤维化,其效应可能与抑制肝脏NOX4过表达有关.     

甘草酸对CCl4肝纤维化大鼠肝组织smad7免疫组化表达的影响

目的：利用CCl4诱导肝纤维化动物实验模型，研究甘草酸治疗前后smad7的变化，揭示甘草酸抗肝纤维化的分子生物学机制。方法：将89只雄性大鼠随机分成3组：正常对照组24只；ccl4组33只；甘草酸治疗组32只。其中甘草酸治疗组腹腔注射o．2％的甘草酸氨水溶液，每周3次。应用免疫组织化学法检测不同时期（1、2、4．8周）3组大鼠Smad7的表达。结果；研究发现甘草酸在肝纤维化发生的各个阶段均能改善肝脏的病理变化，且其作用在肝纤雏化的后期更为明显。在甘草酸治疗组中Smad7的表达在第4周明显超过CCl4组。结论：甘草酸能改善CCl4诱导肝纤维化大鼠的病理变化。甘草酸抑制肝纤维化的作用机制之一是通过增强Smad7的表达实现的。     

即刻早期基因锌指结构9在肝纤维化大鼠肝脏中的表达

目的：通过研究肝纤维化大鼠肝组织锌指结构9（zinic finger9，ZF9）基因的表达及其变化，初步探讨ZF9在大鼠肝纤维化发生中的作用。方法：雄性SD大鼠，随机分为正常组、1周组、4周组和8周组，皮下注射40％植物油四氯化碳（CCl4），并分别于注射后1、4、8周取肝组织免疫组化检测转化生长因子-β1（TGF-β1）蛋白，RT-PCR检测ZF9 mRNA水平．苦味酸-酸性品红染色观察胶原纤维表达变化。结果：（1）正常大鼠肝组织ZF9基因少量表达，模型组大鼠注射CCl4 1周后其表达增强，注射CCl4 4周后明显增强，8周时仍呈高表达。（2）正常大鼠TGF-β1在少许肝窦周细胞和汇管区部分间质细胞着色，大鼠注射CCl4 1周后，上述着色细胞增多，范围增加，注射CCl4 4周后，TGF-β1表达进一步增加，第8周TGF-β1表达更加丰富，部分肝细胞也可见表达。（3）正常肝组织几乎不表达胶原，模型组注射CCl4 1周后可见胶原有少量着色，到第4和第8周表达明显增多。结论：ZF9基因转录水平在肝纤维化的形成过程中逐渐增加．并与TGF-β1的表达同步，与胶原纤维的增加一致，可能通过活化肝星状细胞促进肝纤维化的发生。     

CCl4攻击小鼠致肝纤维化血清IL-4、IL-6、IL-8表达的影响

目的：观察CCl4攻击小鼠致肝纤维化血清IL-4、IL-6、IL-8的动态变化规律及其表达的影响。方法：将小鼠分为4组：雌、雄性小鼠对照组、雌、雄性小鼠体积分数为30%四氯化碳花生油组（皮下注射）。用ELISA及酶标仪方法检测小鼠血清IL-4、IL-6、IL-8的含量及肝脏、脾脏的表达情况。结果：CCl4攻击可使小鼠血清IL-6、IL-8含量增加,IL-4的表达进一步减少。结论：CCl4可能通过攻击小鼠IL-4、IL-6、IL-8的表达参与抗炎反应过程,细胞因子在肝纤维化发病过程中起重要的作用。检测血清IL-4、IL-6、IL-8浓度的变化可作为了解其与肝纤维化的关系。     

水飞蓟宾卵磷脂复合物对肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-1表达的影响

目的：应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型，研究水飞蓟宾卵磷脂复合物（SPC）对纤维化肝组织中TIMP-1表达的影响。方法：70只大鼠随机分为正常对照组、模型组、SPC干预组、模型对照组及SPC治疗组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型。按6期分类法评价各组肝纤维化程度。应用RT—PCR检测各组肝组织中TIMP-1 mRNA水平；应用免疫组织化学技术检测各组动物肝组织TIMP-1的表达。结果：SPC干预组与治疗组的大鼠肝纤维化程度、肝组织中TIMP-1 mRNA水平及肝组织中TIMP-1的阳性表达均分别较模型组与模型对照组显著减轻与下降。结论：SPC能明显改善纤维化肝组织病理改变和减轻肝纤维化程度，抑制TIMP-1的表达是其抗肝纤维化的机制之一。     

β-arrestin1通过活化p38信号转导通路激活肝星状细胞促进肝纤维化

目的 探讨β-arrestin1(ARRB1)在肝纤维化中的作用，阐明ARRB1和p38信号转导通路诱导肝星状细胞活化从而促进肝纤维化的机制。方法 选取C57BJ/6L背景的雄性小鼠12只，随机分为对照组和模型组，每组6只小鼠，采用浓度为20%的四氯化碳诱导肝纤维化小鼠模型，并于临床收集肝硬化患者的肝组织及健康对照志愿者的肝组织样本。采用HE和天狼星红染色来评估肝纤维化情况。通过免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测ARRB1、p38、磷酸化p38(pp38)及纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白的表达水平。在人肝星状细胞LX2中使用转化生长因子-β(TGF-β)细胞因子诱导其活化，并分析ARRB1的表达水平；进而利用小干扰RNA和质粒沉默或者过表达ARRB1，同时配合p38特异性抑制剂（SB203580），揭示两者的调控关系。结果 在肝纤维化组织中ARRB1表达升高，p38信号活化增强（P均<0.05）。在肝星状细胞LX2中，TGF-β可以激活肝星状细胞并表达ARRB1和增强p38信号。ARRB1表达的升高或抑制可以相应地影响p38信号从...     

大鼠肝脏白细胞介素-1α和白细胞介素-6的表达与肝纤维化的相关性分析

目的:观察白细胞介素-1α(IL-1α)和白细胞介素-6(IL-6)在肝纤维化大鼠肝组织中的表达并分别分析它们与肝纤维化的相关性.方法:用二甲基亚硝胺建立大鼠肝纤维化模型,并以秋水仙碱进行抗纤维化处理.大鼠肝脏组织的石蜡切片分别进行HE染色和免疫组织化学染色,观察肝脏病理学变化和IL-1α、IL-6表达,并检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸 (HA)、层粘连蛋白(LN)水平.结果:(1)肝纤维化模型组大鼠IL-1α、IL-6的表达水平均显著高于正常对照组和秋水仙碱治疗组(P ＜0.01).(2)IL-1α、IL-6的表达分别与肝纤维化病理学分级、HA、LN明显相关(P＜0.01).结论:(1)细胞因子IL-1α、IL -6在肝纤维化形成中发挥重要作用;(2)肝脏IL-1α、IL-6的表达水平可反映肝纤维化程度,可作为药物疗效评价的客观指标之一.     

TGF-β1多肽疫苗抗肝纤维化的鉴定

目的 鉴定转化生长因子β1（TGF-β1）的优势抗原表位偶联钥孔戚血蓝素（KLH）蛋白人工合成多肽疫苗对SD大鼠的免疫原性,并探讨对SD大鼠实验性肝纤维化的抑制效应.方法 人工合成TGF-β1优势抗原表位多肽偶联KLH蛋白后,作为多肽疫苗免疫SD大鼠.40只SPF级SD大鼠随机分为4组,即正常对照组、佐剂对照组、造模组（CCl4诱导）、多肽疫苗组,每组各10只,采用CCl4复合因素诱发大鼠肝纤维化模型.多肽疫苗组动物第1、14、28天连续三次每次腹股沟处及腋窝处多点注射50 μg 0.5ml乳剂（相同体积的弗氏佐剂加合成肽）,此后每隔7d免疫一次无任何佐剂的合成肽（50 μg0.5 ml水剂）,共免疫10周;造模组及多肽疫苗组自第3周起首次皮下注射40％ CCl4橄榄油溶液2 ml/kg,以后每周2次背部皮下注射40％ CCl4橄榄油溶液1.5 ml/kg、30％乙醇6 ml/kg隔日灌胃并给予高脂饮食连续造模8周.正常对照组大鼠同时给予相同剂量的橄榄油溶液皮下注射;佐剂对照组大鼠同期给予注射用水加弗氏佐剂0.5ml乳剂.第10周处死所有大鼠,ELISA检测血清TGF-β1抗体、肝纤维化指标（HA、Ⅳ-C）,全自动生化仪检测血清ALT、AST、TBIL、ALB和GLB,碱水解法检测肝脏羟脯氨酸（Hyp）含量,并进行肝脏病理检查.结果 TGF-β1多肽疫苗可以诱导SD大鼠产生一定量的抗TGF-β1抗体,但是与对照组比较没有统计学差异（P＞0.05）.多肽疫苗组生化指标ALT、AST、TBIL与造模组比较有统计学差异（P＜0.05）,但是血清HA、Ⅳ-C含量及肝脏Hyp含量与造模组相比并没有统计学差异（P＞0.05）.HE、VG染色可见多肽疫苗组较造模组肝组织病理变化及纤维化程度无明显差异.结论 TGF-β1多肽疫苗可以诱导SD大鼠产生一定量的抗TGF-β1中和抗体,且可能具有保肝作用,但其干预治疗实验性大鼠肝纤维化的疗效较差,有待进一步研究.     

干扰素α-2a与肝纤维化大鼠肝星状细胞的凋亡

背景：干扰素α-2a改善肝纤维化的机制直到目前仍尚未阐明。目的：进一步验证干扰素α-2a对C14诱导大鼠肝纤维化模型中肝星状细胞凋亡的影响。方法：建立CC14诱导肝纤维化模型,健康SD雌性大鼠50只,采用随机对照原则将SD大鼠分成5组,即生理盐水对照组、纤维化模型组、6×10^4U／kg干扰素α-2a干预组、12×10^4U／kg干扰素α-2a干预组及6×10^4U／kg干扰素α-2a对照组。造模8周时取肝组织标本,分别进行肝纤维化指标检测;RT-PCR分析肝组织bcl-2、bax的表达;免疫组织化学染色用a平滑肌肌动蛋白对活化的肝星状细胞进行标记。结果与结论：肝组织病理形态显示CC14诱导肝纤维化成功建立,表现为纤维化模型组汇管区周围纤维化明显,有芒状纤维和纤维间隔形成,各干扰素α-2a干预组肝纤维化有不同程度缓解。纤维化模型组有大量a平滑肌肌动蛋白阳性表达,6×10^4U／kg干扰素α-2a干预组a平滑肌肌动蛋白阳性表达较纤维化模型组减少,12×10^4U／kg干扰素α-2a干预组更少,6×10^4U／kg干扰素α-2a对照组未见a平滑肌肌动蛋白阳性表达。结果提示干扰素α-2a能下调CC14诱导肝纤维化bcl-2的表达,及上调bax的表达。提示干扰素α-2a阻断CC14诱导肝纤维化机制存在通过调节bcl-2、bax的表达,诱导肝星状细胞凋亡途径,该调节作用可能与干扰素α-2a剂量相关。     

外源性硫化氢对大鼠肝纤维化胶原合成和凋亡调节蛋白Bcl-2及Bax表达的影响

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠的胶原合成和凋亡调节蛋白Bcl-2及Bax的影响。方法将80只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、低剂量硫氢化钠(NaHS)组和高剂量NaHS组。处死大鼠后用HE染色及Van Gieson染色观察胶原合成、肝纤维化程度并分级,TUNEL染色了解肝细胞凋亡并以免疫组化法检测细胞凋亡指标Bcl-2及Bax。结果模型对照组大鼠肝胶原合成活跃,肝纤维化程度均达到Ⅲ^Ⅳ期,Bax在第6周末表达达最高峰,而Bcl-2则在第8周末表达达高峰,高剂量和低剂量NaHS组肝胶原合成减少,且肝纤维化程度明显减轻,多处于ⅠⅣ期,Bax在第6周末表达达最高峰,而Bcl-2则在第8周末表达达高峰,高剂量和低剂量NaHS组肝胶原合成减少,且肝纤维化程度明显减轻,多处于Ⅰ^Ⅱ期(P<0.01),肝细胞凋亡减少,Bcl-2及Bax的表达下降,与模型对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);并且各指标在高剂量NaHS组与低剂量NaHS组比较差异亦有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。此外,至第8周末,高剂量NaHS组部分指标已接近正常。结论外源性H2S可以减少CCl4诱导的大鼠肝纤维化胶原合成,减轻肝纤维化程度,下调凋亡调节蛋白Bcl-2及Bax的表达,发挥重要的抗大鼠肝纤维化作用,且与剂量呈正相关。     

双虎清肝颗粒对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠TGF-β1-smads信号通路的干预作用及肝脏组织学的影响

【目的】探讨双虎清肝颗粒对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠TGF-β1-smads信号通路的干预作用及肝脏组织学的影响。【方法]Sprague-Dawley大鼠60只,分为正常对照组（A组）、模型组（B组）、双虎清肝颗粒小、中、大剂量组（C1,c2,c3组）、水飞蓟素对照组（D组）。除A组外,均经皮下注射四氯化碳8周,后各治疗组给予不同剂量双虎清肝颗粒8周,D组予水飞蓟素8周,ELISA法检测大鼠血液TGF-13l,免疫组化检测smad3及smad7在肝组织内的表达及定位,肝组织作常规HE及Masson染色,观察脂肪变、炎症及纤维化程度。【结果】TGF-β1：与B组比较C1、C2、C3、D组（P〈O．05）,A组（P〈O．01）。smad3：与B组比较C1、C2、C3、D组（P〈0．05）,A组（P〈0．01）。Smad7：与B组比较C1、C2、c3、D组（P〉0．05）,A组P〈0．01。组织学：A组无异常;B组明显的纤维化和脂肪变性表现;C1、c2、c3、D组：不同程度的纤维化和脂肪变表现,从C1开始至C3程度逐渐减轻,D组和C3组接近。各组大鼠肝纤维化病变半定量：与B组比较,各组大鼠（P〈O．05）。【结论】双虎清肝颗粒能够通过抑制TGF-β1,及smad3的生成而显著改善四氯化碳所诱发的肝纤维化大鼠肝脏组织学的变化并且有量效关系。     

犬肝纤维化MR弥散加权成像及VEGF表达与病理对照研究

目的：分析磁共振弥散加权成像参数ADC值、eADC值及VEGF表达水平在中华田园犬肝纤维化进程中的变化规律;并与肝脏组织常规病理结构改变进行对照分析,探讨肝纤维化的诊断方法。方法：采用腹腔注射50%四氯化碳（CCL4）油溶液配合高脂饮食,建立犬肝纤维化的动物模型,定期对其行MR常规扫描、DWI及肝穿刺,对肝脏组织进行常规病理学染色及VEGF免疫组织化学染色,根据病理分期分组,分析各组ADC值、eADC值及VEGF表达水平的变化规律及与肝纤维化的相关性。结果：各期肝纤维化模型：S0 （n=12）、S1 （n=9）、S2 （n=9）、S3 （n=10）、S4 （n=10）;纤维化程度加重,ADC值减低、eADC值增高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。ADC值及eADC值与肝纤维化程度有很好的相关性;随肝纤维化程度加重,VEGF表达水平明显增高。结论：四氯化碳油溶液腹腔注射配合高脂饮食可以成功建立不同分期犬肝纤维化模型。ADC值及eADC值能够定量分析不同程度的肝纤维化,是诊断不同程度纤维化较有意义的评价指标。VEGF可能在慢性肝病所致肝纤维化过程中起重要作用。     

非酒精性脂肪肝模型小鼠的建立

背景：以往非酒精性脂肪肝模型建立的常用诱导方法均有其局限性,因此,有必要建立高质量的非酒精性脂肪肝模型。目的：拟利用复合高脂饮食和低浓度四氯化碳诱导小鼠非酒精性脂肪肝模型。方法：取昆明小鼠随机分为3组：对照组,高脂模型组和高脂模型＋四氯化碳组。观察饲养第2,4,6和8周末肝脏形态和病理变化,测定第8周末血清丙氨酸氨基转移酶,天冬氨酸氨基转移酶,胆固醇和三酰甘油,以及肝脏胆固醇和三酰甘油水平。结果与结论：复合高脂饮食＋5%四氯化碳腹腔注射的方式造模,第2周末开始出现炎症细胞浸润,第4周末出现少量脂滴,第6周末出现脂肪病变,第8周末在脂肪病变的基础上,部分小鼠出现了肝纤维化,8周末小鼠肝指数、血清丙氨酸氨基转移酶,天冬氨酸氨基转移酶,胆固醇和三酰甘油,肝脏胆固醇和三酰甘油浓度明显升高（P〈0.05或P〈0.01）。通过8周复合高脂饮食和5%四氯化碳腹腔注射成功建立小鼠非酒精性脂肪肝模型。     

rhKD／APPvar对实验性慢性肝损伤肝组织纤维化影响的研究

目的探讨重组人淀粉样蛋白前体Kunitz型蛋白酶抑制剂结构域变异体（reorganization human Kunitzprotease inhibitor domain of amyloid protein precursor variant,rhKD/APPvar）对实验性慢性肝损伤大鼠肝组织纤维化的影响。方法利用实验鼠的四氯化碳（CCl4）慢性肝损伤模型,采用胶原纤维染色检测方法,观察rhKD/APPvar对慢性肝损伤大鼠肝组织纤维化改变的影响。结果随着rhKD/APPvar剂量的增加,胶原纤维增生减轻。尤其以rhKD/APPvar大剂量组效果最为明显。结论 rhKD/APPvar能够显著抑制大鼠肝脏纤维化。     

肝纤维化模型大鼠肝功能变化与萱草活性成分黄酮苷的干预

背景：萱草活性成分黄酮苷被认为具有调整人体代谢,清除超氧阴离子自由基,清除体内代谢废物,护肝抗衰老,有很强的扶正固本之功效。目的：观察萱草活性成分黄酮苷对肝纤维化模型大鼠的肝功能的影响。方法：建造四氯化碳大鼠肝纤维化模型,建模的同时给予萱草活性成分黄酮苷干预。实验4周后采血,检测血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶、清球蛋白比值、高密度脂蛋白值,观察大鼠的进食、活动和生长状况。结果与结论：实验4周后,四氯化碳模型组大鼠死亡率为37.5%,黄酮苷组为12.5%。2周后,模型组大鼠体质量明显下降（P〈0.05）,黄酮苷组与阴性对照组比较未见显著性下降（P〉0.05）。黄酮苷组大鼠肝/体比值较模型组有所下降。黄酮苷较模型组血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶及清球蛋白比值显著降低,与阴性对照组差异无显著性意义。提示,在肝纤维化的病理进程中,采取萱草活性成分黄酮苷进行干预,可有效缓解大鼠肝损害改善肝功能。     

褪黑素保护大鼠肝纤维化的机制探讨

目的研究褪黑素保护大鼠肝纤维化的机制。方法用四氯化碳(CCl4)制造大鼠肝纤维化模型,同时予10 mg.kg-1.d-1褪黑素腹腔注射;在造模的第12周末处死大鼠,观察大鼠肝脏活化核转录因子κB(NF-κB)亚单位P65的表达。用α-SMA单抗标记活化的肝脏星状细胞(HSCs),计算其数量,同时测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)水平及ALB与球蛋白(GLO)比值,并进行肝脏病理学评分。结果褪黑素抑制了NF-κB亚单位P65的活化,活化HSCs数量减少,ALT、AST降低,而ALB和ALB/GLO明显提高,肝脏炎症和纤维化显著减轻(P<0.05~0.01)。结论褪黑素通过抑制NF-κB的激活,减轻肝脏炎症,抑制了HSCs活化,使肝纤维化减轻。     

Notch通路及Snail在大鼠肝纤维化发生发展中的作用

目的 探讨Notc h信号通路及锌指蛋白（Snail-1）表达在大鼠肝纤维化发生、发展中的作用。方法Wist ar大鼠60只,随机分为对照组、模型组、药物组,其中药物组及模型组皮下注射四氯化碳制备肝纤维化模型,正常组皮下注射生理盐水作为对照。从造模开始药物组以扶正化瘀方溶液4.6 g/kg灌胃,每天1次;模型组及正常组给予等量生理盐水灌胃,8周后将大鼠处死,取肝组织行苏木精-伊红染色评价肝纤维化程度,采用免疫组织化学方法检测Notch配体（Jagged-1）、Notch-1、Snail-1、E-钙黏素（E-cadherin）与A-平滑肌肌动蛋白（A-S MA）的表达。结果 模型组肝实质结构紊乱,肝细胞坏死、再生明显,胶原纤维沉积明显增加。药物组较模型组肝纤维化程度减轻,胶原沉积较少。与对照组相比,模型组肝组织Jagged-1、Notch-1、Snail-1、A-S M A表达明显升高,E-cadheri n表达下降（F=190.415～608.534,q=26.691～48.437,P〈0.01）;与模型组比较,药物组大鼠肝组织内Jagged-1、Notc h-1、Snail-1、A-S MA表达下降,E-cadherin表达升高（q=8.336～33 9.62,P〈0.01）。结论 Not ch通路及Snail蛋白可能参与肝纤维化的发生、发展过程,而抑制Notch通路及Snail蛋白可能是扶正化瘀方干预肝纤维化进展机制之一。     

羟基红花黄色素A对实验性大鼠肝纤维化TGF-β1-CTGF的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(HYSA)抗四氯化碳所致肝纤维化的作用及对TGF-β1/CTGF表达的影响,为探索HYSA抗肝纤维化治疗的应用提供实验依据。方法将SD大鼠36只随机分为对照组、模型组和HYSA组(每组12只),以四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,HYSA组给予10 mg/kg HYSA治疗,8周后通过HE染色和Masson染色对肝纤维化程度进行评分;免疫组织化学观察TGF-β1、CTGF表达。结果 HYSA组与模型组相比,在纤维沉积面积[(2.168±0.160)%vs.(3.984±0.398)%]、纤维化评分(9.250±4.126 vs.19.333±3.448)、TGF-β1表达(0.184±0.018vs.0.287±0.019)及CTGF表达(0.082±0.011 vs.0.129±0.015)差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 HYSA可明显减轻四氯化碳所致的肝纤维化的程度,HYSA可能通过抑制TGF-β1和CTGF的表达发挥抗肝纤维化的作用。