吉非替尼联合西妥昔单抗对人肠癌Lovo细胞作用的研究

目的 通过研究吉非替尼与西妥昔单抗的不同给药方案对人肠癌Lovo细胞的杀伤作用,探讨两药单药或联合使用对肠癌的作用结果。方法 通过PCR扩增后产物直接测序的方法筛选肠癌细胞,以药物联合效应测定方法,评价吉非替尼和西妥昔单抗不同时间、浓度、给药顺序对K-ras基因没有发生突变的肠癌Lovo细胞的抑制作用,流式细胞仪测定最佳方案对Lovo细胞周期分布及凋亡率的影响。结果 证实药物诱导细胞凋亡存在,吉非替尼联合西妥昔单抗对Lovo细胞的抑制作用优于单药的分别作用,而不同浓度、时间、给药顺序没有显著差异(P＞0.05)。结论 吉非替尼与西妥昔单抗联合应用对人肠癌Lovo细胞的增殖存在抑制作用。     

阿帕替尼联合曲妥珠单抗对胃癌细胞的协同增敏作用

目的观察阿帕替尼联合曲妥珠单抗杀伤胃癌NCI-N87细胞的协同增敏作用并探讨可能作用机制。方法CCK-8法检测空白对照组、曲妥珠单抗组(0.1、1、10μg/ml)、阿帕替尼组(1μmol/L)及曲妥珠单抗(0.1、1、10μg/ml)+阿帕替尼(1μmol/L)组对NCI-N87细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测NCI-N87细胞凋亡,Western blotting检测HER-2、VEGFR2、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果CCK-8检测提示曲妥珠单抗、阿帕替尼能够抑制NCI-N87细胞增殖,在一定浓度范围内作用呈浓度依赖性和时间依赖性(P<0.01);q值计算提示曲妥珠单抗与阿帕替尼具有协同抑制NCI-N87细胞增殖的作用。流式细胞术检测显示联合组NCI-N87胃癌细胞凋亡较单药组明显升高(P<0.05),其中空白对照组、阿帕替尼组(1μmol/L)、曲妥珠单抗(0.1μg/ml)组及曲妥珠单抗(0.1μg/ml)+阿帕替尼(1μmol/L)组的凋亡率分别为(3.0±1.28)%、(5.8±1.63)%、(8.0±3.92)%和(21.6±6.85)%。曲妥珠单抗+阿帕替尼组与空白对照组、曲妥珠单抗及阿帕替尼单药组比较,HER-2蛋白表达显著下调(P<0.05);曲妥珠单抗+阿帕替尼组与空白对照组比较,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01)。结论阿帕替尼联合曲妥珠单抗可能通过下调HER-2蛋白及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,协同抑制NCI-N87细胞增殖和促进细胞凋亡。     

Herceptin联合5-氟脲嘧啶和紫杉醇治疗胃癌的体外实验研究

目的：体外研究Herceptin联合紫杉醇和5-FU治疗胃癌的最佳方案和机制。方法：以Her-2阳性的NCI-N87和Her-2阴性的MGC803胃癌细胞株做为研究对象，应用MTT比色法观察紫杉醇、5-FU、Herceptin对细胞的生长抑制作用和联合效应；流式细胞术和West-Blot方法检测细胞周期、凋亡以及Her-2、AKT和P-AKT的表达。结果：紫杉醇联合5-FU对两种细胞的最佳方案均是先紫杉醇24h后5-FU48h，同一方案对MGC803细胞疗效明显强于N87细胞。Hereeptin联合紫杉醇和5-FU对MGC803细胞无作用，但对NCI～N87细胞．先化疗后Herceptin比单纯化疗的疗效明显增强。Herceptin明显下调N87细胞Her-2蛋白的表达和S期细胞数：Hereeptin单用或联合紫杉醇和5-FU均能不同程度的抑制N87细胞的P-AKT的表达，对AKT表达无影响。结论：紫杉醇联合5-FU治疗胃癌可能存在最佳方案和最适人群。化疗敏感性与Her-2过表达有关。     

紫杉醇与吉非替尼对人肺腺癌细胞SPC-A1生长及细胞周期的作用

背景与目的既往研究显示,细胞毒化疗药物与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)吉非替尼同时使用治疗晚期非小细胞肺癌无临床获益。本研究观察紫杉醇与吉非替尼序贯应用对人肺腺癌细胞SPC-A1生长及细胞周期的影响,探索二者序贯用药是否比单药更有效及其可能的细胞学机制。方法RT-PCR法及Western blotting法分别检测SPC-A1细胞EGFRmRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果SPC-A1细胞EGFRmRNA及蛋白呈过表达,在(1×10-14-1×10-6)M范围内,紫杉醇和吉非替尼均明显抑制SPC-A1细胞生长,作用呈浓度和时间依赖性。二者联合作用对细胞生长的影响与给药的次序有关:跟单药组比较,同时给药或先用吉非替尼后用紫杉醇组对抑制细胞生长无显著增强作用,先用紫杉醇后用吉非替尼组对抑制细胞生长有明显增强作用。细胞周期显示:紫杉醇和吉非替尼分别将SPC-A1细胞阻滞于G2期和G1期,同时用药组或先用吉非替尼后用紫杉醇组G1期细胞显著增多而G2期细胞显著减少,先用紫杉醇后用吉非替尼组G2期细胞显著增多而G1期细胞显著减少。结论紫杉醇和吉非替尼都能抑制SPC-A1细胞的生长,二者联合作用对细胞生长的影响与给药次序有关,同时给药或先用吉非替尼后用紫杉醇对抑制细胞生长无显著增强作用可能与它们对细胞周期的影响相关,先用紫杉醇后用吉非替尼对抑制细胞生长的增强作用可能与对细胞周期的影响无关。     

拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的作用及机制

目的 探讨拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的体外活性及其作用机制。方法 MTT法检测拉帕替尼、顺铂单独及二者联合对食管鳞癌细胞的增殖抑制作用，并计算两药联合作用指数。碘化丙啶（PI）染色或Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞周期进程及凋亡，Western blot法检测两药单独及联合处理后食管鳞癌细胞EGFR和HER2的磷酸化及下游信号分子的表达变化。结果 拉帕替尼联合顺铂可协同抑制食管鳞癌细胞的增殖，二者之间的联合作用指数小于1。拉帕替尼联合顺铂可使食管鳞癌细胞阻滞于G2/M期，并可显著诱导细胞凋亡。联合用药可显著抑制EGFR和HER2的磷酸化，并进而抑制两个主要的下游信号分子ERK和AKT的活化。结论 拉帕替尼联合顺铂在体外具有协同抗食管鳞癌活性，对EGFR和HER2过表达食管鳞癌是一种有前景的治疗策略。     

Sorafenib联合紫杉醇不同给药顺序作用于人肝癌细胞BEL-7402的效应

背景与目的：Sorafenib是一种多靶点的抗肿瘤药物,其治疗原发性肝癌的疗效已经初步得到证实。本研究应用Sorafenib与紫杉醇（paclitaxel,TAX）联合．观察两药不同的给药顺序作用于人肝癌细胞BEL-7402的不同效应,初步探讨产生这种差异的机制。方法：采用MTY法检测Sorafenib与紫杉醇单药作用于BEL-7402细胞的IC50流式细胞术检测Sorafenib与紫杉醇不同给药顺序作用后,BEL-7402细胞周期和凋亡率的变化。Western blot检测不同给药顺序作用后的BEL-7402细胞Bcl-2的表达情况。结果：Sorafenib和紫杉醇单药作用于BEL．7402细胞48h的IC50分别为（2.43±0.32） μg/mL、（1.89±0.72） μg/mL。分析Sorafenib、紫杉醇单药,先用紫杉醇再加入Sorafenib,先用Sorafenib再加入紫杉醇及紫杉醇与Sorafenib同时作用后BEL-7402细胞周期及凋亡率的变化,结果显示：①Sorafenib主要将细胞阻滞在S期,而紫杉醇主要将细胞阻滞在G2-M期。②先用紫杉醇再给予Sorafenib组细胞S期及G2-M期均有延长,且较其他组获得较高的凋亡率（36.43±2.29）％（P〈0．01）。Western blot显示先用紫杉醇再给予Sorafenib组BEL-7402细胞的Bcl-2表达的水平最低。结论：Sorafenib联合紫杉醇不同给药顺序作用于BEL-7402细胞,先应用紫杉醇诱导再序贯给予Sorafenib时细胞凋亡率更高：产生这种不同效应的可能机制为两种药物作用于不同的细胞周期,以及不同给药方法后的Bcl-2的表达水平不同。     

舒尼替尼联合多西他赛序贯给药作用于EGFR-TKIs抵抗的非小细胞肺癌A549细胞株的效应

目的:本研究旨在探索舒尼替尼单药对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)耐药的非小细胞肺癌A549细胞的效应,以及联合多西他赛不同给药顺序对A549细胞株的不同效应,揭示产生这种差异的机制。方法:MTT法检测舒尼替尼和多西他赛对A549细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),以及不同给药顺序的联合指数(combination index,CI)的变化。FCM检测舒尼替尼(3.5μmol/L)和多西他赛(5.0nmol/L)不同联合方式作用后的A549细胞周期变化。蛋白质印迹法检测不同给药顺序作用后细胞中p-AKT蛋白水平的变化。结果:舒尼替尼和多西他赛作用于A549细胞72h的IC50分别为3.6±0.41μmol/L和5.5±0.95nmol/L;且两者的联合抗增殖作用与给药顺序有关,先用多西他赛后再用舒尼替尼表现出明显的协同效应,而先用舒尼替尼后再用多西他赛和同时给药则产生拮抗作用。FCM检测结果显示,舒尼替尼和多西他赛分别将A549细胞阻滞于G0/G1期和S期;当先用多西他赛后再用舒尼替尼时,S期细胞显著增多,G0/G1期细胞则显著减少。蛋白质印迹结果显示,先用多西他赛后再用舒尼替尼时p-AKT/AKT比值下降最多。结论:舒尼替尼能抑制A549细胞的生长,先用多西他赛后再用舒尼替尼能产生明显的协同效应;推测产生这种差异的机制可能与细胞周期和生存通路蛋白表达的变化相关。     

拉帕替尼和紫杉醇在食管癌细胞中的抗肿瘤活性及其作用机制

目的 探讨拉帕替尼、紫杉醇和拉帕替尼联合紫杉醇对食管癌EC109细胞的抗肿瘤活性及作用机制.方法 MTT法检测拉帕替尼(1、2、4、8μmol/L)、紫杉醇(5、10、20、40μg/L)及联合使用对食管癌EC109细胞增殖的影响;分别检测拉帕替尼2μmol/L、紫杉醇10μg/L及联合使用对EC109细胞的侵袭、周期...     

紫杉醇联合紫草素对U87脑胶质瘤细胞的作用及机制初探

目的:探讨紫杉醇联合紫草素通过协同作用杀伤人脑胶质瘤的作用。方法:将不同浓度的紫杉醇与紫草素单药及两种药物半量联合作用于胶质瘤细胞后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,用划痕实验和Transwell法检测细胞生物学行为（迁移与侵袭）的影响,流式细胞技术检测细胞周期及凋亡率,Western-blot测定细胞外调节蛋白激酶（ERK）的蛋白表达。结果:紫杉醇与紫草素对胶质瘤细胞株U87细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,并且发挥协同作用。紫杉醇与紫草素单独以及联合应用抑制U87细胞迁移与侵袭。两种药物联合应用促进U87细胞凋亡,紫草素组G1期的RNA含量增多,紫杉醇组及联合应用组的G2期RNA含量显著增高。Western-blot结果显示两者联合应用时,p-ERK蛋白表达降低。结论:与紫杉醇或紫草素单用组相比,两者半量联用通过协同作用能显著抑制U87胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期。紫杉醇与紫草素的协同效应机制与二者联合应用抑制p-ERK蛋白表达相关。     

阿帕替尼联合大剂量丹参酮IIA对肺腺癌A549细胞株凋亡及Bim异构体的影响

目的:观察阿帕替尼与丹参酮IIA单药及不同时序联合用药方案对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响，并探究其作用机制。方法:培养肺癌A549细胞，用梯度浓度的阿帕替尼(0、5、10、20、40、80 μmol/L)及丹参酮IIA(0、5、10、20、40、80 μmol/L)分别处理A549细胞，应用CCK8法检测其对细胞增殖的抑制作用；流式细胞技术（Annexin V/PI 双染法）检测不同用药组作用48 h后的细胞凋亡率；半定量RT-PCR检测凋亡相关基因Bim异构体的表达情况。结果:阿帕替尼及丹参酮IIA单药对A549细胞的增殖均有抑制作用，且呈现浓度依赖性。两种药物联合使用时，联合用药组增殖抑制和凋亡率优于单药组和改变药物顺序的序贯组。结论:阿帕替尼与丹参酮IIA单药以及联合用药均可抑制A549细胞的增殖并促进凋亡；最佳联合方案为阿帕替尼联合丹参酮IIA同时使用，细胞凋亡率最高；其作用机制之一可能是联合用药通过转录和mRNA选择性剪接来上调Bim L基因的表达,从而促进细胞凋亡。