化痰通络中药对急性脑梗死模型大鼠溶栓治疗后内质网应激诱发神经细胞凋亡的影响

目的明确化痰通络中药对急性脑梗死模型大鼠溶栓治疗后内质网应激诱发神经细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将160只健康SD大鼠随机等分为4组,即假手术组、模型组、rt-PA组、rt-PA+化痰通络组,每组再随机分为6h、1d、3d、7d四个时相,假手术组以生理盐水造模作为对照,其余各组以栓子盐水悬液制造大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,造模成功后假手术组和模型组尾静脉注入生理盐水干预,rt-PA组尾静脉注入rt-PA干预,rt-PA+化痰通络组给予尾静脉注入rt-PA和化痰通络中药灌胃干预。采用原位末端标记法(TUNEL)观察各组大鼠不同时相海马CA3区神经元凋亡情况,并采用流式细胞仪计数凋亡神经元。通过Western blot法检测梗死脑组织GADD153/CHOP、TRB3和Akt蛋白表达水平。结果同一组内与6h时相比较,各组在24h、72h时相神经元凋亡具有显著性差异(P0.05),并以24h神经元凋亡最多。同一时相内与假手术组比较,模型组神经元凋亡显著升高(P0.05)。同一时相内与模型组比较,rt-PA组在24h、7d时相神经元凋亡明显低于模型组(P0.05),rt-PA+化痰通络组各个时相神经元凋亡均显著降低(P0.05)。与rt-PA组相比,rt-PA+化痰通络组在1d和3d时相神经元凋亡显著(P0.05),其余时相均有降低的趋势。rt-PA+化痰通络组TRB3表达受到抑制(P0.05),而Akt表达受到促进(P0.05)。结论化痰通络中药可明显减轻急性脑梗死模型大鼠溶栓治疗后内质网应激诱发的神经元凋亡,且其机制可能与抑制TRB3和促进Akt蛋白表达有关。     

化痰通络方对急性脑梗死溶栓后JNK mRNA表达的影响

目的:探讨化痰通络方对急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤后调控内质网稳态关键靶点JNK mRNA的影响。方法:将健康SD大鼠160只随机分为假手术组、模型组、rt-PA组、rt-PA+化痰通络法联合组各40只。除假手术组在注射时以生理盐水0.3 mL代替栓子溶液外,其余各组按大脑中动脉栓塞(MCAO)模型制备。rt-PA组予5.67 mg/kgrt-PA溶栓治疗,化痰通络法联合rt-PA组在溶栓基础上予9 mL/kg中药浓煎剂灌胃治疗,2次/d。每组分别于6 h及1、3、7天4个时相各取10只大鼠采用RT-PCR检测方法,观察梗死部位脑组织JNK mRNA表达变化情况。结果:与模型组相比,rt-PA组3、7天时JNK mRNA表达量均下降(P0.05),rt-PA+化痰通络组4个时相JNK mRNA表达量均下降(P0.05);与rt-PA组相比,rt-PA+化痰通络组在第1天时JNK mRNA表达量下降(P0.05)。结论:化痰通络方可通过降低内质网应激后细胞凋亡性信号途径中JNK mRNA表达水平减轻应激脑神经细胞不可逆性致死,达到防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤进一步发展的目的。     

化痰通络法对rt-PA溶栓后急性脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Caspase-12表达的影响

[目的]观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠经重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓治疗后内质网应激(ERS)神经细胞凋亡途径中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)蛋白和基因表达及神经元凋亡的影响。[方法]选择160只健康的SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、rt-PA组和实验组共4组。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),实验组与rt-PA组大鼠经尾静脉注入rt-PA(浓度:5.67 mg/kg)溶栓治疗,并联合化痰通络法中药灌胃(浓度:7.2 g/kg),每日2次。每组分别于为6 h、24 h、3 d和7 d 4个时相,观察梗死区域脑组织神经细胞Caspase-12蛋白和基因的表达,及神经元细胞凋亡的情况。[结果]与假手术组相比,模型组各时相Caspase-12蛋白与基因的表达量均明显增加(P0.05)。与模型组相比,除7 d时rt-PA组Caspase-12蛋白表达减少,差异无统计学意义(P0.05)外,rt-PA组和实验组在其他各时相Caspase-12蛋白与基因的表达均明显减少(P0.05)。与rt-PA组相比,实验组Caspase-12基因在1 d、7 d时表达量明显减少(P0.05),而Caspase-12蛋白表达差异无统计学意义(P0.05),但有下降趋势。[结论]化痰通络法中药可降低急性脑梗死大鼠溶栓治疗后梗死区域Caspase-12蛋白和基因的表达,该法可能通过影响该环节,进而部分抑制内质网应激后期神经细胞的凋亡,从而防治急性脑梗死溶栓后缺血/再灌注的发生与发展。     

内质网应激相关蛋白GADD153/CHOP在系膜增生性肾炎肾组织中的表达及中药干预研究

目的:研究系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)大鼠肾脏组织内质网应激相关蛋白生长停滞及DNA损伤基因153(GADD153)/C-EBP同源蛋白(CHOP)的表达、中药保肾颗粒对GADD153/CHOP表达的干预效果,探讨保肾颗粒治疗系膜增生性肾小球肾炎的作用机制。方法:大鼠随机分为中药组、对照组、模型组、空白组,中药组给予保肾颗粒、对照组给予雷公藤多甙片灌胃、空白组和模型组以等量生理盐水灌胃,连续14周。于造模后给药前1 d及实验结束后,检测各组大鼠血清肌酐(SCr),TUNEL检测大鼠肾脏细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)及Western blot法检测肾组织GADD153/CHOP的表达。结果:与模型组比较,对照组和中药组SCr均显著下降(P0.05)。空白组肾组织细胞凋亡不明显,模型组有大量的肾组织细胞凋亡,中药组及对照组凋亡较轻。与模型组比较,中药组及对照组GADD153/CHOP及GADD153/CHOPmRNA表达水平下降(P0.05)。结论:Ms PGN大鼠肾组织GADD153/CHOP表达增高,提示内质网应激可能参与了肾脏损害;而保肾颗粒对Ms PGN大鼠肾组织GADD153/CHOP过度表达有较好的抑制作用,且作用与雷公藤多甙片相当,是减轻肾脏损害的重要机制之一。     

化痰通络方对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后神经细胞自噬途径中Beclin1与LC3蛋白表达的影响

[目的]观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后神经细胞自噬途径中自噬相关蛋白(Beclin1)及微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白表达的影响。[方法]选择160只健康SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方联合rt-PA组(简称中药组),每组采用6 h、1 d、3 d和7 d 4个时相。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组与中药组分别给予尾静脉注入rt-PA(浓度为5.67 mg/kg)及联合化痰通络中药(浓度为7.2 g/kg)干预,每日2次。于相应时间点采用Western blot检测各组大鼠大脑皮质梗死区组织中Beclin1及LC3蛋白的表达。[结果]Western blot结果显示:与假手术组相比,模型组在4个时相中Beclin1和LC3蛋白的相对丰度值均明显增高(P0.05);采用rt-PA和rt-PA联合化痰通络法干预后,4个时相内Beclin1与LC3蛋白的相对丰度值均明显下降(P0.05);且rt-PA联合化痰通络组下降更加显著,与rt-PA组比较差异有统计学意义(P0.05)。[结论]化痰通络方可通过降低神经细胞自噬途径中Beclin1与LC3蛋白的表达,部分抑制神经细胞的过度自噬,进而保护神经细胞损伤,从而更好的防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注的发生与发展。     

化痰通络法对急性脑梗死大鼠神经细胞凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨化痰通络方对重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后的急性脑梗死大鼠内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)后期神经细胞凋亡途径中Caspase-3蛋白以及Caspase-9蛋白表达的影响。方法:将健康160只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、rt-PA组和实验组,每组各40只。采用自身栓子法以制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组与中药组分别给予SD大鼠尾静脉注入rt-PA(浓度:5.67 mg·kg-1)及联合化痰通络中药(浓度:7.2 g·kg-1)干预,,每日2次。每组分为6 h、1 d、3 d和7 d四个时相,并分别采用蛋白印迹法观察脑组织神经细胞中Caspase-9与Caspase-3蛋白的表达,采用TUNEL法观察各组大鼠脑神经元细胞的凋亡情况。结果:凋亡信号途径中Caspase-9蛋白以及Caspase-3蛋白的表达:与假手术组比较,模型组在4个时相中Caspase-9蛋白与Caspase-3蛋白表达量增加明显,差异具有统计学意义(P0.05);而与模型组比较,rt-PA组和实验组在4个时相中Caspase-9蛋白与Caspase-3蛋白的表达量均降低差异具有统计学意义(P0.05),与rt-PA组比较,实验组Caspase-9蛋白在1 d和7 d时表达量明显下低,Caspase-3蛋白在6 h、1 d、7 d时降低显著差异具有统计学意义(P0.05)。结论:化痰通络法可以通过降低内质网应激后期神经细胞凋亡途径中Caspase-9与Caspase-3蛋白的表达,并且部分抑制神经细胞的凋亡,从而防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注的发生与发展。     

电针预处理对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马葡萄糖调节蛋白78和生长停滞及DNA损伤基因153表达的影响

目的:探讨电针预处理对短暂性全脑缺血再灌注大鼠海马葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)和生长停滞及DNA损伤基因153(GADD 153)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、缺血组和电针预处理组,每组48只。采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型。电针预处理组于模型建立前5d电针刺激"大椎""百会"两穴,30min/d。分别于再灌注6、12、24、48h处死动物。Western blot方法检测海马GRP 78和GADD 153表达;HE染色法计数存活神经元数目;TUNEL法测定凋亡神经元数目。结果:与假手术组相比,缺血组再灌注12、24、48h海马存活神经元计数减少,各时点凋亡神经元数目增多(P0.05),缺血组在再灌注6、12、24、48h海马GRP 78和GADD 153表达上调(P0.05);与缺血组比较,电针预处理组再灌注24、48h时海马存活神经元计数升高,在12、24、48h凋亡神经元数目减少(P0.05),再灌注各时点GRP 78表达上调,GADD 153表达下调(P0.05)。结论:电针预处理对缺血再灌注大鼠有显著的脑保护作用,这可能与其上调脑缺血区GRP 78表达,下调GADD 153的表达,从而减轻内质网应激反应有关。     

化痰通络法对急性脑梗死缺血再灌注损伤TNAF-2及Ask1蛋白的影响

目的:探讨化痰通络法对于防治脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤时对细胞凋亡及与其相关的TNAF-2及Ask1蛋白的影响。方法:选择健康的SD大鼠160只,随机分为假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络法联合rt-PA组各40只。除假手术组在注射时以生理盐水代替栓子溶液外,其余各组按大脑中动脉栓塞(MCAO)模型制备。每组分6h,1 d,3 d,7 d四个时相。每组每个时相各取10只大鼠Western Blot检测方法,观察梗死脑组织神经细胞中TNAF-2及Ask1蛋白表达的变化。结果:对TNAF-2的影响:同一组内,和6 h相比,各组整体趋势均以1 d时相对丰度值为最高。同一时相内,与假手术组相比,模型组在四个时相中TNAF-2蛋白相对丰度值明显增高(P<0.05);与模型组相比,rtPA组和rt-PA+化痰通络组在四个时相TNAF-2蛋白相对丰度值均明显降低(P<0.05);与rt-PA组相比,rt-PA+化痰通络组在四个时相TNAF-2蛋白相对丰度值无明显变化(P>0.05);同一时相内,与假手术组相比,模型组在6 h、3d时相Ask1蛋白的相对丰度值均明显升高(P<0.05);与模型组相比,rt-PA组四个时相Ask1蛋白的相对丰度值均明显升高(P<0.05),rt-PA+化痰通络组四个时相Ask1蛋白的相对丰度值无明显差异(P>0.05);与rt-PA组相比,rtPA+化痰通络组在四个时相Ask1蛋白的相对丰度值均明显降低(P<0.05)。结论:化痰通络法可以降低TNAF-2及Ask1蛋白的表达,从而有效抑制脑缺血再灌注损伤后神经元细胞凋亡。     

化痰通络方联合rt-PA对急性脑梗死溶栓后神经功能缺损及皮质神经元微观形态的影响

目的:观察化痰通络法对急性脑梗死大鼠重组组织纤溶酶原激活剂( rt-PA)溶栓后神经功能缺损评分及神经元微观形态的影响,为化痰通络法防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤提供实验依据.方法:选择健康雄性SD大鼠80只,随机分为3组,即假手术组、模型组、化痰通络法联合rt-PA组(每组又分6,24 h,3,7d4个时相),采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(M CAO),化痰通络法结合rt-PA组于血栓注入后3h一次性由尾静脉缓慢注入2 mL 0.9％生理盐水+5.67 mg· kg-1rt-PA,并分别给予高、低剂量化痰通络方灌胃治疗(2.88,1.44 g·kg-1),每日2次.对大鼠不同时相进行神经功能缺损评分,并通过光电镜对大脑皮质缺血区神经元进行形态观察.结果:Bederson's评分:与模型组相比,治疗组神经功能缺损评分明显降低(P＜0.01),其中以rt-PA联合化痰通络方低、高剂量组神经功能缺损评分降低最为明显(P＜0.05).光镜下,在同一时相中,与模型组相比,治疗组皮质神经元少量变性,组问并无显著差别.同组不同时相比较,以7d神经元变性最多.电镜下,在同一时相中,与模型组相比,治疗组均起到保护神经元及内皮细胞的作用,但以化痰通络方联合rt-PA组更为显著.同组不同时相比较,以24 h神经元水肿最为严重,7d神经元破坏最为严重.各组横向比较,以化痰通络方联合rt-PA高剂量组24 h时相对神经元的保护作用最好,化痰通络方联合rt-PA低剂量组3d和7d对神经元形态保护为最佳.结论:化痰通络法可以减轻急性脑梗死溶栓后神经功能缺损症状,改善皮质微观形态学变化,同时针对溶栓后不同时相调整中药的用药剂量,可以更好的减轻溶栓后缺血再灌注损伤.     

化痰通络法对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后MMP-9酶原活化途径中金属蛋白酶MMP3与TIMP-1基因与蛋白表达的影响

目的观察化痰通络法对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后MMP-9酶原活化途径中金属蛋白酶MMP3与TIMP-1基因与蛋白表达的影响,为化痰通络法防治急性脑梗死溶栓后出血转化提供实验依据。方法选择健康雄性SD大鼠240只,随机分为6组,即假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络法(分高、常规、低中药剂量)联合rt-PA组,每组又分在6 h、24 h、72 h、7 d四个时相,采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组及中药组分别于血栓注入后3 h一次性由尾静脉缓慢注入5.67mg/kg rt-PA,并分别给予高、常规、低剂量中药灌胃治疗(药量分别为:18ml/kg、9ml/kg、4.5ml/kg),每日2次。采用Western Blot法检测化痰通络法干预rt-PA溶栓后MCAO大鼠皮质中MMP-9蛋白表达变化的基础上,分别采用RT-PCR法与Western Blot法检测其对MMP-9上游激活物MMP-3、TIMP-1基因与蛋白表达的影响。结果与假手术组相比,模型组内各个时相大鼠大脑皮质梗死区MMP-9含量均显著增加,具有统计学意义(P0.05);与模型组相比,rt-PA组MMP-9蛋白、MMP-3基因及蛋白表达量显著升高,而TIMP-1基因及蛋白表达呈下降趋势,差异具有显著性(P0.05)。同一组内不同时相比较,MMP-9蛋白表达量6h最低,并随时间延长逐渐递增,以72h时MMP-9蛋白表达量最高,7d时MMP-9蛋白表达量呈下降趋势,差异均具有统计学意义(P0.05);同一时相,与模型组比较,rt-PA组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组MMP-9的蛋白表达量皆有显著下降趋势(P0.01);与rt-PA组比较,中药中剂量组和中药高剂量组MMP-9的蛋白表达量仍有显著下降趋势(P0.05),虽无统计学意义,但在6h、1d时相以中药高剂量组降低MMP-9蛋白表达量更为明显,72h、7d时相则以中药中剂量组降低MMP-9的蛋白表达量趋势明显。同时与rt-PA组比较,中药中剂量组和中药高剂量组MMP-3表达均有下降(P0.05),且TIMP-1表达亦有上升趋势。结论化痰通络法联合rt-PA溶栓,可通过调控MMP-9上游不同活化途径中的关键因子,部分抑制其活化程度,保护血脑屏障完整性,同时针对溶栓后不同时相调整中药的用药剂量,可以更好的减轻溶栓后出血转化的发生与发展。     

化痰通络方对急性脑梗死大鼠溶栓后脑微血管内皮细胞构成蛋白基因表达的影响

目的： 观察化痰通络法对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）溶栓后脑微血管内皮细胞构成蛋白基因表达的影响,为化痰通络法防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤提供实验依据。 方法： 240只健康SD大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方低、中、高剂量联合rt-PA组（联合组）,每组40只,采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）,rt-PA组与化痰通络方联合rt-PA组于血栓注入后3 h一次性予以rt-PA溶栓治疗,后者联合给予低、中、高剂量（生药3.6,7.2,14.4 g·kg^-1）化痰通络方灌胃治疗,每日2次,分别于造模后6,24,72 h,7 d 4个时点,应用RT-PCR法观察不同时相大鼠皮质及海马紧密连接蛋白Occludin,claudin-1,Zonula occludins protins-1（ZO-1）基因的表达。 结果： 在不同时点,各实验组在不同脑组织中Occludin,claudin-1,ZO-1基因表达量均在6 h最高,24 h最低,72 h,7 d数值逐渐升高,且联合组升高趋势更明显。与组内6 h时比较,rt-PA组、联合低、中、高剂量组Occludin,claudin-1,ZO-1基因表达量多于24,72 h（P < 0.05）。而同一时点与模型组相比,联合中、高剂量组各时点Occludin,claudin-1基因表达量均明显升高（P < 0.05）。而ZO-1基因表达量虽具有相似变化趋势,但仅在24,72 h,7 d差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论： 化痰通络方联合rt-PA溶栓,可通过调控微血管内皮细胞构成蛋白Occludin,claudin-1,ZO-1基因的表达,进而保护血脑屏障完整性,防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤的发生与发展。     

化痰通络法治疗急性脑梗死100例随机对照临床研究

[目的]评价化痰通络法治疗急性脑梗死的临床疗效,为脑梗死急性期临床治疗方案提供依据。[方法]将符合纳入标准的急性脑梗死患者100例,随机分为中药组和对照组。两组患者均采用常规基础治疗,中药组加服化痰通络法中药。分别评估两组患者治疗有效率,记录两组患者治疗前后的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、随访至治疗后90 d,记录Barthel指数及改良Rankin指数评分情况。[结果]中药组有效率为92%,高于对照组的82%;在NIHSS评分、Barthel指数评分改善方面治疗组均优于对照组(P<0.05);在改良Rankin指数评估方面治疗组优于对照组,具有一定优势。[结论]化痰通络法中药疗效肯定,可改善急性脑梗死患者的神经功能状况,提高患者日常生活能力和社会活动参与能力,提升患者生存质量。     

骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎软骨细胞凋亡及胞外基质降解的影响

目的：通过骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡及胞外基质降解作用的研究,探讨骨灵膏及其拆方制剂对骨关节炎的作用机制。方法：选用60只雌性SD大鼠随机分为骨灵膏、骨膏、灵膏、塞来昔布、模型及正常组6组,每组10只,采用冷固法建立骨关节炎模型,造模成功后,骨灵膏、骨膏、灵膏均按10.41 mL·kg^-1·d^-1（相当于生药量33.31 g·kg^-1）灌胃,塞来昔布20.83 mg·kg^-1·d^-1灌胃,正常、模型组给予等量生理盐水灌胃,给药10周后,取大鼠膝关节软骨组织,分别以苏木精-伊红（HE）、番红-固绿（SA/FG）、番红-阿尔辛蓝（SA/AB）进行组织病理观察,根据改良的Mankin关节软骨病理评分标准进行分级评分,采用Western blot法检测基因153（CHOP/GADD153）蛋白的表达,通过荧光定量PCR检测软骨细胞B细胞淋巴瘤/白血病2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,基质金属蛋白酶-3（MMP-3）,基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）mRNA表达。结果：与正常组比较模型组能显著减低Bcl-2,TIMP-1 mRNA表达（P<0.01）及增加Bax,MMP-3 mRNA表达（P<0.01）。与模型组相比骨灵膏能明显下调ERS相关CHOP/GADD153蛋白的生成（P<0.01）、促进抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达及降低促凋亡基因BaxmRNA表达（P<0.01）,进而上调Bcl-2/bax,抑制软骨细胞的异常凋亡;同时,骨灵膏较模型组能显著降低MMP-3 mRNA的表达（P<0.01）、升高TIMP-1 mRNA的表达（P<0.01）,降低MMP-3 mRNA/TIMP-1 mRNA。结论：骨灵膏可能通过降低ERS途径相关蛋白GADD153的异常生成,进一步调控相关凋亡靶基因的表达而抑制软骨细胞的异常凋亡和阻止细胞外基质异常降解而阻止OA关节软骨退行性变,保护了关节软骨,其作用明显优于其拆方制剂骨膏、灵膏。     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠AQP1/a-ENaC表达的影响

[目的]探讨通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠肺水肿的可能作用机制。[方法]27只大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、中药组,每组9只。模型组与中药组尾静脉注射内毒素8 mg/kg,空白组大鼠静脉注射生理盐水。中药组在造模完成后给予通腑泻肺中药灌胃,每次0.01 m L/g,每日1次,共7 d,空白组与模型组予等量生理盐水灌胃。通过病理切片观察各组大鼠肺组织损伤情况,免疫组化染色方法检测肺组织水通道蛋白1(AQP1)和上皮细胞钠通道(a-ENa C)表达。[结果]模型组大鼠肺组织中AQP1和a-ENa C表达水平显著下降(P0.01);与模型组相比,中药组AQP1和a-ENa C表达显著升高(P0.05)。[结论]通腑泻肺方能增强ALI/ARDS大鼠AQP1和a-ENa C表达而促进其肺部水液代谢,从而发挥其改善肺水肿的作用。     

降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠肾保护作用及对肾组织Bcl-2和Bad表达的影响

目的观察降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠模型血液生化指标及对肾组织Bcl-2、Bad表达的影响,探讨降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护作用和可能机制。方法将60只SD大鼠随机选取10只为对照组,其余50只进行造模,造模成功后将大鼠随机分为模型组、贝那普利组和降脂通络软胶囊(25、50、100 mg/kg)组,每组各10只,各组按相应剂量给药,在给药的第4周末检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP)及血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;采用电镜、免疫荧光观察肾脏病理形态学变化,免疫组化及Real-time PCR法检测各组大鼠肾组织Bcl-2、Bad的表达情况。结果与模型组比较,各给药组UTP、TC、TG均有所降低(P0.05),各给药组TP、ALB均有所升高(P0.05)。降脂通络软胶囊50、100 mg/kg组与贝那普利组UTP、TC、TG、TP、ALB比较差异不显著(P0.05),效果优于降脂通络软胶囊25 mg/kg组(P0.05)。与对照组比较,各给药组及模型组BUN、Scr均未见明显变化,差异不显著(P0.05)。与模型组相比,各给药组大鼠肾组织中Bcl-2 mRNA的表达较模型组明显上调,Bad mRNA表达下调,差异显著(P0.05);降脂通络软胶囊50、100 mg/kg组与贝那普利组Bcl-2、Bad比较差异不显著(P0.05),效果优于降脂通络软胶囊25 mg/kg组(P0.05)。结论降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护作用可能与其上调肾组织中Bcl-2 mRNA表达,下调Bad mRNA表达,抑制足细胞凋亡、修复受损足细胞有关。     

补肺益阳化痰中药治疗对稳定期COPD患者的肺功能及生命质量的影响

目的:研究补肺益阳化痰中药治疗对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的肺功能及生命质量的影响.方法:将72例COPD患者随机分成观察组及对照组,每组36例,对照组仅使用西药治疗,观察组在对照组治疗的基础上联合补肺益阳化痰中药治疗,两组均1个月为1个疗程,6个疗程后观察两组患者肺功能、生命质量情况及药物不良反应.结果:观察组中医证候显效率(33.33％)、总有效率(83.33％)显著高于对照组(P＜0.01);肺功能改善程度优于对照组(P＜0.05);生命质量评分降低程度优于对照组(P＜0.05).两组治疗期间均无不良反应发生.结论:补肺益阳化痰中药可有效改善稳定期COPD患者的肺功能及生命质量,适合临床推广应用.