转录因子Sp1和Sp3对JurkatT细胞端粒酶活性的调节作用

目的：探讨转录因子Sp1、Sp3对Jurkat T细胞端粒酶活性和粒酶逆转录酶（hTERT）的调节作用。方法：用脂质体将Sp1、Sp3表达载体转入JurkatT细胞，用Western blotting方法检测蛋白表达水平，用端粒酶PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性并用银染显示端粒酶活性梯度；用RT－PCR方法检测hTERT mRNA水平。结果：Sp1、Sp3载体转化36h的细胞Sp1、Sp3蛋白水平分别升高59．6％（P＜0．01）和36．8％（P＜0．05）；随着Sp1表达水平的增加，端粒酶活性和hTERT mRNA水平明显增加，增加率分别为38．5％（P＜0．05）和25．4％（P＜0．05）。而Sp3表达载体对端粒酶活性和hTERT mRNA水平无明显影响。结论：转录因子Sp1通过调节hTERT mRNA转录水平而调节Jurkat T细胞端粒酶活性，Sp3无此作用。     

姜黄素改变端粒酶活性对肝癌细胞体外增殖的影响

目的 观察姜黄素对人肝癌细胞株HepG2体外增殖和端粒酶活性的影响，为彰明其抗肝癌机制提供依据。方法 四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验检测细胞生长抑制率；流式细胞法检测细胞周期的分布；端粒片断重复扩增-酶联免疫吸附法（TRAP-ELISA）测定细胞端粒活性的变化；并用RT—PCR法检测细胞端粒酶hTERT—mRNA的表达。结果 姜黄素对HepG2细胞生长有显著的抑制作用，并呈明显的量效依赖性；不同浓度的姜黄素使G2／M期细胞比例明显增加，G1期／细胞比例明显降低；随姜黄素浓度的增加，HepG2细胞端粒酶活性依次下降；不同浓度提取物对HepG2细胞的hTERT—mRNA表达均有明显抑制作用，具有显著的量效关系。结论 姜黄素对HepG2细胞有明显的生长抑制作用，可能作用机制为诱导细胞周期G2／M期阻滞并抑制HepG2细胞端粒酶hTERT-mILNA的转录，从而降低端粒酶的活性。     

RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性抑制的研究

目的:探讨RNA干扰技术使人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因沉默,对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的抑制作用。方法:针对hTERT基因设计构建多种siRNA表达载体,并转染至膀胱肿瘤BIU-87细胞,通过实时荧光定量、单四唑(MTT)检测端粒酶活性,观察siRNA表达载体对hTERT基因表达的影响。结果:实时荧光定量和MTT检测证明,所构建的载体能导致不同程度的hTERT基因沉默,并成功地抑制BIU-87细胞的生长。结论:RNA干扰膀胱尿路上皮癌细胞(BIU-87)端粒酶hTERT基因,能影响端粒酶基因的表达,为进一步研究端粒酶活性在膀胱尿路上皮癌中的作用奠定了基础。     

外源性端粒酶催化亚单位对人视网膜血管内皮细胞的影响

目的探讨外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)对人视网膜血管内皮细胞(hRCEC)端粒酶活性、相关基因表达和体外生存时间的影响。方法阳离子脂质体介导hRCEC转染;RT-PCR法检测人类端粒酶RNA组份(hTR)、端粒酶相关蛋白1(TEP1)及hTERT基因的表达;TRAP法检测端粒酶活性;细胞计数法绘制生长曲线。结果hTR、TEP1基因在hTERT转染hRCEC前后都表达,hTERT基因在转染前不表达,转染后24h及稳定转染克隆形成时表达,细胞停止分裂时又失去表达;转染前无端粒酶活性,转染后24h及稳定转染克隆形成时可检测到端粒酶活性,细胞停止分裂时端粒酶活性消失;稳定转染了hTERT基因后hRCEC的生存时间没有延长。结论hTERT转染可显著提高hRCEC中hTERT基因表达水平,hTERT基因表达与端粒酶活性一致,但只用hTERT转染的方法不能使hRCEC细胞生存时间延长。     

端粒酶逆转录酶显性负突变体对乳腺癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的：观察端粒酶逆转录酶显性负突变体（DN-hTERT）对乳腺癌细胞MCF7端粒酶活性的抑制作用.方法：将携带DN-hTERT基因的真核表达载体IRES2-EGFP空载体通过脂质体2000介导转入MCF7细胞,以G418进行稳定筛选,得到阳性克隆;倒置荧光显微镜观察转染细胞的生长情况;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞hTERT mRNA的表达;TRAP-ELISA方法检测转染细胞端粒酶活性.结果：MCF7细胞转染DN-hTERT后生长受到抑制;转染DN-hTERT的MCF7细胞（MCF7/DN）hTERT mRNA表达升高;改进端粒重复序列扩增法（TRAP-ELISA）检测MCF7/DN细胞端粒酶活性与转染空载体MCF7细胞（MCF7/I）比较显著降低（P＜0.05）.结论：DN-hTERT能特异性抑制MCF7细胞生长和端粒酶活性.     

化疗药物诱导肝癌细胞凋亡过程中端粒酶、端粒酶逆转录酶活性的变化

目的:探讨hTERT和端粒酶在化疗药物诱导凋亡过程中的作用及其意义。方法选择IC50剂量的三尖杉酯碱、长春新碱和足叶已甙处理肝癌细胞,采用TRAP法检测药物处理前后肝癌细胞端粒酶活性;应用流式细胞学检测细胞周期和细胞凋亡率;并利用Western Blotting检测药物作用后hTERT蛋白水平变化。结果三尖杉酯碱、长春新碱作用于肝癌细胞,明显降低hTERT蛋白表达水平,下调胞内端粒酶活性,并诱导细胞凋亡及周期阻滞;足叶已甙对肝癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白水平无明显抑制作用;化疗前后胞内hTERT水平和细胞凋亡率的变化呈明显负相关。结论化疗药物可能通过降低hTERT蛋白水平而下调了端粒酶活性,并诱导凋亡;hTERT蛋白水平可作为化疗敏感性指标。     

端粒酶与端粒酶催化亚单位在乳腺肿瘤组织中的表达及其意义

目的探讨端粒酶活性与端粒酶催化亚单位（hTERT）在乳腺肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用银染-聚合酶链反应-酶免法（TRAP-PCR—ELISA）法检测48例乳腺癌组织标本、48例相应癌旁组织标本、19例良性乳腺肿瘤组织标本、21例正常乳腺组织标本的端粒酶活性，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测hTERT的基因表达。结果端粒酶活性表达率和端粒酶催化亚单位hTERT基因表达率分别为：乳腺癌组为85．42％和89．58％；良性乳腺肿瘤组为42．11％和31．58％；相应癌旁组为14．58％和16．67％；正常乳腺组为0．00％，0．48％。乳腺癌组、良性乳腺肿瘤组、相应癌旁组及正常乳腺组之间均有非常显著性差异（P均〈0．001）；乳腺癌组端粒酶和端粒酶催化亚单位hTERT基因表达率与良性乳腺肿瘤组呈正相关（r分别为0．7982、0．6875，P均〈0．01）。结论端粒酶活性及其催化亚单位hTERT基因表达与乳腺肿瘤的形成和发展过程有关；端粒酶活性和端粒酶催化亚单位基因表达的检测，可作为乳腺肿瘤诊断、治疗、监测、预后的重要指标，具有较重要的价值。     

高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡与人端粒酶逆转录酶及端粒酶的关系

目的 研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞调亡与细胞端粒酶和端粒酶逆转录酶(hTERT)水平的关系。方法 在体外，以HL60细胞株细胞为对象，采用半定量RT—PCR法检测hTERT mRNA表达量；采用端粒重复序列扩增法(TRAP)—酶联免疫吸附试验(ELISA)检测端粒酶活性；采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 与空白对照相比，HHT能够下调hTERT mRNA的表达。HHT浓度为0．005—0．030μg／m1时，HL60细胞hTERT mRNA表达无明显变化；当浓度增至0．040—0．050μg／m1，hTERT mRNA表达量下降至检测不出。0．020μg／m1 HHT作用18h后，hTERT mRNA表达呈下降趋势，24h后端粒酶活性明显下降，两者的下降趋势基本相似，但hTERT mRNA表达下降幅度较端粒酶活性下降幅度更大。在HHT作用下，HL60细胞凋亡率增加，而端粒酶活性及hTERT mRNA水平下降，且与HHT浓度或作用时间相关。结论 HHT下调端粒酶活性可能与hTERT mRNA转录水平下降有关。通过下降hTERT mRNA转录和端粒酶活性可能是HHT诱导HL60细胞凋亡的原因之一。     

胃癌组织端粒酶活性与催化亚基hTERT表达的关系

研究胃癌、胃黏膜肠化生及正常黏膜组织端粒酶活性与人端粒酶催化亚基(hTERT)表达的相关性及端粒酶激活在胃癌发生中的作用.方法:通过端粒重复序列扩增(TRAP)和逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)方法测定3种胃癌细胞株、26例胃癌、10例胃黏膜肠化生和36例正常胃黏膜组织标本端粒酶活性和hTERT表达.结果:3种胃癌细胞株、24例胃癌组织有端粒酶活性;4例肠化生端粒酶活性较弱;36例正常胃黏膜标本未测到端粒酶活性.hTERT在26例胃癌组织、5例肠化胃黏膜中表达;正常胃黏膜无表达.端粒酶活性、hTERT表达与肿瘤的分期和病理分级无关.结论:hTERT在肿瘤形成的早期阶段表达,端粒酶的激活是胃癌形成的关键步骤.     

人胰腺癌端粒酶亚单位的表达及其意义

目的：探讨端粒酶亚单位表达水平与人胰腺癌发生的关系，以及表达与端粒酶活性高低的相关性。方法：应用RT－PCR，DNA测序等技术研究端粒酶亚单位在胰腺癌中的表达情况，用ELISA法检测端粒酶活性。结果：24例胰腺癌标本中hTERT mRNA表达阳性率为83．3％，而癌旁组织为8．3％，两者有显著性差异。hTERT mRNA的表达是人端粒酶活性表达的关键性因素。hTR入TP1 mRNA在癌组织及癌旁组织中的表达无统计学差异，与端粒酶活性的表达无相关性。结论：端粒酶参与了胰腺癌的发生；hTERT mRNA表达水平的上调可能在胰腺癌形成过程中起重要作用。     

端粒酶的定量检测与头颈部肿瘤的诊断

端粒酶是一种特殊的RNA依赖性DNA聚合酶 ,广泛存在于癌细胞、生殖细胞、胚系细胞 ( germlinecell)、造血干细胞、活性淋巴细胞、表皮基底细胞及肠滤泡细胞等中 ,也在绝大多数头颈部恶性肿瘤中满意表达。人类端粒酶由RNA(hTR)和蛋白质两个亚单位组成核糖核蛋白体 ,而蛋白质又分为结合部分TP1和催化部分hTERT两部分 ,其中TP1是端粒酶相关蛋白 1,hTERT是催化亚基。由于大部分正常人体细胞中没有端粒酶活性 ,而肿瘤细胞却有端粒酶活性特异性表达 ,所以 ,端粒酶作为肿瘤的分子生物学标记物已成为人们的公识。1　端粒酶活性的检测方法1 …     

端粒酶逆转录酶（hTERT）的分子调节机制

人端粒酶逆转录酶（hTERT）是端粒酶成分中的限速亚单位,是端粒酶活性调节的主要部分,细胞通过调节c-Myc、SP1、Mad、锌指蛋白2（MZF－2）、甲基化等调节hTERT的转录水平,或通过hTERT mRNA的不同剪切方式、分子之间相互作用、磷酸化和脱磷酸化等转录后途径调节hTERT。     

DNA载体途径的RNA干扰技术对前列腺癌细胞系ALVA-41端粒酶活性的抑制作用

目的:探讨DNA载体途径的RNA干扰技术抑制肿瘤细胞的作用和机制。方法:设计和构建由U6启动子驱动产生hTERT的siRNA表达质粒,转染至ALVA-41前列腺肿瘤细胞,以TRAP-ELISA方法观察细胞端粒酶活性,W estern-b lot检测端粒酶蛋白的表达,细胞记数法检测对细胞生长的影响。结果:构建的针对hTERT基因的U6表达质粒具有明显的干扰效果,受到特异hTERT-siRNA干扰的ALVA-41肿瘤细胞端粒酶表达下调,细胞生长受抑。结论:应用RNA干扰技术可阻止hTERT基因的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。