恩施州部分伤寒沙门氏菌分离鉴定和基因分型结果分析

目的对两起由伤寒沙门氏菌引起的聚集性爆发流行中所分离到的伤寒沙门氏菌进行鉴定和基因分型,探讨恩施州伤寒沙门菌的分子流行病学,为科学防治提供依据。方法用传统方法对11株伤寒沙门氏菌菌株进行生化、血清学复核鉴定。对确认的伤寒沙门氏菌菌株,采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱。结果 11株伤寒沙门菌经PFGE,根据其条带的差异可分为3个PFGE型别。结论两起伤寒沙门氏菌感染为不同亚型所致。     

惠州市腹泻患者非伤寒沙门氏菌监测结果分析

目的 了解我市非伤寒沙门菌的流行基线,早期识别暴发疫情,分析流行因素,掌握我市在腹泻病人中分离的非伤寒沙门菌株的血清型别、分布、耐药性变化情况,指导临床用药.方法 对2008-2009年惠州市监测医院的腹泻患者粪便标本进行非伤寒沙门氏菌检测,对分离到的菌株进行血清型、药物敏感性试验和脉冲场凝胶电泳( PFGE)分型.结...     

ERIC-PCR与PFGE检测铜绿假单胞菌同源性的方法学比较

目的比较肠杆菌基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)与限制性内切酶联合脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测铜绿假单胞菌同源性的方法学一致性。方法分别用ERIC-PCR和PFGE对北京某医院48株铜绿假单胞菌株进行分型,明确其是否有克隆传播。结果 ERIC-PCR方法鉴定有34株为同一克隆来源,其余14株被分为9种基因型。PFGE方法分型鉴定有38株为同一克隆来源,其余10株表现为7种基因型,均提示脑外科内的铜绿假单胞菌在2010年存在一个克隆株传播。两种方法学结果的符合率为89.5%,PFGE重复3次结果相似度达96.6%,ERIC-PCR重复5次结果相似度达75.4%。结论 ERIC-PC操作简便快速,重复性较好,与PFGE结果一致性高,适合在基层医院进行细菌流行病学分析。     

36例儿童非伤寒沙门菌感染的临床特点及其对抗菌药物的耐药性分析

目的:分析36例儿童非伤寒沙门菌感染的临床特点及其对抗菌药物的耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法:选取2013年7月—2016年6月期间收治的非伤寒沙门菌感染患儿36例资料,采用回顾性分析法分析其临床特点及其对抗菌药物的耐药性。结果:36例非伤寒沙门菌感染患儿中,主要临床类型为胃肠炎型(7~11月为发病高峰期),其最常见的病原菌类型为鼠伤寒沙门菌,且其对多种抗菌药物耐药;根据药敏试验结果选用抗菌药物对症治疗,患者的预后良好。结论:非伤寒沙门菌感染的致病机制尚未完全明确,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型可有效地检测菌株的同源性;非伤寒沙门菌的耐药情况严重,需根据药敏试验结果合理选用抗菌药物,尤其是重视院内交叉感染。     

急诊科分离的万古霉素耐药肠球菌的耐药性与同源性研究

目的研究急诊科患者临床分离万古霉素耐药肠球菌(VRE)的耐药性及同源性。方法收集2005年11月至2008年12月急诊科临床分离的VRE,用琼脂二倍稀释法,测定不同抗菌药物的MIC,用多重PCR法,鉴定细菌万古霉素耐药基因型,用SmaI酶切染色体脉冲场凝胶电泳(PFGE),研究菌株的同源性。结果共从7位患者分离出8株万古霉素耐药肠球菌,均为vanA型屎肠球菌且均为多重耐药。PFGE结果显示8株vanA型屎肠球菌间差异性很大。结论该急诊科中VRE均为vanA型屎肠球菌;但未发现急诊室内同克隆VRE传播。     

PFGE和质粒图谱分析人和猪来源德尔卑沙门菌多重耐药株的同源性

目的 分析人和猪来源的德尔卑沙门菌的分子同源性,为研究多重耐药性在人畜之间传播提供分子生物学技术依据.方法 药敏试验检测人和猪来源的德尔卑沙门菌多重耐药株对10种抗菌药物的敏感性;用脉冲凝胶电泳方法(PFGE)检测菌株间的分子同源性;结合实验或电转移试验获得目标质粒,质粒酶切图谱检测质粒的同源性.PCR分析染色体介导喹诺酮耐药基因gyrA和arC,质粒可介导的喹诺酮耐药基因qnrA/qnrB/qnrC/qnrS、aac(6)-Ⅰ b-cr、qepA和oqxAB.结果 共收集48株德尔卑沙门菌,经药敏试验筛选获得11株多重耐药株(MDR),人源性8株,猪源性3株.11株菌除对氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、磺胺和四环素(R型:ACSSuT)耐药外,所有菌株也对萘啶酸和环丙沙星耐药,6株对左氧氟沙星耐药,5株对头孢曲松耐药.PFGE分析,11株菌共分为6个克隆,3株动物源性菌株与8株人源性菌株无克隆相关性.喹诺酮耐药基因分析显示,有5株和3株动物源株检测到gyrA的Ser83Leu或/和Asp87Asn突变,6株人源株和3株动物源株检测到parC的Ser80Ile或/和Thr57Ser突变.质粒电泳分析显示,所有菌株都存在1-4条质粒条带,大小介于2～180kb,其中3株人源性菌株和1株动物源性株都存在4kb左右大小的质粒;2株动物源性菌株仅存在20 kb大小质粒.用结合实验和电转移方法,分析4kb质粒结构,证实4个质粒的酶切图谱完全一致,质粒中均存在介导外排基因oqxAB和喹诺酮耐药基因aac(6')-Ⅰ b-cr.结论 人和猪来源的德尔卑沙门菌多重耐药株中质粒介导的外排基因oqxAB和喹诺酮耐药基因aac(6')-Ⅰ b-c是喹诺酮重要的耐药机制,可能在沙门菌间传递,导致对喹诺酮类高耐药性.通过人和猪的接触或间接途径,沙门菌有传播喹诺酮耐药性的风险,同一种质粒可在人和动物中转移而传播该耐药机制.     

厦门市副溶血性弧菌的脉冲场电泳分析及数据库建立

目的：建立厦门市副溶血性弧菌分离株的脉冲场凝胶电泳（PFGE）数据库,分析不同来源菌株的同源性关系。方法203株菌株的基因组DNA经SfiⅠ酶切、脉冲场电泳后,利用Bionumerics软件分析电泳图谱。结果203株菌株可分成149种不同的PFGE型,91.13%（185株）的菌株具有独特的带型,同时也有少数带型包含的菌株数较多。对于日常监测中分离得到的菌株,PFGE分型结果与水产品的种类、采样时间基本无相关性,79个菌株可分成74个PFGE带型;从历年食物中毒应急监测中分离得到的菌株,其PFGE型相对较少,124株中只有76个PFGE型。应用Bionumerics计算D值为99.81%。结论建立了厦门市副溶血性弧菌的PFGE数据库,为本市副溶血性弧菌的监测和疫情的应急处理提供了科学依据。     

2005～2011年厦门市食物中毒副溶血性弧菌的病原特征分析

目的分析2005~2011年25起食物中毒标本中分离的108株副溶血性弧菌的血清型分布、tdh基因携带情况和PFGE分型特征。方法血清学实验检测菌株的血清型别;实时荧光PCR法检测耐热直接溶血素（tdh）基因;脉冲场凝胶电泳（PFGE）和BioNumerics软件对菌株进行分子分型分析。结果 108株菌分为7个血清群、15个血清型,主要血清型是O3∶K6;所有菌株分成65个PFGE types（PT）,相似度为34.1%~100.0%;92株菌携带tdh基因,阳性率为85.2%。结论引起厦门市食物中毒的副溶血性弧菌血清型分布呈多样性,优势血清型为O3∶K6,且大部分菌株具有tdh基因;同一克隆的菌株血清型可相同也可不同。     

惠州市腹泻患者非伤寒沙门氏菌监测结果分析

目的了解我市非伤寒沙门菌的流行基线,早期识别暴发疫情,分析流行因素,掌握我市在腹泻病人中分离的非伤寒沙门菌株的血清型别、分布、耐药性变化情况,指导临床用药。方法对2008—2009年惠州市监测医院的腹泻患者粪便标本进行非伤寒沙门氏菌检测,对分离到的菌株进行血清型、药物敏感性试验和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型。结果两年共监测腹泻患者430例,检出沙门氏菌19例,阳性率为4．42％。19株沙门氏菌分布于5个血清型,以鼠伤寒沙门氏菌及肠炎沙门氏菌为主,分别占47．37％和26．32％。大多数沙门菌对常用的头孢类和喹诺酮类抗生素敏感。结论沙门氏菌是重要的肠道病原菌,病菌经口进人体内而致病,应加强相应的食品卫生监督与健康教育,宣传个人卫生防护知识,切实预防沙门氏菌感染。     

伤寒沙门菌sufC基因缺陷变异株的制备

目的为深入研究sufC基因在伤寒沙门菌中的功能作用,制备sufC基因缺陷变异株。方法根据GeneBank公布的伤寒沙门菌sufC基因序列,设计sufC缺失用PCR特异性引物,制备缺失sufC基因的同源性核苷酸片段,连接自杀质粒后导入伤寒沙门菌野生株,诱导同源重组,重组菌经PCR观察及序列分析鉴定,将完全重组稳定的相应菌株作为伤寒沙门菌sufC基因缺陷变异株,并经测序分析加以确定。结果 PCR及序列分析证实,缺陷变异株的sufC基因缺失495个碱基。结论伤寒沙门菌sufC基因缺陷株构建成功,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能作用奠定了基础。     

巢式聚合酶链反应快速检测血液标本中

目的建立一种检测血液中伤寒沙门菌的方法.方法根据伤寒沙门菌特异鞭毛基因设计两对引物,通过巢式聚合酶链反应(PCR)扩增伤寒沙门菌DNA片断,扩增产物通过凝胶电泳进行分析.结果用伤寒沙门菌DNA系列稀释液进行试验,巢式PCR能够检出10个伤寒沙门菌.36份培养阳性标本,33份PCR阳性;6份培养阴性但临床高度可疑的伤寒病人标本PCR阳性10份其它原因引起发热的临床标本均为阴性.结论巢式PCR能够快速、特异、准确地检出血液中的伤寒沙门菌.     

伤寒沙门菌主动外排多重耐药基因acrB与表达水平研究

目的调查临床分离伤寒沙门菌对常用抗生素的耐药情况与多重耐药主动外排基因acrB的检测、序列分析及其表达水平。方法根据NCCLS推荐的琼脂二倍稀释法测定7种抗生素对伤寒沙门菌的抗菌活性，以基因库序列为参考设计引物PCR扩增acrB、测序并用RT—PCR方法检测其表达水平。结果32株伤寒沙门菌对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、哌拉西林、氯霉素、四环素、庆大霉素的耐药率分别为0、0、0、28．13％、43．75％、40．63％和12．5％，其中多重耐药菌10株。所有细菌均检测到多重耐药外排基因acrB．测序显示与参考沙门菌序列（No．AL627267）比较，有2处碱基变异。与大肠埃希菌（No．ECU00734）比较，碱基同源性为85．51％（61／421），提示其碱基序列同源性极高。对不同种类抗生素耐药及不耐药部分伤寒沙门菌共16株进行一步法RT—PCR检测acrB表达水平，结果所测伤寒沙门菌均检测到多重耐药外排基因acrB的表达，多重耐药株主动外排的表达较其它菌株明显增强。结论伤寒沙门菌对喹诺酮类、第三代头孢菌素类耐药率低，对哌拉西林、氯霉素、四环素耐药率相对较高，且有多重耐药。伤寒沙门菌中均存在acrAB主动外排系统，acrB与大肠埃希菌同源性高，对不同结构抗生素耐药的种类越多，表达水平越高。主动外排机制可能是伤寒沙门菌多重耐药的主要原因之一。     

细胞壁缺陷沙门菌细胞多糖的研究

目的探讨细胞壁缺陷沙门菌的细胞多糖组成特点及其变异的生化机制。方法采用分光光度法、鲎血细胞溶解物试验,分别对伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的细胞壁缺陷突变株(CWDM)以及伤寒沙门菌的CWDM返祖菌株的细胞壁多糖、细胞外多糖、脂多糖进行定性、定量实验,检测与分析沙门菌CWDM及其返祖菌株细胞多糖的化学组成特点。结果伤寒沙门菌及甲型副伤寒沙门菌的CWDMs细胞壁多糖与细胞外多糖的含量明显低于其亲代细菌型和伤寒沙门菌粗糙型返祖菌,鲎血细胞溶解物试验定性试验结果显示,两种细菌的CWDMs均表现为阴性反应,但定量试验表明其含量仅为细菌型和伤寒沙门菌返祖菌含量的1/30。结论细胞壁缺陷可导致沙门菌发生细胞壁多糖、细胞外多糖及脂多糖的含量减少。     

77例耐氯霉素伤寒杆菌药敏试验的探讨

目的：探讨耐氯霉素伤寒杆菌与常用的治疗伤寒药物之间的关系。方法：收集经血培养或大便培养证实为伤寒杆菌的菌株,用氯霉素,卡那霉素,四环素,氨苄西林等作药物敏感试验。结果：１０１株伤寒杆菌中,有７７株对氯霉素或≥２种药物不敏感,其中对≥３种药物达７２株次。结论：耐氯霉素伤寒杆菌对常用治疗药物耐药性大,对氨基糖苷类抗生素较敏感。     

Recent advances in salmonellosis treatment based on in vitro susceptibilities

Chloramphenicol-resistant strains of Salmonella typhi (MIC 60 micrograms/ml), chloramphenicol and ampicillin-resistant strains of Salmonella typhimurium as well as multiresistant strains of various salmonella serotypes were found to be very sensitive to cephradine (MIC 0.078-0.625 micrograms/ml). Ten patients with Salmonella typhi bacteremia were successfully treated with cephradine; all the patients' strains were chloramphenicol-resistant. Cephradine appears to warrant further clinical trial for the treatment of salmonellosis.     

2015-2017年中山市某医院沙门菌的药敏分析及肠毒素基因检测

目的 研究中山市西北部区域沙门菌感染患者的流行病学特征、耐药特点及其相关肠毒素基因型。方法 2015年1月-2017年12月，我院从4019例腹泻患者的粪便标本中共分离出沙门菌108株，进行血清分型及药物敏感试验，同时采用PCR方法检测其肠毒素基因(spvA、spvB、rck)。结果 108株沙门菌可分为17个血清型，以鼠伤寒沙门菌和斯坦利沙门菌为主，分别占42.6%(46/108)和15.7%(17/108)，2015年分别检出伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌各一株；108株沙门菌对氨苄西林(61.11%)和氨苄西林/舒巴坦(49.07%)耐药率最高，未发现对亚胺培南及哌拉西林/三唑巴坦的耐药菌株；在108株沙门菌中，所有菌株均含有spvA基因，34株为spvB阳性，28株为rck阳性，spvB基因阳性患者其高热、便血的比率显著高于spvB阴性患者(χ2=4.185, P<0.05; χ2=6.13, P<0.05)；rck基因阳性患者其高热、便血的比率显著高于rck阴性患者(χ2=5.274, P<0.05, χ2=8.887，P<0.05)。结论 本地区沙门菌感染患者以鼠伤寒沙门菌和斯坦利沙门菌为主，高发季节集中在夏秋两季，沙门菌株耐药率较高。沙门菌感染患者高热及便血的发生率与spvB基因、rck基因的检出具有明显相关性。     

Detection and characterisation of CTX-M and CMY-2 beta-lactamases among Escherichia coli isolates from farm animals in Guangdong Province of China

The objective of this study was to characterise the beta-lactamase genes of cephalosporin-resistant Escherichia coli isolated from farm animals in Guangdong Province of China. Of 592 E. coli isolates recovered from farm animals from 2003-2005, 50 (8.4%) showed cephalosporin resistance. Polymerase chain reaction and sequencing analysis showed that 14 isolates (2.4%) from chickens, ducks, pigs and partridges were positive for the bla(CTX-M) gene (10 for bla(CTX-M-14) and 4 for bla(CTX-M-27)). CMY-2 was detected for the first time in mainland China in six E. coli isolates (1.0%) from chickens and goose. Except for one isolate, bla(CTX-M)- and bla(CMY-2)-containing isolates also harboured the bla(TEM-1b) gene. Conjugation experiments demonstrated that the bla(CTX-M) and bla(TEM) genes could be transferred to E. coli DH5alpha. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) showed that the 14 CTX-M-producing isolates belonged to 12 different types. Two isolates (one from a chicken, the other from a pig) containing CTX-M-14 showed indistinguishable PFGE patterns, indicating clonal dissemination of this strain among animals from different farms. This study describes for the first time the emergence of CTX-M- and CMY-2-producing E. coli among farm animals in China, with the CTX-M-9 group being the predominant extended-spectrum beta-lactamase detected.     

中国西部地区沙门菌属细菌耐药及分布特点

目的 了解2016年1月—2017年12月我国西部地区沙门菌属细菌的耐药及分布特点,为临床合理使用抗菌药物提供 依据。方法 对临床分离的沙门菌属细菌,按照统一方案,药敏试验均采用纸片扩散法或自动化仪器法,结果按CLSI2017年标 准判读,用WHONET5.6软件和SPSS23.0软件进行数据统计分析。结果 2016年及2017年我国西部地区沙门菌属细菌检出率分 别为0.22%和0.21%。2016—2017年共检出256株沙门菌属细菌,其中检出最多的为伤寒沙门菌42株(16.4 %),其次为鼠伤寒沙门 菌35株(13.7%)。药敏试验结果显示,2016年及2017年沙门菌属细菌对氨苄西林耐药率最高,分别为65.3%、67.2%;对复方磺胺 甲噁唑耐药率为22.5%、22.6%;对环丙沙星耐药率较低,分别为4.0%、16.2%。鼠伤寒沙门菌对氨苄西林和复方磺胺甲噁唑的 耐药率分别为87.9 %和51.5%,高于伤寒沙门菌的57.1%和22.0%,以及肠炎沙门菌的83.3%和14.3%。结论 我国西部地区流行 的沙门菌属以伤寒沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主。鼠伤寒沙门菌的耐药率较高,氨苄西林、复方磺胺甲噁唑由于高耐药率已不推 荐作为临床经验用药。第三代头孢菌素及氟喹诺酮类抗菌药物对沙门菌属仍维持较高的敏感率,但仍需持续加强对多重耐药沙 门菌的耐药监测。