血管紧张素Ⅱ对脐血CD34+细胞体外分化为巨核细胞的影响

为了探讨血管紧张素Ⅱ对脐血CD34^＋细胞诱导分化为巨核细胞的影响，采用免疫磁珠法（MACS）分选8例健康产妇足月顺产胎儿脐血中的CD34^＋细胞，在舍血小板生成素（TPO50ng／ml）、白介素-3（IL-310ng／ml）、干细胞刺激因子（SCF50ng／l）的无血清培养液中添加浓度分别为50、100、1000μg／ml的血管紧张素Ⅱ作为实验组；同时以未添加血管紧张素Ⅱ的基础培养液作为对照组，培养14天后观察结果。细胞计数仪计数单个核细胞数（MNC）；流式细胞仪计数培养体系中的CD41^＋细胞数、血小板数，及分析细胞周期；利用CD41单克隆抗体免疫荧光染色观察培养体系中的细胞情况。结果表明：与对照组比较，实验组单个核细胞数无明显改变（P〉0．05）；而CD41^＋细胞和血小板数量有明显的增加（P〈0.05）；细胞周期分析显示，实验组的4倍体细胞增加，并存在明显的凋亡（P〈0．05）；荧光显微镜下观察对照组和实验组均可见大小不一的CD41^＋细胞。结论：血管紧张素Ⅱ可以促进脐血中CD34^＋细胞诱导分化为巨核细胞，并能促进巨核细胞产生血小板。     

脐血造血干祖细胞体外扩增的研究进展

脐带血富含造血干细胞，并具有免疫原性低，无肿瘤细胞污染，来源广泛，获取容易等优点，使得脐血成为骨髓及外周血造血干细胞的极佳替代来源。但是单份脐带血所含有的造血干粗细胞（HSPC）数不足以满足成人移植的需要，在体外对脐血造血干祖细胞进行体外扩增有望解决这一难题，并成为近年来研究的热点。本文就脐血造血干祖细胞的生物学特点及扩增研究的进展进行综述。     

血管紧张素Ⅱ对脐血红系造血祖细胞优势扩增作用的研究

近年来，许多研究结果表明血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可能参与调控造血细胞的生长，如红系造血干／祖细胞表面有血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）的表达。然而，上述研究未阐明AT1R在粒系祖细胞上有无表达及AngⅡ对红系造血作用的分子机制。我们试图通过体外细胞培养的方法，探讨AngⅡ对红系造血祖细胞的优势扩增作用及其分子机制。     

人脐血造血干/祖细胞体外扩增的研究新进展

人脐血造血干／祖细胞增殖能力强，在不同的细胞生长因子联合作用下，可以有目的地扩增，使单份脐血造血干／祖细胞数量增加。动物实验证实了体外扩增并未降低造血干／祖细胞在小鼠体内的造血重建能力。因此，脐血造血细胞体外扩增有望解决成人济血移植中存在的造血干／祖细胞数量不足的问题。     

脐血早期造血细胞体外扩增的研究进展

通过选择合适的研究条件,对脐血早期造血细胞进行体外扩增以及评价扩增后的质与量,从而得到相对足够的细胞数并维持其植入能力,使其得以应用于临床移植。现就脐血早期造血细胞在临床应用前体外扩增的基础研究加以系统综述。     

脐血造血干祖细胞体外扩增的研究进展

脐带血富含造血干细胞,并具有免疫原性低,无肿瘤细胞污染,来源广泛,获取容易等优点,使得脐血成为骨髓及外周血造血干细胞的极佳替代来源。但是单份脐带血所含有的造血干祖细胞(HSPC)数不足以满足成人移植的需要,在体外对脐血造血干祖细胞进行体外扩增有望解决这一难题,并成为近年来研究的热点。本文就脐血造血干祖细胞的生物学特点及扩增研究的进展进行综述。     

Flt3／FL结构、功能及对脐血造血干／祖细胞体外扩增作用的研究

Flt3是主要表达于造血干／祖细胞上的一种Ⅲ型酪氨酸激酶受体,Flt3配基（FL）是一种早期造血生长因子,与造血调控密切相关。FL在脐血造血干／祖细胞体外扩增中发挥重要作用,并具有其他方面的功能。本文就Flt3/FL的结构、功能及其在脐血造血干／祖细胞体外扩增中的作用作一综述。     

脐血造血干/祖细胞体外定向诱导扩增的研究

目的　观察不同因子组合在体外对脐血 (CB)中的巨核系等造血祖细胞的诱导扩增作用。方法　用体外液体悬浮培养法 ,将白细胞介素 3(IL 3)、白细胞介素 6 (IL 6 )、血小板生成素 (TPO)、脐血血浆 (CBP)作为刺激因子 ,添加不同的细胞因子组合 ,对CB的单个核细胞 (MNC)短期培养 2 1d。在培养的 0、7、14、2 1d检测新鲜细胞和培养细胞中的有核细胞数 (NC)、巨核系祖细胞 (CFU Mk)、粒巨噬系祖细胞 (CFU GM)、混合系祖细胞 (CFU GEMM)增殖倍数。结果　在 2 1d内 ,3个实验组的NC数 ,CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM都有不同程度的增加 ,其中NC、CFU GM在培养的 2 1d达到高峰。CFU Mk、CFU GEMM在培养的 14d达高峰。在含有TPO的实验组中 ,CFU Mk的增殖倍数高于不含TPO的实验组 ,CFU GM、CFU GEMM增殖的倍数也高于不含TPO的实验组。含有CBP的实验组对CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM有明显的促增殖作用。结论　CB中的含有丰富的造血干 祖细胞 ,可以在不同细胞因子的刺激下进行定向扩增 ,TPO可以促进干 祖细胞向巨核系分化 ,对粒巨噬系祖细胞也有促进作用。脐血血浆可以作为协同刺激因子促进CB中干 祖细胞增殖。     

脐血CD133^＋细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究

本研究探讨脐血CD133^＋（UCB—CD133^＋）细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统（MACS）分选UCB—CD133^＋细胞，将纯化的UCB—CD133^＋细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞，在培养第7、10和14天进行细胞计数，流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化，并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位（CFU—MK）培养。结果表明：培养至第7天时，UCB—CD133^＋细胞扩增效果最佳，扩增了8、2-1-2．2倍；培养至第14天，细胞总数扩增了116倍；培养至10天时，平均1个CD133^＋细胞所产生的CD133^＋CD41^＋和CD34^＋CD41^＋细胞数最多，分剐为2．5±0．9和2．6±0.5个，所产生的CD41^＋细胞为20．3±5、9个；扩增前后的UCB—CD133^＋细胞均能形成CFU—MK，扩增第10天的UCB—CD133^＋细胞所形成的CFU—MK总数最多，CFU—MK扩增倍数为59．5±11．8倍。巨核细胞免疫组织化学染色显示，扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态，未见血小板形成。结论：UCB—CD133^＋细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力，培养第10天扩增效能最佳。     

转基因骨髓基质细胞对人脐血CD34+细胞体外扩增作用的研究

为探讨转染FL基因的人原代骨髓基质细胞对脐血CD34+ 细胞的体外扩增效应 ,建立了转基因骨髓基质细胞与人脐血CD34+ 细胞共培养体系。采用免疫磁珠法分离人脐血CD34+ 细胞 ,在不同的体外培养体系中进行培养并取样检测细胞总数 ,CFC和CD34+ 细胞百分率。结果表明 ,在不同组合的培养体系中 ,转基因骨髓基质细胞培养体系较骨髓基质细胞培养体系和无滋养层培养体系对有核细胞总数 ,CFC含量和CD34+ 细胞含量均具有明显的扩增作用 ,分别扩增了 12 2 .5± 4 .3,39.6± 2 .7和 11.8± 0 5 2倍 (P <0 .0 5 )。结论 :转染FL基因的人骨髓基质细胞协同其它细胞因子可增强对人脐血CD34+ 细胞的体外扩增作用。     

人骨髓间充质干细胞与脐血CD34+细胞体外扩增

为了研究骨髓间充质干细胞(MSC)及细胞因子对脐血CD34 造血祖细胞体外扩增的作用,及其扩增作用 对细胞黏附分子的影响,用免疫磁珠富集脐血CD34 细胞,然后接种到含有或不含有MSC和细胞因子的24孔培 养板,体外培养1周,观察不同指标并进行组间比较。结果表明:①SDF-1α SCF TPO FL因子组合与SCF TPO FL因子组合对脐血CD34 细胞的扩增作用无显著性差异(无论有无MSC细胞层存在)(P>0.05);②MSC 与上述细胞因子共存的培养体系优于相应的单纯细胞因子培养体系(P<0.05);③扩增前与扩增后脐血造血祖 细胞黏附分子CD44的表达没有明显变化。结论:趋化因子SDF-1α对SCF TPO FL因子组合的扩增作用无显 著影响;MSC增加细胞因子的脐血细胞体外扩增的作用;体外扩增不影响跻血细胞黏附分子CD44的表达。     

脐血体外红系定向扩增和分化的研究进展

通过选择合适的培养条件，诱导脐血干／祖细胞定向扩增和分化，产生大量所需的功能细胞，以满足基础研究和临床应用，这已成为目前脐血体外培养研究的新热点。本文就脐血体外红系定向扩增和分化的研究作一综述。     

脐血间充质干细胞的生物学特征及其对造血干/祖细胞体外扩增的支持作用

目的探讨脐血间充质干细胞(MSC)的生物学特征及其对造血干/祖细胞体外扩增的支持作用。方法用液体培养法分离脐血贴壁细胞,采用ELISA方法检测贴壁细胞条件培养液中细胞因子的表达;用流式细胞术分析其免疫表型特征;在成软骨细胞诱导培养条件下诱导细胞分化,并用RTPCR方法检测分化后细胞原胶原Ⅱ型基因的表达。采用分阶段共培养方法观察脐血贴壁细胞对CD34+细胞体外扩增的支持作用。结果脐血单个核细胞纤维样细胞集落形成率为(3.5±0.7)/106。脐血MSC体外至少可以扩增15代。没有分化的脐血MSC表型为CD13、CD29、CD90、CD105、CD166、SH2、SH3和SH4阳性,CD45、CD34和CD14阴性;脐血MSC培养上清中干细胞因子、IL6和肿瘤坏死因子α检测阳性。在成软骨细胞诱导培养基培养条件下,脐血MSC原胶原Ⅱ型基因mRNA表达阳性。脐血MSC与CD34+细胞共掊养14d,CD34+细胞扩增率高于未共培养组4倍。结论脐血MSC具有类似于成体骨髓MSC的特征,对造血干细胞增殖有明显的支持作用。     

GM-CSF对脐血CD34+巨核祖细胞体外扩增及分化的影响

本实验旨在研究GM-CSF对脐血CD34^＋细胞诱导分化为巨核细胞的影响.采用免疫磁珠法分选CD34^＋细胞,在含有TPO＋IL-3＋SCF并添加了不同浓度（5、20、100ng/ml）的GM-CSF的无血清培养基中进行培养.培养6、10、14天后计数单个核细胞（MNC）,检测CD41^＋细胞比例和CFU-MK.结果表明,培养14天后3种不同浓度GM-CSF对MNC均有明显的扩增作用,其中以20和100ng/ml GM-CSF的扩增效果较好.3种不同浓度的GM-CSF均使CD41^＋细胞比例增加,20和100ng/ml与5 ng/ml GM-CSF相比更能提高CD41^＋细胞的比例.5和20 ng/ml的GM-CSF能促进CFU-MK的形成,但100ng/ml的GM-CSF却抑制CFU-MK的形成.结论：在TPO＋IL-3＋SCF细胞因子组合中添加GM-CSF有利于促进脐血CD34^＋细胞诱导分化为巨核细胞.     

转白血病抑制因子基因人胚肺成纤维细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的影响

背景:单份脐血的造血细胞数量有限,难以满足成人的需要,如何有效地扩增脐血造血干/祖细胞是目前研究的热点.目的:构建人白血病抑制因子基因修饰的人胚肺成纤维细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞体外扩增的影响.方法:建立转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞,用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验检测自发迁移率和基质细胞衍生因子1诱导迁移试验以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力.结果与结论:成功建立转基因饲养层细胞,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,与人白血病抑制因子转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可大量扩增,同时表面黏附分子的表达量仍较高.体外迁移实验显示与转基因饲养层细胞共培养的造血细胞的诱导迁移率明显高于对照组,可以较好地保持其归巢能力.因此转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力.     

造血干/祖细胞体外扩增的临床应用现状

重组人造血生长因子 (Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ ,ＨＧＦ)以及造血干 祖细胞 (Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ,ＨＳＰＣ)动员、采集和分离技术的进步不仅推动了临床大剂量化疗的发展 ,同时也促进了体外扩增ＨＳＰＣ临床应用这一细胞治疗新领域的开展。众多研究显示 ,体外扩增ＨＳＰＣ是可行的。这一技术可克服单份脐血应用于成人ＨＳＰＣ数量的不足 ;对于骨髓移植来说 ,可以减少骨髓的采集量和采集时间 ,对减轻供者的痛苦以及费用具有重要的意义 ;同样对那些外周血干细胞…     

siRNA干扰p27基因表达对脐血CD34+细胞体外扩增影响的初步研究

造血干/祖细胞是一类被定义为具有自我更新和潜在重建造血能力的细胞.脐血是造血干/祖细胞的重要来源.通常人们应用高浓度的细胞因子刺激扩增脐血造血干/祖细胞,但导致其多向分化潜能及移植后造血重建能力下降.近来,Cheng等研究造血干/祖细胞的增殖周期特性发现,两种不同的Cip/Kip家族成员p21和p27可分别特异性地负向调控造血干/祖细胞增殖池的大小,p21可阻滞干细胞进入增殖周期,而p27可限制祖细胞的增殖周期.这为体外操纵造血干/祖细胞的增殖提供了良好途径.我们以pSilencer1.0-U6构建p27 siRNA表达载体转染脐血CD34＋细胞,以去除p27对造血祖细胞的增殖抑制作用,以一种不同于既往细胞因子刺激的方式,试图为体外扩增脐血CD34^＋细胞提供一种新的策略.     

脐血CD34^＋细胞体外扩增的研究

采用ＤｙｎａｌＭ－４５０ＣＤ＿（３４）免疫磁珠分离纯化脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，并探讨了不同细胞因子［干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素６（ＩＬ－６）、白细胞介素３（ＩＬ－３）及红细胞生成素（Ｅｐｏ）］组合对脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞的体外培养和扩增作用。结果表明：①经ＤｙｎａｌＭ－４５０ＣＤ＿（３４）免疫磁珠分离的脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，其纯度达８５％～。９５％；②甲基纤维素培养体系中，在不同组合的细胞因子作用下，脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞的集落产率明显不同，单用ＩＬ－６最低，ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－３及Ｅｐｏ联用产率最高；③在低氧液体培养体系中，ＩＬ－６和ＩＬ６＋Ｅｐｏ不能有效地扩增脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，而其它细胞因子组合均可产生明显的扩增作用；其中加Ｅｐｏ的组合扩增效果显著高于无Ｅｐｏ的相应组合。脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞分离、纯化及其体外扩增的研究对于脐血造血细胞库的建立，脐血造血细胞移植和基因导入的研究均具有重要意义。     

混合脐血血浆对脐血CD34^＋细胞体外扩增的作用

采用两步法分离出脐血CD34~ 细胞,比较研究了混合脐血血浆联合IL-3,IL-6,GM-CSF,Epo 4种中、晚期造血因子和单纯的4种造血因子情况下脐血CD34~ 细胞的体外扩增。结果表明,混合脐血血浆联合造血因子对粒-巨噬细胞集落形成单位(granulocyte-macrophage colony-forming unit,CFU-GM),红系爆式集落形成单位(burst-forming unit of erythriod,BFU-E),混合集落形成单位(minxed colony-forming unit,CFU-mix)3种集落的扩增效果明显优于单纯的4种造血因子联合组,差异具有统计学意义(P<0.01),但单纯混合脐血血浆扩增效果较差。脐血造血细胞扩增对子成人脐血移植有重要意义。上述结果提示,混合脐血血浆的扩增成功,可代替或弥补早期造血生长因子的作用,用于脐血造血细胞的体外扩增。