简易快速制备兔抗鼠IgM血清

随着杂交瘤技术的发展,各类单克隆抗体(McAb)相继问世,为鉴别其Ig类别及进一步提纯均需用IgM抗血清。制备该血清用IgM抗原提纯较为困难,需经多种纯化步骤     

辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠IgM抗体的制备

我室制备的数株抗大肠癌单抗已用于大肠癌的免疫组化、血清学检测、放射免疫定位及导向治疗等研究,其中涉及多株IgM单抗。需要使用酶标兔抗鼠IgM抗体,国内尚无酶标抗IgM抗体供应。现以本室制备的鼠IgM单折为免疫原,采用皮内多点注射免疫     

鼠单克隆抗体治疗中的病人抗鼠免疫球蛋白应答

鼠单克隆抗体(简称单抗)在临床治疗应用中有可能引起宿主产生抗球蛋白应答,     

免疫球蛋白的遗传标记

自从1956年Grubb发现第一个人类免疫球蛋白遗传标记Gm(1)并证明它符合孟德尔遗传规律以来,人们对于免疫球蛋白遗传标记的研究方兴未艾、日趋深入,它已成了免疫遗传学的一项重要研究内容;它还可为种族、民族亲缘关系的研究提供一定线索,作为人类学研究的有用工具;同时它对疾病病因之探讨也有一定意义。本文主要就其遗传学机理及其分布特性作一综述。一、免疫球蛋白简介众所周知,免疫球蛋白(immunoglo     

抗鼠上皮细胞单克隆抗体的制备及其导致肾损伤的作用

为了探讨膜性肾病的发病机理,作者试图用杂交瘤技术获得针对肾小球上皮细胞的McAb。以大鼠肾小球为抗原,加完全福氏佐剂,免疫BALB/c小鼠。采用对数生长的P3u1与免疫后的脾细胞融合及进行克隆筛选,获得3株针对肾小球上皮细胞的杂交瘤。利用抗原交叉试验(ELISA方法)、McAb亚类鉴定、放射免疫沉淀McAb纯度鉴定、McAb效价测定等方法对杂交瘤细胞进行了鉴定,同时使用免疫电镜的方法,并制备了McAB介导的肾炎模型。结果为:(1)以     

应用蛋白质A-琼脂糖-4B亲和层析柱纯化兔血清免疫球蛋白G制备羊抗兔IgG血清

近年来在不少免疫学科研实验中,需要高纯度和高效价羊抗兔IgG免疫血清作为第二抗体,应用于多种免疫学实验方法中,如放射免疫分析法,免疫荧光法,免疫酶法及ABC法等。本实验采用蛋白质A—琼脂糖—4B亲和层析柱,从兔血清中一步提纯免疫球蛋白G,用     

小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用

制备小鼠抗兔IgG的mAb,经标记HRP和FITC后,应用于ELISA、Western blot、免疫组织化学染色试验以及FCM.以正常兔IgG为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过常规B淋巴细胞融合技术,获得两株分泌抗兔IgG mAb的杂交瘤细胞株,间接ELISA腹水效价均达1 ×10-7,且亚类均为IgG1(κ).抗体经鉴定、纯化后,以改良的过碘酸钠法标记HRP,本室常规方法标记FITC.FITC标记的2A1 mAb的F/P值为4.1,2F11的F/P值为2.7.HRP标记抗体的效价和工作浓度分别:2A1为1:25600和1:3200,2F11为1:102400和1:25600.在相同工作浓度条件下,ELISA、Western blot的实验结果,HRP标记的2F11 mAb明显优于商品化抗兔pAb,而且,2A1和2F11mAb经标记后还可用于免疫组化和FCM,显示出很好的应用前景.     

抗组胺免疫球蛋白的制备

<正> 为了探讨运用荧光抗体分析组胺受体及ELISA测定体液组胺浓度,本文进行了抗组胺免疫球蛋白的制备。 二盐酸组胺的分子量为184,抗原性很弱。本文参照文献(Colombo 1984)将牛血清白蛋白与组胺交联以增加组胺的抗原性。用放射性核素跟踪法~3H-组胺(Amersham)判定牛血清白蛋白与组胺结合分子比为1:12。用此结合物和组胺分别免疫新西兰纯种雄性白兔,前者免疫获得成功,效价达1:16,组胺免     

免疫球蛋白同种异型遗传标记及父权测定

导言关于免疫球蛋白(Ig)受遗传控制的资料系从研究同种异型遗传标记(allotypicmarkers)中获得。同种异型标记是Ig分子上的抗原,可用免疫学方法测定。这种抗原存在于许多哺乳类动物。同种异型标记具有特异性,即同一种族内的个体特异性,它反映了Ig分子结构上由遗传决定的差异。     

人血清免疫球蛋白工作标准的制备与标定

本文报导混合浓缩人血清工作标准(89-1)的制备和用WHO相应参考标准血清标定出其中五类免疫球蛋白(Igs)及IgG4亚类含量。该制剂主要用于体外测定IgG、IgA、IgM的工作标准,也可供作体外测定IgD、IgE、IgG4的工作标准。混合前每份血清均无乙型肝炎表面抗原、转氨酶正常。定量分装为每安瓿0.5ml,经冷冻干燥后,4℃保存。参照国际参考标准血清67/97及67/37,分别以免疫单扩散法标定89-1中IgG、IgA、ISM含量;以酶联免疫吸附试验(ELISA)标定IgD、IgG4和IgE含量。其中IgG、IgG4、IgA、IgM含量,应用本室制备的相应单克隆抗体(McAb)标定,而IgD和IgE应用多克隆抗体(PcAb)进行标定。并用五剂量法及四剂量法分别计算Igs含量。     

兔抗人PON2抗体的制备与初步应用

目的:制备兔抗人PON2(paraoxonase-2)的多克隆抗体并进行初步鉴定.方法:生物信息学方法分析人PON2蛋白序列,选取人兔同源性较低,亲水性及免疫原性较强的片段,通过大肠杆菌原核表达系统进行重组表达,获得GST-PON2融合蛋白用于免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,通过XX方法分离纯化得到的抗PON2多克隆抗体,用West-ern blot、间接免疫荧光对其进行特异性及灵敏度鉴定.结果:成功获得了高表达的相对分子质量(Mr)为46 000的PON2重组融合蛋白;Western blot鉴定结果显示此多克隆抗体可特异识别肝脏总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中Mr为39 000的天然PON2蛋白;间接免疫荧光结果显示此多克隆抗体所识别的蛋白定位于SY5Y细胞胞质中.结论:抗人PON2的多克隆抗体特异识别肝总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中的天然蛋白,可用于PON2的研究及临床检测.     

神经组织的电镜酶标记方法

电镜免疫细胞化学是利用抗原与抗体反应的原理对生物结构的化学成分进行定位和定量分析的方法,为了显示细胞中某种化学成分,需具有该成分的标记抗体及标记物,电镜常用的标记物有铁蛋白、辣根过氧化物酶和胶体金等。近十年来,免疫电镜金标的报道日益增多,酶标则相对较少。在实际工作中,有些组织金颗粒很难进入,需用酶标才能完成。结合我们的经验,介绍神经组织的酶标记方法。     

单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记

<正> 单克隆抗体(下称单抗)由于仅有唯一特异抗原结合位点,其标记较多克隆抗体困难,尤其应用IgM单抗则更为困难。作者用戊二醛二步法,过碘酸钠氧化法。和戊二醛-过碘酸钠氧化法标记IgM单抗均未成功。而用改良过碘酸钠氧化法得到满意效果。     

人免疫球蛋白轻链的提纯、抗血清制备及临床应用

人Ig轻链是一条由213～214个氨基酸构成的多肽链,分Kappa和Lambda两型,分子量22,500,在多发性骨髓瘤,轻链病患者及肾功能损伤者的血和尿中,轻链明显增多,故纯化的轻链及其单价抗血清是诊断这类疾病所必须的诊断试剂。 取本周氏蛋白尿以固体硫酸铵粗提,藉DEAE-     

酶标记抗人IgM McAb及其初步鉴定应用

采用辣根过氧化物酶(HRP),以改良过碘酸钠法标记了国内三个单位制备的6种抗人IgM单克隆抗体(McAb),并对其进行了初步鉴定和应用,结果显示这些HRP标记抗体的效价高低不一。分析表明McAb与多克隆抗体一样,其标记前的效价高低是决定HRP标记后效价高低的关键因素。选择高效价的HRP-抗人IgM McAb用于ELISA间接夹心法中检测病人血清特异性IgM抗体,其特异性和敏感性与采用HRP-羊抗人μ链免疫血清检测结果基本相同。     

B淋巴细胞对兔免疫球蛋白和兔抗鼠IgM抗体的提呈作用

本文采用兔免疫蛋白特异的鼠T细胞株为靶细胞,以T细胞的增殖和IL-2的产生活性为反应指标,探讨了小鼠B淋巴细胞兔免疫球蛋白和兔抗鼠IgM等抗原的提呈作用。实验结果显示,B细胞对兔抗鼠IgM抗体有很强的提呈作用,提呈兔抗鼠IgM抗体所需的抗原浓度较低,比兔免疫球蛋白低1000倍以上,当用巨噬细胞作为抗原提呈细胞时,则无上述差异。故提示可用兔抗鼠IgM抗体模拟抗原特异性B细胞的高效抗原提呈作用。此研究结果为进一步探讨抗原特异性B细胞抗原提呈作用的特点,以及T—B细胞间相互作用的途径和机制,提供了有用的实验模型。     

巴曲酶对兔动脉粥样硬化的作用

为了探讨巴曲酶对动脉粥样硬化的作用，我们将50只日本大耳白兔分成对照组和高脂组，待高脂组形成动脉粥样硬化模型后再分为3组(安慰剂组、治疗组1和治疗组2)。治疗组以巴曲酶干预四周，同时用生理盐水注射安慰剂组和对照组，取治疗前、中、后动物的主动脉，分别将斑块内脂质、内皮细胞、平滑肌、胶原纤维染色，弹力纤维自发荧光，用普通光学显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察。结果显示治疗四周后治疗组兔动脉粥样硬化斑块趋向于稳定性斑块，但治疗组1和治疗组2之间无明显区别。因此我们认为巴曲酶具有稳定动脉粥样硬化斑块的作用，但其剂量—效应关系不明确，机理尚需进一步研究。     

制备胶体金标记抗体的新方法

近年来免疫细胞化学方法发展迅速。其中应用胶体金标记抗体的免疫金染色法(IGS,用于电镜水平)和免疫金银染色法(IGSS,用于光镜水平),与目前我国较广泛应用的免疫荧光法或免疫酶法相比较,具有如下优越性:染色步骤简便,不需用有致癌性的显包底物:可同时应用于光镜和电镜;电镜下分辨率高,不影响原有超微结梅的观察;可进行双重或多重免疫标记;敏感性比免疫荧光法及免疫酶法高,是迄今最敏感的免疫细胞化学方法。国外商品化供应的胶体金标记抗体,制备过程中需用超速离心机离心,不仅成本高,售价昂贵,而且离心后的胶体金     

草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM, 以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠, 3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 用ELISA法对杂交瘤进行筛选, 并鉴定mAb的生物学特性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后, 共获得5株抗草鱼IgM的mAbs, 分别命名为4B3、 2B11、 4D5、 3F2和4E6, 它们的细胞上清ELISA效价为1∶ 3 200～1∶ 6 400, 其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶ 6 400和1∶ 256 000, 经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1.交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应, 除mAb 4B3外, 其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应, 而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应.mAb 4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应, 而与其他鱼类血清反应很弱.免疫印迹实验结果表明mAb 4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链.ELISA检测mAb 4D5对草鱼IgM的敏感性达10 μg/L.结论:制备的抗草鱼IgM mAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等, 具有广阔的应用前景.