DNA甲基化在急性冠脉综合征患者CD4+CD28-T细胞CD28表达缺失中的作用

目的 通过研究急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血CD4+T细胞CD28 mRNA水平和CD28基因启动子调节序列的甲基化状态,旨在探讨DNA甲基化在ACS患者CD4+CD28-T细胞CD28表达缺失中的作用.方法 免疫磁珠分离CD4+T细胞经逆转录后,实时定量PCR(real time-PCR)技术检测CD4+T细胞CD28mRNA的表达水平,亚硫酸氢钠测序检测CD28基因启动子调节序列的甲基化状态.结果 与正常对照组相比,ACS患者CD4+T细胞CD28mRNA表达水平显著减低,差异具有统计学意义[正常对照组比ACS组:(1.066±0.162)比(0.401±0.069),P<0.05].CD28基因启动子区域的甲基化水平显著增高,差异有统计学意义[正常对照组比ACS组:(24.47±3.17)%比(43.33±1.52)%,P<0.05].CD28基因启动子区域DNA甲基化水平与CD28mRNA表达水平呈显著负相关(P=0.01,r=-0.579).结论 ACS患者CD4+T细胞CD28基因启动子区域高甲基化调控了CD28基因转录抑制.DNA甲基化参与了CD4+CD28-T细胞的形成.     

FasL基因转染对大鼠肥大细胞凋亡的影响

目的：观察FasL基因转染对大鼠肥大细胞凋亡的影响。方法：RT-PCR法扩增大鼠FasL穿膜区和胞外区cDNA，成功构建pcDNA3．1／FasL真核表达质粒，瞬时转染RBL-2H3，RT-PCR、免疫印迹法鉴定FasL在RBL-2H3上的表达，Annexinv流式细胞检测pcDNA3．1／FasL转染RBL-2H3后细胞的凋亡情况。结果：获得FasL穿膜区和胞外区eDNA，构建pcDNA3．1／FasL真核表达质粒，瞬时转染RBL-2H3后在细胞膜和上清均有FasL的存在，瞬时转染RBL-2H3后48小时，细胞发生凋亡。结论：吧大细胞可以通过Fas-FasL途径凋亡，为FasL基因应用于过敏性疾病的治疗提供依据。     

CD28共刺激信号的传导途径

目前大量实验已证实CD28和CTLA－4与其配体B7家族分子结合后所产生的共刺激信号（costimulatorysignal）在T细胞活化过程中起重要作用。关于CD28和CTLA－4信号传导的分子机制的研究正受到重视。由于CTLA－4的功能尚待进一步确定，信号传导方面的资料又较少，本文仅就CD28信号的启动、信号传导中涉及的分子作一综述，并将CD28共刺激途径与TCR途径进行了简略比较     

人BAFF-R基因启动子活性的初步研究

目的以B淋巴细胞刺激因子受体BAFF-R基因5'上游区序列为研究对象,初步鉴定、分析该基因的启动子所在区域。方法克隆BAFF-R基因5'侧翼区1823 bp序列,构建8个含有不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-B1～B8,将这8个序列缺失重组质粒与psv-β-gal质粒共转染细胞,检测荧光素酶的相对活性,确定启动子所在区域。结果8个重组质粒中pGL3-B2、pGL3-B3、pGL3-B5、pGL3-B6启动子的活性较低;pGL3-B7启动子的活性最强,pGL3-B8启动子活性最低。结论BAFF-R基因5'端-288～-430、-712～-868和-1420～-1562三个区段可能存在转录沉默子元件,-617～-712和-1277～-1420区段存在转录增强子元件,BAFF-R基因的核心启动子可能位于-1420～+261区域。     

小鼠CD86基因启动子的构建及活性分析

为构建小鼠CD86启动子,并对其特异性调控能力进行鉴定。首先自C57BL/6J小鼠基因组中采用高保真PCR扩增小鼠CD86基因的启动子,经测序鉴定后,插入pCDNA3.1-EGFP重组质粒。然后分别转染小鼠来源细胞株:RAW264.7、NIH/3T3、P815、SP2/0、EL4细胞,观察各细胞内绿色荧光蛋白的表达。结果显示,小鼠CD86基因启动子的序列与GenBank报道一致;双酶切鉴定证实小鼠CD86启动子序列已经克隆入重组载体;小鼠CD86启动子能调控EGFP在巨噬细胞系RAW264.7细胞中表达,不能调控EGFP在NIH/3T3、P815、SP2/0和EL4非抗原提呈细胞内表达。说明成功构建小鼠CD86基因启动子,且该启动子具有特异性调控目的基因表达的活性。     

抗人CD28激发性单抗对T细胞淋巴瘤的抑制作用研究

目的:研究鼠抗人CD28单克隆抗体(克隆号:2F5)对T淋巴细胞瘤的抗肿瘤效应,为抗体介导肿瘤靶向治疗提供新的方法和思路。方法:流式细胞术检测鼠抗人CD28单克隆抗体2F5对人T淋巴瘤细胞株Jurkat细胞表面膜型CD28分子的识别;MTT法检测2F5对Jurkat细胞体外增殖的影响;将Jurkat细胞株接种于裸鼠腋下,建立Jurkat细胞荷瘤裸鼠模型;经瘤内多点注射2F5(注射剂量1μg/mm3),逐日观察肿瘤的大小和裸鼠的生存状态。结果:2F5能够识别Jurkat细胞表面CD28分子,阳性结合率可达93.37%;2F5与Jurkat细胞共培养后,显微镜下观察可见胞质中出现黑色颗粒,胞膜破裂,细胞的折光性和立体感减弱;MTT法分析结果显示,抗CD28单抗对Jurkat细胞的体外增殖具有明显的抑制作用;将Jurkat细胞接种35只裸鼠(成瘤率达70%);经瘤内多点注射2F5,35天后荷瘤小鼠体内肿瘤的生长速率明显降低;而生理盐水对照组肿瘤生长无明显改变。结论:鼠抗人CD28单克隆抗体2F5通过与Jurkat细胞表面膜型CD28分子结合对其增殖具有明显的抑制作用,提示CD28分子可作为治疗T淋巴瘤的一个潜在靶点,抗体对治疗CD28分子阳性的肿瘤具有潜在临床应用价值。     

CD28共刺激信号的传导途径

目前大量实验已证实ＣＤ２８和ＣＴＬＡ４与其配体Ｂ７家族分子结合后所产生的共刺激信号在Ｔ细胞活化过程中起重要作用。关于ＣＤ２８和ＣＴＬＡ－４信号传导的分子机制的研究正受到重视。由于ＣＴＬＡ－４的功能尚待进一步确定，信号传导方面的资料又较少，本文仅就ＣＤ２８信号的启动、信号传导中涉及的分子作一综述，并将ＣＤ２８共刺激途径与ＴＣＲ途径进行了简略比较。     

CD28协同刺激信号传导的研究进展

T细胞表面分子 CD2 8介导的协同刺激信号在 T细胞的激活、增殖、抗凋亡及促进多种细胞因子的分泌中起重要作用。有关其活化信号在 T细胞内的传导已成为免疫学研究的热点。近年的研究表明 ,CD2 8在 T细胞内可通过多种信号传导分子 ,如 PI3K、Grb2、A- SMase、PKC- θ等传导活化信号 ,亦可通过 Itk、MKP等传导活化抑制信号 ,从而调控 T细胞的活化、增殖等作用     

人CD28基因的分子克隆及其痘苗病毒载体介导的真…

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人Ｊｕｒｋａｔ细胞克隆了ＣＤ２８ ｃＤＮＡ，将ＣＤ２８全编码区基因片段重组入ＰＵＣ质粒，测序证实所获得的为人ＣＤ２８基因。以痘苗病毒天坛株国载体，构建表达人ＣＤ２８的重组痘苗病毒株，并在重组病毒感染的细胞膜上表达人ＣＤ２８膜抗原，拟用该抗原免疫小鼠以制备抗ＣＤ２８的抗体。     

T细胞表面分子CD28研究进展

Ｔ细胞表面分子ＣＤ２８是粘附分子免疫球蛋白超家族的一员，ＣＤ２８与其天然配基Ｂ７结合可发挥共刺激作用，作为第二信号介绍Ｔ细胞激活，促进Ｔ细胞增殖及分泌多种细胞因子并介绍导Ｔ，Ｂ细胞粘附，防止克隆无反应状态的形成。     

CD28复合刺激信号对人外周血T淋巴细胞c-Re1的影响

报道ＣＤ２８信号传导对正常人外周血Ｔ淋巴细胞原癌基因ｃ－Ｒｅ１的影响。用免疫磁珠阴性选择法从外周血单个核细胞中分离出Ｔ淋巴细胞，经ＣＤ２８单克隆抗体及ＰＭＡ复合刺激，提取胞核和胞浆蛋白， 分别用于与ｃ－Ｒｅｌ抗血清或磷酸化酪氨酸的单克隆抗体做免疫沉淀反应和／或ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，用ｃ－Ｒｅｌ抗体作为探针。最后用放射自显影技术显示ｃ－Ｒｅｌ的存在和酪氨酸的磷酸化。采用ＣＴＬＬ法测定Ｔ细胞上清液的ＩＬ－２量。研究结果表明：ＣＤ２８的复合刺激促进ｃ－Ｒｅｌ的诱生、核内转移和酪氨酸成酸化，并使活化的Ｔ细胞ＩＬ－２的产生增加。这些结果证明ＣＤ２８依赖的酪氨酸磷酸化的Ｔ细胞途径与ｃ－Ｒｅｌ有直接的相关。     

老年人T细胞膜型CD28及血清中可溶性CD28的表达及其意义

分析老年人(年龄在60岁以上)外周血T细胞膜型CD28(mCD28)及血清中可溶性CD28(sCD28)的表达水平,探讨该分子在老年人免疫功能改变中的意义。分别收集肝素抗凝及不抗凝的老年人外周血,抗凝血经分离获取单个核细胞,间接免疫荧光及流式细胞仪分析,老年人T细胞mCD28的阳性表达率为男性(41.56%±11.23%)及女性(42.97%±12.02%)。与年轻人[男性(61.51%±17.45%)及女性(62.38%±16.22%)]相比,差别具有显著性(P<0.01)。酶联免疫吸附法(ELISA)检测,老年人血清中sCD28的含量为男性(1.08±0.45)及女性(0.98±0.47)ng/ml,与青年人[男性(0.55±0.16)及女性(0.52±0.13)ng/ml]相比,差别具有显著性(P<0.01)。老年人T细胞mCD28的表达水平下降,而血清中sCD28的含量升高。     

CIK/NK细胞4周培养过程中的CD27、CD28的表达及其意义

目的:了解细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞和自然杀伤（NK）细胞在培养过程中CD27和CD28的表达变化规律。方法:通过流式细胞仪检测CD3+CD56+ CIK细胞以及CD3-CD56+ NK细胞在4周培养过程中其上CD27和CD28的表达变化。结果:CD27在CIK和NK细胞上均于培养的第2周达到最高峰,分别为（44.57±4.07）％和（51.02±5.20）％,但之后逐步下降,在培养第4周降至30%左右的水平。CD28在CIK和NK细胞上分别是在第3周和第2周时达到表达的最高峰,为（4.40±0.66）％和（45.14±3.58）％,之后迅速下降,在培养第4周已经几乎消失。结论:根据CD27和CD28在CIK/NK细胞上的表达变化规律,CIK/NK细胞的收获时机以培养第3周为宜。     

CD28单抗对CD3AK细胞增殖及表型的影响

CD3AK细胞是用小剂量CD3单抗交联CD3分子而活化的T细胞 ,它具有较强的细胞增殖和细胞毒效能。CD2 8分子则是T细胞激活过程中所需的协同刺激分子 ,可提供T细胞活化所需的第二信号。本文利用CD2 8单抗作为CD2 8分子的配体 ,观察了CD2 8信号途径的激活对CD3AK细胞的影响。结果显示CD2 8单抗可增强CD3AK细胞的增殖活性和趋化团聚形成集落的能力 ,并优先引起CD4+T细胞的增殖。     

系统性红斑狼疮患者CD28表达及其意义

ＣＤ２８是Ｔ细胞激活中重要的共刺激分子。为了解Ｂ７－Ｃ礤刺激途径在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）中的作用，我们对３０例期ＳＬＥ２外周血Ｔ细胞ＣＤ２８的表达进行了检测，并分析了其激活后凋亡情况。结果表明，ＳＬＥ组的ＣＤ２８Ｔ细胞低于正常对照组，在抗ＣＤ３单抗刺激后ＣＤ２８细胞凋亡率增加。这提示ＳＬＥ中Ｂ７－ＣＤ２８共刺激途径介导的ＡＩＣＤ可能导致ＳＬＥ中的Ｔ细胞淋巴细胞贫血症。     

CD28在多发性硬化患者CD8+淋巴细胞的表达

目的探讨CD28在多发性硬化(MS)患者CD8+淋巴细胞的表达水平.方法流式细胞仪测定16例复发期MS患者和20例对照组外周血淋巴细胞CD28+、CD8+CD28-和CD8+CD28+的百分率.结果复发期MS患者淋巴细胞CD8+CD28-百分率低于对照组,CD28+和CD8+CD28+的百分率与对照组无明显差异;甲基强的松龙治疗对CD28+、CD8+CD28-和CD8+CD28+的百分率无影响.结论参与MS的发病的CD8细胞是CD8+CD28-细胞.     

CD28/B7和CD134/CD134L共刺激通路阻断与免疫抑制剂联合治疗对移植心脏存活时间影响

目的探讨CD28-B7、CD134-CD134L共刺激信号通路阻断以及雷帕霉素、供体特异性脾细胞输注(DST)等联合治疗对心脏移植排斥反应的影响。方法将DA大鼠心脏移植到LEW大鼠的腹腔内,用CTLA4-Ig融合蛋白、CD134L抗体分别阻断CD28-B7、CD134-CD134L共刺激信号通路,以及雷帕霉素、DST等不同治疗组合观察对移植心脏存活时间的影响,并利用免疫组化方法观察炎症细胞浸润情况。结果CD134-CD134L、CD28-B7共刺激信号通路单独阻断和雷帕霉素单独治疗后心脏存活时间分别为7.6+0.5d、12+3.5d和19.1+6d;CD134-CD134L、CD28-B7共刺激信号通路阻断与雷帕霉素联合治疗心脏存活时间分别为25.2+2.2d和31.5+4.6d。CD134-CD134L、CD28-B7共刺激信号通路共同阻断与雷帕霉素、DST联合治疗心脏存活时间明显延长,为59.1±10.4d,另外有2例存活时间超过120d。结论单独雷帕霉素、CD134-CD134L和CD28-B7通路阻断对移植心脏炎症细胞浸润和组织坏死程度无明显改善,而两个共刺激通路同时阻断与雷帕霉素、DST联合治疗时改善效果最明显。     

Genetic analysis of CD28 signaling

T cell activation is central to initiating an immune response. Two signals are required: an antigen-specific signal through the T cell receptor (TCR) and an antigen-independent costimulatory signal, primarily through CD28 in naïve T cells. Although many of the molecules involved in TCR signal transduction have been identified, the signaling pathways downstream of CD28 involved in costimulation are not well-defined. Through mutagenesis, we have generated a panel of Jurkat T cell lines in which CD28 costimulation fails to upregulate the RE/AP composite element of the IL-2 promoter. Biochemical analysis and genetic rescue of the defects in these cell lines will lead to a better understanding of CD28 signal transduction.