青蒿琥酯对人子宫内膜癌细胞体外的抑制作用

目的研究青蒿琥酯(Artesunate, Art)对人子宫内膜癌细胞Ishikawa的体外抑制作用,为进一步的临床研究及应用提供依据。方法培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,利用MTT法测定不同浓度Art对Ishikawa细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）观察药物作用前后细胞凋亡及周期的变化。结果Art显著抑制Ishikawa细胞的增殖,IC50为45.063μmol/L;25μmol/L Art作用Ishikawa细胞24h后即能检测出典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞凋亡率最高达58.31%;低浓度可将细胞阻滞在G₁期,当浓度达到100μmol/L时,Art可将细胞阻滞于G₂期。结论Art能显著抑制Ishikawa细胞生长,并能调整其周期,诱导凋亡,有可能开发为有效治疗子宫内膜癌的辅助药物。     

TRAIL逆转基质细胞黏附介导Jurkat细胞耐药的研究

目的:构建骨髓基质细胞-白血病共培养模型模拟白血病微环境,探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)逆转黏附介导白血病耐药的有效性.方法:构建Jurkat细胞共培养模型、扫描电镜观察.以0 5 μmol/L DNR作用6和12 h,流式细胞仪检测Jurkat细胞TRAIL-R1、TRAIL-R2的表达.分为TRAIL组、DNR组和TRAIL协同DNR组,AnnexinⅤ-FITC/PI标记后流式细胞仪定量Jurkat细胞凋亡率,并检测细胞内DNR蓄积浓度.MTT法测定IC50,计算200 ng/mL TRAIL作用18 h的耐药逆转倍数.结果:0 5 μmol/L DNR能上调TRAIL-R2的表达,作用6 h即可达高峰,但不能上调TRAIL-R1的表达,骨髓基质细胞黏附均不影响Jurkat细胞TRAIL-R1和TRAIL-R2的表达.骨髓基质细胞黏附明显抑制DNR的凋亡诱导效应,但对TRAIL的凋亡诱导效应无明显影响,且与DNR间有协同效应.200 ng/mL TRAIL能使Jurkat细胞对DNR的IC50由2 30 μmol/L降至0 049 μmol/L,逆转倍数FR为46 94倍,但未观察到TRAIL上调Jurkat细胞内DNR的蓄积浓度.结论: TRAIL协同DNR能有效逆转黏附介导Jurkat细胞耐药,其机制不依赖于白血病细胞内DNR蓄积浓度的变化.     

洛铂对鼻咽癌抗肿瘤作用的体外实验研究

目的 探讨洛铂对鼻咽癌的体外抗肿瘤作用及其可能的机制,为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供实验依据。方法 在体外将不同浓度洛铂分别作用于低分化鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1和SUNE1,采用CCK-8法检测细胞活性;碘化丙啶（PI）染色分析细胞中DNA的含量,流式细胞仪检测细胞周期情况;采用Annexin V-FITC／PI双染法检测细胞凋亡情况;采用蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 在体外洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h具有明显的细胞抑制作用,并表现出浓度依赖性。洛铂作用鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1、SUNE1的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（4.05±0.49）μmol/L、（4.32±1.17）μmol/L和（2.51±0.15）μmol／L。洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h后,在较低浓度（0.125倍IC₅₀）时将细胞周期阻滞在G₂期,同时伴随G₂期相关蛋白Cyclin B1和phospho-cdc2（Tyr15）表达增高;而在较高浓度（0.5倍IC₅₀）时则诱导细胞呈Caspase依赖性细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论 洛铂对鼻咽癌细胞具有明显的细胞毒作用,且呈浓度依赖性;其机制表现为双重作用,即在较低浓度时阻滞细胞于G₂期和在较高浓度时诱导细胞凋亡,这为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供可能性。     

水杨酸钠对HL—60／VCR细胞多药耐药的部分逆转

目的：研究水杨酸钠(Na-Sal对HL-60／VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。方法：采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术等方法，观察非甾体抗炎药Na-Sal对HL-60／VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。结果：Na-Sal对HL-60／VCR细胞的生长具有抑制作用并表现出剂量依赖性，1mmol/L的非细胞毒剂量的Na-Sal和化疗药物联合应用可以提高多种化疗药物的细胞毒性作用，逆转倍数为1．01-3．26，相对逆转效率为0．52％-73．62％。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素(DNR)浓度发现，Na-Sal并不增加HL-60／VCR细胞内DNR浓度。结论：Na-Sal能有效地部分逆转HL-60／VCR细胞的多药耐药性。     

S-Trityl-L-Cysteine诱导HL-60细胞有丝分裂阻滞和凋亡

目的研究 S-三苯甲基-L-半胱氨酸（S-Trityl-L-Cysteine,STLC）对急性白血病 HL-60细胞有丝分裂阻滞和凋亡的影响,初步探讨药物作用下HL-60细胞有丝分裂阻滞和凋亡间的因果关系。方法将HL 60细胞分成不加药对照组和不同剂量 (1、2.5、5、10、50、100 μmol/L) STLC加药组,药物作用一定时间后,台盼蓝染色观察HL-60细胞活性变化, MTT法检测其对HL 60细胞的抑制效应, 免疫荧光染色观察细胞及其核的特征,流式细胞术分析细胞周期和亚二倍体峰的变化,Annexin-v/PI双染检测药物处理前后正常骨髓细胞凋亡比率。结果MTT和台盼蓝染色实验显示STLC抑制HL-60细胞生长并致其死亡;免疫荧光染色见核破裂及凋亡小体和细胞体积增大等典型有丝分裂灾变细胞凋亡现象;细胞周期和凋亡分析表明 STLC 致HL-60细胞凋亡比率与药物浓度和作用时间呈正相关,致G₂/M期阻滞比率24 h和48 h随药物浓度增加而升高,而72 h无明显变化,进一步研究发现STLC处理早期即可致G₂/M期有丝分裂阻滞和凋亡的同时发生,撤除药物作用后有丝分裂阻滞呈可逆性恢复,STLC作用下正常骨髓细胞凋亡比率无明显变化。结论STLC诱导HL-60细胞阻滞在G₂/M期并致其凋亡,显示较强的抗有丝分裂和抗肿瘤效果,药物处理早期有丝分裂阻滞和凋亡同时发生提示尚有该药物作用新机制的存在。     

水杨酸钠对HL-60/VCR细胞多药耐药的部分逆转

目的 :研究水杨酸钠 (Na Sal)对HL 6 0 VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。方法 :采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术等方法 ,观察非甾体抗炎药Na Sal对HL 6 0 VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。结果 :Na Sal对HL 6 0 VCR细胞的生长具有抑制作用并表现出剂量依赖性 ,1mmol L的非细胞毒剂量的Na Sal和化疗药物联合应用可以提高多种化疗药物的细胞毒性作用 ,逆转倍数为 1 0 1～ 3 2 6 ,相对逆转效率为 0 5 2 %～ 73 6 2 %。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素 (DNR)浓度发现 ,Na Sal并不增加HL 6 0 VCR细胞内DNR浓度。结论 :Na Sal能有效地部分逆转HL 6 0 VCR细胞的多药耐药性     

三氧化二砷对人胃癌耐药细胞系SGC7901/ADM耐药逆转及凋亡诱导作用的探讨

目的:探讨中药三氧化二砷(As2O3)对人胃癌多药耐药细胞系(SGC7901/ADM)的耐药逆转及凋亡诱导作用.方法:应用免疫细胞化学方法(PV法)测定不同剂量的As2O3用药前后细胞内mdr-1基因产物P-gp的表达变化;同时用流式细胞仪对以上各组细胞进行细胞周期解析和凋亡率的测定.结果:As2O3在0.10～0.75μmol/L浓度范围内能够逆转SGC7901/ADM细胞内P-gp的表达,并将细胞阻滞于G0～G1期、诱导细胞凋亡(P＜0.01),其作用随As2O3剂量增加而增大.结论:在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADM中,As2O3具有耐药逆转和凋亡诱导双重作用,并呈剂量依赖性.     

核因子-κB抑制剂逆转人胃癌细胞对长春新碱耐药性的研究

目的研究核因子2κB(NF2κB)抑制剂MG2132逆转胃癌耐药的可能性。方法以胃腺癌细胞株SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药株SGC7901/VCR为研究对象,通过凝胶电泳迁移率分析检测NF2κBDNA结合活性,ELISA法检测细胞内IκB2α蛋白的表达,免疫细胞化学法观测细胞内p65核转位,MTT法检测癌细胞对药物的敏感性。结果SGC7901/VCR耐药细胞中,NF2κB的基础活性及不同浓度VCR诱导的NF2κB活化程度均比敏感细胞高。NF2κB抑制剂MG2132(2.5μmol/L)预处理耐药细胞30min,可明显抑制VCR诱导的NF2κB活化、IκB2α降解和p65核转位。VCR对耐药细胞和敏感细胞的半数抑制浓度分别为40.03mg/L和0.26mg/L,MG2132可显著提高耐药细胞对VCR的敏感性,耐药倍数由154.0降至16.5,但对敏感细胞影响不大。结论MG2132可通过抑制NF2κB的活化,在一定程度上逆转胃癌细胞对长春新碱的耐药性,提高化疗效率。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度和细胞内VCR蓄积的影响

目的:测定中药柴胡(BupleurumChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)和长春新碱(Vincristine,VCR)浓度的影响,探索柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法:以Fura2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL7402细胞内[Ca2 ]i。高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化。结果:柴胡提取物可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001),可使细胞内VCR浓度升高(P<0.01)。结论:柴胡提取物可以增加VCR在BEL7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL7402细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)。钙离子通道阻滞作用可能为柴胡提取物逆转BEL7402细胞多药耐药的机制之一。     

三氧化二砷对人宫颈癌细胞Fas 表达和钙含量的影响

 目的 研究人宫颈癌Hela细胞经三氧化二砷(As₂O₃)处理后的Fas表达和钙含量变化。方法利用MTT法观察As₂O₃对Hela细胞的生长抑制作用，Annexin V-FITC+PI双参数检测细胞凋亡。流式细胞仪测定As₂O₃处理后Hela细胞Fas阳性百分率及胞内钙离子(IECa²⁺)含量变化。结果 (1) As₂O₃可显著抑制Hela细胞生长，且剂量-效应和时间-效应关系显著(P<0．05)，其24h、48h和72h的IG50值分别为8．62μmol／L、6．77μmol／L和4．89μmol／L。(2) As₂O₃处理后Hela细胞凋亡率明显增加。(3) As₂O₃能显著增加Fas蛋白表达和IECa²⁺含量(P<0．01)。结论 As₂O₃在体外可显著抑制Hela细胞生长并引起凋亡，其机制可能与上调Fas表达和IECa²⁺含量有关。     

三氧化二砷逆转人肺腺癌A549/ R 细胞耐药及对GSTs 表达的影响

 目的 探讨三氧化二砷（As₂O₃）对人肺腺癌A549／R细胞耐药的逆转及谷胱甘肽S转移酶（GSTs）表达的变化。方法 分别采用生化方法及RT-PCR方法检测GSTs活性及GST-πmRNA表达水平的变化。结果 0．15μmol／L As2O3可使A549／R细胞内阿霉素（ADM）浓度增加，其IC50值由原来的0．495μmol／L降低至0．217μmol／L，逆转倍数为2．3倍。耐药细胞中GSTs活性增高，GST-πmRNA呈过表达状态。不同浓度的As2O3作用后，GSTs活性下降（P〈0．05），GST-πmRNA表达水平下调，呈浓度依赖性变化。结论 As₂O₃可部分逆转A549／R细胞对ADM的耐药性，GST-π的改变参与其耐药机制。     

米非司酮对子宫内膜癌细胞周期时相调控的研究

 目的 探讨抗孕激素米非司酮对子宫内膜癌细胞周期时相的调控作用. 方法 体外培养子宫内膜癌HHUA细胞,不同浓度米非司酮处理细胞24～96小时,流式细胞术（FCM）测定癌细胞周期分布的变化;免疫组化法观察细胞周期调控蛋白的表达变化. 结果 当抗孕激素米非司酮浓度≥5μmol/L作用癌细胞36小时,G1期细胞比率明显上升,S期细胞比率（SPF）降低（P〈0.05）;细胞周期调控蛋白p21和p16表达明显上调（P〈0.05）. 结论 抗孕激素米非司酮通过调节细胞周期相关蛋白表达使HHUA细胞阻滞于G1期,抑制癌细胞增殖.     

甲基莲心碱对乳腺癌MCF-7/Adr 细胞MDR逆转的研究

 目的 探讨甲基莲心碱（Neferine，Nef）对耐药人乳腺癌细胞增殖，细胞内ADM积聚浓度及mdr-1／P-gp表达的影响。方法 采用MTT法测定细胞毒作用，高效液相色谱法测定细胞内ADM积聚浓度，RT—PCR技术及蛋白质印迹技术检测mdr-1／P-gp表达。结果 10μg／ml Nef＋ADM组细胞的抑制率及细胞内ADM积聚浓度比ADM组高（P〈0.01）；20μg／ml Nef＋ADM组细胞抑制率及细胞内ADM积聚浓度较5μg／ml异博定＋ADM组及10μg／ml Nef＋ADM组均高（P〈0．01）。10μg／ml Nef＋ADM组MCF-7／Adr细胞mdr-1 mRNA及P-gp表达比ADM组明显下降（P〈0．01）。20μg／ml Nef＋ADM组细胞mdr-1mRNA及P-gp表达较10μg／ml Nef＋ADM组明显下调（P〈0．01）。结论 Nef能抑制耐药人乳腺癌细胞增殖。Nef能增加MCF-7／Adr细胞内ADM积聚浓度。Nef通过降低耐药人乳腺癌细胞mdr-1 mRNA及P-gp的表达逆转MDR。     

钙通道阻滞剂对体外培养的脑膜瘤细胞信号转导及增殖的影响

 目的 观察维拉帕米对体外培养的脑膜瘤细胞信号转导及增殖的影响并探讨其作用机制。方法 采用荧光光度计检测脑膜瘤细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]i)水平，结合细胞计数方法测定细胞的增殖情况。结果 1μmol／L维拉帕米能明显抑制血清诱导的脑膜瘤细胞的增殖(P<0．01)；细胞数为对照组的80％。10％的血清作用于脑膜瘤细胞以后，[Ca²⁺]i迅速升高到(435．3±34．9)μmol／L(P<0．01)。用维拉帕米预处理后，[Ca²⁺]i为221．1±26．1，升高辐度明显降低，(P<0．01)。结论 维拉帕米能抑制血清诱导的体外培养的脑膜瘤细胞增殖信号的转导，其作用机制与降低了[Ca²⁺]i增加有关。     

辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响

目的观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响。方法以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖、细胞周期相和细胞凋亡、CDK2和CDK4 mRNA表达、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达的影响。结果4、8、16μmol/LOP作用MCF-7乳腺癌细胞72h时,细胞增殖率分别为107.31%、168.06%、62.00%,G0/G1期细胞分别为(52.46±6.67)%、(50.19±7.39)%、(67.31±5.47)%,对照组(55.27±7.53)%,细胞凋亡率分别为(4.84±1.12)%、(6.48±1.36)%、(19.26±3.57)%,对照组(5.56±1.125)%,16μmol/LOP减少了细胞中CDK2、CDK4、Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的表达。结论4、8μmol/LOP促进MCF-7乳腺癌细胞增殖,16μmol/LOP则抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,这可能与OP影响细胞中CDK2、CDK4、Cyc-lin D1 mRNA及Cyclin D1表达有关。     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株SKOV3 细胞增殖抑制的影响

 目的 观察As₂O₃对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响。方法 采用MTT比色法，测定不同浓度As₂O₃对SKOV3细胞生长的抑制作用，并绘制浓度一抑制率量效曲线；用倒置显微镜及透射电镜观察药物作用后SKOV3细胞形态变化；流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 As₂O₃对SKOV3有明显抑制作用，且具有浓度和时间依赖性。72h时As₂O₃的IC50为4．67μM。As₂O₃ 1．0～4．0μM作用于SKOV3细胞在24～72h后均出现G2／M期阻滞，以48h最明显。As₂O₃ 2．0μM作用24h、48h后流式细胞仪检测SKOV3细胞的凋亡率分别为3．68％、6．66％。倒置显微镜和透射电镜均观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。结论 As₂O₃对卵巢癌SKOV3细胞的生长有明显的抑制作用，并可诱导SKOV3细胞周期阻滞及细胞凋亡。     

硒化麒麟菜多糖抑制人喉癌细胞株Hep-2增殖的作用

 目的 通过比较研究海藻麒麟菜多糖粗提物、无机硒化合物-亚硒酸钠（Na2SeO3）及其共价化合物-硒化麒麟菜多糖对人喉癌细胞株Hep-2的作用，探索新的具有抗肿瘤活性的有机硒化合物。方法 应用不同剂量的样品作用于Hep-2细胞株后，用MTT比色分析法计算肿瘤抑制率。结果 硒化多糖对Hep-2细胞的抑制率高于相同多糖浓度的麒麟菜多糖和相同硒浓度的亚硒酸钠（P〈0．05）。硒化多糖的抑制率可高达71．53％，其多糖IC50，与硒IC50，分别为1805μg／ml和7．0μmol／L，分别低于麒麟菜多糖的多糖IC50，（3034μg／m1）和亚硒酸钠的硒IC50（9．0μmol／L）。结论 硒化麒麟菜多糖具有抗Hep-2细胞增殖的活性，其抑制作用明显优于亚硒酸钠及天然麒麟菜多糖的抗肿瘤活性。     

23-羟基白桦酸抑制血管内皮细胞增殖和诱导凋亡的实验

 目的 研究23-羟基白桦酸（23-hydroxy betulinic acid，23-HBA）对人血管内皮细胞（human microcapillary endothelial cells，HMEC）增殖及凋亡的影响。方法 采用SRB法测定23-HBA对HMEC增殖的抑制率，并用流式细胞术测定23-HBA对HMEC周期及凋亡的影响。结果 23-HBA可明显抑制HMEC的体外增殖，IC50为40．44μg／ml。流式细胞术测定，HMEC出现典型的凋亡峰，其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高，与对照组相比，差别有统计学意义。HMEC的S期细胞含量明显上升，而G2／M期细胞含量下降。结论 23-HBA具有明显抑制血管内皮细胞增殖，诱导细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡及其作用机制的实验研究

 目的研究三氧化二砷（As₂O₃）诱导人鼻咽癌细胞株凋亡作用及其相关机制。方法采用流式细胞术，电镜、TUNEL方法检测As₂O₃诱导CNE1细胞凋亡作用，免疫组织化学法检测As₂O₃对CNE1细胞p53、bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果经As₂O₃处理的CNE1细胞发生凋亡，表现为FCM可检测到“亚二倍体峰”，形态学上可见核固缩，染色质边集，凋亡小体形成等改变；TUNEL法可检测到细胞内呈棕色颗粒的凋亡细胞，随着药物浓度升高，凋亡细胞发生率逐渐增多，As₂O₃目浓度为0．5mg／L、1．0mg／L和2．0mg／L作用48h后，CNE1细胞的凋亡指数分别为2．66±0．64、8．15±0．96和11．59±0．68，显著高于非药物处理组（0．43±0．43，P〈0．05）。经As2O3处理的CNE1细胞内p53和bax蛋白表达较对照组明显增加，与凋亡指数呈正相关关系（r=0．554，P=0．011；r=0．891，P=0．000…）；p53和bax蛋白表达也呈正相关关系（r=0．626，P=0．003）。结论As₂O₃在体外可诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡，其机制可能与上调p53、bax基因表达有关。