噬菌体生物扩增法检测痰标本结核分枝杆菌及耐药性测定

目前常规结核分枝杆菌(MTB)细菌学检查和药敏检测尚无法充分满足临床需要。以噬菌体为基础的结核分枝杆菌裂解试验,利用噬菌体生长快、特异性高的特性,快速准确地检测MTB,并进行药敏检测,近年来在结核病研究中备受关注[1-2]。本研究采用噬菌体裂解法快速检测肺结核患者痰标本中的MTB,同时检测对异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)的敏感性,并与改良罗氏培养法分离细菌及比例法药敏结果进行比较,现报告如下。材料与方法一、材料1.标本来源:70份涂阳痰标本均取自我院结防门诊部2005、2006年临床确诊的肺结核患者。2.噬菌体生物扩增法(PhaB)检测试剂由上海金浩公司提供。3.指示细胞:购自国家菌种保藏中心。为快速生长的耻垢分枝杆菌。用液体培养基将处于对数生长期的耻垢分枝杆菌调至工作浓度为109菌落形成单位,4℃保存备用。4.药物及其浓度:R、H、E粉购自沈阳红旗制药厂,S购自上海信谊药厂。4种药物的试验浓度分别为:H0.4μg/ml、R 20μg/mlS、5μg/ml、E 5μg/ml。二、方法1.标本前处理:70份涂片阳性肺结核患者痰标本用4%的氢氧化钠-半胱氨酸37℃水浴震荡液化20 min...     

噬菌体裂解法与BACTEC-460法在结核分支杆菌快速检测中的比较

目的：比较噬菌体裂解法与BACTEC－460法在结核分支杆菌快速检测及鉴定中的价值。方法：应用噬菌体裂解法和BACTEC－460法分别检测30株结构分支杆菌临床分离株、10株非结核分支杆菌和7株非分支杆菌，以及60份临床确诊的肺结核患者的痰标本，结果：所有结核分支杆菌临床分离株噬菌体裂解试验均为阳性，而非结核分支杆菌和非分支杆菌均为阴性。41份BACTEC－460培养阳性和19份BACTEC－460培养阴性的痰标本中，噬菌体裂试验分别有34份（82．9％）和5份（26．3％）阳性。结论：噬菌体裂解法可以简便，快速地检测结核分支杆菌，并且具有较高的敏感性的特异性。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用附182例分析

目的评价噬菌体生物扩增法检测痰、胸水、腹水中结核分枝杆菌的阳性检出率及临床应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法对68例痰标本,63例胸水标本,17例腹水标本等进行检测。并对60例痰标本同时进行涂片抗酸染色对比。结果噬菌体生物扩增法检测182例各类标本中,其阳性检出率分别为痰38%（26/68）胸水46%（29/63）腹水52%（9/17）脓汁1例阳性（1/4）,脑脊液19例和尿11例均为未检出阳性。60例痰标本同时做涂片抗酸染色,两者的阳性检出率有显著性差异（χ2=11.25P〈0.01）。结论噬菌体生物扩增法具有快速、灵敏、特异等优点。对痰菌阴性患者提高阳性检出率具有明显价值。同时对检测胸腹水中结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,无需特殊设备适宜在基层医院推广。     

应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

应用磁纳米捕获-PCR技术检测痰液结核分枝杆菌的研究

目的采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,以提高PCR检测的灵敏度,快速诊断结核病。方法以普通PCR为对照,采用磁纳米捕获技术富集187份结核和非结核呼吸系统疾病患者痰标本中的结核分枝杆菌,进行PCR检测。结果 152份肺结核患者痰标本41份(27.0%)涂片抗酸染色阳性,72份(47.4%)普通PCR检测阳性,126份(82.9%)磁纳米捕获-PCR检测阳性。35份非结核呼吸系统疾病患者,痰标本中抗酸染色均为阴性,1份普通PCR和磁纳米捕获-PCR检测均阳性,该患者临床诊断肺部感染合并陈旧性肺结核。结论采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,可显著提高PCR检测的灵敏度。     

两份痰标本代替三份痰标本涂片法的可行性研究

目的 探讨在可疑肺结核病例中能否用两份痰标本涂片法代替三份痰标本涂片法.方法 对1002例可疑肺结核病例的三份痰标本(即时痰、夜间痰、清晨痰)分别进行直接涂片、萋-尼尔逊氏抗酸染色和光学显微镜镜检.结果 即时痰+夜间痰+清晨痰组与夜间痰+清晨痰组的结核阳性率无显著性差异.结论 即时痰不能提高结核阳性率,在可疑肺结核患者中可以用夜间痰+清晨痰两份标本涂片法代替原方案即时痰+夜间痰+清晨痰的三份标本涂片法.     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

实时荧光PCR检测儿童肺结核粪便中Mtb-DNA的效果评价

目的 应用实时荧光PCR快速检测肺结核患儿粪便中Mtb-DNA,并初步评估其临床效果。 方法 收集肺结核住院儿童粪便标本76份,应用实时荧光PCR检测Mtb-DNA,检测结果与20例其他呼吸系统疾病患儿的粪便实时荧光PCR检测Mtb-DNA、76例粪便抗酸杆菌涂片检查以及41例患儿痰标本的涂片和(或)培养、实时荧光PCR检测结果进行比较。 结果 粪便实时荧光PCR检测敏感度达到23.68%(18/76),特异度为100.00％(20/20),肺结核患儿粪便PCR阳性率［23.68%(18/76)］明显高于涂片阳性率［6.58%(5/76)］,41例患儿中痰涂片和(或)培养阳性例数(15例)和痰PCR检测阳性例数(18例)高于粪便PCR检测阳性例数(11例)。 结论 实时荧光PCR检测儿童粪便Mtb-DNA,是一种特异度高、比较敏感、非侵入性且相对安全的儿童肺结核快速诊断方法。     

液基细胞学技术在肺结核诊断中的应用价值

目的 探讨液基细胞学技术(thinprep cytologic test,TCT)在肺结核诊断中的应用价值。方法 按照患者纳入标准搜集2017年11月至2019年2月河北省张家口市传染病医院诊治的248例初诊为疑似肺结核的患者,最终临床综合诊断确诊为肺结核患者181例,非肺结核患者67例。由结核科医生根据相应临床表现及体征按照每例患者选用1种类型临床标本的原则共采集248份临床标本,包括101份晨痰标本、67份胸腔积液标本、80份支气管肺泡灌洗液标本。248份标本均行TCT、萋-尼抗酸染色涂片镜检(Ziehl-Neelsen 染色涂片法镜检,简称“Z-N涂片法”)、BACTEC^TM MGIT 960液体培养法(简称“MGIT 960法”)检测分枝杆菌。采用SPSS 19.0软件进行数据的统计学分析,计数资料间的比较采用χ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 TCT检测248份标本、痰液标本、胸腔积液标本、支气管肺泡灌洗液标本的阳性率[分别为53.63%(133/248)、67.33%(68/101)、17.91%(12/67)、66.25%(53/80)]均明显高于Z-N涂片法 [分别为25.81%(64/248)、36.63%(37/101)、7.46%(5/67)、27.50%(22/80)](χ²值分别为46.788、19.736、9.449、20.833,P值分别为0.000、0.000、0.002、0.000);但TCT检测痰标本的阳性率明显低于MGIT 960法[81.19%(82/101)](χ ²=5.076,P=0.024),而检测胸腔积液及支气管灌洗液标本的阳性率与MGIT 960法[分别为25.37%(17/67)、70.00%(56/80)]差异均无统计学意义(χ ²=1.100,P=0.294;χ ²=0.377,P=0.539)。以临床诊断为参考标准,TCT、Z-N染色法、MGIT 960法检测所有临床标本的敏感度分别为72.93%(132/181)、30.39%(55/181)、85.64%(155/181),一致率分别为79.84%(198/248)、48.79%(121/248)、89.52%(222/248),特异度分别为98.51%(66/67)、98.51%(66/67)、100.00%(67/67)。 结论 TCT检测痰液、胸腔积液及支气管肺泡灌洗液标本中分枝杆菌的阳性率、敏感度均高于Z-N涂片法,对诊断肺结核具有重要临床应用价值。     

CRISPR-Cas13a检测在肺结核诊断中的价值

目的:评价应用CRISPR-Cas13a检测临床样本对肺结核的诊断价值。方法:采用回顾性研究方法，收集首都医科大学附属北京胸科医院2022年9月至2022年12月收治住院的102例经GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)确诊的肺结核患者的支气管肺泡灌洗液标本，作为结核病组；收集同期收治入院的100例非结核病患者(包括肺癌，细菌性肺炎，支气管扩张，慢性阻塞性肺疾病)的支气管肺泡灌洗液标本，作为非结核病组。所有患者的支气管肺泡灌洗液标本均进行涂片抗酸杆菌染色镜检、培养、Xpert检测及CRISPR-Cas13a检测。以Xpert检测结果为参照，评价CRISPR-Cas13a检测支气管肺泡灌洗液对肺结核的诊断价值。结果:结核病组102份标本中，CRISPR-Cas13a检测阳性为99份(97.1%),涂片阳性40份(39.2%),培养阳性68份(66.7%)。CRISPR-Cas13a检测阳性率明显高于涂片和培养法，差异有统计学意义(涂片：χ²=58.141,P<0.001;培养：χ²=30.250,P<0.0...     

涂阳肺结核患者密切接触者结核感染危险及相关因素分析

目的 了解涂阳肺结核患者密切接触者结核感染危险程度及相关因素。方法 2007年7月至2008年6月河北省20个县确诊的涂阳肺结核患者确认的1岁及1岁以上的7884例密切接触者在线索患者确诊后1个月内进行PPD试验,3个月后对第1次试验阴性者再次进行PPD试验。结果 涂阳肺结核密切接触者中＜15岁的儿童感染率为39.03%（153/392）,15岁及以上年龄组感染率为60.65%（4014/6618）。PPD试验强阳性率＜15岁的无卡痕儿童高达28.06%（110/392）,是有卡痕儿童（16.82%,147/874）的1.67倍,15岁及以上年龄组13.55%（897/6618）最低。随着线索患者痰中结核分枝杆菌菌量的增多,密切接触者感染率增高,痰中结核分枝杆菌菌量不同的线索患者的接触者感染率及PPD试验强阳性率差异均有统计学意义（χ²=38.42,P<0.01;χ²=235.11,P<0.01）。与线索患者为夫妻、父母、同学和同事关系的接触者感染率较高,为祖孙和兄弟姐妹关系的接触者感染率较低,不同关系接触者的感染率和PPD试验强阳性率差异均有统计学意义（χ²=127.14,P<0.05;χ²=18.97,P<0.05）。涂阳肺结核密切接触者年感染危险率为3.53%（ARI=10÷1133÷3×12×100%）。结论 涂阳肺结核密切接触者结核感染危险明显高于普通人群。接触者结核感染的危险与线索患者痰中结核分枝杆菌菌量、接触者与线索患者关系以及接触者的年龄有关。     

短化后复发肺结核的流行病学影响因素分析

目的　探讨河南省结核病控制项目短程督导化疗后肺结核复发的流行病学情况及其影响因素。方法 追踪河南省结核病控制项目治疗管理的涂阳肺结核病人,了解细菌学复发情况。结果 随访观察的涂阳肺结核患者经河南省结核病控制项目短程督导化疗方案治愈后复发率为3.12%;治疗后2、3个月及以后痰菌阴转的患者复发率分别是2.1%、4.2%和8.8%(P＜0.01);初、复治患者复发率分别为2.4%、4.7%(P＜0.01);不同年龄别复发率差异有显著性(P＜0.01);不同职业复发率差异有显著性(P＜0.01);年龄、肺部空洞型病灶、家庭经济贫困及痰菌阴转时间是复发的危险因素,遵守医嘱规则服药是保护性因素。结论 河南省结核病控制项目病人短程督导化疗后复发率与痰菌阴转时间高度相关,治愈后1年内复发率最高,完成疗程应随访观察1年。家庭经济贫困以及老年空洞型肺结核患者是复发的高危人群,应作为重点随访对象。     

肺结核患者痰抗酸杆菌检出阳性率的影响因素

目的探讨肺结核患者痰涂片抗酸杆菌阳性检出率的影响因素。方法 79803份痰标本、3750份纤支镜灌洗液标本分别采用直接涂片镜检法和液基集菌法检出的阳性率进行分析。结果采用液基集菌法涂片后痰液的抗酸杆菌阳性检出率提高2.94%,纤支镜灌洗液的抗酸杆菌阳性检出率提高8.22%。同样方法获取的标本使用液基集菌法对纤支镜灌洗液涂片中抗酸杆菌阳性检出率的提高明显大于痰标本。结论痰涂片阳性检出率的提高,除与标本检测方法有关外,合格的痰液标本是提高抗酸杆菌阳性检出率的重要影响因素。     

T-SPOT.TB在肺结核合并糖尿病患者诊断中的价值分析

目的 研究分析在肺结核合并糖尿病患者中采用结核杆菌T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)诊断的价值影响.方法 通过抽签选出于2017年10月—2019年4月期间收治的60名非肺结核合并糖尿病患者作为该次研究的一号组,同时选取同时期在该院确诊的60例患有肺结核合并糖尿病的患者作为该次研究的二号组.对两组患者统一实施结核杆菌...     

Slide culture and rapid sensitivity test for tubercle bacillus

We use the slide culture and direct sensitivity test for tubercle bacillus. The sputum specimens was taken from 479 cases. The positive rates of slide culture method and thick smear were 50.5% and 47.8% respectively. The positive rates from slide culture and modified Loewenstein-Jensen medium were 48.2% and 51.9% respectively. The results of sensitivity test of both methods in 40 cases were quite similar. The slide culture technique is a simple, cheap and very rapid method for sensitivity test, it is particularly useful for treatment of pulmonary tuberculosis patients.     

云南省红河州哈尼族结核病疫情调查分析

目的　调查云南省哈尼族肺结核流行情况。方法 出生满3个月以上婴儿至15周岁以下儿童作结核菌素试验(PPD)及卡介苗接种的卡痕检查,PPD强阳性者进行胸部摄片检查,有症状者进行痰菌检查。结果 402名哈尼族人中检出活动性肺结核23例,检出率5.7%,痰菌阳性3人,涂阳率746.27/10万。PPD强阳性反应25名,强阳性率4.0%。结论 云南省红河州哈尼族肺结核疫情严峻。     

荧光PCR诊断肺结核的临床应用研究

目的对荧光PCR(FQ-PCR)、痰涂片、结核抗体血清学试验及痰培养在肺结核诊断上进行方法学评价。方法 FQ-PCR、痰涂片及痰培养四种方法对结核组(124例)及非结核组(119例)进行检测,对四种方法进行方法学评价。结果结核组中荧光PCR、痰涂片、痰培养、血清学试验四种方法检出率分别为58.9%、30.6%、47.5%及66.1%,差异有统计学意义(P0.01),其中以血清学试验及荧光PCR检出率较高;在非结核组中,荧光PCR、痰涂片、痰培养三种方法均未检测出阳性结果,血清学试验检测出12例阳性;四种方法的方法学评价:灵敏度、约登指数、符合率、阴性预测值以荧光PCR、血清学试验较高,特异度、阳性预测值荧光PCR、痰涂片、痰培养均为100%,综合各项指标以荧光PCR方法较好。结论荧光PCR具有较高的灵敏度、特异度,快速、简单,在肺结核的诊断上具有较大的优势,适合在临床推广应用。     

117例HIV／AIDS病人合并肺结核的临床特点

目的分析艾滋病病毒（HIV）感染者／艾滋病（AIDS）病人合并肺结核的临床特点,提高诊疗水平。方法对1997年7月至2011年7月间,住院的HIV／AIDS合并肺结核的病人,回顾分析其末梢血CD＋T淋巴细胞（简称CD4细胞）计数与结核菌素纯蛋白衍生物试验（PPD试验）、痰涂片、结核抗体以及纤维支气管镜灌洗液涂片的关系。结果117例病人中,cD。细胞计数〈50个／mm3时,PPD试验无阳性反应,痰涂片阳性率为20．0％（3／15）,结核抗体阳性率为26．7％（4／15）;CD4细胞计数在50～200个／mm3时,PPD试验阳性率为25．0％（16／64）,痰涂片阳性率为40．6％（26／64）,结核抗体阳性率为35．9％（23／64）;CD4细胞计数在200～500个／mm3时,PPD试验阳性率为55．3％（21／38）,痰涂片阳性率为60．5％（23／38）,结核抗体阳性率为52．6％（20／38）,其中65例痰涂片阴性患者经纤维支气管镜灌洗液涂片有29例（44．6％）抗酸杆菌阳性;CD4细胞计数〉500个／mm3时,痰涂片阳性率为71．4％（5／7）,结核抗体阳性率为57．1％（4／7）。结论CD4细胞计数在500个／mm3以上时,痰涂片阳性率、结核抗体阳性率与HIV阴性肺结核检测相近,CD4细胞计数在200个／mm3以下时,临床表现较为复杂,数值越低合并肺结核症状越重,PPD试验反应、痰涂片、结核抗体以及纤维支气管镜灌洗液涂片阳性率越低。     

TaqMan聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌DNA及其临？…

目的 探讨ＴａｑＭａｎ聚合酶链反应（ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ）技术在肺结构诊断中的价值。方法 对１６８例活动性肺结核、５７例肺癌患者的痰和外周血及３４－例健康对照外周血,同时应用ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ、ＰＣＲ检测,并与痰涂片法、ＢＡＣＴＥＣ法及改良罗氏培养法结果进行比较。结果 ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ检测痰和外周血总的阳性率分别为５３．０％和６１．３％,显著高于ＰＣＲ、痰涂片法、ＢＡＴＣＴＥＣ法及改良罗氏培     

痰涂片阳性结核病患者的涂片与培养结果分析

目的 研究痰涂片阳性(简称涂阳)结核病患者不同标本涂片与罗氏培养阳性率的差别,探讨痰涂片和痰培养的标本选择标准.方法 回顾性分析2007年全国结核病耐药性基线调查纳入的结核病涂阳患者中3813例的痰涂片和培养结果,比较即时痰、夜痰和晨痰的涂片和培养阳性率,以及每300个视野中检测出1～2条抗酸杆菌的标本培养阳性率.两两比较采用χ2检验.结果 即时痰、夜间痰和晨痰的涂片阳性率分别为75.2%(2868/3813)、87.9%(3350/3813)和89.4%(3408/3813);同一病例的3份痰涂片均为阳性者占64.5%(2460/3813),2份涂片为阳性者占23.4%(893/3813),仅1份痰涂片为阳性者占12.1%(460/3813);即时痰加晨痰的涂片累积阳性率是3份痰涂片阳性率的96.9%(3695/3813),即时痰、夜间痰和晨痰的培养阳性率分别为97.8%(1654/1691)、96.7%(3006/3107)和97.2%(2473/2543);涂阳病例2份痰比1份痰的培养阳性率仅提高1.7%～2.8%;300个视野中检出1～2条抗酸杆菌的痰标本中90%(98/109)为痰培养阳性.结论 如采集即时痰和晨痰用于初诊者诊断,可将涂片检查3份痰标本改为2份;按照涂阳标本优先培养的原则,初诊涂阳患者培养可以由2份标本改为1份标本;涂片检查结果为每300个视野1～2条抗酸杆菌时具有一定诊断价值.

Abstract：

Objective To study the positive rate of smear and culture in different sputa from smearpositive patients with tuberculosis,and to discuss the criteria of sputum selection for smear and culture.Methods The results of smear and culture of sputum samples from 3813 cases during tubercuiosis drugresistance baseline survey in 2007 were retrospectively analyzed.The positive rates of smear and culture of spot sputum,night sputum and morning sputum were compared,and the culture positive rate of sputum samples with 1-2 acid fast bacilli(AFB)/300 fields was summarized.The χ2 teat was used for comparison.Results The smear positive rate of spot sputum,night sputum,and morning sputum wag 75.2%(2868/3813),87.9%(3350/3813),and 89.4%(3408/3813)respectively.The percentage of cases which were positive for all the 3 sputum samples was 64.5%(2460/3813),while that for 2 samples and 1 sample was 23.4%(893/3813)and 12.1%(460/3813)respectively.The cumulative smear positive rate of spot sputum plus morning sputum reached 96.9%(3695/3813)of the rate combined from the 3 sputum samples.The culture positive rate of spot sputum,night sputum,and morning sputum was 97.8%(1654/1691),96.7%(3006/3107)and 97.2%(2473/2543)respectively.For the smear positive cases,the positive rate of 2 sputum culture increased only 1.7%-2.8%compared with that of 1 sputum culture.The culture positive rate of samples with a smear result of 1-2 AFB/300 fields was 90%(98/109).Conclusions When spot sputum and morning sputum are collected for the diagnosis,the humber needed for smear can be decreased from 3 to 2.For smear-positive cases,if sputum is selected for culture according to the smear result,the number needed for culture can be decreased from 2 to 1.A smear result of 1-2 AFB/300 fields is of considerable diagnostic value for tuberculosis.