LC-MS/MS法测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物的含量

目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物洛伐他汀酸的浓度.方法 样品用乙酸乙酯∶二氯甲烷(体积比为1∶1)提取浓集后进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C18(50×3 mm, 3 μm),流动相为乙腈-水(85∶15).质谱采用ESI离子源MRM模式检测,以辛伐他汀为内标,按内标法定量. 洛伐他汀、洛伐他汀酸和内标的检测离子对分别为质荷比(m/z)427.4→325.4、445.4→343.4和436.4→325.4.结果 洛伐他汀在0.031～64 μg/L范围内线性关系良好(r=0.9987),最低定量限为0.031 μg/L,方法 回收率在96%～102%之间,日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于5.3%及9.3%.结论 本文建立的方法 准确、灵敏,可用于洛伐他汀血药浓度测定及药代动力学研究.     

盐酸索他洛尔片的含量测定及稳定性考察

目的研究盐酸索他洛尔片的质量标准及其稳定性.方法样品用0.1mol/L盐酸溶解,经过滤后测定.紫外分光光度法的测定波长为228nm;高效液相色谱法采用ODSC18柱,以0.1%HAc-乙腈(8020)为流动相,磺胺二甲基嘧啶为内标物,检测波长为228nm.结果紫外分光光度法的线性范围为5～25mg/mL(r=0.9999),平均回收率为99.47%(n=9,RSD=0.87%);高效液相色谱法的线性范围为5～45mg/L(r=0.9997),平均回收率为99.01%(n=9,RSD=0.77%).结论这两种方法用于测定盐酸索他洛尔片的含量考察稳定性具有准确、精密、简便的特点.     

反相高效液相色谱法测定人血浆中奥美拉唑的浓度

目的建立测定奥美拉唑血药浓度的反相高效液相色谱法,考察样品提取及色谱分离条件.方法血浆中加入内标尼美舒利后,用以乙醚提取,进行高效液相色谱法检测.以Dikma Technologies C18柱,甲醇:水:三乙胺:冰醋酸(60:40:0.5:0.5)为流动相进行色谱分离.流速1.0ml/min,检测波长302nm.结果奥美拉唑浓度在50～1 800ng/ml范围内线性良好,r=0.9995.测定浓度为15、100、1 500ng/ml的血浆样品,其日间及日内的RSD分别为0.86%、6.7%、4.93%和3.04%、4.25%、5.22%(n=5).3种浓度的提取回收率分别为77.74%、79.44%和86.30%.结论方法简便、准确、灵敏,可用于奥美拉唑血药浓度的测定.     

HPLC法测定复方曲安奈德二甲基亚砜溶液中醋酸曲安奈德和氯霉素的含量

目的建立同时测定复方曲安奈德二甲基亚砜液中醋酸曲安奈德和氯霉素的方法.方法采用反相高效液相色谱法,以Shim-pack vp-ODS柱(4.6mm×150mm,5μm)作分析柱,以甲醇-水(7030,v/v)为流动相,流速1ml/min.地塞米松为内标,240nm紫外检测.结果二组分分离良好.平均回收率醋酸曲安奈德101.70%(RSD=1.65%,n=5),氯霉素99.48%(RSD=1.59%,n=5).结论该法快速简便,准确可靠,适于该制剂的含量测定.     

尿中多胺的毛细管电泳激光诱导荧光测定法

目的 :建立高效毛细管区带电泳 (CZE)激光诱导荧光 (LIF)测定人尿中多胺 (POL)的新方法。方法 :样品用 5mmol/L的HClO4分离蛋白 ,样品中多胺与异硫氰酸荧光素 (FITC)完成衍生反应后 ,用四甲基乙二胺(TEMED)作内标 ,在 15mmol/L的硼酸盐缓冲液 (pH 8.5 )中 ,运用毛细管区带电泳进行色谱分离 ,以激光诱导荧光测定法测定多胺。结果 :多胺测定在 10～ 2 0 0 μg/L范围内具有良好的线性关系 (r =0 .996 ) ,最低检测限为 16μg/L ,日内变异系数 (CV) 3.5 1%～ 4 .6 1% ,日间变异系数 (CV) 3.74 %～ 4 .83% ,方法平均回收率为 96 .0 0 %～ 99.33%。结论 :本方法简便、快速、定量可靠 ,可用于临床实验室测定人尿中多胺水平     

反相高效液相色谱荧光法测定人血浆中左氧氟沙星的浓度

目的 建立测定人血浆中左氧氟沙星浓度的反相高效液相色谱荧光法(HPLC-FLD).方法 采用HPLC-FLD法测定,以Kromasil C＜,18柱为分析柱,0.4%三乙胺溶液(pH3.00)-乙腈(8713,v/v)为流动相,流速为0.8 ml/min,激发波长为295 nm,发射波长为490 nm,洛美沙星为内标物.结果 左氧氟沙星在0.0156～16.0μg/ml检测浓度范围内呈良好线性关系(r=0.9998),平均回收率为(100.1±2.5)%;日内差异≤3.9%,日间差异≤3.6%.结论 该方法 操作简便、灵敏、准确,适用于临床左氧氟沙星血浆浓度的监测.     

反相高效液相色谱法测定西洛他唑片含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定西洛他唑片的含量.方法:采用美国Agilent HP1100系列高效液相色谱仪,SinoChrom OPS-AP(4.6 nm×250 nm 5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-水(60:10:30),流速为1.0 ml/min,检测波长:257 nm,柱温25℃,进样量为10 μl,并以标准品氯霉素为内标进行含量测定.结果:西洛他唑浓度在25.6～307.2 μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9998),加样提取平均回收率为99.96%(RSD=0.27%).结论:本方法操作简便,灵敏,准确,重现性好,适用于西洛他唑片含量的测定.     

LC-MS测定大鼠脑微血管内皮细胞中卡马西平的含量

目的:建立大鼠脑微血管内皮细胞中卡马西平的LC-MS测定方法.方法:细胞悬液中加入内标盐酸非洛普,高速离心沉淀蛋白,取上清液进行LC-MS测定.色谱柱为Shim-pack ODS C18(5.0 μm,150 mm×2.0 mm ID),离子源为ESI,检测离子为[M H] :卡马西平(m/z):237;DDPH(m/z):344,流动相为2 mmol/L醋酸铵缓冲液(pH=4)与乙腈(60∶40,v/v).结果:本实验条件下卡马西平与内标盐酸非洛普可良好分离,保留时间分别为5.0 min和3.6 min左右;线性范围为0.39～50.00 ng/mL;方法回收率为96%～104%;日内日间变异系数均小于13%;最低检测浓度为0.39 ng/mL.结论:该方法符合生物样品测定要求,可用于细胞内卡马西平浓度的测定.     

高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用

目的 对高效液相色谱法(HPLC)测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的抑制作用进行方法 改进,以提高其准确度和普及性,并用于测定抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的抑制作用.方法 TACE与多肽底物经37℃孵育15 min后,加入Ala-Dpa作为内标物,用高效液相色谱法进行分析.以55%甲醇水溶液为流动相,检测波长353 nm.根据剩余底物与内标物的色谱峰面积比,从校准曲线中得出底物的转化量,据此计算TACE的酶活性.结果底物与内标物的色谱峰面积比与底物浓度呈良好线性关系,相关系数为0.996 8,线性范围10 μmol/L 至 400 μmol/L.精密度试验表明,采用内标法定量,精密度得到显著改善.经测定,抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的半数抑制浓度IC50分别为317.5 nmol/L和175.8 nmol/L.结论 以Ala-Dpa作内标物,HPLC测定TACE 酶活性,为TACE抑制剂的筛选提供了一种更准确、更实用的方法 .     

HPLC-FD法测定羟基喜树碱在大鼠体内组织分布

目的:建立一种简单、灵敏、专属的反相高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FD)方法,测定大鼠体内十二个组织样本中的羟基喜树碱分布.方法:以喜树碱为内标,乙腈-0.1%三乙胺溶液(pH 3.0)(25∶75,v/v)为流动相,采用C18色谱柱(250 mm×4.5 mm,5 μm),柱温35 ℃,流速为1.0 ml/min,荧光检测的激发波长(Ex)为382 nm,发射波长(Em)为528 nm.结果:羟基喜树碱(HCPT)的保留时间约为9.9 min,内标物喜树碱(CPT)的保留时间约为19.8 min.组织匀浆中HCPT的最低定量限为0.1 ng/ml(S/N>10).HCPT在各组织中一定浓度范围内线性关系良好,各组织中低、中、高浓度的回收率及日间精密度均符合方法学要求.结论:本文建立的HPLC-FD法可准确测定大鼠各组织样本中的羟基喜树碱分布.     

高效液相色谱测定罗布麻浸膏中的槲皮素

本文介绍用高效液相色谱法测定罗布麻浸膏中檞皮素。使用岛津LC—2型高压液相色谱仪,YWG—C_(18)H_(35)填充柱(25cm×4.6mm i.d.)。以1.5％磷酸的50％甲醇混合液作流动相,紫外254nm检测,用内标法定量,内标物为β—萘酚。测定结果,罗布麻浸膏中檞皮素的含量平均为0.17％,相对标准偏差3.2％(8次测定)。本法简便,快速,重现性好。     

高效液相色谱法分离测定鱼油中的EPA和DHA

介绍用高效液相色谱法分离测定鱼鱼油及其制品中的二十碳五烯酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃａｃｉｄ，ＥＰＡ）和二十二碳六烯酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃａｃｉｄ，ＤＨＡ）方法。使用Ｗａｔｅｒｓ液相色谱仪，μ－ＢｏｎｄｐａｒｋＣ＿（１８）Ｈ＿（３７）填充柱（３０ｃｍ×４ｍｍ）。鱼油经０．５ｍｏｌ／ＬＫＯＨ乙醇溶液皂化，三乙胺－ω－溴苯乙酮酯化后直接进样。以８８％的甲醇水溶液为流动相，紫外２５４ｎｍ检测，用外标法测定。该方法的回收率ＥＰＡ为９３．０％～９８．０％，ＤＨＡ为９３．０％～１００．０％。相对标准偏差ＥＰＡ为０．４１％～０．８６％，ＤＨＡ为０．６７％～１．２０％（ｎ＝７）。本法简便、快速、重现性好。     

血栓素B2的高效液相荧光测定及刺五加提取物的抗血小板作用

本文在Turk及Wintersteiger荧光衍生实验的基础上,建立了反相HPLC法测定血小板TXB₂含量的方法.血小板TXB₂用Sep-PakC₁₈提取,在冠醚和碳酸钾存在下,BrMmc与TXB₂的羧基反应生成BrMmc-TXB₂。然后经Zorbax-ODS柱(250mm×4.6mm,5μm)分离,测定荧光强度(E×345,Em405)。流动相为乙腈:水:磷酸(60:40:0.1V/V),流速1ml/min.BrMmc-TXB₂的分离在20min内完成。TXB₂的含量用外标法定量,检测限15ng。体外实验刺五加提取物(0.275～2.2mg/mlPRP)对AA、ADP诱导的家兔血小板聚集有明显的抑制作用,并能抑制AA诱导的血小板TXB₂的生成。静脉注射(120mg/kg)对AA、ADP诱导的聚集也有抑制作用。     

HPLC法同时测定复方参芎滴丸中4种成分的含量

目的 建立同时测定复方参芎滴丸中丹参素钠、丹酚酸B、丹参酮ⅡA和阿魏酸4种成分质量分数的HPLC法. 方法 采用Welchrom-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为体积分数0.1%甲酸水溶液-甲醇-乙腈(体积比40∶60),梯度洗脱;流量为1.0 mL/min;检测波长为286 nm;柱温为25 ℃. 结果 丹参素钠、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA分别在1.92~30.7 μg/mL (r=0.999 4)、1.12~18.0 μg/mL(r=0.999 1)、3.50~56.0 μg/mL(r=0.999 4)、4.25~68.0 μg/mL(r=0.9997)范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为104.4%、101.0%、99.6%、96.4%,RSD值分别为1.955%、2.520%、2.154%、1.458%. 结论 该方法简便、精确、重复性好,适用于复方参芎滴丸中4种成分的测定.     

当归口服液质量标准研究

对当归口服液质量标准的制定进行了研究，采用薄层色谱法对其口服液中的当归进行了定性鉴别，以阿魏酸为指标，运用高效液相色谱法进行了含量测定。平均回收率９８．６２％，Ｒｓ为０．４９３％。     

HPLC法测定大枣环磷酸腺苷(c-AMP)的含量

目的建立大枣环磷酸腺苷(cyclic adenosine 3′,5′-monophosphate,c-AMP)含量的测定方法。方法高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),采用MGC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.05 mol/L KH2PO4-Methanol(90:10-10:90);梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果 c-AMP在15.6~500.0 ng范围内呈良好的线性关系(r=1.000),平均回收率为100.35%±1.58%,RSD为1.58%。结论本方法操作简便、灵敏度高、准确性和重现性好,可作为大枣的质量控制方法。     

高效液相法测定党归舒经胶囊中阿魏酸的含量

目的:建立党归舒经胶囊中阿魏酸含量的HPLC测定方法.方法:采用高效液相色谱法,使用DIONEX Acclaim 120 C18(250.0 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-1.5％冰醋酸(40:60)作为流动相.检测波长320 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温为35℃.结果:阿魏酸在0.024～0.240范围内线性较好(r=0.999 8),平均回收率为98.92％(RSD为0.45％).结论:该方法快速、简便、可靠、准确度高、重复性好,处方中其他成分对测定亦无干扰,分离效果好,可用于党归舒经胶囊中阿魏酸含量测定.     

HPLC法测定阜康阿魏根和叶中阿魏酸的含量

目的建立阜康阿魏根和叶中阿魏酸含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定阜康阿魏根和叶中阿魏酸的含量。色谱条件:Kromasil C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸(15∶85),流速为1.0mL/min,检测波长为320nm,柱温为35℃。结果阿魏酸峰面积与进样量在0.009 8～0.049 0μg范围内有良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率为99.3%,RSD为0.79%(n=6)。结论该方法快速、准确、可靠,可用于阿魏根和叶中阿魏酸含量的测定。     

高效液相色谱法测定甘草黄酮阿魏酸乳膏中阿魏酸含量

目的建立甘草黄酮阿魏酸乳膏中阿魏酸含量的测定方法。方法采用KromasilC18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱;流动相为乙腈-0．3％冰醋酸（25：75）;流速为1．0ml／min;柱温25℃;检测波长320nm;进样量20μl。结果阿魏酸浓度为2．26-36．16μg／ml时与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9998）,平均加样回收率为97．50％,RSD为1．73％（n=6）。结论本方法准确、简便、重现性好,可作为该品种中阿魏酸的定量检测方法。     

HPLC同时测定六味补血颗粒中芍药苷和阿魏酸的含量

目的:建立同时测量六味补血颗粒中主药有效成分芍药苷和阿魏酸含量的方法。方法:采用Symmetry C18色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相采用甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱;流速1.0 mL/min;检测波长为285 nm;柱温:25℃。结果:芍药苷在17.44~174.4μg.mL-1的范围内峰面积积分值与浓度呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为98.9%,RSD=1.29%(n=6);阿魏酸在0.356~14.24μg.mL-1的范围内峰面积积分值与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.68%,RSD=2.4%(n=6)。结论:该法准确、简便,重现性好,可作为六味补血颗粒制剂质量控制的有效方法。