人参单体皂甙Rh2对体外培养的前列腺癌细胞株PC-3M抑制效应的研究

目的:探讨人参单体皂甙Rh2对体外培养的PC-3M细胞株的抗肿瘤效应.方法:采用MTT实验及3H-TdR掺入实验观察Rh2对PC-3M细胞生长状态及细胞DNA合成的影响.结果:高剂量Rh2可明显抑制PC-3M细胞的生长,细胞DNA合成减慢,并呈剂量依赖性.结论:Rh2对PC-3M细胞具有明显的抗肿瘤效应.     

非那雄胺对人前列腺癌PC－3细胞体外生长抑制及迁移的影响

目的：探讨非那雄胺对人前列腺癌PC－3细胞生长抑制作用及迁移的影响。方法设立对照组和实验组,采用CCK－8试剂盒检测非那雄胺对细胞生长抑制的影响,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况,ELISA试剂盒检测血管内皮生长因子（ VEGF）蛋白的表达。结果实验组对人前列腺癌PC－3细胞体外生长抑制无影响,中剂量组（60μmol／mL）、高剂量组（100μmol／mL）的非那雄胺可以抑制PC－3细胞的迁移,VEGF蛋白分泌水平明显低于对照组。结论非那雄胺对人前列腺癌PC－3细胞的体外生长无抑制作用,但非那雄胺可以抑制前列腺癌PC－3细胞迁移。     

Genistein对人乳腺癌细胞株BCaP-37的体外抑制作用

目的 :观察Genistein对乳腺癌细胞的抑制作用。方法 :采用MTT法、克隆形成实验、3 H TdR掺入实验测定Genistein对人乳腺癌细胞株BCaP 3 7的生长、克隆形成和DNA合成能力的抑制作用。结果 :Genistein能明显抑制BCaP 3 7细胞的生长、克隆形成和DNA合成 ,呈明显的剂量 效应关系 ,随作用时间延长其效果明显增强。结论 :Genistein通过抑制人乳腺癌细胞株BCaP 3 7DNA合成而降低其生长和繁殖能力。     

siRNA沉默PC3细胞中KDR基因的表达

目的:构建针对血管内皮生长因子受体Ⅱ(KDR)基因的shRNA表达载体,研究KDR基因沉默后对PC3细胞的增殖、生长的影响.方法:将合成的三对DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencerTM3.1-H1 neo线性质粒用T4 DNA连接酶连接,构建pSilencer3.1-KDR1,psi-lencer3.1-KDR2和Psilencer3.1-KDR3三个siRNA表达载体.经酶切及DNA测序鉴定后,采用脂质体介导的基因法转染PC3细胞,通过RT-PCR、免疫印迹和免疫细胞化学染色实验,检测KDR的表达变化,MTT法检测细胞牛长速度的变化,流式细胞仪检测细胞周期的变化,以未转染和转染阴性对照质粒pSileneer3.1-NC的PC3细胞为对照.结果:酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹和免疫细胞化学染色实验表明,pSilencer3.1-KDR3有效地降解了PC3细胞中KDR基因的mRNA,下调蛋白表达;转染pSilenc-er3.1-KDR3后PC3细胞生长速度明显变慢.结果表明,pSi-leneer3.1-KDR3组PC3细胞的G0/G1期百分率明显增高,而S期和G2M期的细胞减少,与其余组相比差异具有统计学意义(P<0.01).而pSilencer3.1-KDR1和pSilencer3.1-KDR2无效.结论:成功构建针对KDR基因的siRNA表达载体,只有pSileneer3.1-KDR3可有效地沉默KDR在前列腺癌细胞系PC3细胞中的表达,抑制PC3细胞的增殖.     

^188Re作用于三种肿瘤细胞株的剂量—效应关系及敏感性研究

目的 研究放射性核素^188Re作用于不同肿瘤细胞株的剂量－效应关系及药物敏感性。方法 采用MTT法观察^188Re作用于前列腺癌PC－3细胞、乳腺癌ER－75－30细胞和非小细胞肺癌A549细胞后各细胞株生长受抑制的程度并绘制抑制率曲线。结果 PC－3、ER－75－30、A549细胞加入^188Re 48h后，细胞形态发生变化，表现为形态不规则，贴壁能力下降，透光度降低，部分细胞崩解死亡，且效应随着药物浓度的增加更为明显。在同一剂量下抑制率为PC－3＞ER－75－30＞A549.对^188Re的敏感性PC－3最敏感，ER－75－30细胞次之，A549细胞相对较差。结论 ^188Re对肿瘤细胞的生长具有抑制作用，不同肿瘤细胞对^188Re的敏感性不同。     

人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep-2抗增殖作用的研究

目的　探讨人参单体皂甙Rh2对体外培养的人喉癌细胞株Hep - 2的抗增殖作用及其作用机制。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)实验、流式细胞技术及免疫组织化学S -ABC法分别检测人参单体皂甙Rh2对喉癌细胞株Hep - 2的增殖、细胞周期的影响。 结果　 (1)人参单体皂甙Rh2可明显抑制Hep - 2细胞的生长 ,并呈剂量、时间依赖性作用。 (2 )人参单体皂甙Rh2 (30 μg/ml)处理细胞 2 4h :G1期细胞由 6 0 0 9%增加至6 8 86 % (P <0 0 1) ,S期细胞由 18 89%减少至 12 30 % (P <0 0 1) ,G2 /M期细胞及凋亡细胞无明显变化 (P>0 0 5 ) ,细胞阻滞于G1期。结论　人参单体皂甙Rh2对人喉癌细胞株Hep - 2具有明显的生长抑制作用 ,并可导致其G1期细胞周期阻滞。G1期细胞周期阻滞可能是人参单体皂甙Rh2抗肿瘤作用的机制之一     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株体外作用的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对卵巢癌细胞株体外生长的影响。方法：以As2O3处理卵巢癌细胞株SKOV3，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，测定As2O3对SKOV3生长的抑制作用，并绘制剂量－效应曲线；通过透射电镜观察细胞超微结构的变化；应用流式细胞仪分析DNA含量和细胞周期并测定凋亡特征酶caspase-3的活性变化。结果：0．5－4．0μmol/L三氧化二砷明显抑制SKOV3细胞的增殖，并呈剂量和时间依赖性；透射电镜观察可看到较为典型的细胞凋亡的形态学改变；细胞核固缩，染色质凝集，呈新月状紧贴于核膜周边，凋亡小体形成等；流式细胞仪检测出现DNA含量小于G1峰的亚二倍体凋亡峰，同时出现G2／M期阻滞；SKOV3在As2O3作用下，caspase-3是实现凋亡的效应因子，它的激活必然导致凋亡细胞最终的各种表型变化。结论：As2O3对卵巢癌细胞株SKOV3的生长有明显的抑制作用，诱导凋亡是其主要作用机制之一。     

米托蒽醌对HL-60细胞生长的影响

目的：探索米托蒽醌（MTN）对HL－60细胞生长的影响。方法：取对数生长期HL－60细胞，不同浓度MTN作用不同时间后，利用MTT法观察MTN对HL－60细胞的抑制效应，透射电镜，DNA电泳观察MTN作用HL－60细胞后其形态学及DNA的变化。结果：（1）毫微克级的MTN对HL－60细胞有明显的抑制效应。且此效应具有时间，剂量依赖关系。（2）MTN作用后的HL－60细胞透射电镜观察胞膜完整，出现核碎裂，凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现200bp左右的梯形条带。结论：MTN对HP－60细胞有明显的抑制作用。小剂量的MTN对HL－60细胞以诱导细胞凋亡为主，大剂量的MTN对HL－60细胞以细胞毒作用为主。     

热休克对卵巢癌细胞凋亡影响的实验研究

目的：探讨热休克对卵巢癌细胞A2780经TNF－α诱导凋亡的影响,为卵巢癌细胞凋亡与热休克相关关系提供实验依据。方法：采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡指数（AI）,^3H-TdR掺入试验检测DNA合成情况。结果：热休克组凋亡指数比非热休克组的凋亡指数明显下降,差异有显著性意义,且呈剂量依赖效应,cpm值热休克组细胞比非热休克组明显增高,抑制率下降,也呈剂量依赖效应。结论：热休克对卵巢癌细胞A2780凋亡具有抑制作用,且呈剂量依赖效应。     

人参皂苷Rh2对白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的探讨人参皂苷Rh2对人白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测人参皂苷Rh2对HL-60细胞增殖的影响，采用DNA的片段化实验，观察人参皂苷Rh2对HL-60细胞凋亡的影响。结果G—Rh2能明显抑制HL-60细胞增殖，呈浓度依赖性关系；人参皂苷Rh2能明显诱导HL-60细胞凋亡，呈浓度和时间依赖效应，DNA的琼脂糖凝胶电泳分析可见凋亡特征性的DNA梯状图谱。结论G—Rh2主要通过有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡从而发挥其抗白血病效应。     

Rh_2诱导PC-3M细胞凋亡及对新基因GRIM-19表达的影响

目的:研究人参单体皂甙Rh2对PC-3M细胞株(激素非依赖性人前列腺癌细胞)的致凋亡作用及对新基因GRIM-19表达的影响。方法:采用吖啶橙染色观察其对PC-3M胞的促凋亡作用;RT-PCR和Westernblot方法分别检测用药后PC-3M细胞GRIM-19mRNA和蛋白的表达。结果:不同剂量的Rh2作用于PC-3M细胞24h吖啶橙染色结果呈阳性;RT-PCR结果与Westernblot结果相一致,Rh2随浓度的增加GRIM-19mRNA和蛋白表达逐渐增强,Rh2中低剂量组与对照组比较差异显著(P<0.05),Rh2高剂量组GRIM-19表达与对照组比较差异十分显著(P<0.01)。结论:Rh2诱导PC-3M细胞凋亡与上调GRIM-19基因和蛋白表达有关,其表达强度呈剂量依赖性。     

喹喔啉双氮氧化物衍生物QN-2013的乏氧细胞毒性和放射增敏作用

目的：检验和评价喹喔啉双氮氧化物衍生物QN-2013的选择性乏氧细胞毒性和放射增敏作用。方法：体外细胞毒性、放射增敏作用及体内抗肿瘤活性,分别用集落形成法和肿瘤生长延迟法检验。细胞周期的变化、DNA损伤和损伤DNA的修复分别以流式细胞术和“彗星”分析法测定。结果：QN-2013对乏氧和富氧HeLa-S3细胞的等毒性浓度ICN250和ICair50分别是0.08和1.7 mmol*L－1,乏氧细胞毒性比率(hypoxic cytotoxicity ratio, HCR)为21。这说明QN-2013具有一定的乏氧细胞毒性,但弱于代表性生物还原药SR-4233。在1 mmol*L－1以下时,QN-2013的体外放射增敏作用比MISO(misonidazole)弱,但随药物浓度增加近似按指数增大,而荷瘤小鼠腹腔给药则体内增敏作用与施药剂量无明显依赖关系。在细胞和分子水平上,QN-2013诱发乏氧HeLa-S3细胞G2M期阻断,引起DNA双链断裂,且抑制辐射DNA损伤的修复。结论:QN-2013是一中度活性的乏氧选择性细胞毒剂,体内外实验表明具有一定的放射增敏作用,明显增强辐射抗肿瘤能力。其作用机制可能是通过直接损伤DNA和抑制DNA修复。这些结果提示虽QN-2013本身可能不是理想的生物还原药,但喹喔啉氮氧化物系列不失为探索新抗癌药应重视的领域之一。     

槲皮素对人白血病HL—60细胞DNA和细胞周期的影响

以人白血病HL－60细胞为实验对象，利用3H-脱氧胸苷（3H－TdR）掺入实验，JAM实验法及流式细胞仪观察槲皮素对HL－60细胞DNA和细胞周期的影响。结果显示，槲皮素15μmol／L～120μmol／L可显著抑制HL－60细胞的DNA合成及诱发DNA链断裂；槲皮素主要是阻滞G1期向S期移行，使G1期细胞蓄积，S期细胞减少。槲皮素的作用呈明显的剂量依赖关系。     

Propachlor 对前列腺癌细胞 PC3及 LNCaP 的作用及其可能机制

目的：探讨化合物 Propachlor 对前列腺癌的作用及可能的分子机制。方法用梯度浓度的化合物 Propachlor处理前列腺癌 PC3及 LNCaP 细胞株;使用 CellTiter 方法检测肿瘤细胞的存活率,Western blot 法检测细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ的转变情况,荧光显微镜检测细胞中诱导 LC3质粒标记绿色荧光蛋白(GFP-LC3)的表达情况。结果 Propachlor可以抑制前列腺癌 PC3及 LNCaP 细胞的存活率,同时剂量越大肿瘤细胞存活率抑制越明显;Propachlor 可以诱导 PC3及 LNCaP 肿瘤细胞自噬蛋白 LC3-Ⅱ及自噬小体 GFP-LC3的表达,诱导自噬效应同 Propachlor 的剂量正相关。结论化合物 Propachlor 具有抗前列腺癌的生物学效应,同时该抗肿瘤效应是通过激活细胞内自噬效应产生的。     

1,4二羰基类化合物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的：：寻找新型靶向抗肿瘤小分子。方法：通过高通量筛选得到先导物,合成其衍生物,采用MTT法对衍生物的体外抗肿瘤活性进行测试,并通过细胞周期实验、体外抗 HCT116细胞(p53-/-)活性实验以及免疫共沉淀实验探索其可能的抗肿瘤作用机制。结果：化合物9对 HCT116细胞抑制活性达到9.382μM、化合物1对MCF7细胞抑制活性达到3.636μM、化合物7与化合物10对 HepG2细胞的抑制活性分别为6.677μM和8.746μM,均优于阳性药 Nutlin-3a 与5-Fuorouracil。并推测出衍生物抗肿瘤作用机制为 p 53-MDM2相互作用。结论：1,4二羰基化合物具有良好的体外抗肿瘤活性,其作用机制为p 53-MDM2相互作用。     

DIM对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用

目的：探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM) 对人激素非依赖性 前列腺癌细胞PC3M的生长抑制作用。方法：应用MTT生长抑制实验观察不同浓度DIM对PC3M细胞增殖活性的影响，流式细胞术观察不同浓度DIM对PC3M细胞的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果：不同浓度的DIM对PC3M细胞有显著的增殖抑制作用（P<0.05），药物浓度为10、30、60和120 μmol•L^-1时，抑制率分别为35.6%、58.8%、76.6%和90.5%。当 药物浓度为60 μmol•L^-1时，细胞周期停滞在G₁期，并诱导22.6％的PC3M细胞发生凋亡。结论：DIM可抑制PC3M细胞增殖，并诱导其凋亡，为DIM用于激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据。     

20(s)-原人参二醇对体外培养的人前列腺癌PC3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：观察20 (s)-原人参二醇 (PPD) 对体外培养的人前列腺癌（PCa）PC3 细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制。方法：将体外培养的PC3 细胞分为对照组及 20、30和40 μmol?L-1PPD组。采用PPD处理细胞48 h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖抑制情况,采用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法检测细胞凋亡情况,并通过Western blotting方法检测 Bcl-2、Bax和γH2Ax蛋白的表达情况。结果：不同剂量PPD处理后,PC3细胞变圆回缩并出现碎片,AO/EB染色呈现不同程度的黄绿色;不同剂量PPD作用后,各组细胞增殖抑制率均显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量PPD作用PC3细胞48 h后,Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达变化不明显,γH2Ax蛋白表达上调(P<0.05)。结论：PPD可诱导PC3细胞凋亡,其作用机制可能与 Bcl-2、Bax信号通路以及DNA断裂基因γH2Ax蛋白表达上调有关。     

M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a促进前列腺癌恶性进展的机制研究

目的：探究M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a对前列腺癌(prostate cancer, PCa)恶性进展的影响并探讨其分子机制。方法：在成功建立M2型巨噬细胞的基础上，抽提并鉴定其外泌体，检测外泌体中差异表达的miRNA,同时在不同PCa细胞中验证，选取miR-374a进行研究；M2细胞中转染cy3荧光标记的miR-374a与PC3细胞共培养，荧光显微镜观察PC3细胞中cy3荧光表达情况；DU145和PC3细胞中转染miR-374a inhibitor进行增殖、迁移等细胞功能学实验及裸鼠皮下成瘤实验；通过数据库筛选叉头盒转录因子(FOXO1)作为靶基因，通过Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验进行验证；干扰FOXO1后进行细胞功能学实验，观察是否能逆转miR-374a inhibitor对DU145及PC3细胞功能学的影响。结果：成功建立M2细胞并抽提其外泌体，其中miR-374a在M2细胞外泌体中高表达；荧光定量PCR实验结果证明miR-374a在PC3及DU145中表达量显著高于LNCaP,在M2细胞中表达量高于THP-1细胞，PC3细胞与M...     

三氧化二砷人外诱导人胃癌SGC0—7901细胞凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对人胃癌SGC－7901细胞和抑制生长,诱导凋亡的生物学效应,方法：光学显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测As2O3对该细胞株生长的影响,流式细胞仪（FCM）及3‘－OH末标记法（TUNEL）检测凋亡细胞,结果：SGC－7901细胞经As2O3作用后,细胞增残受到明显抑制,且呈剂量和作用时间依赖关系,细胞周期分析显示胃癌SGC－7901细胞增残,并诱导该细胞系凋亡,其发生机制可能与细胞周期阻滞有关。     

人前列腺癌多药耐药细胞系的建立

目的:建立人前列腺癌多药耐药细胞系。方法：以顺铂为诱导药物,人前列腺癌细胞PC3M为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人前列腺癌多药耐药细胞系PC3M/CDDP;MTT法检测药物敏感性,免疫细胞化学法检测P-糖蛋白（P-gP）、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果：经顺铂诱导建立的人前列腺癌细胞系PC3M/CDDP对顺铂、丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱等药物的50%抑制浓度(IC₅₀)分别为（0.603±0.102）、（0.201±0.056）、（0.267±0.067）、（1.676±0.321）和（0.657±0.227）mg•L-1,与PC3M细胞系比较差异有显著性（P<0.05）;免疫细胞化学染色结果显示,PC3M/CDDP细胞系MRP、P-gP表达强度明显大于PC3M细胞系（P<0.05）;PC3M/CDDP细胞系的细胞倍增时间为40.5 h,与PC3M细胞系（48.6 h）比较差异无显著性（P>0.05）。结论：成功建立稳定的人前列腺癌 PC3M/CDDP细胞系,该细胞系具有对多种抗癌药耐药及细胞增殖未受影响的特点,可应用于下游实验。