3-甲基腺嘌呤对人耐药大肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响

目的：研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对耐5-氟尿嘧啶（5-Fu）结肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响,探讨自噬抑制剂在逆转结直肠癌耐药中的作用。方法：浓度递增筛选法诱导耐5-Fu（100kig／L）的SW480细胞株,用10umol／L浓度的3一MA处理后,再用5-Fu（浓度200μg／L）作用24h。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,丹酰戊二胺（MDC）染色和电镜检测细胞自噬活性变化。结果：3-MA对耐药细胞自噬活性的抑制率达89．7％,增殖抑制率为9．6％,凋亡率为5．7％,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。经3-MA处理后,5-Fu对耐药SW480细胞增殖抑制率达71．6％±2．9％,凋亡率达36．6％土2．9％,而单用5-Fu细胞增殖抑制率仅为23．6％±2．9％,凋亡率仅为10．3％±2．5％,3-MA预处理后5-Fu对耐药细胞的增殖抑制率及凋亡率均明显增强（P〈0．05）,自噬泡数量显著减少,自噬活性明显降低（P〈0．05）。结论：3-MA单用时仅有较弱的抗肿瘤作用,与5-Fu联用时耐药细胞的增殖及自噬活性被显著抑制,增强了SW480耐药细胞对5-Fu的敏感性,提高了化疗效果。     

3-甲基腺嘌呤诱发HeLa细胞自噬及抑制辐照细胞自噬的双重作用

目的了解PI,K抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对电离辐射后细胞自噬的影响,初步探讨作用机制。方法细胞增殖-毒性试剂盒CCK-8检测不同浓度3-MA处理及60Coγ射线4Gy照射或联合3-MA作用的HeLa细胞细胞生长变化和毒性,Annexin V—FITC／PI双标记检测细胞凋亡,Westernblot检测自噬相关蛋白SQSTMl／p62表达,Lipofectamine2000介导转染GFP—LC3质粒,共聚焦显微镜检测自噬体形成。结果3mmol／L以上浓度3-MA作用24h对HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,作用更长时间产生致死毒性效应。无论是5mmol／L3-MA单独作用还是单独4Gy照射,均能诱发HeLa细胞自噬。但3-MA与（射线辐照联合作用时,HeLa细胞自噬受到抑制,细胞凋亡显著增加。结论PI3K抑制剂3-MA既诱发细胞自噬又能抑制电离辐射诱发细胞自噬,以在不同的条件下两种方式影响细胞存活。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤促进荜茇酰胺的抗肿瘤作用

摘 要 目的 荜茇酰胺是一种中药单体,具有多种药理学作用。本研究旨在探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对荜茇酰胺抗肿瘤作用的影响。方法 实验分为对照组：采用生理盐水处理A549细胞48h;荜茇酰胺组：3μM荜茇酰胺处理细胞48h,荜茇酰胺+ N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）组：3μM荜茇酰胺和10mM NAC处理细胞48h;3-甲基腺嘌呤+荜茇酰胺组：3μM荜茇酰胺和10mM NAC处理细胞48h。采用CCK-8法测定细胞活力,使用流式细胞仪测定细胞内活性氧（ROS）水平,蛋白质印迹法检测细胞自噬蛋白（LC3B）的表达。结果 3μM荜茇酰胺处理A549细胞后,细胞ROS水平显著升高至1.49±0.18(P<0.05),细胞活力显著下降至60.1±10.2%（P<0.05）,LC3B-II表达显著增加（P<0.05）。荜茇酰胺与10mM NAC合用后,细胞ROS水平为0.98±0.04,细胞活力为97.7+4.0%,LC3B-II表达下降至用药前水平（P<0.05）。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤处理肺癌细胞后,LC3B-II表达显著降低。3-甲基腺嘌呤+荜茇酰胺组A549细胞活力为24.8±1.3%,显著低于荜茇酰胺组（60.1±10.2%,P<0.05）。结论 荜茇酰胺通过ROS依赖途径促进细胞自噬。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强荜茇酰胺的抗肿瘤作用。     

自噬对口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞放疗敏感性的影响及其机制

目的：利用自噬抑制剂联合放射疗法作用于口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,探讨自噬对口腔癌放射治疗敏感性的影响及其作用机制。方法：选择人口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,分为对照组、氯喹（CQ）组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、放射组（IR组）及联合放射组（CQ+IR组和3-MA+IR组）。应用MTT法检测细胞生存率,采用免疫荧光法激光共聚焦显微镜观察CAL-27细胞自噬水平（即LC3Ⅱ免疫荧光强度）,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3和beclin-1表达水平,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：与IR组比较,联合放射组细胞生存率明显降低（P < 0.05）。IR组细胞自噬水平明显高于对照组、CQ组、3-MA组和联合放射组（P < 0.05）。IR 组LC3和beclin-1蛋白表达水平明显高于对照组和联合放射组（P < 0.05）。与对照组比较,IR组和联合放射组细胞凋亡率明显升高（P < 0.05）;与IR组比较,联合放射组细胞凋亡率也明显升高（P < 0.05）。结论：放射疗法可以诱导口腔鳞状细胞癌细胞自噬水平升高。自噬抑制剂可以通过对口腔鳞状细胞癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用,提高其对放射治疗的敏感性。     

自噬调控剂研究进展

自噬是一种高度保守的经溶酶体介导的对细胞内蛋白质和细胞器降解、维持细胞内环境自身稳定的过程,广泛存在于真核细胞中,它与细胞的正常生长发育进程以及炎症、肿瘤等多种疾病的发生发展有着密切的联系。多数情况下,自噬对细胞或机体是作为一种保护机制,但有时也可以导致细胞的死亡。近几年来,自噬成为生物学领域研究中的一个新热点,而自噬调控剂的研发也应运而生。自噬调控剂通过不同的机制发挥作用,有望通过对其的深入研究为相关疾病的预防和诊治提供新方法。     

3-methyladenine抑制自噬诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡

【目的】 探讨3-methyladenine(3-MA)对人胰腺癌SW1990细胞增殖?迁移及失巢凋亡的影响作用及其机制?【方法】 以胰腺癌细胞SW1990及永生化胰腺导管上皮细胞H6C7为研究对象,设3-MA处理组及PBS对照组,采用软琼脂克隆培养法及Poly-HEMA悬浮培养法筛选抵抗失巢凋亡的细胞?Annexin V-FITC/PI双染和TUNEL试剂盒法检测细胞凋亡;免疫荧光法及透射电镜检测细胞自噬;CCK-8法检测细胞增殖; Transwell小室检测细胞迁移能力?【结果】永生化胰腺导管上皮细胞H6C7处理组及对照组均无集落形成,胰腺癌细胞SW1990处理组形成(2.3 ± 2.63)个集落,对照组形成(9 ± 3)个,与H6C7 相比,SW1990具有较强的抵抗失巢凋亡的能力 (P < 0.05)?3-MA可抑制胰腺癌SW1990细胞自噬(P < 0.05)并抑制其增殖及迁移能力(P < 0.01)且诱导失巢凋亡(P < 0.01)?【结论】 3-MA可诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡,其机制可能与细胞自噬受抑有关?     

Claudin-1蛋白的表达对食管癌细胞的自噬影响

目的 检测Claudin-1蛋白在食管癌细胞中的表达,并探讨其对食管鳞癌癌细胞的的自噬的影响。方法采用western blot检测Claudin-1在食管癌各细胞株的表达情况。SiRNA干扰Claudin-1蛋白的表达后,western blot检测干扰效果。mRFP-GFP-LC3腺病毒转染SiR组及NC组后,用激光共聚焦显微镜分析siR组与NC组的细胞自噬情况。结果 细胞株KYSE 150的Claudin-1蛋白表达量最高,Si-RNA干扰Claudin-1的表达后siR组的自噬水平显著高于NC组(P<0. 05)。结论 Claudin-1蛋白的表达增多对食管癌细胞的细胞自噬有促进作用。     

自噬在结直肠癌中的作用研究进展

结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一,早期临床症状不明显,发现时往往是中晚期.自噬是一种进化保守的正常细胞中监视机制,它通过溶酶体清除分解受损的细胞器和聚集的蛋白质,并将产生的基础营养物质重新循环利用.在结直肠癌中,自噬对肿瘤的促进与抑制双重作用广泛得到认可,因此,明确自噬对结直肠癌肿瘤细胞的作用,将为结直肠癌的治疗提供更多...     

幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）对胃黏膜上皮细胞（GES-1）自噬和凋亡的影响。方法：Hp与GES-1体外共培养,同时设立雷帕霉素（RAPA）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预组及空白对照组,于2、4、6、12及24 h终止感染,通过免疫蛋白印迹、荧光染色、透射电镜、流式细胞术及细胞内活菌计数等方法观察Hp对GES-1自噬和凋亡的影响。结果：Hp＋GES-1组在2 h出现自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达及细胞内荧光自噬颗粒,透射电镜观察到细胞内出现双层或多层膜包裹的自噬小体样结构,细胞自噬在4 h达高峰,感染中后期逐渐减弱并消失;RAPA＋Hp＋GES-1组细胞自噬程度进一步增强,细胞凋亡率及细胞内活菌数均降低（P〈0.05-P〈0.01）;3-MA＋Hp＋GES-1组细胞自噬强度显著降低,而其细胞凋亡率和细胞内活菌数均明显升高（P 〈0.01）。结论：Hp可在感染早期诱导GES-1自噬;RAPA和3-MA可增强或降低自噬发生程度,从而减轻或促进细胞损伤。     

绒毛和胎盘中Jagged-1/Jagged-2的表达与蜕膜中CD56＋NK表达相关性探讨

目的探讨绒毛和胎盘中Jagged-1/Jagged-2的表达与蜕膜中CD56＋NK表达相关性情况。方法分析该院2013年3月—2014年2月收治的妊娠期流产对象42例和正常剖宫产30例的临床资料,对Jagged-1、CD56＋NK细胞和Jagged-2应用免疫组化方法检测,通过对其测定的情况。结果胎盘组Jagged-1高于绒毛组,Jagged-2低于绒毛组,自然流产组Jagged-1、Jagged-2及CD56＋的表达均低于人工流产组,CD56＋NK细胞和绒毛组织中的Jagged-1阳性细胞表达水平、Jagged-2阳性细胞表达水平均呈现明显正相关性,差异有统计学意义（r=0.91,0.95,P〈0.05）。结论 Jagged-1、Jagged-2对NK细胞表型的变化可能两者一起参与,因而对妊娠结局造成影响,并且形成妊娠免疫耐受。     

黏蛋白1在大肠癌患者血清中的表达水平及临床意义

目的探讨大肠癌患者血清中黏蛋白1的表达及临床意义。方法应用放射免疫法检测40例大肠癌患者术前血清MUC1的表达水平,并与20例健康体检者对照。结果大肠癌患者血清MUC1的表达水平明显高于对照组。大肠癌中,侵及浆膜外、有淋巴结转移、Dukes C+D期、低分化组的表达显著高于未侵及浆膜外、无淋巴结转移、Dukes A+B期、中高分化组(P<0.05);但与患者的性别、年龄、肿瘤大小均无明显关系(P>0.05)。结论血清MUC1表达与大肠癌生物学行为有关,检测血清MUC1的表达水平对于大肠癌的诊断、恶性程度及预后的判断均有一定价值。     

miR-30c-1-3p在人结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨miR-30c-1-3p在人结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法采集行手术治疗的52例结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常黏膜组织,实时定量PCR法检测两种组织中miR-30c-1-3p的表达水平并作比较;进一步分析结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平与患者临床特征的关系。结果结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平明显低于癌旁正常黏膜组织（P＜0.05）。结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平与患者有无淋巴结转移及临床分期有关,有淋巴结转移、临床分期Ⅲ~Ⅳ期的患者结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平均较低（均P＜0.05）;而与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、分化程度、浸润深度等均无关（均P＞0.05）。结论miR-30c-1-3p在人结直肠癌组织中表达下调,与有无淋巴结转移、临床分期有关,提示miR-30c-1-3p可能与结直肠癌的转移侵袭相关。     

5氮杂胞苷对HT29细胞DLC-1基因表达和细胞增殖活性的影响

目的探讨去甲基化药物5氮杂胞苷对肠癌细胞系HT29的DLC1基因表达和细胞增殖活性的影响。方法使用浓度为5μmol·L-1和10μmol·L-1的去甲基化药物5氮杂胞苷处理HT29细胞,通过MTT实验观察细胞增殖活性的差异,RTPCR技术检测DLC1mRNA表达强度的变化。结果经药物处理后,HT29细胞的增殖活性受到抑制,DLC1mRNA的表达明显增强。结论HT29细胞DLC1mRNA的表达下调可能是由于启动子区域高甲基化所致,DLC1基因具有抑制肿瘤细胞生长的功能,其可能参与了结肠癌的发病机制。     

P27kip1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:通过检测结直肠癌病人肿瘤组织及癌旁组织中P27kip1的表达,探讨其与结直肠癌患者预后的相关性。方法:应用免疫组织化学方法检测62例结直肠癌患者癌组织及癌旁组织中P27kip1的表达水平,应用SPSS19.0软件分析其表达差异及与临床病理特征及预后的相关性。结果:癌旁组织P27kip1高表达率为62.9%,与正常组织中的P27kip1基因表达无统计学意义,而癌组织中P27kip1高表达率为37%;P27kip1的表达水平与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤分化无明显关联(P>0.05),但与肿瘤的病理分期及有无淋巴转移有关(P<0.05);单因素生存分析提示P27kip1高表达的病人生存时间较长(P<0.05),然而通过COX比例风险模型进行多因素分析,没能提示P27kip1的表达能作为独立预测生存的因素。结论:P27kip1蛋白的高表达可以作为结直肠癌的预后评估的重要参考指标,但不能作为独立预测预后的指标。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人大肠癌株SW620增殖的抑制及与PAK1基因表达的相关性研究

目的 观测表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人大肠癌SW620细胞增殖及SW620细胞表达PAK1的影响.方法 用终浓度为40 μmol/L、60 μmol/L和80 ixmo1/L的EGCG干预人大肠癌细胞株SW620,在0、24、48和72 h不同时间点上用噻唑蓝(MTT)比色法检测EGCG对SW620细胞生长的影响;并以SW620细胞空白组为对照,用蛋白免疫印迹(Westerm blot)检测不同EGCG作用48 h时SW620细胞PAK1的表达水平变化.结果 EGCG对大肠癌SW620细胞增殖有显著的抑制作用,而且与SW620细胞空白对照组相比.EGCG处理组细胞的PAK1蛋白表达受到显著抑制.结论 EGCG抑制大肠癌SW620细胞增殖的机制可能与EGCG通过调控大肠癌细胞的PAK1表达相关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on the proliferation of SW620 cells and the expression of PAK1 gene. Methods Human colonic cancer cell line SW620 was treated with EGCG at 40, 60 and 80 μmol/L and cultured in RPMI 1640 medium for 0, 24, 48 and 72 h. The proliferation of SW620 cells was observed by MTT assay before and after EGCG treatment, and the expression of PAK1 protein was observed by Western blotting. Results SW620 cells treated with EGCG displayed a slowed growth in comparison with the control cells, and the growth rate decreased with the increase of EGCG concentration. PAK1 protein expression was lowered in SW62Q, cells after EGCG treatment for 48 h. Conclusion EGCG can inhibit the proliferation and partially reduce the expression of PAK1 protein in SW620 cells.     

RAD51AP1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 观察RAD51AP1在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法 收集2019年3月至2021年3月福建医科大学附属龙岩第一医院收治的151例结直肠癌患者的癌组织和癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学法分析RAD51AP1表达水平与临床病理特征的关系。将SiRAD51AP1转染SW620细胞,采用MTT法、细胞划痕实验观察该基因表达下调对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响,同时运用Western blotting法检测相关信号通路的表达情况。结果 在结直肠癌组织中,RAD51AP1表达高于癌旁正常组织（P<0.001）。RAD51AP1蛋白阳性表达在有、无淋巴结转移方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,下调RAD51AP1基因表达水平能抑制肿瘤细胞的增殖及迁移,RAD51AP1基因通过mTOR/P70S6K信号通路起作用。结论 RAD51AP1在结直肠癌组织中高表达,RAD51AP1基因表达下调,能通过下调mTOR/P70S6K信号通路抑制肿瘤细胞的增殖及迁移。     

ISO-1对大肠癌细胞侵袭的影响

目的研究选择性MIF互变异构酶活性抑制剂ISO-1对人大肠癌细胞侵袭的影响并探讨其可能的机制。方法实验组用0.01~100μmol/L的ISO-1作用于大肠癌细胞Lovo,对照组为相应浓度的DMSO处理;MIF互变异构酶活性通过L-多巴色素甲酯测定;微孔迁移法检测ISO-1对Lovo细胞体外侵袭的影响;ELISA法测定ISO-1作用后培养上清中MIF蛋白水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ISO-1对Lovo细胞MMP-9和IL-8 mRNA表达的影响。结果较高浓度ISO-1(10~100μmol/L)均能明显抑制MIF互变异构酶活性,但不影响细胞外分泌MIF蛋白水平;100μmol/L ISO-1作用24h Lovo细胞穿透聚碳酸酯膜显著减少,与对照组比较差异有显著性(153±13vs204±10,P<0.05);100μmol/L ISO-1作用24h Lovo细胞表达MMP-9和IL-8 mRNA水平显著降低,与对照组比较差异有显著性(MMP-9 mRNA:0.5187±0.072vs0.6757±0.026.P<0.05;IL-8 mRNA:0.1541±0.019 vs 0.2081±0.030,P<0.05)。结论选择性MIF活性抑制剂ISO-1降低了Lovo细胞的侵袭,其可能机制为ISO-1抑制了MIF互变异构酶活性并下调MMP-9和IL-8的表达。