一贯煎诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的实验研究

目的体外实验观察一贯煎诱导分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesen-chymal stem cell,BMSC）定向分化肝细胞的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离原代大鼠BMSC,第3代细胞采用流式细胞仪分析表面细胞因子、诱导分化为脂肪细胞鉴定其干细胞特征;采用肝细胞生长因子联合成纤维细胞生长因子和一贯煎含药血清2种诱导方案连续培养BMSC共21天,PCR检测细胞甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）、白蛋白（albumin,AIb）、肝细胞核因子4eL（hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α）mRNA表达情况,细胞免疫荧光检测细胞AFP和细胞角蛋白18（cytokeratin18,CKl8）的表达,染色高碘酸一希夫反应法观察细胞糖原形成,Western blot法检测细胞CK18、Wnt 3α、α-catenin蛋白的表达情况。结果全骨髓贴壁法分离的BMSC高表达白细胞分化抗原（cluster of differentiation,CD）90、29、44,低表达CD34和CD11b,成脂诱导2周后油红O染色可见大量脂滴。一贯煎药物血清和细胞因子诱导均可提高BMSC表达AIb、AFP、HNF4αmRNA表达水平,促进CK18蛋白表达,诱导21天后可检测到AFP和CK18的表达,可见细胞合成糖原颗粒,观察到BMSC内Wnt 3α和β-catenin表达下调。结论一贯煎可诱导大鼠BMSC向肝细胞样细胞分化,其机制与下调Wnt／β-catenin信号通路有关。     

骨髓间充质干细胞诱导分化为肝样细胞的研究进展

owen[1]首先将其命名为间充质干细胞（BM—MSCs）,最初认为它只能分化为同胚层的细胞,后来研究证实其分化潜能是超越胚层界限的。BM—MSCs属于多能干细胞,来源于中胚层,具有很强的多向分化潜能,具有干细胞的共性。对BM—MSCs分化潜能的研究已成为国内外研究机构的热点。目前BM—MSCs向肝细胞的分化已有研究,但仍处于初步阶段。本文就BM—MSCs体外诱导分化为肝细胞的研究进展作一综述。     

阿魏酸钠诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的初步研究

目的 探讨阿魏酸钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的可能作用。方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，采用阿魏酸钠对其进行诱导培养，倒置显微镜下观察诱导培养不同时间后细胞的形态变化，并应用免疫细胞化学方法鉴定诱导培养后细胞表面神经细胞特异性标志物神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果 阿魏酸钠诱导培养6h后即可见细胞形态发生明显变化，24h后表现为典型的神经细胞样形态，NF和NSE神经细胞特异性标志物呈阳性表达。结论 初步证实阿魏酸钠具有诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。     

骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的研究现状

归纳总结骨髓间充质干细胞的诱导方法和现代应用情况,为骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的深人研究提供参考。通过查阅、整理有关骨髓间充质干细胞的文献资料,从骨髓间充质干细胞的生物特性与制备、诱导成骨细胞的方法、在组织工程骨中的应用、所面临的问题以及未来的研究方向等方面进行总结和分析。结果显示骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,体外可诱导分化为成骨细胞,采用组织工程学技术可在体外构建骨组织工程支架。基于骨髓间充质干细胞的特性,使其在创伤修复、细胞替代治疗、支持造血、基因治疗等方面的应用前景也相当广阔。有必要开展骨髓间充质干细胞成骨诱导分化机制的研究,为其诱导分化成骨细胞提供指导意义和借鉴价值。     

骨髓间充质干细胞体内定向分化为神经元样细胞的研究

虽然骨髓MSC具有广阔的应用前景,但是还有许多问题没有解决。进一步探索决定其分化的关键基因,发现影响其向其他谱系细胞分化的细胞、免疫、分子学机制,找到调控移植细胞迁移和整和的方法等,是在真正临床应用之前所必须要做的工作     

小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究

目的:探讨体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mouse marrow mesenchymal stem cells,mMSCs)分化为神经元样细胞的条件.方法:密度梯度离心结合差异贴壁法分离、纯化mMSCs,胰蛋白酶消化传代扩增mMSCs.用最适浓度的β-疏基乙醇(BME) 神经生长因子(NGF)、NGF 全反式维甲酸(ATRA)、NGF BME ATRA作为诱导剂,观察诱导期间细胞的形态变化,并用免疫细胞化学法鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)的表达,行甲苯胺蓝染色显示尼氏小体.结果:(1)免疫细胞化学显示NGF BME ATRA诱导组诱导效率最高,78%细胞表达NSE,80%细胞表达NF;(2)各诱导组尼氏染色均出现尼氏小体.结论:NGF、BME、ATRA能诱导mMSCs分化为神经元样细胞,其中以NGF(10μg/L) BME(2.5mM/L) ATRA(2.5M/L)组效率最高.     

黄芪含药血清诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究

目的:探索黄芪含药血清诱导骨髓间充质干细胞(MSC)分化为心肌样细胞的作用。方法:采用日本大耳白兔制备黄芪含药血清,分离SD大鼠MSC进行传代培养。用黄芪含药血清和5-Aza进行诱导分化,免疫组化法检测诱导后细胞心肌肌钙蛋白、结蛋白表达,RT-PCR反应测定α-MHC和β-MHC表达。结果:诱导后细胞心肌肌钙蛋白、结蛋白表达阳性,并可以表达心肌特异性的肌球蛋白。结论:黄芪含药血清可诱导MSC分化为心肌样细胞。     

补肾法诱导骨髓间充质干细胞定向成骨分化的研究进展

中医学认为:肾主骨,生髓。骨的生成,发育,强弱,盛衰均与肾有密切关系。众多研究表明补肾法能诱导骨髓间质干细胞定向成骨分化,骨髓间质干细胞是多能细胞,通过诱导可分化成为骨、软骨、脂肪、肌腱,这是用现代科学技术更完善地阐释补肾法的理论依据,对防治骨质疏松症,骨坏死,骨缺损等也有重大价值。     

地黄多糖诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞最佳浓度探索

目的探讨地黄多糖对骨髓间充质干细胞（MSCs）诱导分化为神经细胞的最佳浓度。方法利用贴壁法分离纯化MSCs，不同浓度地黄多糖诱导其向神经细胞分化，β-巯基乙醇诱导作为对照，光镜下观察细胞形态，采用免疫细胞化学方法计算神经元和胶质细胞阳性数。结果不同浓度地黄多糖诱导培养24h后均可表现为典型的神经细胞样形态，但以中浓度地黄多糖组神经细胞数最多，且神经元比例高于其他两组。结论地黄多糖诱导MSCs分化为神经元以中浓度最佳。     

当归红芪超滤膜提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 观察并评价当归红芪超滤膜提取物（简称中药合剂）诱导小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow derived stroma cells, BMSCs）分化为神经样细胞的效果。方法 体外培养小鼠BMSCs后加入药物并分为5组：空白组、6 g/L中药合剂组（简称低剂量组）、12 g/L中药合剂组（简称高剂量组）及3 g/L中药合剂联合0.5 mmol/L β 巯基乙醇用药组（简称联合组）、β 巯基乙醇阳性对照组（简称对照组）。通过甲苯胺蓝染色观察各组诱导分化为神经样细胞的效果,应用免疫组织化学及免疫荧光技术检测分化后细胞所表达的神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase, NSE）、巢蛋白（nestin）、神经丝蛋白（neurofilament protein, NFP）、微管结合蛋白2（microtubule associated protein 2, MAP2）及神经胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP） 5种神经特异性蛋白的差异,并应用流式细胞分析技术（flow cytometry, FCM）检测各组细胞生长周期的变化。结果 诱导后细胞形态发生神经样细胞改变,两个中药合剂组的形态特征性均弱于联合组和对照组;除空白组外,上述5种蛋白在各组的表达为阳性,表达程度均为对照组最高（P<0.05）,联合组次之（P<0.05）;经流式细胞术检测细胞增殖率比较：对照组最低（P<0.05）,高、低剂量组较高（P<0.05）,联合组次之（P<0.05）。结论 中药合剂可较为有效地诱导小鼠BMSCs分化为神经样细胞,诱导能力虽弱于对照组,但对于分化后细胞的增殖作用明显。联合组可有效诱导BMSCs分化为神经样细胞并使细胞有较高的增殖能力, 可能是用于临床研究目前较为理想的用药途径。     

麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响

[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干预14 d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应(qPCR)方法,检测各组GFPBMSC细胞肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白-5(AQP-5)蛋白及mRNA的表达。[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组(P0.01),其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组(P0.01)。[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制。     

骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞的成骨分化是近10年来骨组织工程种子细胞的研究热点,本文查阅相关文献,对近年骨髓间充质干细胞成骨分化进行综述.     

天麻诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的：探讨天麻对体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞的影响：方法：通过贴壁法分离大鼠MSC,体外扩增培养。中药天麻定向诱导分化为类神经元样细胞光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志物神经原烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)。结果：大鼠MSC可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。天麻诱导2h后大部分可分化为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE、Nestin呈阳性,GFAP阴性。结论：大鼠MSC可诱导分化为神经元样细胞。     

中药诱导骨髓间充质干细胞成软骨及成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)不仅具有强大的自我更新能力、多向分化潜能,还兼具低免疫原性及归巢能力,是骨及软骨组织工程中理想的种子细胞。目前,诱导BMSCs分化的细胞因子由于价格昂贵和安全性问题而无法广泛应用于临床实践中。研究表明中药及其有效成分可诱导BMSCs分化,具有与细胞因子类似的生理活性。文章旨在对中药诱导BMSCs成软骨及成骨分化的研究进展进行综述,以期为骨科疾病的防治研究提供参考。     

天然小分子化合物诱导间充质干细胞向成骨分化的研究进展

骨缺损的修复一直是骨科领域的难点,以干细胞移植为核心的再生医学的发展为攻克这一顽疾带来了希望。间充质干细胞具有很强的成骨分化潜能,是骨组织工程优良的种子细胞。天然小分子化合物具有来源丰富、结构复杂多样及广泛而独特生物活性等特点。近年来,发现天然小分子化合物是高效、定向诱导间充质干细胞向成骨细胞分化的天然诱导剂,在干细胞治疗骨缺损中有重要应用前景。综述了近几年有关天然小分子诱导间充质干细胞成骨分化的研究进展,可望加快间充质干细胞在骨缺损、骨组织工程中的临床应用提供新思路。     

成人骨髓间质干细胞诱导分化为神经元样细胞及其与细胞分裂的关系

目的探讨成人骨髓间质干细胞(hMSC)向神经元样细胞分化过程中分化与细胞分裂的关系。方法从成人骨髓中分离骨髓间质干细胞(MSC),培养扩增。用参芪液诱导MSC分化为神经元样细胞,经免疫组化鉴定其神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。诱导后进行神经元样细胞计数,掺入Brdu测定,计算标记系数。采用双标记间接免疫荧光法检测神经元样细胞特异性表面标记(NSE、NF)与细胞分裂的标记Brdu的关系。抑制DNA合成,计算Brdu、NSE和NF阳性细胞数。结果MSC经参芪液诱导后,可见神经元样细胞。免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF阳性,GFAP阴性。MSC诱导分化后的细胞总数增加,诱导分化后12h内细胞增殖较快。30%以上分化的神经元样细胞在表达NSE和NF的同时可见Brdu标记,而另一部分分化的神经元则无Brdu标记。抑制DNA合成,并不会阻止神经元的分化,仍有70%的分化神经元表达神经元特异性标记蛋白NSE。结论MSC诱导分化的部分神经元样细胞可进行细胞分裂,但抑制细胞分裂不影响神经元分化。     

丹酚酸B在大鼠骨髓间充质干细胞分化过程对心肌早期基因Nkx2.5 GATA-4 mRNA表达的影响

目的:探讨丹参单体丹酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrowmes-enchymal stem cells,MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Nkx2.5、GATA-4 mRNA的表达,从而确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点。方法:选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增。免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)及250μg/L SalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24h,于诱导后第4周,用实时荧光定量RT-PCR法检测GATA-4和Nkx2.5基因表达。结果:①第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达。②诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构。5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-aza+SalB组的NKx2.5、GA-TA-4 mRNA表达明显增加。结论:SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用,并且在Nkx2.5基因表达上丹酚酸B的优势更加明显。     

中药及其提取纯化物对骨髓间充质干细胞诱导分化的研究进展

骨髓间充质干细胞具有多向分化的潜能,是目前干细胞领域的研究热点。许多研究者对中药及其提取纯化物对骨髓间充质干细胞分化的影响进行了探索。研究结果表明,部分中药及其提取纯化物能有效诱导骨髓间充质干细胞多向分化。例如三七皂苷能诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞和心肌细胞,柚皮苷能诱导骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,右归饮的家兔含药血清诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞等。     

双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程的蛋白表达

目的:研究中药复方双龙方(人参,丹参)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化过程的蛋白表达;方法:采用双龙方含药血清对中国小型猪MSCs定向诱导分化为心肌样细胞的过程进行人工干预。对分化前后细胞蛋白进行二维电泳分离,PDQuest软件分析蛋白点的表达情况;对差异蛋白进行质谱分析并加以鉴定。结果:成功鉴定16个蛋白,通过对成功鉴定的蛋白功能进行数据库检索,表明这些蛋白的差异表达可能与中药干预过程有关;结论:双龙方含药血清对MSCs体外定向分化过程有一定的辅助作用;同时表明蛋白质组学技术可以应用于细胞增殖、分化和凋亡等过程的机理分析。