乙型肝炎病毒中国流行株B、C、D/C及A基因型的全基因克隆与序列分析

目的:扩增克隆乙型肝炎病毒(HBV)B,C,D/C及A基因型的全基因组,构建不同基因型的全基因序列克隆.方法:从中国慢性乙型肝炎患者血清提取DNA以L-PCR技术对3.2 kb的HBV DNA进行扩增.纯化后克隆到TA载体.对于HBV不同基因型的全基因序列利用Simplot、DNAStar(Clustal W方法的MegAlign和Phylogenetic tree)等生物软件进行分析.结果:克隆出我国主要存在的几种HBV DNA全基因序列:B、C、D/C和A基因型.包括:adr、adw、ayw血清型.B基因型(adw血清型)全基因序列长度为3215 bp,c基因型(adrq+血清型)为3215 bp,D/C基因型(ayw2血清型)为3215 bp,A基因型(adw血清型)为3182 bp,均递交GenBank.在H3样品中的4个全基因克隆中存在一个同时含有2853-2885 nt缺失突变和核心区的1762A-T、1764G-A双位点突变的变异株,表明同一个体中同时存在突变株和野生株,可能是耐抗病毒药物的分子基础.结论:本研究克隆了我国有报道存在的主要基因型、血清型的HBV全基因序列,为全面了解我国HBV基因型和血清型提供了序列资料.     

阿德福韦治疗过程中乙型肝炎病毒核酸序列的变化

目的研究新药阿德福韦抗病毒过程中乙型肝炎病毒(HBV)核酸序列的变化情况,以有效的指导临床用药。方法选取4例服用阿德福韦患者的系列血清,包括用药前血清及用药后半年(28周)、1年(52周)、2年(92周) 血清,将4例系列血清用一片段聚合酶链反应法进行全基因组克隆、测序;并对测序结果进行基因型及血清型分析、全基因序列同源性及差异性比较、HBV各编码区氨基酸变异等生物信息学分析。结果 4例系列血清的基因型及血清型分析为:1例为C基因型／adrq 血清型,1例为B、C混合基因型／adw2、adrq 昆合血清型,2例为B基因型／adw2血清型。全基因序列同源性比较情况为:同例血清组内序列同源性为97．5％-99．8％;B、C混合型感染者其组内同源性为 90．9％-99．3％。不同例血清组间序列同源性为90．6％-100％。各编码区氨基酸变异情况为:治疗52周时碱基突变数明显高于28周和92周。存在热点突变位点。在P基因的逆转录酶区,有几处非常有意义的有义突变,很可能会影响逆转录酶的活性,而使HBV对阿德福韦产生耐药逃逸。结论 HBV全基因组序列分析发现了几处有意义的氨基酸变异,这可能与HBV对阿德福韦的耐药逃逸有关。     

拉米夫定耐药HBV毒株的RT区序列分析

目的分析拉米夫定耐药HBV毒株部分RT区序列，以了解RT区YMDD基序之外HBV的变异情况。方法采用PCR方法对拉米夫定临床耐药患者治疗前及耐药后血清HBV部分RT区序列进行扩增，扩增的核苷酸片段覆盖HBV RT的B区～E区及S基因“a”决定簇，对PCR产物进行直接测序，将HBV RT区核苷酸和推导的氨基酸序列-与治疗前50株HBV野毒株序列和Genebank中77株不同基因型野毒株序列进行比较，同时对HBV进行血清分型。结果60例患者有YMDD变异，其中26例为adw亚型，占43．33％；34例为adr亚型，占56．67％。另外12例患者(16．67％)未发现YMDD变异。16例患者出现11个RT保守区氨基酸变异(不包括550和526位氨基酸变异)；25例患者出现19个HBVRT非保守区氨基酸变异。结论拉米夫定耐药株的氨基酸变异不仅见于RT B区的526和C区550两个位点，B、C区的其他位点、保守区以及RT非保守区也可发生多个变异。     

乙肝病毒基因型的分子生物学特性及其临床意义

乙肝病毒(HBV)基因型是在漫长的岁月中点突变累积形成的,反映了HBV自然感染史发生变异的特点,是病毒变异进化的结果。如果HBV基因序列的某些核酸的改变导致其编码产物抗原位点的改变,就逐渐构成了不同的血清型。目前已根据HBsAg的抗原决定簇的差异将HBV分为4种亚型(adr,adw,ayr,ayw),这些亚型还可进一步细分为9     

乙型肝炎病毒基因组结构与功能复杂性的认识

全世界有乙型肝炎病毒(HBV)感染者3.5亿人.对于HBV多年的研究已经积累了丰富的资料,但是,我们对于HBV基因组特性的认识远远没有穷尽,事实上还有许多方面需要进行探索.通过对特定慢性HBV感染者血清中不同的HBV病毒基因克隆序列的比较提出了HBV准种特点,使我们对于HBV基因组结构与功能的复杂性有了更为深入的了解.野生型病毒之间、野生型病毒与突变型病毒之间、突变型病毒之间的反式调节机制是各种类型的缺陷型HBV存在的重要条件和机制,也是HBV感染引起肝细胞癌(HCC)的重要的分子生物学机制.外周血中存在羧基末端截短的表面抗原中蛋白(MHBst)的编码基因,使我们对于HBV基因编码的反式激活蛋白的类型有了新的认识.通过对克隆的HBVDNA全长基因序列的比较,以及与其他地域所流行的HBV DNA序列之间的比较,发现了新型的开放读码框架(ORF),如前-X(pre-X)蛋白的编码基因和前-前-S(per-pre-S)蛋白的编码基因.长距离精确聚合酶链反应(LA-PCR)技术克隆的HBV DNA全长序列,是我国流行的adr亚型的HBVDNA全基因序列,代表了真正存在的HBV的基因全长序列,在HBV基因结构与功能的研究中,以及在抗HBV治疗疗效应答的研究中具有重要的理论和实际应用价值.     

乙型肝炎病毒S基因变异、基因型与宫内感染免疫失败的关系

目的 探讨HBV S基因变异、基因型与宫内感染免疫失败的关系.方法选择东南大学附属南京第二医院出生的35例宫内感染免疫失败的幼儿及其母亲,实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA含量;并扩增其HBV S基因序列,测序并通过DNASTAR软件与基因库标准序列比对.结果幼儿及其母亲HBV DNA定量检测结果均＞1×106拷贝/mL;幼儿及母亲HBV S基因核苷酸变异率分别为11.4%和17.1%;母婴序列同源性＞99.3%;35对母婴中,23对HBV基因型为C型,血清型为adr亚型,12对为B型,血清型为adw亚型,母婴基因型相同.结论 HBV S基因是否变异可能不是高病毒血症患者宫内感染免疫失败的主要因素;基因分型并不能预测和评价新生儿是否发生宫内感染和免疫失败.     

表面抗原和抗体双阳性慢性乙型肝炎病毒感染者病毒S基因的变异分析

目的 了解HBsAg和抗-HBs双阳性慢性HBV感染者的S基因变异情况.方法 分别对8例HBsAg和抗-HBs双阳性(实验组)及9例HBsAg阳性、抗-HBs阴性慢性HBV感染者(对照组)的S基因进行PCR扩增并测序,将测序结果进行对比分析.基因型和血清型分布比较、主要亲水区变异位点数比较采用Fisher'S精确检验,核苷酸和氨基酸序列的同源性比较采用t检验.结果 感染HBV的基因型分布:实验组为B型2例、C型6例,对照组为B型6例、C型3例,两组间差异无统计学意义(P>0.05);血清型分布:实验组为adw 2例、adr 5例、ayr 1例,对照组为adw 6例、adr 3例,两组间差异无统计学意义(P>0.05).实验组和对照组HBV前S1区的核苷酸替换率(2.29%比1.8%)和氨基酸替换率(2.66%比1.59%)差异无统计学意义(t值分别为1.56和1.39,P值均>0.05),前S2区的核苷酸替换率(1.74%比0.91%)差异有统计学意义(t=4.68,P<0.01),氨基酸替换率(3.18%比2.05%)差异无统计学意义(t=1.85,P>0.05);S区的核苷酸替换率(2.13%比0.81%)和氨基酸替换率(4.37%比1.52%)差异有统计学意义(t值分别为6.00和5.32,P值均<0.01).主要亲水区内外均存在氨基酸的替换,"a"决定簇变异相对较高(P<0.05).结论 HBsAg和抗-HBs双阳性慢性HBV感染者的S基因变异率相对较高.     

乙型肝炎病毒开放读码框的结构及功能研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,其基因组至少含有4个开放读码框,分别为编码外膜蛋白的S基因区、编码核衣壳蛋白的C基因区、编码P蛋白的P基因区及编码X蛋白的X基因区.此外,还发现了两个新的区域,前一前-S区和前-X区.各结构区在病毒的复制、感染、致癌等方面发挥重要作用,文章就其结构和功能的研究进展作一综述.     

两株犬源狂犬病病毒街毒株全基因组序列测定与分析

目的对2株犬源狂犬病病毒街毒株全基因组测序,了解国内狂犬病病毒的流行和变异情况。方法采用乳鼠脑内接种方法分离2株天津地区狂犬病病毒街毒株,RT-PCR扩增病毒DNA覆盖全基因组12个相互重叠的基因片段,PCR产物平端克隆后进行全基因组核苷酸序列测定,然后对其分子变异和进化特点进行分析。进行两分离株的序列相似性、氨基酸同源性、主要功能位点的变异比较和种系发生分析。结果 TJD04和TJD05两株狂犬病病毒全基因组长均为11 924 nts,全基因组序列的组成和结构均符合弹状病毒科狂犬病病毒属的特征。病毒基因组由5个编码区组成,基因起始位点和终止位点高度保守,氨基酸编码长度未发生变异,5个编码蛋白序列较少发生变化,仅有个别主要功能位点发生变异,且大部分变异均属于无意义沉默突变。多序列相似性比较和种系发生分析显示,两株病毒均属于基因1型,N基因与全基因进化树保持一致,与中国犬源狂犬病病毒BD06同源性最高(99.6%),进化关系近,并具有较为独特的中国地域特点。结论两天津株狂犬病毒可能是自然界中固有的狂犬病病毒街毒株。     

北京地区乙肝病毒S基因序列多态性及其分布

目的:探讨HBV的S基因序列多态性、基因型/血清型在北京地区的分布特征以及基因型/血清型与临床症状的可能相关性方法:对69例样品进行S区聚合酶链反应扩增测序,通过标准序列使用MEGA3.1和DnaSP软件分析核苷酸差异度,比较基因型、血清亚型的核酸及蛋白质差异.结果:在69例北京地区样品中检测出C基因型55例(79.7%),B基因型14例(20.3%);adrq~ 和adw2分别为52和14例,2例血清亚型未见报道.S基因核苷酸差异度分布不均匀,在C型中较高.非同义突变类型多分布在疏水区中,亲水区多为同义突变.临床症状在B,C基因型中有显著性差异.结论:S基因的序列差异在C型中高于B型;DNA序列突变在S基因中呈非随机分布,疏水区突变率高而两个亲水区比较保守.     

咽部吞咽的生理解剖学与吞咽障碍的失代偿

0引言吞咽是维持人体生存的重要功能活动.每人每天均必须进行无数次吞咽.对吞咽障碍(deglutitiondisoders,DD)进行有效的预防、诊断和治疗必须了解咽部有关的解剖和功能.1吞咽的生理解剖学“吞咽”不仅指口腔内食团(包括液、固体食物、药物和唾液等)在咽部的通过,而应将之定义为是在构成吞咽通道的唇、舌、腭、咽、喉、食管等各器官肌肉、神经的密切协同下,将吞咽物顺利、安全地运送至胃的全过程[1].食物在口腔内经过咀嚼、搅拌,由唾液润湿,变成食团,然后被吞咽经咽和食管入胃.咀嚼的作用是把大块食物分成小块,并经舌肌、颊肌、颌肌等的搅…     

Preparation and separation of the glucuronide and sulfate conjugates of thyroxine and triiodothyronine

An enzymatic method for synthesis of labelled thyroxine glucuronide (T4G) and triiodothyronine glucuronide (T3G) from labelled thyroxine (T4) and triiodothyronine (T3) is presented. The synthetic glucuronides are completely digested by beta-glucuronidase, with recovery of the parent T4 or T3. They have distinctive elution patterns on HPLC and on Sephadex G25 chromatography, and can be clearly separated from T4 and T3 as well as from synthetic T4 sulfate (T4S) and T3 sulfate (T3S). On LH 20 chromatography, elution of T4G and T3G is intermediate between that of T4 and T3 and that of T4S and T3S. T3G can be well separated from other thyronines by HPLC alone, but T4G coelutes with rT3 on HPLC; these are then separated by adding a Sephadex G25 chromatography step. Biosynthetic 131I-T3G and 125I-T4G from the bile of a cat given 131I-T3 and 125I-T4 had similar HPLC chromatographic patterns to those of synthetic T3G and T4G. That the identified peaks from analysis of the bile were indeed T3G and T4G was confirmed by recovery of the parent T3 and T4 after beta-glucuronidase digestion.     

我国骨关节结核诊治的回顾与展望

骨关节结核是危害人们健康的严重感染性疾病,近95％由他处结核病继发而来.罹患骨关节结核疾病后几乎均将致残,严重影响人们的健康、工作和生活.建国以来在党和国家的关心和支持下,骨关节结核的诊治水平取得了长足进步.时至今日,由于多种原因,学科发展和被重视程度受到一定的制约,同整个医疗行业的发展不相适应.回顾过去,展望未来,我们需要重新审视骨关节结核的诊治方法,努力推进骨关节结核诊疗技术的科学发展.     

妊娠时间与肺结核复发的相关性研究及诊治对策

目的 分析肺结核史患者妊娠时间和肺结核复发间相关性.方法 选取我院收治的有肺结核史的妊娠妇女576例作为研究对象,对其妊娠前肺结核治疗、治愈后妊娠时间、妊娠后复发肺结核等进行分析,总结有肺结核史育龄女性的妊娠时间和肺结核复发之间的关系.结果 肺结核治愈后不同时间段妊娠者的结核复发率比较,差异具有显著性（P＜0.05）,停药后间隔时间越久妊娠,肺结核复发的几率越小.结论 加强孕期痰菌检查,及早发现复发肺结核,提高母婴安全.     

血管通路的评价、选择及并发症防治

随着终末期肾衰竭患者的逐年增多，用于维持性血液透析患者的费用支出也逐年增加，其中相当比例的资金用于血管通路的建立及相关并发症的处理。据Lysaght估计，2001年全球维持性透析患者超过110万人，并以每年7％的速度增长，到2010年将达到200万人，今后10年医疗费用将超过1万亿美元。美国国立卫生研究院(NIH)估计，每年因血管通路建立和相     

Kinetics and persistence of cardiovascular and locomotor effects of immobilization stress and influence of ACTH treatment

Stress triggers crucial responses, including elevated blood pressure and heart rate (HR), to handle the emergency and restore homeostasis. However, continuation of these effects following cessation of the stress is implicated with many stress-related disorders. Here, we examine the kinetics and persistence of cardiovascular and locomotor responses to single and repeated immobilization stress (IMO), with and without prior treatment with adrenocorticotropic hormone (ACTH). Radiotelemetry probes were implanted into male Sprague-Dawley rats to continually monitor mean arterial pressure (MAP), HR and locomotor activity. Rats were subjected to IMO for 2 h daily (10 a.m. to noon, 6 consecutive days). The first IMO induced the greatest change in MAP (about 30 mm Hg) and HR (about 200 bpm). Following each IMO, MAP and HR were elevated during the remaining light phase and in the subsequent dark phase, HR was lower than prior to IMO. We further examined whether elevation of ACTH to a level similar to IMO will elicit similar effects, and if it will alter subsequent responses to IMO. Injection of ACTH (13 IU/kg, s.c.) triggered a short-lived rise in MAP, and decreased HR. After six daily injections of ACTH and recovery time (8 days), rats were immobilized as above. The cardiovascular responses were similar during the IMO, but the ACTH-pretreated group displayed differences following cessation of the IMO. In addition, IMO led to a large reduction of locomotor activity during the dark (normally active) phase to levels similar to the light phase. Following the IMOs, locomotor activity recovered more slowly in the ACTH-pretreated group. The study revealed that IMO-triggered cardiovascular and locomotor responses are evident after termination of the stress. In addition, prior exposure to ACTH delayed recovery in cardiovascular and locomotor functions following cessation of stress.