创伤后深静脉血栓形成中的黏着斑激酶信号通路

背景:创伤后深静脉血栓形成的分子机制复杂,黏着斑激酶信号通路在深静脉血栓形成过程中的作用尚未阐明.目的:探讨黏着斑激酶信号通路在创伤性深静脉血栓形成中的作用.方法:取20只SD大鼠制备股骨骨折模型.造模后5 d,根据血栓形成情况将模型大鼠分为2组:血栓形成组和无血栓形成组,每组10只.另取10只正常大鼠作为对照组.无创切取大鼠股静脉血管组织,抽取总RNA,Genechip Rat Genome 430 2.0芯片测定股静脉RNA的表达,并分析黏着斑激酶信号通路基因表达的变化.结果与结论:与无血栓形成组比较,血栓形成组中黏着斑激酶信号通路细胞外基质、蛋白激酶C、Fyn、辅肌动蛋白、Vav等关键基因均上调;下调的有整联蛋白α、肌球蛋白轻链磷酸酶、c-Jun基因.结果提示黏着斑激酶信号通路可能是调控血栓生物学状态的重要信号通路.     

创伤后深静脉血栓形成中的黏着斑激酶信号通路

背景：创伤后深静脉血栓形成的分子机制复杂,黏着斑激酶信号通路在深静脉血栓形成过程中的作用尚未阐明。目的：探讨黏着斑激酶信号通路在创伤性深静脉血栓形成中的作用。方法：取20只SD大鼠制备股骨骨折模型。造模后5d,根据血栓形成情况将模型大鼠分为2组：血栓形成组和无血栓形成组,每组10只。另取10只正常大鼠作为对照组。无创切取大鼠股静脉血管组织,抽取总RNA,Genechip Rat Genome4302.0芯片测定股静脉RNA的表达,并分析黏着斑激酶信号通路基因表达的变化。结果与结论：与无血栓形成组比较,血栓形成组中黏着斑激酶信号通路细胞外基质、蛋白激酶C、Fyn、辅肌动蛋白、Vav等关键基因均上调;下调的有整联蛋白α、肌球蛋白轻链磷酸酶、c-Jun基因。结果提示黏着斑激酶信号通路可能是调控血栓生物学状态的重要信号通路。     

微电场通过非整合素途径活化粘着斑激酶促进滋养细胞迁移/侵袭研究

目的探讨生理性微电场促进体外培养的人胎盘滋养细胞迁移/侵袭功能是否与滋养细胞表面整合素(integrin)表达有关。方法用150 m V/mm的直流微电场刺激滋养细胞,时间分别为5、10和15 h,测定其迁移情况并观察细胞形态变化。Western blot检测刺激前后1 h内粘着斑激酶FAK活化情况和细胞表面integrinα1、integrinα5、integrinαV和integrinα1蛋白表达水平。结果在含有10%胎牛血清的培养基中,150 m V/mm电场刺激下滋养细胞向负极定向迁移,迁移速度和距离较对照组明显增加(P=0.021),胞体拉长,垂直于电场方向排列;胞内FAKTyr397位点于刺激后5、10、30、60 min内迅速活化并逐渐加强(P0.05);刺激前后滋养细胞表面integrinα1、integrinα5、integrinαV、和integrinα1蛋白表达水平无明显改变(P0.05)。结论生理性直流微电场可能通过非整合素途径活化FAK从而促进滋养细胞迁移/侵袭功能,但其详细机制仍需进一步研究。     

微电场对胎盘滋养细胞迁移/侵袭相关信号通路活性的影响

目的探讨滋养细胞迁移/侵袭相关促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶(MAPK/ERK),磷酸肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)和蛋白酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)信号传导通路在微电场刺激下的活化水平。方法将胎盘滋养细胞用场强为150mV/mm的直流微电场加以刺激,通过蛋白质印迹法(Western blot)测定电刺激前和后各时间点滋养细胞MAPK/ERK、PI3K/Akt和JAK/STAT3信号传导通路相关活性分子的活化水平。滋养细胞在加电前分别用MAPK抑制剂PD980599(100μmol/L)和Akt抑制剂LY294002(20μmol/L)处理1h,在上述相应含抑制剂的培养基中用场强为150mV/mm直流微电场刺激5h,观察抑制剂对微电场刺激细胞行为的影响。结果 Western blot结果显示,滋养细胞在150mV/mm微电场作用下,p42/44MAPK Thr202/Thr204位点、Akt Ser473位点于5min开始活化,10~60min内逐渐加强,STAT3S727位点在微电场作用下上述各时间点无明显磷酸化水平改变。相应信号通路抑制剂处理后滋养细胞对微电场刺激的应答反应均受到明显抑制。结论微电场对滋养细胞迁移/侵袭功能的影响与MAPK/ERK、PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

健骨颗粒含药血清培养成骨细胞整合素/黏着斑激酶信号通路相关因子的表达

背景:目前有关成骨细胞整合素的功能状态及整合素信号转导调控的研究较少.健骨颗粒对成骨细胞整合素表达水平及信号转导通路调控的作用未被阐明.目的:观察健骨颗粒含药血清对成骨细胞黏附的影响,揭示健骨颗粒对成骨细胞整合素表达水平及信号转导通路的调控作用.方法:健康雄性3月龄SD大鼠用于制备健骨颗粒含药血清,选取最佳剂量的含药血清干预第3代大鼠成骨细胞,ELlSA法检测培养液中纤连蛋白、Ⅰ型胶原、玻连蛋白的水平,Western blot法检测成骨细胞黏着斑激酶的磷酸化情况,实时荧光定量PCR法检测成骨细胞纤连蛋白、Ⅰ型胶原、玻连蛋白、黏着斑激酶mRNA的表达.结果与结论:浓度为20%的健骨颗粒含药血清能明显增强体外培养成骨细胞的增殖活力.随着含药血清干预时间的延长,成骨细胞表达及分泌的纤连蛋白、Ⅰ型胶原、玻连蛋白、黏着斑激酶mRNA及蛋白水平逐渐上升,黏着斑激酶的磷酸化水平也逐渐增高(P＜0.05);均明显高于同期的生理盐水血清干预水平(P＜0.05或P＜0.01).说明健骨颗粒能作用于成骨细胞整合素激活的粘着斑激酶转导通路各相关因子,使成骨细胞进入"分泌增加→黏附增加→功能增强、分裂增殖→分泌增加"的良性循环,对成骨细胞的成骨效应起正性调节作用.     

SFRP5调控Wnt/β-Catenin信号通路对子痫前期滋养细胞迁移和侵袭的作用机制研究

目的 探讨分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)在子痫前期(PE)患者中的表达水平及其对滋养细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 收集2020年1月到2021年10月在长治医学院附属和济医院产科收治的15例PE患者(PE组)和15例健康孕妇(正常组)剖宫产手术中获得的胎盘组织和血液样本;采用酶联免疫吸附试验法和免疫组化法分别检测血清和胎盘组织中SFRP5表达水平;体外培养人滋养层细胞系HTR8/SVneo,分别用重组人SFRP5蛋白、Dickkopf相关蛋白1(Dkk-1)和氯化锂(LiCl)处理细胞;采用划痕实验和基底胶Transwell实验检测HTR8/SVneo滋养细胞迁移和侵袭能力;明胶酶谱法检测HTR8/SVneo滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2/9的活性;蛋白免疫印迹法检测HTR8/SVneo滋养细胞中糖原合成酶-3β(GSK3β)和β-catenin蛋白的表达。结果 与正常组[(9.03±1.75)ng/mL)]相比,PE组血清SFRP5水平[(48.07±3.81)ng/mL]显著升高,差异有统计学意义(t=36.063、P<0.001)。与对照组相比,SFRP5组HT...     

黏着斑激酶与纤维化疾病关系的研究进展

黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种胞质非受体蛋白酪氨酸激酶,与酪氨酸激酶2(proline 2 rich tyrosine kinase2,PYK2)及细胞黏着激酶β(cellular adhesion kinaseβ,CAKβ)组成黏附斑复合物家族(focal adhesion complex family)[1],主要     

中药清肾颗粒对肾纤维化大鼠黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的干预作用

目的：观察中药清肾颗粒对肾间质纤维化（RIF）大鼠肾组织黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶（FAK-Ras-MAPK）信号转导通路的影响。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、百令胶囊组和清肾颗粒组,每组10只。采用单侧输尿管结扎（UUO）法制备RIF大鼠模型。术后百令胶囊组将百令胶囊溶于4 mL温水按0.3 g·kg-1·d-1灌胃;清肾颗粒组将清肾颗粒溶于4 mL温水按6 g·kg-1·d-1灌胃,正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。8周后检测各组大鼠血尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、纤维连接蛋白（FN）、α-肌动蛋白（α-SMA）水平;采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织FAK、Ras、p38MAPK、FN、α-SMA的表达水平。结果模型组大鼠血清BUN、SCr、FN、α-SMA水平高于正常对照组;清肾颗粒组和百令胶囊组给药前血清BUN、SCr水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）;给药后两组BUN、SCr、FN、α-SMA均较模型组显著降低,且以清肾颗粒组降低更显著〔BUN（mmol/L）：13.18±4.91比18.56±5.59,SCr （μmol/L）：104.80±12.04比119.02±12.47,FN（mg/L）：29.72±16.75比46.38±8.63,α-SMA（kU/L）：5.49±2.68比7.13±2.37,均P＜0.05〕;免疫组化结果显示：模型组大鼠肾脏组织中FAK、Ras、p38MAPK及FN、α-SMA表达均高于正常对照组,清肾颗粒组和百令胶囊组上述各指标表达均较模型组显著降低,且以清肾颗粒组的下降程度更显著（FAK：3.00±1.41比5.28±2.21,FN：4.25±1.04比6.29±2.06,α-SMA：3.25±1.28比4.86±1.57, p38MAPK：2.50±1.31比4.71±2.50,Ras：3.50±1.41比4.29±1.38,均P＜0.05）。结论清肾颗粒可以降低RIF大鼠血清BUN、SCr水平,抑制肾脏内FAK-Ras-MAPK信号转导通路的活化,从而减少FN和α-SMA生成,发挥抗RIF作用。     

整合素连接激酶通过核因子κB途径介导基质金属蛋白酶9上调促进肺癌细胞迁移和侵袭

目的 探讨整合素连接激酶（ILK）促进肺癌细胞侵袭的相关分子机制.方法 通过细胞转染、siRNA干扰、细胞划痕实验、实时定量PCR、Western Blot方法探讨ILK和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在肺癌A549细胞中的表达及相互关系.结果 在肺癌A549细胞系中,过度表达的ILK诱导MMP-9的表达（P＜0.01）;加入MMP-9抑制剂多西环素显著影响了转染组细胞划痕愈合能力（P＜0.01）,加入抗-MMP-9中和抗体则严重阻碍了细胞迁移能力（P＜0.01）,体外基底膜侵袭实验亦得到了相同的结果（P＜0.01）.ILK的过度表达促进磷酸化和核因子-κB（NF-κB）亚单位p65的核易位（P＜0.01）,并且NF-κB抑制剂BAY11-7028和NF-κBp65siRNA能抑制ILK高表达细胞系中MMP-9的上调（P＜0.01）.结论 本研究结果表明,ILK的过度表达可促进肺癌细胞迁移和侵袭,并且是通过NF-κB途径介导MMP-9上调来实现这一过程.     

Schisandrin B suppresses glioma cell metastasis mediated by inhibition of mTOR/MMP-9 signal pathway

BackgroundMalignant glioma is the aggressive tumor in the brain and is characterized by high morbidity, high mortality. The main purpose of the present study was to investigate the therapeutic effects of Schisandrin B on glioma cells and preliminary explore the possible mechanism underlying anti-metastasis of Schisandrin B.MethodsTwo glioma cell lines, U251 and U87, were used in present study. The ability of metastasis of glioma cells was evaluated using transwell migration assay and invasion assay. Expression of Akt, mTOR, MMP-2 and MMP-9 was determined using Western blotting. Antagonist or agonist was used to activated or inactivated signal molecules.ResultsSchisandrin B suppressed cell migration and invasion in manner of dose dependent as well as inhibited expression of p-Akt, p-mTOR and MMP-9. Activation of PI3K by 740Y-P treatment leaded to upregulation of p-Akt, mTOR and MMP-9; inactivation of mTOR by Rapamycin treatment inhibited expression MMP-9 while activation of mTOR by l-Leucine treatment enhanced MMP-9 expression in Schisandrin B incubated cells. Anti-migration and invasion action of Schisandrin B was also reversed by mTOR activation.ConclusionOur findings demonstrate that Schisandrin B can suppress migration and invasion of glioma cell via PI3K/Akt-mTOR-MMP-9 signaling pathway.