厄洛替尼对人胰腺癌细胞凋亡及survivin蛋白表达的影响

目的 研究厄洛替尼对人胰腺癌细胞PANC-1凋亡及survivin蛋白表达的影响.方法 培养人胰腺癌细胞,培养液中加入不同浓度厄洛替尼,MTT比色法检测PANC-1细胞增殖变化,流式细胞学检测PANC-1细胞的凋亡率;Western印迹检测survivin蛋白的表达情况.结果 厄洛替尼能明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长,随用药时间的延长和用药浓度的提高,抑制率明显增强(P＜0.05);12.5 μmol/L厄洛替尼作用24、48、72 h的PANC-1细胞凋亡率(％)分别为9.51±1.38,14.50±1.65,16.6±1.89.结论 厄洛替尼通过下调survivin蛋白的表达诱导人胰腺癌细胞PANC-1凋亡,从细胞水平为其抗肿瘤浸润提供了新的治疗思路和实验依据.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人胰腺癌细胞株SW1990增殖的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胰腺癌细胞株SW1990增殖及细胞凋亡、细胞周期的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度EGCG(6.25、12.5、25、50、100μg/ml)对体外培养的SW1990细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测EGCG(25μg/ml)对SW1990细胞凋亡及不同浓度的EGCG(0、10、20、30、40、50 μg/ml)对SW1990细胞周期的影响.结果 不同浓度EGCG(0、25、50μg/ml)作用SW1990细胞24 h后,吸光度值(A492)分别为0.46±0.04、0.42±0.04、0.27±0.03,48 h后分别为0.48±0.02、0.31±0.03、0.16±0.02,72 h后分别为0.51±0.01、0.24±0.04、0.14±0.04,EGCG呈浓度及时间依赖性抑制SW1990的增殖(P＜0.01).25 μg/ml EGCG作用于SW1990细胞24、48、72 h后的细胞凋亡率分别为(8.33±1.15)%、(19.77±0.81)%、(29.17±0.75)%,而对照组相应的细胞凋亡率分别为(2.77±0.45)%、(3.20±0.26)%、(3.67±0.35)%,两组差异具有统计学意义(P＜0.01).0、20、50 μg/ml EGCG作用SW1990细胞24 h后,G0/G1期细胞分别占(57.59±0.97)%、(62.99±1.91)%、(68.87±1.88)%,随着EGCG浓度的增加,Go/G1期细胞比例明显增加,而S期和G2/M期细胞比例相应下降(P＜0.01).结论 EGCG能明显抑制SW1990细胞的增殖,其机制可能与其诱导SW1990细胞凋亡及调控细胞周期有关.     

美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05);观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.     

丝裂霉素C对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨丝裂霉素C(MMC)对增生性瘢痕成纤维细胞(FB)增殖的影响及机制,为增生性瘢痕的治疗提供理论依据.方法 用组织块法体外培养人增生性瘢痕FB,应用MTT方法、Western blot技术结合光密度扫描分析,观察MMC对增生性瘢痕FB增殖活性的影响及Smad7蛋白的表达情况.结果 在24、48、72 h这3个时间段内,随着培养时间的增加,细胞生长抑制率呈现明显的上升趋势,并且MMC浓度为2.5～200 μg/mL时,对细胞生长有明显的抑制效应,与对照组比较存在统计学差异(P＜0,05),显示明显的时间剂量依赖关系.经2.5～200μg/mL不同浓度的MMC作用增生性瘢痕FB24 h,Smad7蛋白表达量增加.结论 MMC对增生性瘢痕FB的增殖起到抑制作用,同时诱导Smad7蛋白的表达.     

半乳凝素3在胰腺癌细胞中的表达及对胰腺癌SW1990细胞增殖和侵袭的影响

目的 研究半乳凝素3( galectin-3)在胰腺癌细胞株中的表达及对人胰腺癌细胞株SW1990增殖和侵袭能力的影响.方法 采用免疫细胞化学法和RT-PCR方法检测胰腺癌细胞株SW1990、PANC1、AsPC-1的galectin-3蛋白和mRNA表达.分别应用1、2、3、5μg/ml galectin-3单抗处理SW1990细胞24、48、72 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,Transwell小室检测细胞的侵袭能力.结果 胰腺癌SW1990.PANC1、AsPC-1细胞均有galectin-3 mRNA和蛋白表达.galectin-3单抗呈浓度和时间依赖性抑制SW1990细胞的增殖及穿膜细胞数.培养72 h时2、3、5μg/ml galectin-3单抗的细胞生长抑制率分别为19.8％、29.9％和42.7％,与对照组比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05).3 μg/ml galectin-3单抗组的穿膜细胞抑制率为37.1％,与对照组的10.4％差异有统计学意义(P＜0.05).结论 galectin-3在胰腺癌细胞中高表达,用抗体中和galectin-3能抑制SW1990细胞的增殖和侵袭能力     

丝裂霉素C对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨丝裂霉素C(MMC)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)增殖的影响.方法 采用不同浓度的MMC作用于体外培养的FB,采用四唑盐比色(MTT)方法,观察MMC对体外培养的KFB增殖活性的影响.采用RT-PCR方法,检测MMC对体外培养的KFB TGF-β1 mRNA表达的影响.结果 MTT显示在24、48、72 h时间段内,随着培养时间的增加,细胞生长抑制率呈现上升趋势,作用48 h、72 hKFB与24h相比KFB有极显著差异(P＜0.01),作用72 h与48 h相比,有上升趋势,但差异比不显著,24h为最佳作用时间.RT-PCR方法显示:MMC干预组TGF-β1 mRNA相对表达量明显低于正常对照组,从12.5 μg/mlMMC开始具有显著的统计学差异(P＜0.01),随MMC浓度增大,MMC干预组TGF-β1 mRNA相对表达量呈逐渐降低趋势.结论 2.5～ 200 μg/ml范围的MMC可有效抑制体外培养的病理性KFB的增殖活性,当浓度为200 μg/nl时作用尤为明显,MMC对TGF-β1 mRNA的表达具有明显减弱效应.     

氯吡格雷上调长链非编码RNA-4231减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的:探讨氯吡格雷对缺氧/复氧(H/R)后心肌细胞的保护作用及机制.方法:体外培养大鼠H9c2心肌细胞,对细胞进行H/R处理,建立细胞H/R损伤模型,分别使用不同浓度(H/R组0、低剂量药物组12.5μg/mL、中剂量药物组25μg/mL、高剂量药物组50 μg/mL)的氯吡格雷处理细胞,正常培养的细胞设为对照组.用p...     

厄洛替尼抑制核转录因子κB表达及其对胰腺癌细胞侵袭力的影响

目的探讨厄洛替尼对胰腺癌细胞侵袭力的影响及其相关分子机制。方法细胞培养人胰腺癌细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell体外侵袭实验观察厄洛替尼对人胰腺癌细胞株(PANC-1)细胞侵袭力的影响,并用Western印迹检测survivin蛋白的表达情况。结果厄洛替尼对人PANC-1细胞的生长具有抑制作用,并且具有剂量依赖性(P<0.05);厄洛替尼作用于PANC-1胰腺癌细胞上清液条件培养基可显著抑制PANC-1细胞的侵袭;厄洛替尼作用48 h后可以显著抑制胰腺癌PANC-1细胞分泌核转录因子(NF)-κB,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论厄洛替尼通过抑制NF-κB的表达,抑制胰腺癌细胞的侵袭力。     

独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化的影响

目的 探讨独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 体外培养人胰腺癌细胞PANC-1，取传3代、对数生长期、生长状态良好的PANC-1细胞，随机分为Control组及独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组，独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组分别予相应浓度的独角莲醇提物干预，Control组不予独角莲醇提物干预。干预24、48 h，采用CCK-8法检测细胞活力；干预48 h，采用划痕实验检测细胞迁移能力，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果 与Control组比较，独角莲醇提物500μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著升高，而独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著降低（P均<0.05）。随着浓度增加和培养时间延长，独角莲醇提物各浓度组细胞活力显著下降，呈现浓度和时间依赖性（P均<0.05）。独角莲醇提物5...     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.方法:在缺氧条件体外培养肝细胞癌HepG2细胞16 h,并以不同浓度EGCG处理,即低剂量(10 μmol/L)、中剂量(50 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L),制成细胞爬片以免疫组化SABC法检测HIF-1α及VEGF表达的变化,同时设常氧组及缺氧对照组进行比较.结果:常氧状态下HepG2细胞中HIF-1α几乎无表达,VEGF有少量表达.缺氧对照组经16h缺氧后HIF-1α表达明显上调,与常氧组相比有显著差异( t = 3.579,P<0.01);VEGF表达亦较常氧组明显上调,两者有明显差异( t =6.372,P<0.01).同浓度的EGCG对缺氧各组细胞HIF-1α及VEGF表达,与缺氧对照组相比均有不同明显抑制作用(HIF:F = 56.818,P<0.05;VEGF:F = 10.016,P<0.05),EGCG对HIF-1α及VEGF表达的抑制作用呈剂量依赖性,且相关分析显示,HIF-1α及VEGF蛋白表达同步化( r=0.617,P<0.05).结论:EGCG可从蛋白水平下调缺氧诱导的HepG2细胞HIF-1α及VEGF的表达水平,从而有可能抑制肿瘤血管新生.