解毒凉血方对肝卵圆细胞向成熟肝细胞的诱导分化作用和机制研究

目的:研究解毒凉血方对肝卵圆细胞的诱导分化作用及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为模型组、解毒凉血方组、正常对照组;通过喂饲2-乙酰氨基芴加2/3肝切除术建立肝卵圆细胞增殖模型;HE染色观察肝组织病理学,透射电镜观察肝卵圆细胞的超微结构,免疫组织化学观察各组大鼠肝组织OV6、ALB、CD34及Notch1的表达和分布。结果:模型组造模过程中至7周末肝组织汇管区周围可见大量的卵圆细胞增生,OV6、CD34、Notch1蛋白与正常对照组比较在肝组织中呈高表达,ALB蛋白较正常对照组表达明显减少;解毒凉血方组肝组织卵圆细胞增生较模型组明显减少,OV6、CD34、Notch1蛋白表达较模型组明显减少(P0.05)、ALB蛋白表达较模型组明显增加(P0.05)。结论:解毒凉血方能有效的促进卵圆细胞向成熟肝细胞分化,此作用机制可能与调节Notch信号通路有关。     

抗纤软肝颗粒含药血清对肝卵圆细胞系WB-F344上皮间质转化的影响

目的 研究抗纤软肝颗粒含药血清(KXRG)对N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导肝卵圆细胞系WB-F344上皮间质转化的影响。方法 采用MNNG干预WB-F344细胞系制备上皮间质转化(EMT)细胞模型,实验组用高、中、低不同浓度抗纤软肝颗粒含药血清(KXRG)刺激细胞,正常组、模型组加等量大鼠空白血清;采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,Western blot法检测E-cadherin,N-cadherin,Vimentin蛋白的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中甲胎蛋白(AFP)含量。结果 与正常组比较,模型组细胞OD值、细胞上清中AFP浓度、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平均明显升高(P <0.05);而E-cadherin蛋白表达水平降低(P <0.05)。与模型组相比,含药血清各组细胞OD值、细胞上清中AFP浓度、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平均显著下降(P <0.05),且含药血清浓度越高,上述指标下降越明显;而E-cadherin蛋白表达水平明显上升(P <0.05),且含药血清浓...     

黄芪刺激体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的作用

目的探讨黄芪对体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的影响。方法从喂饲含0．1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4～6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞,用RT-PCR、免疫组化、Westem blot等方法对培养的细胞进行鉴定。MIT法观察不同浓度黄芪对肝卵圆细胞生长的影响；Giemsa染色法观察细胞表型的改变情况；碘化丙啶染色流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果所分出的细胞既表达干细胞标志物c-kit,也表达胚胎肝细胞标志物甲胎蛋白、胆管细胞标志物OV6和CK19,此外还表达成熟肝细胞标志物白蛋白,认为它们是大鼠肝卵圆细胞。从0．125mg/ml～4mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后都有促进其生长的作用,其中2mg/ml黄芪刺激生长作用最明显(P＜0．05)。2 mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后既出现了一些增殖能力强的细胞,也出现了一些核质比低的细胞,此时细胞周期测定结果显示处G_2-S和M期的细胞比未用黄芪处理的对照细胞增多。结论黄芪具有明显的刺激体外培养的肝卵圆细胞生长的作用。     

益气解毒方对体外培养小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用

目的 MTT法观察益气解毒中药复方含药血清对小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用。方法大鼠灌胃制备益气解毒复方中药含药血清,作用于体外培养的小鼠肝癌H22细胞,采用MTT法观察益气解毒中药复方含药血清对细胞生长的抑制作用。结果高剂量血清组与对照血清组之间的吸光度差异有显著统计学意义(P<0.001),随着作用时间的延长,其吸光度逐渐降低,抑制率逐渐增高。结论益气解毒中药复方含药血清对小鼠肝癌H22细胞生长具有较好的抑制作用。     

四逆散含药血清对大鼠肝干细胞WB-F344增殖分化的影响

目的研究四逆散(柴胡,白芍,枳实,甘草)含药血清诱导大鼠肝干细胞WB-F344分化的作用。方法 SD大鼠灌胃四逆散,取其含药血清处理WB-F344细胞,应用CCK-8方法检测细胞活性,Western blot法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞色素P450 3A(CYP 3A)蛋白表达,PCR检测AFP、ALB的mRNA水平,PAS法检测糖原合成功能,尿素氮检测试剂盒观察尿素氮合成功能,Mito Tracker Red染色法检测线粒体数目,Clark氧电极检测细胞耗氧量,荧光素酶法测定细胞内ATP水平,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果含药血清对实验细胞无毒性作用,10%含药血清显示出较好的促进细胞增殖的效果;含药血清作用后,AFP的蛋白及基因水平有降低趋势,ALB的蛋白及基因水平有升高趋势,糖原合成功能、尿素氮合成功能提高,CYP 3A蛋白水平有一定增加。同时,线粒体数目增加,细胞呼吸功能、ATP水平、线粒体膜电位都有一定程度增加。结论四逆散含药血清可促进肝干细胞增殖、诱导其分化,可能为促进肝损伤修复的机制之一。     

大黄虫丸对肝纤维化大鼠肝卵圆细胞的作用及其对TIMP-1、CTGF和Notch1表达的影响

目的:观察肝卵圆细胞活化在大黄虫丸防治实验性大鼠肝纤维化中的作用。方法:应用二甲基亚硝胺复制大鼠肝纤维化模型,给以大黄虫丸高、中、低剂量组干预,Mallory染色观察肝纤维化水平,放免法检测血清肝纤维化指标,免疫组化观察肝卵圆细胞活化水平,荧光定量PCR法检测TIMP-1、CTGF和Notch1表达。结果:模型组肝纤维化水平显著升高,大黄虫丸显著降低血清HA、PCⅢ、LN水平,减少HOC活化数量,降低TIMP-1、CTGF和Notch1表达,大黄虫丸抑制HOC活化水平与降低肝纤维化水平呈正相关。结论:大黄虫丸通过抑制TIMP-1、CTGF通路,减轻肝纤维化;通过抑制Notch1表达,减少HOC活化,其防治肝纤维化的作用可能与减少HOC活化相关。     

云芝的益气解毒作用研究

用能强烈激活网状内皮系统（ＲＥＳ）吞噬活性的云芝为益气扶正药的代表，探讨了其对内毒素毒性及于体内命运的影响，结果表明，ｉｐ云芝胞内多糖５０ｍｇ／ｋｇ４天，对内毒素所致小鼠、大鼠的休克死亡有明显的保护效果。对于大鼠肠系膜上动脉夹闭（ＳＭＡＯ）性休克，云芝多糖也有显著的保护效果，能降低正常或ＲＥＳ封闭大鼠的死亡率，拮抗ＳＭＯＡ所致大鼠ＲＥＳ吞噬活性的明显抑制。云芝多糖在体外对内毒素无直接诚毒作用，但可显著促进大鼠对血流中内毒素的廓清，并明显抑制内毒素的发热反应。表明云芝多糖可通过增强ＲＥＳ对内毒素的清除而取得抗内毒素效果，即激活ＲＥＳ是一个清除内毒素的有效途径。     

益气逐瘀解毒方抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用研究

目的:研究益气逐瘀解毒方(YQZYJD)对四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:将SD雄性大鼠给予CCl_4橄榄油混合液进行皮下注射7周,制备肝纤维化大鼠模型,随机分为YQZYJD高、中、低剂量组、阳性对照组、模型组,给予相应治疗,5周后处死大鼠,检测外周血生化指标ALT、AST和GGT,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN),肝组织HE、MASSON染色分别检测肝组织损伤及肝纤维化程度,免疫组化法分别检测大鼠肝组织中α-SMA及TGF-β1表达水平。结果:与阳性对照组相比,YQZYJD高剂量组GGT、HA和LN水平显著降低(P0.05),病理组织学检测发现,YQZYJD治疗各组的肝组织结构回复均优于模型组,而高剂量组优于阳性对照组;YQZYJD各剂量组α-SMA表达均较模型组显著降低(P0.05),YQZYJD高剂量组TGF-β1的表达较阳性对照组显著降低(P0.01)。结论:YQZYJD可促进CCl_4诱导肝纤维化大鼠模型的肝组织结构回复,过度沉积的ECM降解,抑制HSCs的活化,降低TGF-β1的表达水平,改善CCl_4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度。     

益气解毒复方含药血清对胸腺增生型重症肌无力mTEC和Treg细胞增殖的影响

目的:探讨益气解毒复方含药血清对胸腺增生型重症肌无力(MG)患者胸腺髓质上皮细胞(mTEC)和调节性T细胞(Treg)增殖的影响。方法:采用血清药理学方法,将35只SD大鼠适应性喂养1周后随机分为益气解毒复方低、中、高剂量组,空白组,强的松组,每组7只。大鼠连续灌胃1周,制备上述各组含药血清。利用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法观察不同浓度益气解毒复方含药血清对mTEC和Treg细胞增殖的作用,并通过共同培养方式观察mTEC及益气解毒复方含药血清对Treg细胞增殖的作用。结果:胸腺细胞经培育,使用mTEC特征性标记荆豆凝集素Ⅰ(UEAI)做流式检测阳性率均值为92.54%。采用磁珠分选Treg细胞,多次磁珠分选后的Treg细胞纯度高达92%,mTEC和Treg细胞均呈较高阳性率表达,细胞为mTEC和Treg细胞,细胞纯度符合后续实验的要求。益气解毒复方含药血清体积分数2.5%~15%时,对mTEC和Treg细胞均有抑制作用,益气解毒复方含药血清浓度≥20%时对细胞的增殖有促进作用,且随作用的时间延长,含药血清对细胞的增殖的促进作用越为明显。培养48 h后的结果显示,与空白组比较,强的松组和益气解毒复方低剂量组差异无统计学意义,中、高剂量组细胞增殖抑制率显著降低(P<0.01)。与mTEC共同培养的Treg细胞,与空白组比较,强的松组、益气解毒复方低剂量组Treg细胞增殖抑制率差异无统计学意义,中、高剂量组细胞增殖抑制率显著降低(P<0.01)。结论:益气解毒复方含药血清能够影响胸腺增生型MG患者mTEC和Treg细胞的增殖,独立培养MG患者的Treg细胞相比,与mTEC共同培养的MG患者Treg细胞增殖具有促进作用,提示mTEC能够调控Treg细胞的增殖,且这种作用在予以益气解毒复方含药血清干预之后更为明显,说明益气解毒复方对Treg细胞的干预,可以通过对mTEC的治疗作用产生,这可能是益气解毒复方治疗MG的作用机制之一。     

益气逐瘀解毒颗粒调控 MMPs/TIMPs 平衡抗大鼠肝纤维化作用研究

目的:探讨益气逐瘀解毒颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用及机制。方法:将SD雄性大鼠给予CCl4橄榄油混合液进行皮下注射7周,制备肝纤维化大鼠模型,随机分为益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组、阳性对照组、模型组、空白组,给予相应治疗,5周后处死大鼠,检测外周血生化指标,逆转录-定量PCR法和蛋白印迹法分别检测大鼠肝组织中基质蛋白酶1 (Matrix metalloproteinase1, MMP-1)、MMP-2、MMP-9、MMP-13及基质蛋白酶抑制因子1 (tissue Inhibitor of metalloproteinases1,TIMP-1)表达水平,肝组织苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin staining, HE染色)、MASSON染色检测肝纤维化程度。结果:治疗后与空白组比较,模型组的ALT、AST无显著性差异(P 0.05),MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13基因表达显著降低(P 0.05),TIMP-1基因表达显著升高(P 0.05),肝纤维化半定量计分(SSS)评分显著升高(P 0.01);与模型组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组ALT、AST无显著性差异(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高剂量组MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13基因表达明显升高(P 0.05),中剂量组MMP-9、MMP-13基因表达明显增高(P 0.05),低剂量组MMP-13基因表达明显增高(P 0.05),高、中剂量组TIMP-1基因表达明显降低(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒各剂量组MMP-2、MMP-9蛋白表达量无显著性差异(P 0.05),高、中剂量组MMP-13蛋白表达量显著升高(P 0.05),各剂量组TIMP-1蛋白表达量均显著下降(P 0.05),以低剂量组下降尤为显著,优于高、中剂量组(P 0.05),各药物干预组SSS评分显著降低(P 0.01);与阳性对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组ALT、AST无显著性差异(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高剂量组MMP-2基因表达明显升高(P 0.05),高、中剂量组TIMP-1基因表达明显降低(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高、中剂量组MMP-13蛋白表达显著升高(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒各剂量组TIMP-1蛋白表达显著降低(P 0.05),低剂量组下降尤为显著,优于高、中剂量组(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组SSS评分显著降低(P 0.01)。结论:调控MMPs/TIMPs平衡可能是益气逐瘀解毒颗粒抗肝维化的作用机制之一,其通过升高MMP-13、降低TIMP-1表达水平,调控MMPs/TIMPs平衡,促进过度沉积的细胞外基质(Extracelluar matrix,ECM)降解,改善CCl4诱导肝纤维化大鼠模型的肝脏功能,从而改善其肝纤维化程度。     

苦参碱含药血清对WB-F344细胞形态、增殖和Jagged1信号分子表达的影响

目的研究苦参碱含药血清对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞形态、增殖及Jagged1信号分子表达的影响,探讨苦参碱对肝干细胞诱导分化的作用机制。方法用不同浓度苦参碱含药血清（5%、10%、20%）作用于WB-F344细胞,以未用苦参碱含药血清处理的WB-F344细胞为空白对照组,观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学法观察ALB、Jagged1蛋白表达变化,RT-PCR观察Jagged1、Hes1mRNA表达的变化。结果经苦参碱含药血清干预后,WB-F344细胞形态发生明显改变：药物组细胞较对照组细胞体积增大,核缩小,核浆比减小,培养48 h大部分细胞呈多边形。MTT结果显示,5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清24、48、72 h均能不同程度抑制WB-F344增殖,且存在时间、剂量依赖性。免疫细胞化学结果显示,空白对照组WB-F344细胞表达Jagged1蛋白,不表达ALB蛋白,经苦参碱含药血清处理后Jagged1蛋白表达显著下降（P〈0.01）,ALB蛋白表达显著升高（P〈0.01）。RT-PCR结果显示,经苦参碱含药血清处理后Jagged1mRNA、Hes1mRNA表达显著下降（P〈0.01）。结论苦参碱含药血清可诱导WB-F344细胞向肝细胞特性方向分化,其作用机制与调节Notch信号通路的关键分子有关。     

益气升清法在治疗肝硬变腹水中的应用

肝硬变腹水病机乃本虚标实,治疗当强调扶正补虚,脾胃位居中焦,乃气机升降之枢,故需强调健脾益气以扶正气,升提清阳以降湿浊从而增强中医辨治肝硬变腹水的疗效。肝硬变腹水其标总以水湿为患,但气能行水,故有形之水湿,必依赖于无形之气的推动方不停聚为邪,故治水必治气,气足则水行。不论在肝硬变腹水的早期或晚期,不论是邪实为甚还是正虚为主,益气升清法需贯穿治疗的全过程,在早期可"见肝之病,知肝传脾,当先实脾"而达厚土制水以防腹水生成,在晚期可益气培土升清以助腹水消散及防止复发。     

张国骏教授补肾疏肝治疗不孕症随诊体会

近年来不孕不育呈增长趋势,中医治疗不孕症具有一定优势和较好疗效。张国骏教授运用补肾疏肝法治疗不孕症疗效显著。笔者仅就其中1例简谈个人体会。     

中药抗肝纤维化作用机制的研究进展

介绍了近年来中药抗肝纤维化作用机制的研究进展，综述了中药抗肝纤维化过程中抗肝损伤、抑制细胞外基质（ECM）合成、促进ECM降解等过程中的作用机制，并对今后中药抗纤维化作用的研究提出了建议。     

养阴益气中药合剂对甲亢类阴虚病理模型大鼠作用的实验研究

报告了给大鼠肌注甲状腺素造成甲亢类阴虚病理模型,其肛温、耗氧率、体重、饮食、活动及一般情况和血中T₃,T₄等指标均发生明显改变,由生地、麦冬和太子参组成的养阴益气中药合剂对此具有纠正和调整作用。     

半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响

目的观察半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响,探讨其抑瘤机制。方法 40只Wistar大鼠随机分为空白组及半枝莲小、中、大剂量组,分别早晚灌胃给药,半枝莲小、中、大剂量组给药量分别为0.75、1.50、3.00 g/mL,空白组给予等量生理盐水,连续4 d,第5日取血,分离血清,分别作用于等量HepG2细胞,MTT法检测各组细胞黏附情况。结果半枝莲组与空白组相比,能明显抑制HepG2细胞的黏附（P〈0.05）,呈明显的量效关系。结论半枝莲可能通过抑制肿瘤细胞的黏附来发挥抗肿瘤的作用。     

生精益气汤治疗精液异常不育症临床研究

目的：观察生精益气汤治疗精液异常不育症的临床疗效。方法：将120例精液异常不育症患者随机分为两组，对照组60例给予口服黄精赞育胶囊治疗；治疗组60例煎服生精益气汤治疗，疗程均为90d。结果：临床总有效率治疗组为86．67％，对照组为83．33％，精液各项参考指标两组治疗后，差异均没有统计学意义（P〉0．05），治疗组治疗前后差异有极显著性差异（P〈0．01）。结论：生精益气汤治疗精液异常不育症疗效显著，可明显提高精子数量、活力及成活率。     

补肾中药对老年大鼠肝细胞核内活性基因的影响

目的:观察老年、老年加补肾中药及青年组大鼠细胞核内活性基因的变化,探求补肾中药延缓衰老的分子生物学机理。方法:以脱氧核糖核酶Ⅰ(DNabe Ⅰ)为探针,脱氧核糖核酸Ⅱ(DNaseⅡ)为参照,分别切割老年、青年、老年加补肾药大剂量组、老年加补肾药小剂量组大鼠肝细胞核内染色质,研究4组大鼠肝细胞核活性基因的变化。酶切后进行琼脂糖电泳,并将胶板置于紫外灯下观察、摄影。结果:观察到在不同的时间内,对 DNaseⅠ的消化敏感性依次为青年组大于补肾组(大剂量组与小剂量组无显著差异),补肾组大于老年组,而4组对 DNaseⅡ敏感性无差异。结论:老年大鼠肝细胞核内染色质对 DNaseⅠ的敏感性下降。补肾中药延缓衰老的分子生物学基础可能与减缓细胞核内活性基因丢失有关。     

补肾方剂对骨质疏松性骨折临床治疗分析

目的:探讨补肾方剂对骨质疏松性骨折愈合影响。方法:对60例不同部位骨质疏松性骨折的患者随机分成治疗组、对照组,6周后对比两组血清骨性碱磷酶(BALP)I、型前胶原羧基端肽(PICP)、骨钙素(BGP)骨形成生化指标变化以及骨强度(SOS)治疗情况,6周、12周后在X线下观察骨折愈合情况。结果:治疗组6周后BALP、PICP、BGP水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);12周后治疗组骨折愈合占97%,对照组骨折愈合占77%,治疗组优于对照组(P<0.05),两组治疗6周后SOS差异无统计学意义(P<0.01)。结论:补肾方剂对骨质疏松骨折骨痂生长,促进骨形成疗效明显。     

益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响

目的探讨益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭（CRF）患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响。方法维持性血液透析患者40例随机分为西药组和益气活血中药组,采用ELISA方法检测两组患者血液透析前后血小板膜糖蛋白CD62P的含量。结果两组治疗后与治疗前比较,血尿素氮、肌酐、钾离子、红细胞压积、血小板计数、二氧化碳结合力水平,差异均有显著性（P〈0．05）;血小板膜糖蛋白CD62P的表达差异有显著性（P〈0．05）,两组治疗后比较差异亦有显著性（P〈0．05）。两组中医症候疗效比较,差异无显著性（P〉0．05）。结论益气活血中药血液透析可以改变血小板膜糖蛋白CD62P表达,可能与中药治疗CRF有关。