蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛含量测定

目的:建立蟾皮中蟾蜍噻咛的含量测定方法,比较不同产地及养殖方式对蟾皮中蟾蜍噻咛含量的影响。方法:采用高效液相色谱法测定了不同产地蟾皮中蟾蜍噻咛的含量,色谱柱Lichrosob C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(10∶90),检测波长225 nm,流速1.0 mL.min^-1。结果:回归方程为Y=7.489×10⁴+2.791×10⁵X,r=0.999 9,平均回收率为99.2%,蟾皮中蟾蜍噻咛的质量分数在36.4~641.8μg.g^-1,华蟾素注射液中的质量分数在22.47~33.16μg.mL^-1。结论:蟾皮中蟾蜍噻咛在野生和养殖品种中的差异较大。该方法快速简便,重复性良好,可用于蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛的含量测定。     

HPLC测定不同种蟾皮药材中不同部位蟾蜍噻咛的含量

目的:对不同种蟾皮不同部位中蟾蜍噻咛的含量进行了比较研究.方法:采用高效液相色谱法测定了不同种蟾皮中不同部位蟾蜍噻咛的含量.样品中蟾蜍噻咛峰通过与对照品进行HPLC-DAD 3D及HPLC-MS-MS比对分析进行了确定.提取方法通过正交试验确定为50倍量50％甲醇超声60 min.样品分析选用了WondsiITM C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5μm),以乙腈-水(6∶94)为流动相,检测波长226 nm.结果:该方法具有良好的线性(r=0.999 7)、精密度(RSD,0.59％)、稳定性(RSD.0.72％)和重复性(RSD,1.56％);平均加样回收率为98.57％,RSD为2.03％,表明该方法准确可靠.经测定,中华大蟾蜍与黑框蟾蜍不同部位均含有蟾蜍噻咛成分,含量为0.07％ ～0.17％.结论:蟾蜍噻咛在不同种蟾皮药材中的不同部位含量差异不大.     

网络药理学结合指纹图谱与多元统计分析预测蟾皮质量标志物

目的 基于网络药理学结合指纹图谱与多元统计分析预测蟾皮质量标志物。方法 基于文献分析定位蟾皮质量标志物范围来源,通过网络药理学筛选蟾皮中药效相关成分,结合指纹图谱和多元统计分析筛选出影响蟾皮批次间差异性成分,将药效成分与特征差异性成分关联,预测质量标志物,并进行分子对接验证和含量测定。结果 蟾皮质量标志物为沙蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、蟾蜍噻咛,能与主要抗肿瘤靶点稳定结合,其含量在多批次样品间具有一定差异,其中沙蟾毒精、蟾蜍噻咛整体较高,华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基整体较低。结论 沙蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、蟾蜍噻咛为蟾皮抗肿瘤作用的质量标志物。     

蟾皮的水溶性成分研究

目的：研究中华大蟾蜍皮的水溶性成分。方法：利用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20 凝胶柱色谱、重结晶等手段分离纯化蟾皮的水溶性化学成分, 根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定化合物的结构。结果：分离得到7个化合物分别鉴定为蟾蜍环酰胺D（bufogargarizanine D,1）, 脱氢蟾蜍噻咛（dehydrobufothionine, 2）,环（脯氨酸-甘氨酸）二肽（cyclo（Pro-Gly）dipeptide,3）,环（丙氨酸-丙氨酸）二肽（cyclo （Ala-Ala）dipeptide,4）, 尿嘧啶（uracil, 5）, 胸腺嘧啶（thymine,6）,腺苷（gland glucoside,7）。结论：化合物1为新化合物,化合物3-7为首次从中华大蟾蜍皮中分离得到。     

蟾皮中蟾蜍噻咛的超声提取工艺研究

目的 优选超声提取蟾蜍噻咛的最佳提取工艺.方法 通过单因素设计的方法,采用间歇超声辐射进行微波提取工艺的优化;以蟾蜍噻咛含量为评价指标,采用HPLC测定蟾蜍噻咛的含量.结果 超声法提取的最佳工艺条件为50％乙醇pH值为4的酸性溶液,温度50℃,固液比为1:15,提取时间为60 min,功率100W.结论 与传统水加热回流提取法相比,缩短了提取时间,降低成本,并有良好的蟾蜍噻咛提取率.     

HPLC测定强力救心滴丸中华蟾蜍毒基和酯蟾毒配基的含量

目的测定强力救心滴丸中华蟾蜍毒基和酯蟾毒配基的含量.方法采用高效液相色谱法.色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(5050);流速1.0mL/min;检测波长296nm.结果华蟾蜍毒基和酯蟾毒配基分别在0.67μg～4.7μg及0.33μg～2.3μg范围内具有良好线性关系,平均回收率分别为97.78%(RSD=1.2%)及99.61%(2.0%).结论该法可用于强力救心滴丸中华蟾蜍毒基和酯蟾毒配基的含量测定.     

HPLC法测定蟾酥中4种蟾毒内酯

目的建立同时测定蟾酥药材中蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的方法。方法 10批蟾酥药材采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.04%三氟乙酸为流动相梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;柱温为35℃;检测波长为296 nm。结果蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基分别在0.05～2.61μg(R2=1),0.10～4.96μg(R2=1),0.10～5.03μg(R2=1),0.10～5.18μg(R2=1)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为97.62%,97.34%,97.23%,97.34%,RSD值均<2.0%。结论此方法简便、准确。10批不同来源的蟾酥样品测定结果表明,药材中蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基含有量相对稳定,脂蟾毒配基含有量则波动较大。     

蟾蜍类药材中吲哚生物碱和蟾毒配基类成分的含量

目的:建立蟾蜍类药材中吲哚生物碱和蟾毒配基类成分的HPLC含量测定法,并对蟾酥、蟾皮、蟾衣中2类成分进行分析。方法:吲哚生物碱类,Nucleosil C18柱,乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液(6∶94,磷酸调pH 3.2)为流动相,流速0.8 mL.min-1,检测波长275 nm,柱温30℃;蟾毒配基类,Alltima C18柱,乙腈(A)-0.3%乙酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～15 min,28%～54%A;15～35 min,54%A),流速0.6 mL.min-1,检测波长296 nm,柱温30℃。结果:五羟色胺、N-甲基五羟色胺、N,N-二甲基五羟色胺、N,N,N-三甲基五羟色胺、蟾蜍噻咛依次在0.079 6～0.796,0.097 2～1.945,0.074 4～0.744,0.103～2.05,0.067 2～0.672μg线性关系良好;五羟色胺和N-甲基五羟色胺的平均加样回收率依次为98.6%和91.3%;日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基依次在0.004 83～0.614,0.007 9～1.006,0.007 95～1.016,0.009 7～1.24,0.009 6～1.22μg线性关系良好;平均加样回收率依次为101.6%,102.5%,101.0%,99.1%,98.9%。结论:蟾酥中吲哚生物碱和蟾毒配基类成分含量均较高,蟾皮中含量次之,蟾衣中含量最低甚至检测不到。     

蟾皮中吲哚烷胺类生物碱对LPS活化的中性粒细胞抗炎活性及机制研究

吲哚烷胺类生物碱(indolealkylamines, IAAs)是蟾皮中主要的亲水性物质基础,主要包括游离型的N-甲基五羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、脱氢蟾蜍色胺和结合性的蟾蜍噻咛。该研究选择脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)活化的中性粒细胞为体外炎症模型,对蟾皮中5个IAAs单体抗炎活性构效关系及抗炎机制进行探讨。实验分组为空白组、模型组(1μg·mL~(-1) LPS)、阳性药组(100μg·mL~(-1)吲哚美辛)以及5个IAAs低、中、高剂量(50、100、200μg·mL~(-1))组。首先使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测LPS刺激后各组中性粒细胞上清液中IL-6、TNF-α、IL-1β的分泌情况,然后利用Annexin V/PI双染法观察各组中性粒细胞凋亡情况,并用Western blot法检测各组细胞中caspase-3、Bax、Bcl-2、beclin1、LC3-I、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果表明,与模型组相比,IAAs干预后可降低LPS引起的炎症因子分泌过多,且游离型IAAs(N-甲基五羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、脱氢蟾蜍色胺)活性强于结合型IAAs蟾蜍噻咛,其中蟾蜍色胺的效果最为显著。Annexin V/PI结果表明,与空白组相比,模型组可延迟中性粒细胞早期凋亡,蟾蜍色胺处理后可呈剂量依赖关系促进中性粒细胞凋亡,其机制可能与提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达有关。此外,LPS刺激后,可以激活中性粒细胞的自噬信号通路。该研究首次证明,IAAs可降低由LPS引起的中性粒细胞炎症因子的分泌。以蟾蜍色胺为例,其发挥药效的机制可能与促进中性粒细胞凋亡有关。     

HPLC-MS法同时测定六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物

目的建立HPLC-MS法同时测定六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物(和蟾蜍他灵、沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基)的方法。方法采用ODS-2(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.15%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温40℃,检测波长296 nm。HPLC-MS联用的色谱条件与HPLC分离基本条件一致,流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液。通过电喷雾离子源,正离子模式扫描,对六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物进行分析鉴别。结果 9种蟾蜍二烯内酯类化合物均得到良好分离,线性关系良好(r≥0.999 6)。加样回收率均在92%~105%,RSD5%。应用建立的HPLC-MS方法测定了10批六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物的量,分别为和蟾蜍他灵0.40~0.88 mg/g,沙蟾毒精0.32~0.83 mg/g,远华蟾毒精0.61~2.11 mg/g,去乙酰华蟾毒它灵0.15~0.32 mg/g,蟾毒它灵0.84~1.85 mg/g,华蟾毒它灵25.76~62.14 mg/g,蟾毒灵0.96~2.06 mg/g,华蟾酥毒基2.30~4.75 mg/g,脂蟾毒配基1.20~2.61 mg/g。结论所建立的定量测定方法简便、快速、准确可靠,专属性强,可用于六神丸的质量控制。     

RP-HPLC测定不同基源郁金药材中牻牛儿酮的含量

目的:测定4种基源40批郁金药材中牻牛儿酮的含量.方法:采用反相高效液相色谱法,Eclipse XDB-C18(4.6mm x 150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(60:40)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长210 nm.结果:牻牛儿酮进样量在0.045 8～0.687 μg有良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率(n=6)为99.2％,牻牛儿酮含量在0.001 26％ ～0.224％.结论:提供了40批不同基源郁金药材中糖牛儿酮的含量,为科学制定郁金药材的质量标准提供数据支持.     

双夏汤不同配比对夏枯草中迷迭香酸提取率的影响

目的:研究半夏、夏枯草药对配伍后对夏枯草中迷迭香酸提取率的影响。方法:采用Thermo Scientific-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-1%甲酸(30∶70)为流动相,流速为1 m L/min,检测波长为330 nm,柱温40℃。结果:迷迭香酸进样量在0.1~0.5μg范围内有良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为101.1%(RSD=1.71%,n=6)。双夏汤配伍后,半夏与夏枯草比例大于1.5∶1时迷迭香酸提取率降低,小于1.5∶1时迷迭香酸提取率升高。结论:双夏汤不同配伍中半夏的含量影响夏枯草中迷迭香酸的提取率。     

大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺研究

目的建立大孔树脂富集蟾皮总二烯内酯的工艺。方法蟾皮醇提液减压回收醇,经石油醚脱脂,水层上DM130大孔树脂,不同浓度乙醇梯度洗脱,TLC显色结合HPLC法检测二烯内酯所在洗脱部位,比色法测定总二烯内酯含量。结果蟾皮中二烯内酯集中在70%乙醇洗脱部分;采用本实验确定的工艺,制得蟾皮总二烯内酯含量为53.90%,收率为0.23%。结论该工艺可以较好地富集蟾皮总二烯内酯。     

茜草HPLC-DAD指纹图谱的研究

目的:建立茜草药材HPLC-DAD指纹图谱,提供茜草药材的质量控制方法。方法:采用高效液相色谱法;色谱柱为YMC C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),检测波长280 nm;流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min,柱温为25℃。分析时间为60 min。结果:6批茜草药材指纹图谱的平均相似度大于94%。结论:所建立的方法适用于不同产地茜草药材指纹图谱的测定。     

HPLC同时测定附子理中丸中3种单酯型生物碱含量

目的:建立附子理中丸中3种单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)的含量测定方法.方法:色谱柱Alltimate C18(4.6 mm ×250 mm,5μm);保护柱Alltimate C18(4.6 mm ×7.5 mm,5μm);流动相40 mmol·L-1乙酸铵(加氨水调pH 10.00 ±0.5)-乙腈梯度洗脱;流速1.0 mL· min-1,检测波长240 nm,柱温35℃.结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分别在进样量0.212 ～1.272 μg,0.0116～0.0696 μg,1.035 ～6.210 μg线性关系良好,r分别为0.9996,0.9997,0.9996,在8h内稳定性良好.同时,针对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱,附子理中丸(河南宛西)平均加样回收率依次为97.59％ (RSD 1.90％)、98.81％(RSD 2.00％)、98.37％(RSD 1.72％),附子理中丸(安徽东芝堂)平均加样回收率依次为98.18％ (RSD 2.39％)、103.06％(RSD 1.77％)、98.23％(RSD 2.05％),而附子理中丸(北京同仁堂)仅含苯甲酰新乌头原碱的平均加样回收率100.17％(RSD 2.29％).结论:方法结果准确可靠、快速,适用于构建附子理中丸成方制剂的多指标质量评价模式.     

HPLC测定不同基原陈皮药材中橙皮苷含量

目的:采用高效液相色谱法测定不同基原陈皮药材中橙皮苷含量,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法.方法:采用高效液相色谱法,Baseline C18色谱柱(4.60 mm x250 mm,5 μm),流动相甲醇-水(1％乙酸溶液)(50:50),检测波长283 nm,等度洗脱,流速1.0 mL·min -1,柱温室温,进样量20μL.结果:橙皮苷质量浓度在0.002 -0.040 g·L-1呈良好的线性关系(r =0.9999),平均回收率102.3％ (n =9),RSD 1.6％.含量测定结果表明,同一产地不同基原陈皮药材中橙皮苷含量存在显著差异.结论:该方法简单、可行,适用于不同基原陈皮药材中橙皮苷的含量测定以及质量评价.     

HPLC法测定不同产地大叶冬青叶中4种三萜类成分的含量

目的建立HPLC法测定大叶冬青叶中羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素和苦丁冬青苷D含量的方法,对比分析26批来自不同产地及不同采收期大叶冬青叶中4种成分的含量,为其质量标准的完善提供参考。方法采用YMC-ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)为流动相等度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长205 nm,柱温30℃,进样量20μL,建立同时测定羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素含量的方法;以乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)为流动相等度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量10μL,建立测定苦丁冬青苷D含量的方法。结果在上述色谱条件下羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素分离度良好,分别在质量浓度18.88~906.00μg·mL^-1(r=1.000 0,n=6)、15.06~723.00μg·mL^-1(r=0.999 9,n=6)、22.75~1 092.00μg·mL^-1(r=0.999 9,n=6)呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)分别为100.43%(RSD=1.96%)、98.72%(RSD=0.88%)、102.86%(RSD=2.47%)。苦丁冬青苷D在质量浓度9.55~573.00μg·mL^-1(r=0.9999,n=6)呈良好的线性关系,平均加样回收率为101.35%(RSD=0.25%)。结论所建立的测定方法简单方便、结果准确、重复性好,可用于测定大叶冬青叶中羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素和苦丁冬青苷D的含量,为大叶冬青质量标准的建立提供理论依据。不同产地及不同采收时期大叶冬青叶中4种三萜类成分含量存在明显差异。     

5种水蛭中尿嘧啶,黄嘌呤,次黄嘌呤的含量比较

采用反相HPLC法测定了宽体金线蛭、光润金线蛭、尖细金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭及不同产地的宽体金线蛭中尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤的含量。色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C_(18)柱,流动相:0.05mol/l的磷酸氢二铵溶液(pH=8.4),流速:0.8ml/min,检测波长:254nm,回收率:>98.0％。本法准确、快速、重现性好。     

HPLC测定丹黄祛瘀片中苦参碱和氧化苦参碱的含量

目的:建立丹黄祛瘀片中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定方法.方法:采用HPLC,色谱柱为Agilent NH2柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-无水乙醇-3％磷酸(82∶ 10∶8),检测波长220 nm,柱温30℃,流速1.0 mL· min-1.结果:苦参碱和氧化苦参碱的线性范围分别为0.385 ～2.31(r =0.999 6)和0.021 8 ～0.239 8(r =0.999 2) μg;平均加样回收率分别为99.0％ (RSD 0.85％,n=6),97.2％(RSD 1.0％,n=6).结论:该法简便,快速,结果准确,重复性好,可用于控制丹黄祛瘀片的质量.