止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量。结果正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞CTGF、PAI-1、MMP-9 mRNA表达的影响

目的 观察止消通脉宁药物血清(以下简称“药物血清”)清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA 的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用.方法 将HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养.实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+ 10％空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+ 10％低剂量药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+ 10％中剂量药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+ 10％高剂量药物血清).药物干预24h后,荧光定量PCR检测CTGF、PAI-1和MMP-9 mRNA的表达.结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF、PAI-1 mRNA表达显著上升,MMP-9 mRNA表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经止消通脉宁药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA表达逐步下降,MMP-9 mRNA表达逐步上升,与单纯TGF-β 1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF、PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关.     

丹参酮IIA对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞增殖及Ⅰ型胶原分泌的影响

目的探讨丹参酮IIA在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将体外正常培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、转化生长因子-β1组(TGF-β1,10μg/L)、干预一组(丹参酮IIA 1 mg/L+TGF-β110μg/L)、干预二组(丹参酮IIA 5 mg/L+TGF-β110μg/L)及干预三组(丹参酮IIA 10 mg/L+TGF-β110μg/L),分别予相应的干预措施。采用MTT方法检测HK-2的增殖以及用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;采用ELISA法检测上清液中Ⅰ型胶原的含量。结果 TGF-β1组(10μg/L)能刺激肾小管上皮细胞增殖以及促进细胞的形态向成纤维细胞发生转变;加入丹参酮IIA(1 mg/L~10 mg/L)共同作用后,细胞的增殖受到抑制,细胞形态逐渐趋向于正常,呈现明显的剂量依赖性。TGF-β1(10μg/L)能刺激肾小管上皮细胞Ⅰ型胶原的分泌增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),与丹参酮IIA(1 mg/L~10 mg/L)共同作用后Ⅰ型胶原的表达量下降,并呈明显的剂量依赖性。结论丹参酮IIA能够维持HK-2细胞形态的稳定性,防止细胞向成纤维细胞方向发展,在一定程度上抑制了TGF-β1诱导的细胞增殖及分泌Ⅰ型胶原的作用,这可能也是其治疗肾间质纤维化的作用机制。     

平纤宁肺颗粒剂对肺纤维化大鼠肺组织中转化生长因子β_1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:观察平纤宁肺颗粒剂对盐酸博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用。方法:60只SD大鼠,雄性,按体质量随机分为正常对照组、模型组、平纤宁肺颗粒剂高剂量组、低剂量组,每组15只。盐酸博莱霉素气管内注射诱发肺纤维化,造模后给药,分别在给药7、14、28 d每组处死5只,取肺脏做组织病理学检测,同时免疫组化法检测肺组织内转化生长因子β_1(Transforming Growth Factor-β_1,TGF-β_1)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原。结果:模型组大鼠肺组织出现明显的炎细胞浸润,纤维结缔组织增生,平纤宁肺颗粒剂高、低剂量组大鼠在第14、28天的病理变化均较同期模型组减轻。模型组大鼠肺组织TGF-β_1、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达在第7、14、28天均明显高于同期正常对照组,与正常对照组比较有统计学意义(P0.01)。平纤宁肺颗粒剂高、低剂量组TGF-β_1、Ⅰ、Ⅲ型胶表达与同期模型组比较明显降低,有统计学意义(P0.05,0.01)。结论:平纤宁肺颗粒剂可以有效减轻肺纤维化,抑制肺组织中TGF-β_1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达。     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导的 人肾小管上皮细胞纤维化细胞因子的影响

目的 观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化细胞因子的作用,探讨糖耐康防治肾纤维化的作用机理.方法 将HK-2 细胞用含10 %胎牛血清的DMEM/F12(1:1)培养基培养.实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3 组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清).药物干预24 h 后,荧光定量PCR 检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达.结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达显著上升,而MMP-9 mRNA的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经糖耐康药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达逐步下降,而MMP-9 mRNA 的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子表达有关.     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad 2、3 mRNA的表达逐步下降,而Smad 7 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。     

镰形棘豆总黄酮含药血清对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞VEGF mRNA表达的影响

目的:通过观察镰形棘豆总黄酮含药血清干预转化生长因子β1(TGF-β_1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化细胞因子——血管内皮生长因子(VEGF)m RNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为4组:空白对照组、TGF-β_1诱导组(TGF-β_110 ng/m L)、空白血清对照组(TGF-β_110 ng/m L+10%空白血清)、镰形棘豆总黄酮组(TGF-β_110 ng/m L+10%镰形棘豆总黄酮含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测VEGF m RNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β_1诱导后,VEGF m RNA的表达显著上升,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),经镰形棘豆总黄酮药物血清干预后,VEGF m RNA的表达逐步下降,与单纯TGF-β_1诱导组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上能够抑制TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子VEGF的m RNA表达有关。     

止消通脉宁干预TGF-β_1诱导HK-2细胞增殖的研究

目的：通过观察止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖的影响,探讨治疗糖尿病肾病有效中药复方止消通脉宁在防治肾间质纤维化方面的作用。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组（TGF-β110ng/mL）、空白血清对照组（TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清）、干预1组（TGF-β110 ng/mL＋10%低剂量止消通脉宁含药血清）、干预2组（TGF-β110 ng/mL＋10%中剂量止消通脉宁含药血清）、干预3组（TGF-β110 ng/mL＋10%高剂量止消通脉宁含药血清）。倒置显微镜下观察各组细胞形态,MTT法检测细胞增殖。结果：TGF-β110 ng/mL能显著诱导人肾小管上皮细胞增殖,与空白对照组相比有显著性差异（P〈0.05）,且其作用随处理时间的延长而增强,但和止消通脉宁含药血清共同作用后,其促细胞增殖作用受到一定抑制（P〈0.05）。结论：止消通脉宁能抑制HK-2细胞增殖,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

黄芪对致敏大鼠气道壁转化生长因子β_1、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨黄芪在致敏大鼠气道重塑中的作用。方法Wistar雄性大鼠24只,随机分为对照组、致敏组和黄芪干预组,每组8只。采用卵蛋白腹腔注射致敏动物,2周后用1%卵蛋白雾化吸入激发。黄芪干预组在每日激发前给予黄芪注射液5g/kg腹腔注射。对照组以生理盐水代替卵蛋白雾化吸入和腹腔注射。分别采用免疫组化和原位杂交法测定大鼠气道壁Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(FN)及上皮细胞TGF-β_1蛋白水平和TGF-β_1mRNA表达水平。结果(1)致敏组大鼠气道壁Ⅲ型胶原、FN表达分别为29．49±1．89、25．98±1．53,与对照组(16．53±1．20、9．37±1．11)比较,差异有显著性(P＜0．01)；黄芪干预组(21．24±1．38、19．57±1．36)与致敏组比较,差异有显著性(P＜0．01),但高于对照组(P＜0．01)。(2)致敏组大鼠气道上皮细胞TGF-β_1蛋白和mRNA表达分别为26．99%±2．90%、24．91%±2．88%,与对照组(12．02%±1．52%、5．45%±1．18%)比较,差异有显著性(P＜0．01)；黄芪干预组(19．89%±2．06%、12．33%±1．34%)与致敏组比较,差...     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导的HK-2细胞分泌细胞外基质成分的影响

目的观察糖耐康对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)对细胞外基质成分表达的影响,探讨糖耐康治疗肾间质纤维化的作用机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,并分为6组：空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达显著上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。经糖耐康药物血清干预后,其表达逐步下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。     

三七总皂苷对人肾成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子-β1的影响

目的 探讨三七总皂苷(PNS)对人肾成纤维细胞(KFB)分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子-β1的影响.方法 体外培养人肾成纤维细胞(KFB).传代培养后选取第3～4代细胞,分为对照组(不合PNS)和PNS1组(含PNS400μg/mL)、PNS2组(含PNS 600 μg/mL)和PNS3组(含PNS 800μg/mL),分别于作用24h、48h后采取ELISA法测定各组培养液中Ⅰ型胶原及人转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量,对检测数据进行对比分析.结果 作用24h后,对照组Ⅰ型胶原分泌量与PNS各组相比均无显著性差异(P＞0.05),但对照组TGF-β1分泌量与PNS2组和PNS3组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).作用48h后,对照组Ⅰ型胶原分泌量与PNS2组和PNS3组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),对照组TGF-β1分泌量与PNS1组、PNS2组和PNS3组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PNS可明显抑制人肾成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子-β1,且此种抑制效应存在剂量-效应关系,显示PNS可能对肾间质纤维化具有一定的抑制作用.     

敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1及Ⅲ型胶原的影响

目的:研究敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞(LFB)产生转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)的影响,探讨敏咳清颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制。方法:将常规培养LFB分为空白组、模型组、对照组、敏咳清高剂量组、敏咳清低剂量组、养阴清肺糖浆高剂量组、养阴清肺糖浆低剂量组,加入肝素刺激后分别加入对应的含药血清,采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中TGF-β1、COL-Ⅲ的水平。结果:①敏咳清颗粒能明显减少TGF-β1的产生,高剂量组的作用明显强于低剂量组,高、低剂量相比有显著性意义(P<0.01);②敏咳清颗粒能明显抑制肺成纤维细胞表达COL-Ⅲ,高、低剂量组之间相比无显著意义。结论:敏咳清颗粒能显著降低经肝素刺激增殖的LFB对TGF-β1、COL-Ⅲ的表达,提示抑制TGF-β1、COL-Ⅲ的表达,可能是其治疗咳嗽变异型哮喘(CVA)的作用机制之一。     

镰形棘豆提取物对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:本实验通过观察镰形棘豆提取物含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的作用,探讨其在肾间质纤维化方面的作用及机制。方法:采用镰形棘豆提取物(300mg/kg)给大鼠灌胃,每天2次,连续3天。3天后大鼠股动脉采血,分离血清,即得镰形棘豆提取物含药血清。体外培养HK-2细胞,培养基为含10%胎牛血清的DMEM/F12(1:1);细胞分为4组:空白对照组、空白血清对照组(TGF-β1 10 ng/ml+10%空白血清)、镰形棘豆提取物组(TGF-β1 10 ng/ml+10%镰形棘豆提取物含药血清)、转化生长因子-β1诱导组(TGF-β1 10 ng/ml)。药物干预细胞后,采用免疫组化技术测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,ELISA技术测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量,荧光定量PCR检测转化生长因子-β受体I(TβRI)、受体II(TβRII)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、smad 3的蛋白表达。结果:正常的HK-2细胞只表达E-cadherin,不表达α-SMA。但经TGF-β1诱导后细胞转分化,E-cadherin的表达开始减弱,α-SMA表达逐渐增强,药物干预后,α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达增强。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组ColⅠ、ColⅢ、FN的含量显著增加,在24h时分别为(197.4±0.7)、(32.7±0.2)、(754.5±4.1),72h时分别为(216.4±0.8)、(38.3±0.1)(995.4±1.5),P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组ColⅠ、ColⅢ、FN的分泌显著下降,72h时作用更为显著,含量分别为(205.5±0.7)、(35.0±0.3)、(892.4±0.9),P﹤0.05。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组TβRI(11.08±0.10)、TβRII(11.57±0.12)的mRNA表达和Smad 2(0.971±0.017)、smad 3(0.972±0.011)的蛋白表达显著上升,P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组TβRI(9.788±0.379)、TβRII(8.452±0.250)mRNA表达和Smad 2(0.536±0.013)、Smad3(0.530±0.035)蛋白表达也减少,P﹤0.05。空白血清则无此作用。结论:镰形棘豆提取物能够减少细胞外基质成分分泌,调控Smads信号通路,抑制肾小管上皮细胞转分化,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。     

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β_1的影响

目的 :观察三七总皂甙对肝纤维化大鼠胶原合成及TGF β1表达的影响。方法 :用四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型 ,同时给与三七总皂甙治疗 ,免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,纤维化程度分级。结果 :三七总皂甙能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,减轻肝纤维化程度。结论 :三七总皂甙具有抗肝纤维化作用 ,其机理尚待进一步研究     

镰形棘豆总黄酮对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化因子的影响

目的:研究镰形棘豆总黄酮防治肾间质纤维化作用及其机制.方法:大鼠按300 mg·kg-1 ig镰形棘豆总黄酮,连续给药3d后制备含药血清,空白组大鼠ig同体积生理盐水制备空白血清.将人肾小管上皮细胞(HK-2)用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,分为4组:空白对照组、单纯转化生长因子母1(TGF-β1 10 μg·L-1)诱导组、空白血清对照组(TGF-β110 μg·L-1 +10％空白血清)、干预组(TGF-β110 μg·L-1+10％镰形棘豆总黄酮含药血清).药物干预24 h后,荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA的表达.结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF,PAI-1 mRNA的表达显著上升,而MMP-9 mRNA的表达减弱,与空白对照组相比有统计学意义(P＜0.05),经镰形棘豆总黄酮药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达逐步下降,而MMP-9 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF,PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关.     

温和灸足三里穴对自然衰老大鼠的肾脏保护作用及肾组织纤连蛋白、转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨温和灸足三里穴对自然衰老大鼠的肾保护作用及其机制。方法：雄性SD大鼠随机数字表法分为自然衰老组和艾灸足三里组,同时设立9个月龄对照组,每组10只。自然衰老组常规饲养至20个月龄,艾灸足三里组从14个月龄开始温和灸“足三里”穴,1次/d,20 min/次,两侧穴位交替进行,直至20个月龄。结果：与9个月龄对照组比较,自然衰老组大鼠毛发枯黄,精神不振,活动欠灵活;肾结构改变,肾间质出现炎细胞浸润以及大量蓝色胶原纤维,肾组织中β-半乳糖苷酶表达升高（P<0.05）,24 h尿蛋白含量升高（P<0.05）,大鼠肾组织纤连蛋白（FN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达均增加（P<0.01）。与自然衰老组比较,艾灸足三里组大鼠毛发润泽,色泽微黄,活动灵活,日常活动均有不同程度改善;胶原染色减少,肾组织中β-半乳糖苷酶表达降低（P<0.05）,24 h尿蛋白含量降低（P<0.05）,肾组织中FN、TGF-β1 mRNA表达降低（P<0.05）。结论：温和灸足三里穴能减轻大鼠因增龄造成的肾损伤,对自然衰老大鼠具有肾脏保护作用,可能与抑制肾组织FN表达及TGF-β1基因转录有关。     

中药复方对糖尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1、Ⅳ型胶原mRNA表达的影响

目的观察健脾益肾活血化瘀法组成的中药复方对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾皮质转化生长因子β1(TGFβ1)与Ⅳ型胶原mRNA表达的影响,探讨其作用机理。方法采用链脲佐菌素(STZ)按53mg/kg剂量腹腔一次性注射建立糖尿病肾病大鼠模型,造模成功后随机分为中药组(中药复方)、西药组(瑞泰)、模型组和正常组。灌胃8周后RT-PCR法检测大鼠肾皮质TGFβ1与Ⅳ型胶原mRNA表达。结果各治疗组与模型组比较均明显降低糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1、Ⅳ型胶原mRNA表达(P<0.01),且中药组优于西药组(P<0.01)。结论中药复方通过降低糖尿病大鼠肾皮质TGFβ1、Ⅳ型胶原mRNA的表达,从而起到保护肾脏、延缓肾脏病理损害、抑制糖尿病肾病形成的作用。     

复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响

目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5ng/mL+复.肾颗粒100 μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500 μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL).培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达.结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01).结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达.     

人参皂苷Rg1对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血红细胞生成素受体(EPOR)表达变化的关系。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、5μg/L TGF-β1刺激组,人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5μg/L TGF-β1的基础上分别加入10,20,40 mg/L的人参皂苷Rg1)。每组细胞干预72 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定细胞培养上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的含量。实时荧光定量PCR方法检测EPOR mRNA转录水平,免疫细胞化学法检测各组表达EPOR细胞的阳性率。结果 TGF-β1诱导NRK52E细胞形态变化,从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞形态,并抑制细胞增殖(P<0.05),增加细胞表达Col-Ⅰ和FN,抑制EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05);人参皂苷Rg1以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态的改变,减少Col-Ⅰ和FN的表达,上调EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT具有一定的抑制作用;该作用可能与人参皂苷Rg1上调肾小管上皮细胞EPOR的表达有关。