人发角蛋白对脊髓损伤大鼠少突胶质细胞增殖分化效应的影响

目的探讨体内可降解生物材料人发角蛋白(HHK)植入急性冲击性损伤脊髓后,对神经再生过程中少突胶质细胞增殖分化效应的影响。方法采用改制Ⅱ型NYU装置,在建立大鼠急性冲击性脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠脊髓损伤部位,对植入后1、4、12、26周损伤脊髓组织进行光学和电镜结构观察。结果第1周时,损伤部位可见少突胶质细胞散在分布于大量浸润的炎症细胞中;第4周时,通过Mallory's磷乌酸苏木素染色,显示HHK周边呈层包绕的增生少突胶质细胞;第12和26周主要为神经再生和髓鞘重建过程,重建中的少突胶质细胞髓鞘内出现较大的空腔,髓鞘层状分离,并形成大小不一的髓鞘小体,重建髓鞘周边可见新生的少突胶质细胞。结论在急性冲击性脊髓损伤后神经再生过程中,HHK对少突胶质细胞的增殖分化及髓鞘再生修复有积极作用,为进一步综合研究HHK对脊髓损伤修复的作用提供了实验依据。     

脑卒中后少突胶质细胞再生的细胞间相互作用机制

白质损伤是包括脑卒中在内的很多中枢神经系统疾病的重要临床表现。脑白质由成熟少突胶质细胞形成的髓鞘包绕轴突构成,且作为连接各灰质部位的发挥信号传递作用。在脑卒中的急性阶段,少突胶质细胞死亡.脱髓鞘导致了白质功能失调。而在慢性阶段,白质环境对于神经元修复.血管重塑以及髓鞘再生都起到积极促进作用。少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)能增殖分化为成熟少突胶质细胞完成髓鞘再生,重新包绕轴突进行修复。在这过程中,尤其引人注目的是其他种类的细胞在缺血情况下对OPCs的支持作用。本文聚焦白质损伤或者生理情况下,对OPCs如何获得其周围其他细胞支持,完成少突胶质细胞再生以及髓鞘再生的过程进行综述,为白质损伤后修复的进一步研究提供参考。     

已分化神经干细胞修复成年鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的 观察已分化神经干细胞植入成年鼠损伤脊髓后的变化及检查修复脊髓损伤的效果.方法 以胚胎脊髓提取液(FE)诱导细胞/PGA支架复合物分化后,植入成年鼠损伤脊髓,观察分化细胞的存活和发育情况并评估动物的运动功能.结果 FE体外可诱导神经干细胞分化成神经元、星形和少突胶质细胞.植入脊髓后,分化细胞/PGA支架复合物(dNPC)内的细胞成分可以存活并继续成熟,动物BBB评分明显优于对照组.结论 dNPC含有已经分化的细胞,移植后各种细胞成分可以存活并继续成熟,对成年鼠损伤脊髓的结构重建和功能恢复都有一定的作用.     

脊髓半切损伤后髓鞘碱性蛋白及胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的 研究大鼠脊髓半切损伤后后肢运动功能恢复情况及损伤远端星形胶质细胞和近端少突胶质细胞反应性增生关系，探讨损伤后星形胶质细胞和少突胶质细胞反应性增生在脊髓损伤修复中的作用。方法 将35只SD大鼠随机分成7组：对照组5只；实验组6组，每组5只，分别是伤后1天组，3天组，7天组，14天组，21天组，28天组。实验组动物均行T9左侧半切，分别于伤后1，3，7，14，21，28d行后肢运动功能联合评分（CBS）及Basso-Beattle．Bresnahan（BBB）评分。每次评分后处死5只大鼠，进行HE染色及GFAP、MBP免疫组织化学检测。结果 伤后后肢均有不同程度的恢复，1～2周时恢复幅度最大，2～3周时后肢运动功能继续恢复，3周时BBB评分最高达12分，3～4周运动功能无显著性恢复，损伤后1d损伤远端3-6mm处GFAP阳性星形胶质细胞开始增生肥大，3～4d灰质中星形胶质细胞明显增多，2周时达到高峰，损伤近端3～6mm处少突胶质细胞的增生反应过程与星形胶质细胞相似。结论 脊髓损伤后近端少突胶质细胞和远端星形胶质细胞反应性增生可能有助于损伤的修复和再生。     

大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞的生物学特性

目的 探讨大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞在体外条件下的增殖及分化等生物学特性,为进一步研究脊髓脱髓鞘疾病的髓鞘再生奠定基础.方法 采用免疫吸附法原代培养大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞,并用免疫荧光染色鉴定其表面标志物A2B5及NG2;采用Alarm blue法检测其在体外的增殖能力,并绘制生长曲线;诱导原代培养的少突胶质前体细胞向成熟少突胶质细胞分化,并用免疫荧光染色鉴定成熟少突胶质细胞表面标志物MBP及GalC的表达情况.结果 免疫吸附法可以对大鼠脊髓组织中的少突胶质前体细胞进行有效的分离纯化,分离获得的少突胶质前体细胞A2B5及NG2表达呈阳性,Alarm blue法检测结果显示少突胶质前体细胞在体外具有良好的增殖能力,诱导分化实验证实少突胶质前体细胞可以分化为成熟少突胶质细胞并且MBP及GalC表达呈阳性.结论 采用免疫吸附法原代培养的大鼠脊髓源性少突胶质前体细胞在体外具有良好的增殖能力以及分化为成熟少突胶质细胞的能力.     

甲状腺激素促进神经再生的研究进展

甲状腺激素(thyroid hormones，TH)是中枢神经系统正常发育的重要调节因素，少突胶质细胞是中枢神经系统髓鞘形成细胞，神经纤维髓鞘的形成标志着中枢神经系统发育成熟。TH通过不同甲状腺激素受体来影响少突胶质细胞的分化与成熟，减慢少突胶质细胞前体细胞的增殖，促进其分化为成熟的少突胶质细胞，从而控制中枢神经细胞的正常发育。周围神经损伤后，其支配靶器官功能的重建依赖于神经营养因子、细胞外基质和激素。     

大鼠坐骨神经切除后人发角蛋白诱导的神经的再生机制

目的 观察人发角蛋白(HHK)诱导坐骨神经再生时的形态学变化,以揭示神经再生机制,方法制备坐骨神经损伤动物模型,植入HHK丝束桥接体,手术后2天、1、2、3、6、9、12周进行组织学观察.结果 术后第2天到2周,大量新生微血管长入HHK植入部位,切除后近远端的施万细胞发生去分化.去分化后的施万细胞沿着HHK丝束表面纵向分裂增殖.术后第3周人发开始降解,HHK周围可见很多巨噬细胞和多核巨细胞,大量增生的施万细胞有规则地排列于HHK丝间,有轴突和大量的微血管出现.术后第6周,在HHK丝周围可见大量新生的神经纤维,其间有微血管分布.术后第9周,人发角蛋白降解显著,再生神经纤维增多,有明显的神经外膜和束膜.术后第12周,实验组人发角蛋白基本完全降解,其部位被新的神经纤维所取代,并已贯通缺损部位,且外观形态接近正常神经.结论 1,HHK对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥接作用.2、受损后高度分化的施万细胞通过去分化形成幼稚的施万细胞,其中胞质脱落起着关键作用.3、受损轴突立即发生保护性封闭、脱落.健康轴突形成膨大的带突起的生长锥,生长锥突起上伸出许多丝状生长芽.并与1到多个施万细胞嵌合,它们通过竞争性选择,最后只有一条生长芽可发育成完整的轴突.4、神经纤维屏障膜(神经外膜、束膜及内膜)是由最外侧的血管屏障膜中和束内的微血管间充质细胞演变而成的.总之,施万细胞、神经轴突、神经膜三者的再生模式是自身器官化过程所要求的,它们是同步进行的协调行为.     

人发角蛋白修复大鼠脊髓横断损伤的实验研究

目的：研究人发角蛋白(HHK)在大鼠脊髓横断损伤(SCCI)修复中的作用。方法：选用18只SD大鼠，建立正常对照组、SCCI组，SCCI后植入HHK组。于术后1W，3W，6W对大鼠的运动，感觉进行评估；并在横断部位及近，远断3个断面分别取材，用HE，铀铅双染，在光镜及电子显微镜下观察其组织学结构。结果：大鼠脊髓横断损伤后植入HHK，运动，感觉逐渐好转，术后6W基本恢复正常；而未植入HHK大鼠无明显变化。光镜观察：植入HHK组白质有明显的神经纤维沿着HHK再生，部分区域有坏死，无明显的空洞形成；灰质有部分异常神经元，大部分形态正常。未植入HHK组断面有神经呈编织状再生，未见纤维超过离断面，有大面积坏死和空洞形成；灰质神经元大量坏死，形态异常。结论：HHK对横断脊髓的功能及形态恢复有促进作用，本实验为HHK应用于临床奠定基础。     

血管性痴呆大鼠海马神经干细胞移植

目的 探讨新生大鼠脊髓神经干细胞(NSC)移植至血管性痴呆(VD)大鼠海马后在体内的存活、迁移和分化。方法 用无血清培养和单克隆技术从新生大鼠脊髓分离具有单细胞克隆能力的细胞群并连续传代培养，鉴定为NSC后，将其用BrdU标记后移植入VD大鼠海马内，利用免疫荧光化学技术检测移植后细胞的生存、迁移和分化。结果 从脊髓分离的细胞群具有NSC的特性，这些细胞在移植入VD大鼠海马8周后能检测到其存在并向四周迁移，并且分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论 从脊髓分离的细胞是脊髓NSC，将其移植到VD大鼠海马内能生存、迁移和分化。     

少突胶质细胞前体细胞在双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型中的变化特点

目的观察神经胶质细胞在双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的脱髓鞘模型中的变化特点,探讨其与髓鞘再生的内在联系。方法选8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、急性脱髓鞘组及髓鞘再生组。正常组每天饲养正常鼠粮;模型组小鼠饲养含有0.2%CPZ的混合鼠粮,连续饲养6周;髓鞘再生组在连续喂养6周CPZ鼠粮后,换用正常鼠粮2周。实验过程中通过卢卡斯快蓝染色及透射电镜技术判断脑组织胼胝体区髓鞘脱失及恢复程度,通过免疫组化及免疫荧光技术检测脑内NG2,Olig2和GFAP的表达来评估少突胶质细胞前体细胞及星形胶质细胞的变化特点。结果与正常组相比,急性脱髓鞘组胼胝体髓鞘脱失明显,Olig2、GFAP表达明显升高(P<0.05),侧脑室旁外侧隔核(LSD)NG2升高水平较胼胝体区(CC)更为明显(P<0.05,P<0.01);髓鞘再生组髓鞘有所修复,Olig2、GFAP表达仍高于正常组,但较急性脱髓鞘组有一定程度降低(P<0.05)。结论髓鞘损伤期少突胶质细胞前体细胞不能有效迁移至受损部位,修复期Olig2表达降低,星形胶质细胞持续高水平表达可能是髓鞘修复障碍的影响因素。     

神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响

目的观察神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响。方法建立脊髓损伤动物模型,脊髓内注射神经干细胞,采用改良Gale联合评分法评价神经功能,通过H—E染色及尼氏体染色观察脊髓灰白质及神经元的组织学改变。结果脊髓损伤神经干细胞移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显（P〈0．05）;灰、白质中出现小片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少程度较脊髓损伤组轻,损伤坏死区胶质细胞较脊髓损伤组增多（P〈0．05）。结论使用神经干细胞移植能减轻神经细胞坏死程度,减轻脊髓损伤,并使损伤坏死区胶质细胞增多,促进脊髓损伤的修复,对脊髓损伤大鼠感觉、运动功能的恢复有促进作用。     

电针对大鼠脊髓损伤后caspase-3、calpastatin表达及髓鞘变化的影响

[目的]观察电针治疗对大鼠脊髓损伤(SCI)后髓鞘变化及caspase-3、calpastatin表达的影响.[方法]选取雄性SD大鼠,随机分为模型组,电针组(电针大椎、命门穴),甲基强的松龙组(西药组)及空白组4组;除空白组外,其他3组大鼠均采用改良的Allen's打击装置(50 g/cm)复制大鼠T10～T11脊髓...     

嗅神经鞘细胞移植治疗实验性脊髓损伤的研究

目的:观察移植体外培养的嗅神经鞘细胞(OEC)对大鼠脊髓左半侧横断伤的治疗作用。方法:将应用改良Nash法培养的OECs移植到成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,8周后分别采用改良Tarlov法运动学功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)顺行示踪、透射电镜观察、P75免疫组织化学染色及HE染色等方法,观察动物的运动功能、脊髓再生的轴突和髓鞘、OEC的存活和脊髓损伤程度。结果:8周时治疗组运动学功能评分高于对照组(P<0.05);治疗组再生轴突穿越损伤区,对照组则无再生轴突穿越;超微结构显示治疗组轴突数量多于对照组,且髓鞘的完整性强于对照组,OEC表现为星形胶质细胞样和雪旺氏细胞样两种,包绕轴突髓鞘;免疫组化染色显示移植后8周OECs仍然存活,在损伤区均匀、散在分布;损伤后8周脊髓损伤区有胶质瘢痕及空洞形成。结论:移植的嗅神经鞘细胞可促进大鼠运动功能的恢复、脊髓轴突的再生和髓鞘的重塑。     

神经前体细胞移植治疗大鼠急性脊髓损伤的功能评价

目的：神经前体细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的行为变化及功能评价。方法：采用改良A11en法建立大鼠脊髓损伤模型，术后9d，实验组脊髓损伤局部注射移植永生化神经前体细胞系G3。采用只注射培养液和不作治疗处理作为对照组。细胞移植后，采用BBB评分进行功能评价，每周评分1次，检测脊髓损伤大鼠后肢运动功能的改变。分别在细胞移植的第8周和第12周进行运动诱发电位的神经电生理检查，检测脊髓的传导功能。结果：实验组移植水生化神经前体细胞后，其BBB评分和对照组相比差异无显著性；但运动诱发电位与对照组相比明显提高。结论：永生化神经前体细胞移植可显著提高大鼠急性损伤脊髓的传导功能恢复。     

Human neural stem cells promote corticospinal axons regeneration and synapse reformation in injured spinal cord of rats

Background Axonal regeneration in lesioned mammalian central nervous system is abortive, and this causes permanent disabilities in individuals with spinal cord injuries. This paper studied the action of neural stem cell （NSC） in promoting corticospinal axons regeneration and synapse reformation in rats with injured spinal cord. Methods NSCs were isolated from the cortical tissue of spontaneous aborted human fetuses in accordance with the ethical request. The cells were discarded from the NSC culture to acquire NSC-conditioned medium. Sixty adult Wistar rats were randomly divided into four groups （n=15 in each）： NSC graft, NSC medium, graft control and medium control groups. Microsurgical transection of the spinal cord was performed in all the rats at the T11. The NSC graft group received stereotaxic injections of NSCs suspension into both the spinal cord stumps immediately after transection; graft control group received DMEM injection. In NSC medium group, NSC-conditioned medium was administered into the spinal cord every week; NSC culture medium was administered to the medium control group. Hindlimb motor function was assessed using the BBB Locomotor Rating Scale. Regeneration of biotin dextran amine （BDA） labeled corticospinal tract was assessed. Differentiation of NSCs and the expression of synaptophysin at the distal end of the injured spinal cord were observed under a confocal microscope. Group comparisons of behavioral data were analyzed with ANOVA. Results NSCs transplantation resulted in extensive growth of corticospinal axons and locomotor recovery in adult rats after complete spinal cord transection, the mean BBB scores reached 12.5 in NSC graft group and 2.5 in graft control group （P〈 0.05）. There was also significant difference in BBB score between the NSC medium （11.7） and medium control groups （3.7, P〈 0.05）. BDA traces regenerated fibers sprouted across the lesion site and entered the caudal part of the spinal cord. Synaptophysin expression colocalized with BDA positive axons and neurons distal to the injury site. Transplanted cells were found to migrate into the lesion, but not scatter along the route of axon grows. The cells differentiated into astrocytes or oligodendrocytes, but not into the neurons after transplantation. Furthermore, NSC medium administration did not limit the degree of axon sprouting and functional recovery of the injured rats compared to the NSC graft group. Conclusions Human embryonic neural stem cells can promote functional corticospinal axons regeneration and synapse reformation in the injured spinal cord of rats. The action is mainly through the nutritional effect of the stem cells on the spinal cord.     

配对免疫球蛋白受体B在大鼠损伤脊髓中的分布与表达研究

目的 观察配对免疫球蛋白受体B （PirB）在大鼠脊髓损伤（SCI）中的分布与表达.方法 10只SD雌性大鼠（220 g）分为对照组与实验组（脊髓完全横断）,各5只.通过免疫印迹以及荧光双标的方法确定PirB在SCI大鼠的细胞学定位以及蛋白含量的变化情况.结果 PirB分布在少突胶质细胞、前角运动神经元,而两组PirB阳性的细胞差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 PirB的细胞学定位以及蛋白含量的变化可能参与SCI恢复的过程.     

Transplantation of human amniotic epithelial cells improves hindlimb function in rats with spinal cord injury

Background Human amniotic epithelial cells (HAECs), which have several characteristics similar to stem cells, therefore could possibly be used in cell therapy without creating legal or ethical problems. In this study, we transplanted HEACs into the injured spinal cord of rats to investigate if the cells can improve the rats’ hindlimb motor function. Methods HAECs were obtained from a piece of fresh amnion, labeled with Hoechst33342, and transplanted into the site of complete midthoracic spinal transections in adult rats. The rats (n=21) were randomly divided into three groups: Sham-operation group (n=7), cells-graft group (n=7), and PBS group (n=7). One rat of each group was killed for histological analysis at the second week after the transplantation. The other six rats of each group were killed for histological analysis after an 8-week behavioral testing. Hindlimb motor function was assessed by using the open-field BBB scoring system. Survival rate of the graft cells was observed at second and eighth weeks after the transplantation. We also detected the myelin sheath fibers around the lesions and the size of the axotomized red nucleus. A one-way ANOVA was used to compare the means among the groups. The significance level was set at P&lt;0.05.Results The graft HAECs survived for a long time (8 weeks) and integrated into the host spinal cord without immune rejection. Compared with the control group, HAECs can promote the regeneration and sprouting of the axons, improve the hindlimb motor function of the rats (BBB score: cells-graft group 9.0±0.89 vs PBS group 3.7±1.03, P&lt;0.01), and inhibit the atrophy of axotomized red nucleus [cells-graft group (526.47±148.42) &micro;m(2 )vs PBS group (473.69±164.73) &micro;m(2), P&lt;0.01]. Conclusion Transplantation of HAECs can improve the hindlimb motor function of rats with spinal cord injury.     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤后水通道蛋白-4的影响

目的：探索大鼠嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injurySCI）后水通道蛋白-4（AQP-4）和后肢功能的影响。方法：取Wistar大鼠150只,随机分为正常组（50只）、模型组（50只）、OECs移植组（50只）,模型组和OECs移植组用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,造模成功后,其中OECs移植组在损伤处移植嗅鞘细胞,模型组移植DF-12培养液。于术后1、3、7、14、21、28 d进行BBB（Basso-Beattle-Bresnahan）运动功能评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织AQP-4的表达,并用图像分析仪进行定量分析。结果：术后3~28 d,OECs移植组的BBB评分较模型对照组明显提高,术后第1天,模型组和OECs移植组受损脊髓灰质、白质中AQP-4的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但OECs移植组低于模型组（P〈0.05）。第7、14、21、28天,与模型组比较,OECs移植组AQP-4表达也较低（P〈0.01）。结论：OECs移植使脊髓损伤后AQPa表达减少,这可能有利于抑制脊髓水肿、消除脊髓继发性损伤,保存残存正常脊髓组织并促进神经轴突再生,改善其肢体运动功能。