铜绿假单胞菌抗药基因检测及其对消毒剂抗性研究

目的研究临床分离的铜绿假单胞菌携带的抗药基因情况及其与消毒剂的抗性关系和水平。方法采用PCR方法和肉汤稀释法分别检测临床分离铜绿假单胞菌qacE△1-SulI基因和对消毒剂抗性变化,并与铜绿假单胞菌标准菌株进行了平行比较。结果临床分离的6株铜绿假单胞菌中,有5株检出qacE△1-SulI基因阳性,抗药基因携带率达到83%以上。醋酸氯己定对6株临床分离铜绿假单胞菌的MIC值为7.8mg/L,与标准菌株相同;对氯间二甲苯酚对其中1株临床分离株的MIC高于标准菌株,但有2株低于标准株;苯扎溴铵对6株临床分离的铜绿假单胞MIC均低于标准株;聚维酮碘对5株qacE△1-SulI基因阳性菌株的MIC值与标准菌株相同,但抗药基因阴性菌株的MIC值低于标准株。结论临床分离的铜绿假单胞菌多数携带qacE△1-SulI基因,该抗药基因的携带与其对消毒剂的抗性有一定的相关性。     

铜绿假单胞菌对两种消毒剂的抗性变化及其抗药基因检测

目的观察连续传代的铜绿假单胞菌临床株对邻苯二甲醛和碘伏的抗性变化及其与qacE-sul1基因的关系。方法采用肉汤稀释法、悬液定量杀菌试验和PCR方法,检测了两种消毒剂对连续传代的铜绿假单胞菌临床株最小抑菌浓度、最小杀菌浓度变化和抗药基因携带率。结果临床分离的铜绿假单胞菌经连续传代后对邻苯二甲醛、碘伏的抗性均逐渐增强,这些菌株qacE-sul1基因检测结果均为阴性。结论长期使用亚致死剂量的消毒剂可能导致铜绿假单胞菌的抗性产生或增强,其抗性变化与qacE-sul1基因无关。     

铜绿假单胞菌生物膜对消毒剂抗性研究进展

<正>消化内镜根据Spaulding分类被归属为中度危险性器械~([1])。临床使用后的消化内镜必须经过规范清洗和高水平消毒后才能用于下一位患者~([2,3]),目前广泛使用的高水平消毒剂包括戊二醛、邻苯二甲醛、过氧乙酸、酸性氧化电位水和含氯消毒剂等。随着消毒剂的广泛使用,消毒剂抗性研究也开始被关注。早在20世纪50年代Chaplin发现细菌对消毒剂有类似抗药性的性质~([4]),之后Lowbury就提出铜绿假单胞菌对季铵盐类消毒剂有抗性~([5])。Chapman报道称细菌对氯已定、戊二醛、季铵盐及酚类化合物等部分消毒剂也产生了抗性~([6])。铜绿假单胞     

呼吸内科多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因检测分析

目的 了解该院呼吸内科分离多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因和β-内酰胺酶基因携带情况.方法 用聚合酶链反应技术检测14株多重耐药铜绿假单胞菌耐药相关基因.结果 除GIM、SPM、VIM-1、VIM-2、CTX-M、aac(3′)-Ⅰ、aac(3′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ基因全部为阴性外,其余耐药基因有不同程度的阳性.结论 携带多种耐药基因是呼吸内科多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类和β-内酰胺类抗菌剂耐药的重要机制.     

铜绿假单胞菌耐药基因的检测与分析

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的多种耐药基因的分布状况和耐药机制。方法采用PCR方法检测1株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因、菌膜蛋白oprD2基因、Tn21／Tn501型转座子编码基因merA、Ⅰ类整合子编码基因qacE△1-SU11、16SRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素耐药相关基因catB、cm1A。四环素耐药相关基因tetA、tetB以及小多药外排泵基因star-2。采用PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果该株铜绿假单胞菌未检出TEM基因和OXA-10基因,检出OXA-2基因,且伴有OprD2缺失;转座子遗传标记MerA阳性,Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1-Sul1阳性;耐氨基糖苷类基因aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ阳性。未检出氯霉素耐药相关基因catB、cm1A和四环素耐药相关基因tetA、tetB以及小多药外排泵基因smr-2。OXA-2阳性产物进行基因测序．将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的OXA氨基酸序列比较,与OXA-21型最为接近,但仍存在二个氨基酸序列差别。结论我院多药耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,介导了细菌的多药耐药。     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的研究1株多药耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶基因、菌膜蛋白OprD2基因、整合子和转座子介导的各种耐药基因、16SrRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因以及氯霉素与四环素相关耐药基因的的存在情况。方法以K—B法测量其对抗菌药物的耐药性;以PCR法检测其相关耐药基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果该株铜绿假单胞菌检出TEM基因OXA-10基因,且伴有OprD2缺失;转座子遗传标记MerA阳性,Ⅰ类整合子遗传标记qacEAl-Sul1阳性;耐氨基糖苷类基因aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、rmtB阳性,耐氯霉素基因cm1A阳性。结论造成本株铜绿假单胞菌多药耐药的主要原因是该菌株存在多种抗生素相关耐药基因。     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因分析

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,VITEK 2全自动微生物鉴定及药敏系统对其进行重新鉴定,聚合酶链反应（PCR）扩增oprD2、金属酶基因、氨基糖苷类酶修饰基因。结果 40株铜绿假单胞菌对临床常用的抗生素：厄它培南,亚胺培南（IPM）、头孢他啶（CAZ）、美罗培南、头孢吡肟（PEP）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、环丙沙星、氨曲南（ATM）、庆大霉素（GEN）、妥布霉素、阿米卡星、多粘菌素耐药率分别为100%、96.2%、92.0%、90.1%、84.8%、83.9%、83.1%、73.7%、65.1%、60.6%、58.0%、0%。PCR结果显示oprD2缺失率65.0%,整合子阳性率22.5%,发现金属酶基因IMP-1株,氨基糖苷类修饰酶基因ant3Ⅰ、aac6Ⅱ、aac6Ⅰ、ant2Ⅰ基因阳性率分别为36.0%、35.1%、26.2%,20.1%,同时携带2种或2种以上耐药基因占55.0%,携带2种以上氨基糖苷类修饰基因的有40.0%。结论多重耐药铜绿假单胞菌耐药性高,携带多种氨基糖苷类修饰酶基因,外膜孔蛋白oprD2缺失在多药耐药铜绿假单胞很常见,另外携带多种耐药基因盒的整合子的存在也是细菌耐药的常见原因,应引起高度重视。     

常用消毒剂对临床分离多重耐药铜绿假单胞菌的杀灭效果

目的观察常用消毒剂对临床分离铜绿假单胞菌的杀灭效果。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对含氯消毒泡腾片、碘伏和戊二醛等3类消毒剂杀灭铜绿假单胞菌的效果进行了实验室检测,同时与标准菌株作平行比较。结果155株临床分离的铜绿假单胞菌对19种抗生素存在不同程度的耐药。含氯消毒泡腾片、戊二醛、碘伏对临床分离的铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度依次为125、31、50mg/L,对标准菌株最小抑菌浓度依次为188、31、50mg/L。以含有效氯500mg/L泡腾片、125mg/L戊二醛和100mg/L碘伏对悬液内铜绿假单胞菌临床株和标准株作用10min,杀灭率均达100%。结论最小抑菌浓度测定临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌对含氯消毒剂抗性略高于标准株,3种消毒剂对临床分离菌株与标准株杀灭效果基本一致。     

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况。方法采用ATB PSE5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性．采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因。结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林／舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药．对哌拉西林／他唑巴坦的敏感率最高为64-3％，其余的耐药率在57．1％．92．9％之间。28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性．25株(89．3％)oprD基因缺失．24株(85．7％)qacE△1-sulⅠ基因阳性。结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重，oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因．qacE△1-sulⅠ基因携带率很高。     

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况.方法采用ATB′PSE 5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因.结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率最高为64.3%,其余的耐药率在57.1%～92.9%之间.28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性,25株(89.3%)oprD基因缺失,24株(85.7%)qacE△1-sulI基因阳性.结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重,oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因,qacE△1-sulI基因携带率很高.     

铜绿假单胞菌的耐药分析

铜绿假单胞菌广泛存在于自然界中,是一种引起人类各种感染性疾病的条件致病菌,亦是医院内感染的主要致病菌之一。慢性疾病和免疫功能低下者,以及侵入性治疗或严重创伤的患者易罹患该菌感染。近年来该菌在医院内感染中分离率居高,耐药性广泛,临床治疗困难,而成为医院感染的抗生素监测重点。     

广泛耐药铜绿假单胞菌耐药基因和oprD2基因检测及同源性分析

目的探讨本院短期内分离的广泛耐药铜绿假单胞菌药物耐药基因和外膜蛋白基因opr D2携带情况,并分析其分子流行病学特征。方法收集本院2012年10月分离的对临床常用7类抗菌药物耐药或中介的非重复铜绿假单胞菌,采用K-B法检测药物敏感性,选出广泛耐药株和泛耐药株。采用PCR法检测β-内酰胺酶基因(OXA、CTX-M、TEM、PER、GES、DHA、IMP、VIM、NDM、SPM、CARB和KPC)、16S rRNA甲基化酶基因(arm A、rmt A、rmt B)、氨基糖苷类修饰酶基因(aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ)及opr D2基因,PCR扩增阳性产物进行DNA测序,用Blast进行序列比对分析。应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对泛耐药铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果共筛选出23株广泛耐药铜绿假单胞菌,其中泛耐药菌10株。23株广泛耐药铜绿假单胞菌中,耐药基因检测阳性的有OXA-1群、OXA-10群、TEM、PER、CARB、VIM、arm A、rmt B、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ,阳性率分别为21.7%、39.1%、47.8%、87.0%、26.1%、4.3%、8.7%、47.8%、60.9%、52.2%、47.8%。opr D2基因阳性8株,阴性15株,基因缺失率达65.2%(15/23)。阳性基因与Gen Bank中已知序列同源性均大于99%。10株泛耐药菌的PFGE图谱分为4个型,其中主流型A型有6株,B型2株,C型、D型各1株,且A型、B型均来自烧伤外科。结论我院2012年10月分离的广泛耐药铜绿假单胞菌携带多种耐药基因和外膜蛋白opr D2基因缺失是其耐药的主要原因之一,且存在多种耐药基因组合模式。同时我院发生了小规模的泛耐药铜绿假单胞菌克隆株的传播。     

铜绿假单胞菌脉冲场电泳分型及对消毒剂抗性研究

为了解医院特殊病房内铜绿假单胞菌的基因型及其对常用消毒剂的抗药性,采用脉冲场凝胶电泳分型技术对其进行基因分型,并测定了其对3种常用消毒剂最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果,30株铜绿假单胞菌可分为13个基因型(A~M)。其中9个基因型铜绿假单胞菌株对一种含氯消毒剂的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为有效氯450 mg/L;其余铜绿假单胞菌株均为400 mg/L。30株不同基因型铜绿假单胞菌对含苯扎溴铵消毒剂最小抑菌浓度为80 mg/L,最小杀菌浓度为160 mg/L;对碘伏消毒剂的最小抑(杀)菌浓度相同,均为800 mg/L。结论,不同基因型铜绿假单胞菌对含氯消毒剂抗力不同,对其它消毒剂未显示出差别。     

铜绿假单胞菌临床耐药分析

铜绿假单胞菌是医院感染常见的条件致病菌,也是重症监护病房主要菌群之一,根据细菌耐药监测发现铜绿假单胞菌耐药率增长速度明显加快,耐药菌株越来越多。本文对我院2009～2011年铜绿假单胞菌对抗菌药物耐药率进行调查分析,其结果如下。一、材料与方法1.菌株来源:2009年1月至2011年12月本院临床科室送检的标本,培养出铜绿假单胞菌的痰298份、分泌物16份、尿15份、肠道5份、血液1份,除外同一患者同一部位重复分离出的铜绿假单胞菌,共分离出335株铜绿假单胞菌,占细菌培养总数     

铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素耐药状况及相关耐药基因检测

目的了解铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素的耐药状况,探讨其耐药机制。方法采用微量稀释法和纸片扩散法进行抗生素敏感试验,聚合酶链反应(PCR)检测5种氨基糖甙类修饰酶耐药基因。结果临床分离的264株铜绿假单胞菌对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为8.6%、7.5%和2.9%。被检耐药基因的20株铜绿假单胞菌中有6株检出氨基糖甙类修饰酶耐药基因,分别是aac(3)-Ⅱ(2/20)、aac(6′)-Ⅰ、(1/20)、ant(3")-Ⅰ(1/20)和ant(2")-Ⅱ(2/20)。结论该院铜绿假单胞菌对常用氨基糖甙类抗生素的敏感性高,此类抗生素仍是临床治疗铜绿假单胞菌感染的优先选择。产生氨基糖甙类修饰酶是该院临床感染铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素的耐药机制之一。     

鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌qacEΔ1基因检测及消毒剂抗性研究

目的研究临床分离鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌携带qac EΔ1耐消毒剂基因及对3种常用消毒剂抗性情况。方法选择我院2012年1月至2014年12月临床分离的鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌各30株,采用PCR法检测所有菌株携带qac EΔ1耐消毒剂基因情况,采用定量杀菌试验检测qac EΔ1基因阳性菌株对3种临床常用消毒剂抗性的变化,对检测结果进行统计学分析。结果在30株鲍曼不动杆菌中,有22株携带qac EΔ1基因,阳性率为73.3%(22/30)。在30株铜绿假单胞菌中,有18株携带qac EΔ1基因,阳性率为60.0%(18/30)。标准菌株大肠埃希菌ATCC 25922和铜绿假单胞菌ATCC 27853的qac EΔ1基因检测均为阴性。有效碘、有效氯及快速手消毒剂对鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌及质控菌株的灭菌率均随时间和剂量的提高而提高,呈现明显的量-效关系和时-效关系。在灭菌1 min时,除300 mg/L有效碘对鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌qac EΔ1基因阳性菌株灭菌率均低于基因阴性菌株,且差异均有统计学意义(P均0.05)外,其他浓度下有效碘对鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌qac EΔ1基因阳性菌株与阴性菌株灭菌率差异均无统计学意义(P均0.05)。其他作用时间下不同浓度有效碘对鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌qac EΔ1基因阳性菌株的灭菌率均低于qac EΔ1基因阴性菌株,且差异均有统计学意义(P均0.05)。不同浓度的有效氯在作用5 min、7min时对鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌qac EΔ1基因阳性菌株灭菌率均低于基因阴性菌株,且差异均有统计学意义(P均0.05);作用1 min时,500 mg/L有效氯对鲍曼不动杆菌qac EΔ1基因阳性菌株灭菌率均低于阴性菌株,且差异有统计学意义(P0.05),但对铜绿假单胞菌qac EΔ1基因阳性与阴性菌株灭菌率差异无统计学意义(P0.05)。快速手消毒剂在作用1 min、5 min和7 min时对鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌qac EΔ1基因阳性菌株灭菌率均低于基因阴性菌株,且差异均有统计学意义(P均0.05)。结论我院分离的鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌携带qac EΔ1耐消毒剂基因比例较高,qac EΔ1基因阳性菌株对临床常用的3种消毒剂的抗力高于阴性菌株和标准菌株。     

铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的了解铜绿假单胞菌（PA）对β－内酰胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类药物耐药基因的分布情况。方法采用聚合酶链反应（PCR）法对PA进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素类基因、耐消毒剂和磺胺类基因进行检测。结果PCR结果显示40株PA对17种耐药相关基因检出率分别为TEM80％、OXA．112．5％、OXA-1077．5％、CTX-M117．5％、DHA22．5％、IMP5％、aac（3）．Ⅱ90％、aac（6’）-I90％、aac（6’）-Ib65％、ant（2”）-I70％、catB78％、cmlA2．5％、qacE△l-stil1 92．5％。VIM-2、VEB、GES基因均为阴性、Opr D2基因未见缺失。同一患者不同时间分离株耐药基因可不同。结论在40株PA中,B一内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因检出率较高,耐消毒剂基因检出率很高,应该引起高度重视。     

铜绿假单胞菌ICU分离株耐药基因分析

为了解自我院ICU住院病人分离到的铜绿假单胞菌（Pseudornonas aoruginosa,Pa）对β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素耐药的原因,我们用分子生物学技术检测了15种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因（TEM、SHV、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA、FOX、MOX和oprD2）,6种氨基糖苷类修饰基因[aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅱ,结果如下。     

铜绿假单胞菌耐药性分析及金属酶基因检测

目的分析中南大学湘雅医院临床分离铜绿假单胞菌抗菌药物敏感性及金属酶流行情况,以期指导临床用药。方法收集2010年11月—2011年4月临床分离非重复铜绿假单胞菌200株,所有菌株均经VITEK-2全自动微生物鉴定与药敏试验分析系统进行鉴定和药敏试验。采用双纸片协同试验作为金属酶表型初筛试验,初筛阳性菌株采用聚合酶链反应(PCR)检测IMP、VIM、SPM和NDM4种金属酶基因型以及Ⅰ类整合酶基因。结果 200株铜绿假单胞菌分离自ICU患者55株,占27.5%。药敏试验结果显示,该菌对美罗培南耐药率最低(8.5%),对庆大霉素耐药率最高(38.5%)。6株铜绿假单胞菌金属酶初筛试验阳性,检出率3.0%,经基因检测发现IMP型阳性菌株2株(2株均产IMP-1菌株),未检出VIM、SPM及NDM型金属酶,且这6株铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因均为阳性。结论该院产金属β内酰胺酶的铜绿假单胞菌检出率较低,主要金属酶基因型为IMP-1。铜绿假单胞菌耐药仍较严重,但对碳青霉烯类抗生素耐药率低。