南方红豆杉组织培养研究

介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件,在ＭＳ－培养基上,附加不同种类和浓度配经的激素,在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较。其中当２,４－Ｄ１．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．８ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ３ｍｇ／Ｌ或４ｍｇ／Ｌ时,愈伤组织诱导率和生长量最高,结果表明,不同激素组合对愈伤组织诱导率,生长量和发生的性状有明显的影响,为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础,为解决红豆杉的资源贫     

南方红豆杉愈伤组织培养的研究

对南方红豆杉叶愈伤组织诱导条件及最适培养基级成成分进行了探讨。结果表明,２,４－Ｄ比ＮＡＡ更有利于愈伤组织的形成。培养基中添加适度浓度的ＣＡ、Ｐｈｅ和乙酸钠能促进南方红用愈伤组织的生长和紫杉醇的积累。     

南方红豆杉芽愈伤组织的诱导和培养

目的 为研究南方红豆杉芽愈伤组织诱导条件、最适培养基组成成分和紫醇含量的积累。方法 以南方红豆杉芽为外植体,在MS培养基上,试验不同种类、不同浓度的激素及其组合对愈伤组织诱导的影响。结果 芽诱导的最适培养基是MS添加2,4－D2.0mg/L和NAA0.5mg/L。对愈伤组织的增强、驯化和紫杉醇含量的积累则以B5添加2,4－D 0.5mg/L、NAA1.0mg/L和KT0．5mg/L为最佳。结论 本研究为植物组织细胞培养生产紫杉醇提供实验依据。     

南方红豆杉愈伤组织培养条件的优化及紫杉醇积累的基因表达效应分析

目的 优化南方红豆杉愈伤组织诱导与继代培养条件,获得含紫杉醇量高的红豆杉愈伤组织,明确紫杉醇合成相关基因的表达模式与紫杉醇量的关系。方法 探讨了适合南方红豆杉的愈伤组织诱导及继代培养的激素组成及浓度。比较了南方红豆杉 (种胚、幼茎、幼芽)、曼地亚红豆杉 (种胚) 和太平洋红豆杉 (种胚) 不同外植体来源的愈伤组织的生长特点和紫杉醇的量,分析了不同愈伤组织紫杉醇合成相关基因的表达差异。结果 添加 3.0 mg/L 2,4-D 的 Murashige & Skoog (MS) 培养基有利于南方红豆杉的诱导,诱导率高于 92%。添加 2.0 mg/L 2,4-D 与 1.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤 (6-BA) 的继代培养基有利于南方红豆杉的紫杉醇积累。同一培养条件下,南方红豆杉种胚来源的愈伤组织紫杉醇量最高,达到干质量的 0.027%。含紫杉醇量高的愈伤组织,其紫杉醇合成途径中的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶 (GGPPS)、紫杉二烯合成酶 (TASY)、紫杉烷-10β-羟化酶 (T10βH)、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-β-O-乙酰转移酶 (DBAT)、苯丙氨酸氨基变位酶基因 (PAM)、去苯甲酰紫杉-N-苯甲酰转移酶 (DBTNBT) 等酶基因的表达水平高。结论 从南方红豆杉的种胚为外植体源获得了含紫杉醇量高的愈伤组织,提高 GGPPS、TASY、T10βH、DBAT、PAM、DBTNBT 的表达水平将促进紫杉醇的合成。     

南方红豆杉愈伤组织生长动力学及紫杉醇代谢动力学研究

目的 通过愈伤组织细胞生长及其紫杉醇代谢动力学的研究,筛选确定南方红豆杉愈伤组织培养生产紫杉醇的最佳培养基配方与最佳收获期。方法 以改良MS为基本培养基添加不同质量浓度的IBA、6-BA、GA₃组合诱导培养南方红豆杉愈伤组织,通过测定愈伤组织鲜质量进行生长动力学研究,采用HPLC法检测不同生长阶段愈伤组织中紫杉醇的积累量,进行紫杉醇代谢动力学研究。结果 改良MS＋0.2 mg/L IBA＋0.05 mg/L 6-BA＋0.3 mg/L GA₃、MS＋0.2 mg/L IBA＋0.01 mg/L 6-BA＋0.7 mg/L GA₃及MS＋0.2 mg/L IBA＋0.1 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L GA₃培养条件均较有利于南方红豆杉愈伤组织的诱导培养,且紫杉醇的积累量也较高,最高可达0.037 76%。结论 在添加IBA及6-BA的基础上适当增补GA₃可使南方红豆杉愈伤组织诱导提前启动,缩短出愈时间,促进生长,降低褐变程度,增加愈伤组织中紫杉醇的积累量。愈伤组织的生长曲线呈S型,紫杉醇的积累呈线型增加,是一个逐渐积累的过程,但积累到一定程度就不再增加,且伴随着愈伤组织不断褐变。     

叶下珠愈伤组织的诱导与培养

目的建立叶下珠愈伤组织培养方法。方法采用组织培养方法,比较不同外植体、蔗糖、植物生长物质及其配比对叶下珠愈伤组织诱导的影响。结果茎段的诱导率最高,为55.56%,叶片诱导不出愈伤组织。6-BA是叶下珠愈伤组织形成的主要影响因素,2,4-D、NAA、蔗糖次之。结论叶下珠愈伤组织诱导及继代的适宜培养基为MS 2,4-D0.5mg/L 6-BA1.0mg/L NAA0.1mg/L 蔗糖10g/L。     

诱导八角莲愈伤组织的研究

目的:探讨八角莲诱导愈伤组织的过程,为快速繁殖幼苗奠定基础。方法:以八角莲的根茎、叶片为外植体,采用MS培养基,附加不同的植物激素进行实验。结果:以八角莲的叶片为外植体,在培养基MS NAA1.0mg/L 2,4-D2.0mg/L 6-BA0.5mg/L,愈伤组织诱导率可达55.0%。结论:通过合理配制培养基和激素,可以诱导八角莲的愈伤组织。     

药用植物决明的愈伤组织诱导与生长增值的培养条件研究

本实验成功地以决明的胚轴、子叶诱导出愈伤组织。实验表明，MS比B5更利于愈伤组织诱导。正交试验表明，添加1mg／L的IAA、6－BA、GA3可明显促进愈伤组织的生长；添加1mg／L的NAA、2，4－D可抑制其生长；添加1mg／L的6－BA、2，4－D对抑制愈伤组织的分化有明显的效应。适合愈伤组织生长及维持分化率低水平的蔗糖浓度为2％～3％。愈伤组织的诱导及生长周期为30d左右。     

药用植物决明的愈伤组织诱导与生长增殖的培养条件研究

本实验成功地以决明的胚轴、子叶诱导出愈伤组织。实验表明，ＭＳ比Ｂ５更利于愈伤组织诱导，正交试验表明，添加１ｍｇ／Ｌ的ＩＡＡ、６－ＢＡ、ＧＡ３可明显促进愈伤组织的生长；添加１ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ、２，４－Ｄ可抑制其生长；添加１ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ、２，４－Ｄ对抑制愈伤组织的分化有明显的效应。适合愈伤组织生长及维持分化率低水平蔗糖浓度为２－３％。愈伤组织的诱导及生长周期为３０天左右。     

不同种类红豆杉愈伤组织的诱导及紫杉醇含量的差异

研究云南红豆杉、东北红豆杉、红豆杉、南方红豆杉和杂种红豆杉形成愈伤组织的一些因素,比较不同植株来源的愈伤组织系的生长特点和紫杉醇含量。通过考察愈伤组织形成的时间和比率来研究取样时间、当照条件、培养基中２,４－Ｄ浓度和外植体类型对愈伤组织诱导的影响,用高效液相色谱法测定愈伤组织中紫杉醇含量,愈伤组织形成的迟早和比率在不同种类红豆杉之间和同一种类不同植株之间差异较大,在黑暗中,在添加有０．１ｍｇ／ＬＢ     

高寒藏药—川西獐牙菜组织培养研究：Ⅰ.愈伤组织的诱导及初步培养

从川西獐牙菜的胚轴、未成熟种子及幼叶诱导出愈伤组织；试验选用MS、B5和N63种培养基，其中以加有2，4－D3mg／L＋KT0.6mg／L的MS培养基诱导率最高。结果表明,不同培养基及不同激素组合对愈伤组织诱导率有较明显的影响。初步证明了用植物组织培养的方法进行川西獐牙菜的无性快速繁殖是有可能的。     

L-谷氨酰胺和桂皮酸对云南红豆杉愈伤组织生长的影响

研究了不同化合物对褐化严重的云南红豆杉愈伤组织生长的影响。结果表明,在培养基中添加０．２９ｍｇ／ＬＬ－谷氨酰胺和０．０７４－０．２２ｍｇ／Ｌ桂皮酸后能有效地抑制愈伤组织和培养基的褐化,显著改善愈伤组织的生长,并对紫杉醇的含量影响不大;     

珍稀植物跳舞草愈伤组织的诱导

①目的筛选出跳舞草外植体的最佳消毒方案及愈伤组织诱导的最佳条件。②方法以跳舞草的叶片为实验材料,利用离体培养技术,分析了不同消毒时间和培养条件对跳舞草愈伤组织诱导的影响。③结果外植体最佳的消毒方案为：75％的酒精消毒30 s;愈伤组织诱导的最佳条件为：MS,NAA：0．02 mg/L,BA：2 mg/L,糖：30 g/L,琼脂：6 g/L。④结论为进一步建立跳舞草组培快速繁殖体系奠定了基础。     

高效液相色谱法测定东北红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量

目的：建立东北红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）法，选用C18色谱柱，流动相为乙腈：水（60：40），检测波长227nm，柱温25℃，对东北红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量进行了测定。结果：紫杉醇在19．5～97．6μg·mL。之间呈良好的线性关系，紫杉醇平均回收率为100．41％，RSD=1．62％（n=6）。结论：该含量测定方法准确可行，可以作为测定东北红豆杉愈伤组织培养中紫杉醇含量的高效液相色谱方法。     

南方红豆杉外植体母株来源与培养基成分对愈伤组织生长和紫杉醇的影响

目的建立和优化获得量大而高紫杉醇愈伤组织的培养技术和方法。方法以山西陵川县野生和在西安栽培的南方红豆杉为材料,就最佳母株、外植体种类、基本培养基、植物激素种类及浓度对愈伤组织诱导、生长和紫杉醇的影响等因素进行了系统研究。结果幼茎外植体因诱导的愈伤组织时间早、频率高而最佳;培养基Y 5:M S 2,4-D 4.0 m g/L K IN 1.0 m g/L或B 5Ⅲ:B 5 2,4-D 3.0 m g/L K IN 0.1 m g/L Phe 0.1 m o l/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导频率高达100%。继代培养基中质量浓度2,4-D(0.5~3 m g/L)促进愈伤组织增殖;高质量浓度(8 m g/L)则有抑制作用。当2,4-D质量浓度适宜时,愈伤组织在B 5培养基上较在M S培养基上褐化轻、生长快。HPLC分析表明紫杉醇最高的继代培养基为M SⅢ,其紫杉醇质量分数高达干重的0.004%;野生母株幼芽来源的愈伤组织,其紫杉醇普遍高于栽培母株幼茎来源的愈伤组织。结论以5月份野生红豆杉幼茎为外植体,以Y 5或B 5Ⅲ为诱导培养基和继代培养基,继代8~10代,每代培养30~35 d;用M SⅢ培养基再培养1~2代,收获愈伤组织或细胞培养物,并从中提取紫杉醇是获得大量高紫杉醇愈伤组织的较佳培养程序。     

中国粗榧愈伤组织的诱导

目的:应用现代生物技术研究中国粗榧的组织培养技术.方法:观察不同消毒时间(5 min,10 min,15min),不同激素(6-苄基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、6-呋喃氨基嘌呤(KT)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))组合及不同激素浓度的MS培养基对中国粗榧不同的外植体材料(茎尖、当年生幼茎、当年生幼叶)愈伤组织诱导的影响.结果与结论:选用茎尖、幼茎为外植体,消毒时间为10 min,培养基以MS 6-BA NAA 2,4-D(6-BA、NAA质量浓度均为20 mg/L,2,4-D为1.0 mg/L)可较好地诱导中国粗榧愈伤组织的形成.     

几种红豆杉植物及其愈伤组织的同工酶比较研究

对东北红豆杉、云南红豆杉、中国红豆杉和南方红豆衫的幼茎、针叶及其茎来源的愈伤组织的过氧化物酶（POD）、醋酶（EST）、多酚氧化酶（PPO）及超氧化物歧化酶（SOD）的同工酶，可溶性蛋白的含量及电泳谱带，多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性作了比较研究。并探索了这几种同工酶的酶谱和两种酶活性与紫杉醇的生物合成的关系。     

冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究

用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术,诱导出冬 凌草愈伤组织,并探讨 了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响。结果表 明：从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织,以 MS 2,4D 1 mg/L NAA 0.5 mg/L 培养基较好 ,愈 伤组织诱导率高达 96.80%。用普通单细胞平板培养法培养冬凌草单细胞的植板率很低,而 以悬浮培养 15～18 d 的单细胞为材料,接种密度为 5×103个/毫升时,进行条件培养 和 看护培养,植板率达 21.63%。本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬 凌草素细胞株时参考。     

麻黄愈伤组织的诱导研究

麻黄草质茎纤维性比较强,诱导愈伤组织比较困难。研究结果说明:诱导麻黄愈伤组织以幼嫩、深绿色、较粗壮的草质茎节间部分为外植体较好;在MS+NAA1.0(mg/l)+2,4-D0.2(mg/l)和MS+NAA0.1(mg/l)+6-BA0.1(mg/l)培养基上愈伤组织的诱导率均可高达100%。