高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C

目的从银杏叶中分离纯化白果内酯和银杏内酯A、B、C。方法银杏叶提取液经醋酸乙酯萃取、D-101大孔吸附树脂柱和Al2O3柱纯化后得到总内酯提取物,提取物再经两次高速逆流色谱分离制备4种内酯单体。结果25%乙醇热提取、醋酸乙酯萃取、D-101柱、pH4.0的Al2O3柱对总内酯的提纯最终使总内酯质量分数达到44.98%。经高速逆流色谱制备得到的白果内酯和银杏内酯A、B、C最高质量分数分别为98.3%、98.9%、98.8%、98.4%。结论本法简便快速、回收率高,为银杏叶中内酯单体的制备提供了一种新方法     

HPLC-ELSD法测定银杏滴丸中银杏内酯A、B、C和白果内酯

目的 采用高效液相-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定银杏滴丸中银杏内酯A、B、C及白果内酯。方法 样品以甲醇溶解,蒸干后水溶,醋酸乙酯提取处理。采用HPLC-ELSD法测定,ALLtech C18色谱柱(250 mm×45 mm,5 μm);流动相：甲醇-四氢呋喃-水(35∶10∶65);体积流量：0.8 mL/min;气速：2.85 L/min;漂移管温度：105 ℃;柱温：30 ℃。结果 银杏内酯A、B、C及白果内酯的平均加样回收率分别为98.5%、103.5%、99.7%、101.6%,RSD分别为25%、1.9%、2.8%、2.0%。结论 建立的滴丸制剂中银杏内酯A、B、C及白果内酯的定量方法可行性好、简便、可靠。     

银杏叶提取物中白果内酯的分离纯化

目的 分离纯化白果内酯,提高银杏叶提取物的综合利用率。方法 由银杏叶提取物制得白果内酯初提物,再经硅胶柱色谱以及重结晶的方法进行分离、纯化。结果 得到质量分数达98%以上的白果内酯单体。在最佳工艺条件下,白果内酯的得率为80.32%。结论 该方法得率高,分离效果好,可应用于批量制备白果内酯单体。     

DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A、B、C和白果内酯的研究

银杏萜内酯主要包括银杏内酯A、B、C和白果内酯。银杏内酯B是一种很有应用前景的特异性血小板激活因子(PAF)受体拮抗剂，其专一性高，而银杏内酯A也是一种重要的昆虫拒食素，白果内酯对老年痴呆症和神经系统疾病具有一定疗效。目前，银杏萜内酯对心脑血管及外周血管疾病的有效疗效已使他成为药品及保健食品的原料。但目前银杏叶     

银杏叶中银杏萜内酯的GC-MS定性定量分析

目的：建立银杏叶中银杏内酯A，B，C和白果内酯的定性定量分析方法。方法：银杏叶以20％乙醇超声提取，乙酸乙酯萃取，再经酸性氧化铝－活性炭－硅藻土混合柱层析，在100℃以双－三甲基硅烷三氟乙酰胺硅烷化60min后，用HP－5 MS毛细管色谱柱，柱温从180℃程序升温至300℃。采用选择离子监测（SIM）方式，以峰值最高的碎片离子作为监视离子进行定量分析。结果：银杏内酯A，B，C和白果内酯的保留时间分别为13．7，14．3，15．3和6．8min，特征（监视）离子（m/z)分别为537，625，713及455（299）；平均回收率分别为102．0％，99．4％，96．0％和96．3％，RSD分别为0．54％，2．40％，1．98％和2．43％。结论：本方法操作简便、重现性好、专属性强、准确可靠，可作为银杏萜内酯的定性定量分析方法。     

银杏内酯B的制备及纯化工艺研究

目的:研究银杏叶中银杏内酯B的制备及纯化工艺。方法:从萃取塔塔底均匀加入乙酸乙酯进行高速逆流萃取富集;聚酰胺和大孔树脂柱层析分离与乙醇重结晶相结合纯化。结果:用该方法富集和纯化得到的银杏内酯B纯度达96.3%。结论:方法简便,成本低、污染少、安全性高,所得银杏内酯B纯度高。     

HPLC-ELSD法测定注射用银杏内酯中银杏内酯A与银杏内酯B的含量

目的　研究并建立注射用银杏内酯中银杏内酯A与银杏内酯B的含量测定方法。方法　采用RP HPLC法 ,以正丙醇 四氢呋喃 水 (1∶30∶6 9) (V/V/V)为流动相 ,ELSD为检测器同时测定银杏内酯A和银杏内酯B的含量。结果　注射用银杏内酯中银杏内酯A、银杏内酯B与其它成分分离良好 ,银杏内酯A进样量在 2 .12～ 10 .6 0 μg ,银杏内酯B进样量在3.78～ 18.90 μg范围之间呈良好的线性关系 ;加样回收率分别为 97.2 4 %和 97.17% ,RSD分别为 1.94 %和 0 .78%。 结论本法简便 ,重现性好 ,可用于注射用银杏内酯的质量控制      

银杏叶中银杏内酯的提取方法

采用沸水浸泡银杏叶，乙醇抽提水浸膏，乙酸乙酯萃取内酯的生产工艺，所得白色晶体经ＨＰＬＣ检测含银杏内酯为８１．５％，产品得率为０．６％。     

银杏叶中银杏内酯的提取方法

采用沸水浸泡银杏叶、乙醇抽提水浸膏、乙酸乙酯萃取内酯的生产工艺，所得白色晶体经HPLC检测含银杏内酯为81.5％，产品得率为0.6％。     

Improving effect of Ginkgolide B on mitochondrial respiration

Background It has been known that platelet activating factor receptors (PAFR) may mediate many acute pathological responses and that PAFR antagonist Ginkgolide B (GB) possesses multiple effects, but the actions of GB on PAFR affinity and mitochondrial respiration in the ischemic neuron were unclear until now. This study explored the possible effects of GB on PAFR and the mitochondrial respiration of the neuron in the ischemic microenvironment.Methods Thrombotic cerebral ischemia in tree shrews was induced by a photochemical reaction; changes in the regional cerebral blood flow (rCBF, using (99m)Tc tracer technique ), the brain water content (specific gravimetric method), PAFR (3H-labelled PAF assay), the respiratory control rate (RCR), the phosphorus-oxygen (P/O) ratio of mitochondrial respiration (Clark oxygen electrode), mitochondrial permeability transition (MPT) pore, and the mitochondrial ultrastructure in the ischemic neurons were also observed. Data were compared between the two groups (the ischemia group vs the sham group, and the ischemia group vs the GB group).Results There were high affinity and low affinity sites for PAFR on the tree threws’ brain cell membranes. The varying-affinity PAFR binding sites, the respiration state Ⅲ, the state Ⅳ, RCR, the P/O ratio of the mitochondria, and the rCBF all decreased markedly (respectively, P<0.01 and P<0.05), but the water content increased (P<0.01) in the ischemia group after the application of cerebral thrombosis. In tree shrews treated with GB (5 mg/kg i.v.) 6 hours after photochemical reaction, their PAFR binding sites and respiratory state increased markedly. The rCBF gradually increased and the brain edema ameliorated (P<0.01) at 24h after cerebral ischemia. There were significant differences between the ischemia group and sham group (P<0.01). In GB treated isolated neurons’ mitochondria, with or without cerebral ischemia, the energy metabolism of the mitochondria had not been changed.Conclusions The activation of the PAFR may play an important role in the inhibition of the mitochondrial respiration and the induction of neuronal damage after cerebral thrombosis; however, GB possesses neuroprotective effects by improving mitochondrial metabolism.     

银杏内酯B对谷氨酸诱导视网膜神经细胞凋亡的影响

 ［目的］探讨银杏内酯B拮抗谷氨酸诱导的体外培养新生大鼠视网膜神经细胞凋亡作用及其可能的机制。 ［方法］MTT法检测不同浓度谷氨酸对原代培养SD大鼠视网膜神经细胞的兴奋性毒性作用。细胞分为正常组、谷氨酸组和不同浓度（10、50、100μmol/L）GB治疗组(n=6)。MTT法检测不同浓度的银杏内酯B对谷氨酸诱导凋亡的视网膜神经细胞存活率的影响。流式细胞仪结合Annexin V/ PI检测细胞凋亡率，JC-1染色检测线粒体膜电位。［结果］100μmol/L谷氨酸作用下，视网膜神经细胞的吸光度值降低至0.50±0.07，凋亡率为52.4％，JC-1的红/绿比值为1.77。10~100μmol/L银杏内酯B作用下神经细胞的吸光度值分别为0.52±0.09、0.64±0.15和0.74±0.11，细胞的凋亡率分别下降至36.7%，12.4%和2.1%，JC-1的红/绿比值则分别上升为1.898、2.089、2.276（P＜0.05）。［结论］银杏内酯B可以拮抗谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡，其作用机制可能与提高线粒体膜机能有关。     

HPLC测定银杏愈伤组织内酯A的研究

建立了一种可用于银杏离体细胞培养物中内酯Ａ含量分析的ＲＰ－ＨＰＬＣ方法。样品经低浓度甲醇提取后,用中性或酸性氧化铝固相萃取柱纯化,用示差检测器检测,银杏内酯Ａ的最低检测限为 ０,０１２ μｇ,方法回收率为（９６．０±２）％,ＲＳＤ为 ３．１％。     

银杏内酯B对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的 :探讨银杏内酯B(ginkgolideB)对过氧化氢 (Hydrogenperoxide ,H2 O2 )引起PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法 :用噻唑兰 (MTT)检测PC12细胞的存活率 ;乳酸脱氢酶法检测PC12细胞损伤 ;用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化物 ;同时检测细胞内抗氧化酶的活性。结果 :PC12细胞在 5 0～ 30 0 μmol LH2 O2 作用 3h后 ,细胞的死亡率及乳酸脱氢酶 (LDH)释放明显增加 ,抗氧化酶如超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD)、谷胱甘肽过氧化酶 (glutathioneperoxidase ,GSH Px)活性显著降低 ,而脂质过氧化物生成增多。银杏内酯B 10～ 10 0 μmol L能显著降低细胞死亡率、LDH释放及丙二醛 (MDA)的生成 ,且能明显提高抗氧化酶的活性。结论 :银杏内酯B可拮抗H2 O2 引起的PC12细胞损伤 ,其机理可能与银杏内酯B减少脂质过氧化物的生成 ,提高抗氧化酶的活性有关     

银杏内酯B对谷氨酸诱导大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的影响

【目的】探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对谷氨酸(glutamate)引起原代培养的脑皮质神经元氧化损伤的保护作用。【方法】采用改良的方法原代培养胎鼠脑皮质神经元,用噻唑蓝(MTT)及乳酸脱氢酶法分别检测神经元的存活率和损伤情况;用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化的程度;并同时检测了细胞内抗氧化酶的活性。【结果】银杏内酯B(10～100μmol/L)能剂量依赖性地抑制谷氨酸(0.8 mmol/L)引起的细胞存活率下降和细胞损伤,同时提高细胞内抗氧化酶活性和减轻细胞脂质过氧化。【结论】银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用,这可能与其能提高神经细胞内抗氧化酶活性和清除氧自由基有关。     

银杏内酯的提取分离及药理作用研究

目的通过有机溶剂溶解和柱层析技术,从银杏提取物中分离纯化银杏内酯。观察和比较银杏叶提取物（CBE）对不同年龄大鼠动脉环的舒张作用。方法3种银杏内酯（银杏内酯A、B、C）具有不同的选择溶解性的特点,故通过丙酮,乙酸乙酯与乙醇三级溶解银杏提取物,每一级溶解液匹配合适的柱层析吸附剂与洗脱液,从而达到分离纯化银杏内酯的目的。采用高效液相色谱法（HPLC）检测,对所得银杏内酯A,B,C进行测定。4-24周SD大鼠的胸主动脉环被固定在组织浴槽内,先给予去甲肾上腺素预收缩,稳定后给予各浓度的试验药物,观察其对动脉环舒张作用。结果①有机溶荆溶解和柱层析吸附技术可将银杏内酯的纯度由〈6％提高至〉80％,并可将它们逐一分离;②GBE对不同年龄大鼠去甲肾上腺素预收缩的腹主动脉环均有舒张作用,并具有刺量-效应关系。对4-24周大鼠舒张效应,CBE从（1.02＋0.21）％（0.01mg／ml）上升到（27.62±3.62）％（1mg／ml）;③随着大鼠年龄的增长GBE对胸主动脉环的舒张效应逐渐降低。对4-24周大鼠舒张效应,1mg／ml GBE从（27.62±3.62）％降到（14.79±3.67）％,P〈0.05。结论利用有机溶剂溶解和柱层析吸附技术从银杏提取物中分离纯化银杏内酯是一种廉价高效的方法,值得推广。GBE对血管的舒张作用具有类似的年龄相关的改变。     

白花蛇舌草多糖的分离纯化及PMP柱前衍生高效液相分析

经热水提取、醇沉、大孔树脂分离、三氯乙酸脱蛋白、H2O2脱色、透析、DEAE-52纤维素和Sephadex G-200凝胶柱层析,建立了白花蛇舌草多糖的分离纯化方法。制备的ODI经紫外扫描及HPGPC测试,证实为单一纯品。ODI经PMP柱前衍生高效液相法测定,确定其由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成。     

蜜蜂毒中蜂毒素的分离纯化方法及含量测定

目的：从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素（melittin),建立以SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS－PAGE）及HPLC进行蜂毒素定性定量分析的方法。方法：用Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75三步层析法从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素,以SDS－PAGE定性,以HPLC进行含量测定。结果：样品经SDS－PAGE测定为单一条带,相对分子质量约3000。HPLC含量测定,平均回收率为95．97％,相对标准差（RSD）为1．07％。结论：以上述分离纯化法可制得高纯度的蜂毒素,检测方法准确、可靠、简单。