hTNF—α单克隆抗体轻, 链可变区基因的克隆和序列及分子结…

从两株具肮亲和力及中和活性的抗人肿瘤坯死因子－α（ｈＴＮＦ－α）的单抗杂交瘤细胞株１Ｃ３、３Ｆ６中分别提取总ＲＮＡ，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆了抗体的ＶＬ、ＶＨ基因。核苷酸序列分析表明，所克隆基因均为抗体的ＶＬ、ＶＨ基因，并分别属于Ｋａｐｐａ链Ⅳ亚组和重链Ⅲ（Ｄ）亚组。此外，两抗体可变区分子模型及与ｈＴＮＦ－α的结合模型的建立及分析，为进一步的基因工程抗体研究及抗原－抗体相互作用机理的研究奠定了基     

抗CD8单抗轻,重链可变区基因的克隆和序列分析

采用反转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法，从分泌特异性抗ＣＤ８单抗的杂交瘤细胞中扩增出该抗体轻，重链可变区（ＶＨ，ＶＬ）基因，并测定了其序列，经计算机分析，ＶＨ和ＶＬ基因均为新发现的基因序列，符合功能重排的鼠抗体可变区基因特征。     

抗人肝癌单克隆抗体重链可变区基因克隆和序列测定

应用反转录ＰＣＲ方法从分泌抗人肝癌单克隆抗体鼠杂交瘤细胞系ＨＢｂ２７中成功地克隆了单抗重链可变区基因，将此基因重组入Ｍ１３噬菌体中，双脱氧链终止法测定了核苷酸序列。经计算机分析，基因全长４０８ｂｐ，编码１３６个氨基酸，并进行了基因同湖泊性分析，结果表明获得的重链可变区基因是具有功能性的，两端引物自带起始码和终止码，可直接插入原核载体中进行表达。     

肝癌单抗重链可变区基因的克隆及序列测定

从分泌与肝细胞肝癌特异性强并具有良好人体内导向作用的鼠源性单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＡｂ２５中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用合成的寡核甘酸引物从中扩增出抗体重链可变区基因。将此基因克隆到ｐＵＣ１９质粒中，测定了此可变区基因的全序列。经计算机分析，结果表明基因长度为３６０ｂｐ，编码１２０个氨基酸，是具有功能性的抗体可变区基因，在核苷酸序列上与小鼠重链ＶＨ１８６．２家族同源性最高，属免疫球蛋白重链可变区基因９个家族中的第三族     

CEA单抗轻重链可变区基因的克隆和序列分析

从分泌具有高亲和力和特异性的小鼠抗癌胚抗原（ＣＥＡ）的单抗杂交瘤细胞株Ｃ５０中提取总ＲＮＡ，通过ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了抗体的轻、重链可变区基因。核苷酸序列分析表明所克隆基因分别为抗体轻、重链可变区基因。     

抗人ClqMcAb轻、重链可变区基因的克隆、序列分析及轻链可变区基因的表达（摘要）

抗人ＣｌｑＭｃＡｂ轻、重链可变区基因的克隆、序列分析及轻链可变区基因的表达（摘要）陈克敏，朱锡华应用ＰＣＲ技术，从一株抗人ＣｌｑＭｃＡｂ杂交瘤细胞基因组ＤＮＡ及反转录合成ｃＤＮＡ中，扩增、克隆分别获得抗人Ｃｌｑ轻、重链可变区基因，序列分析表明：抗人Ｃ...     

抗鳗弧菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列测定

鳗弧菌感染是养殖及野生海水鱼的重要疾病之一 ,大面积发病会给养殖渔业带来巨大经济损失。目前 ,对鱼鳗弧菌感染的防治主要是利用抗生素及减毒、灭活疫苗。抗生素的长期使用易使鱼体产生耐药性 ;减毒疫苗的安全性较难把握 ;灭活疫苗的抗原性较弱且制备过程中残存的杂质还可能使鱼体出现炎症甚至死亡。针对鳗弧菌保护性表位制备的抗鳗弧菌独特型单克隆抗体 (ｍＡｂ)具有良好的安全性及免疫原性[1] ,但大量生产成本较高。为此 ,我们应用ＲＴ ＰＣＲ从分泌抗鳗弧菌独特型ｍＡｂ的杂交瘤细胞株 4Ａ6中 ,扩增了该ｍＡｂ的重链可变区 (ＶＨ)基因…     

单克隆抗体LC—1轻重链可变区基因的克隆及序列分析

本实验室获得的单克隆抗体（ｍＡｂ）ＬＣ１在体外及体内实验中，能与不同病理类型的肺癌细胞结合，具有作为肺癌病理诊断与鉴别诊断的辅助工具的潜在应用价值。本文应用分子生物学技术，从分泌ＬＣ１的杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，并经过反转录、ＰＣＲ分别分离得ＶＬ基因及ＶＨ基因，并通过序列测定对ＶＨ基因和ＶＬ基因进行了分析。结果表明：ＬＣ１的ＶＨ基因为３５９ｂｐ，ＶＬ基因为３３７ｂｐ；从推导出的氨基酸序列分析证实，它们均符合小鼠Ｉｇ可变区的氨基酸序列特征。根据Ｋａｂａｔ分类体系，ＬＣ１的ＶＨ基因中的ＶＨ基因片段隶属于抗体重链第５个家族，其ＶＬ基因中的ＶＬ基因片段隶属于抗体轻链的Ｖκ２１家族。     

单克隆抗体3D3重链可变区基因结构分析

单克隆抗体（ＭｃＡｂ）在科研及影像诊断等领域应用十分广泛，鼠源性单克隆抗体，由于其抗原性，在人体疾病治疗应用受到限制，利用ＤＮＡ重组技术，构建各种重组抗体基因，表达制备重组抗体，可降低其抗原性，前提是必须获得其可变区基因，我们利用设计合成的一对鼠抗体...     

具有GPX活性的单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

目的利用分泌具有GPX活性的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞3G5,克隆其mAb体的可变区基因。方法提取杂交瘤细胞的总RNA ,分离mRNA ,反转录合成cDNA。经PCR扩增VH 基因和VL 基因 ,将VH 基因和VL基因与载体 pGEM T连接后 ,进行酶切鉴定和序列分析。结果构建了2个分别含有VH 和VL 基因的重组质粒。序列分析表明 ,VH 和VL 分别属于mouscheavychainsubgroupIII和mouselightchainsubgroupV亚群 ,长度为372和324bp ,编码124和108个氨基酸 ,在高变区分别有4和2个丝氨酸。结论克隆的VH 和VL 基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征 ,为将来制备具有GPX活性的单链抗体提供了可靠的基因材料。     

肝癌特异性单克隆抗体HAb18可变区基因的克隆和序列测定

鉴于基因工程抗体具有分子小、免疫原性低，不被细胞受体结合，在体内成象定位检查时本底低，图像清晰，能进入实体瘤周围微循环，在治疗实体瘤时较完整抗体分子的效能高等优点。我们从肝癌特异性ｍＡｂＨＡｂ１８中克隆了其轻、重链可变区基因，并测定了其核苷酸序列，为...     

抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在成功制备小鼠抗人IL-13Rα2高亲和力单克隆抗体(mAb)的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人IL-13Rα2 mAb杂交瘤细胞LX147-7中提取总RNA,以此为模板反转录获得cDNA,用针对小鼠mAb重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应。将PCR产物连入克隆载体,经筛选阳性克隆,PCR和酶切鉴定正确后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因。结论:获得了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因序列,为构建相关基因工程抗体打下了良好基础。     

抗—HEV单克隆抗体B4C重链可变区基因的克隆及初步表达

抗－ＨＥＶ８７Ａ株单克隆抗体（ｍＡｂ）Ｂ４Ｃ的经体外研究鉴定，证实对我国暴发和散发性ＨＥＶ毒株有很高的特异性。为从分子水平上了解ｍＡｂＢ４Ｃ，我们利用基因工程技术，从杂交瘤细胞系中克隆出了重链可变区基因，并对其全部核苷酸序列进行了分析，可能属于小鼠免疫球蛋白重链Ｉ亚组，将ＶｎｃＤＮＡ克隆到高效表达载体ｐＱＥ－３１中，经ＩＰＴＧ诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，可见１条Ｍｒ的１６０００左右的表达带，表达产     

抗BAFF单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在本实验室成功制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人BAFF单克隆抗体杂交瘤细胞FMMUB4中提取总RNA,以此为模版反转录成cDNA,用针对小鼠单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应,PCR产物连接入载体,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因,测序结果证实序列正确。结论:获得了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因序列,为下一步构建相关基因工程抗体打下良好基础。     

9.1C3单克隆抗体轻,重链可变区基因克隆及序列分析

９．１Ｃ３分子是一种参与ＮＫ、巨噬细胞及ＬＡＫ细胞杀伤过程的重要细胞表面分子，主要表达于外周血单个核细胞表面。本文运用分子生物学技术，从分泌９．１Ｃ３ＭＣＡｂ的杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，经反转录、ＰＣＲ分另１１分离了９．１Ｃ３ＭｃＡｂ轻链可变区（ＶＬ）基因及重链可变区（ＶＨ）基因，并用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ基因序列进行了分析。结果表明：９．１Ｃ３ＶＨ基因为３５１ｂＰ，编码１１７ａａ残基，９．１３ＶＬ为３２４ｂＰ，编码１０８ａａ残基；从推导出的氨基酸序列分析证实９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ序列均符合小鼠ｌｇ可变区的氨基酸序列特征；根据Ｋａｂｂａｔ分类体系，９．１Ｃ３ＶＨ隶属Ｉｇ重链第Ⅱ（Ｃ）亚组，９．１Ｃ３ＶＬ隶属小鼠ＩｇＫ链第Ⅴ亚组。９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ基因的克隆成功为其单链抗体的构建、表达奠定了良好的物质基础。     

HLA—A2单抗轻链可变区基因的克隆及其序列分析

以ＨＬＡ－２单抗ｍＲＮＡ为模板，设计了３对特异性引物，采用ＰＣＲ技术，扩增和克隆出单以链可变区基因并应用双脱氧链式终止法及计算机基因文库测定和分析了其氨基酸和核苷酸序列。结果证明，本组单抗轻链由不同的基因家族编码。     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体重链可变区DNA的克隆及序列…

作者从分泌具有高中和活性和高保护作用的抗ＨＳＶ型共同性糖蛋白Ｃ的鼠源性单抗的杂交瘤细胞１Ａ１２／４Ｄ５中提取ＲＮＡ、逆转录成ｃＤＮＡ。用合成的寡核苷酸引物从中扩增了抗体的重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑取两个阳性克隆进行核苷酸序列分析，见所克隆基因确可编码小鼠抗体的重链可变区。     

抗-HEV单克隆抗体B4C重链可变区基因的克隆及初步表达

抗-HEV87A株单克隆抗体（mAb）B4C经体外研究鉴定,证实对我国暴发和散发性HEV毒株有很高的特异性。为从分子水平上了解mAbB4C,我们利用基因工程技术,从杂交瘤细胞系中克隆出了重链可变区基因,并对其全部核苷酸序列进行了分析,可能属于小鼠免疫球蛋白重链IA亚组。将VHcDNA克隆到高效表达载体pQE－31中,经IPTG诱导,SDS－PAGE分析,可见1条Mr为16000左右的表达带,表达产物占菌体总蛋白的29．3％,主要以包涵体形式存在。     

鼠抗hTNF—α单克隆抗体重链基因片段的克隆和cDNA序列测定

采用反转录ＰＣＲ方法，以一对锚ＰＣＲ引物和一对针对鼠ＩｇＶＨ区基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中，分别扩增和克隆了自５′非翻译区至Ｃγ１近３′端的重链基因片段和重链可变区基因片段，并测定了其核苷酸序列。计算机分析表明，系重排的鼠Ｉｇ重链基因。     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体重链可变区DNA的克隆及序列分析

作者从分泌具有高中和活性和高保护作用的抗ＨＳＶ型共同性糖蛋白Ｃ的鼠源性单抗的杂交瘤细胞１Ａ１２／４Ｄ５中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ。用合成的寡核苷酸引物从中扩增了抗体的重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑取两个阳性克隆进行核苷酸序列分析，见所克隆基因确可编码小鼠抗体的重链可变区。