间充质干细胞在新型冠状病毒肺炎治疗中的作用

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)是由新型冠状病毒(severe acute re-spiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)感染引起的以肺为主要靶器官的全身多器官损伤性传染性疾病[1-2].其病理生理机制涉及炎症、缺氧、发热、电解质平衡紊乱、休克等多个基本病理过程[3].免疫细胞过度活化、细胞因子风暴、过度氧化应激可能是COVID-19引起急性呼吸窘迫症状(acute respiratory distress syndrome,ARDS)、脓毒症休克及多器官功能衰竭并导致死亡的主要原因[4-6].截至2021-07-28日,全球累计COVID19确诊病例超过194608040例,死亡逾4162304例,严重影响了各国人民的身心健康.《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第八版)》对COVID-19临床分型主要有四型:轻型、普通型、重型和危重型[1].轻型和普通型的致死率相对较低,重型和危重型致死率较高,是临床治疗的重点[7].     

人脐带间充质干细胞治疗放射性肺损伤的研究

目的探讨分离、培养、标记人脐带间充质干细胞（u-MSCs）的方法及其对放射性肺损伤的治疗作用。方法无菌取得健康孕妇并剖宫产胎儿的脐带,按照贴壁培养法分离培养获取第三代u-MSCs,并用BrdU标记。将大鼠随机分为对照组（A组）、单纯照射组（B组）、u-MSCs治疗组（C组）,利用细胞培养技术检测u-MSCs对放射性肺损伤的治疗作用,对比检测各组大鼠TNF-a的含量,肺组织的病理改变。结果可通过贴壁培养法从人脐带分离、培养生长状态良好的u-MSCs,且这些细胞更为原始,更为年轻。BrdU是u-MSCs的良好标记物,阳性标记部位在细胞核,成功率较高。与A组比较,B组肺泡腔内有渗出,间隔增宽,有纤维化样变,血浆TNF-a水平显著增高。与B组比较,C组肺泡间隔增宽不明显,未见纤维化样改变,TNF-a水平在各时相均低于B组,肺组织损伤程度较B组明显改善。结论从人脐带可以分离、培养出生长状态良好的u-MSCs。经尾静脉注射u-MSCs后对放射性肺损伤有一定的保护作用。     

间充质干细胞治疗新型冠状病毒肺炎的研究现状

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)大流行正在全球迅速和持续蔓延,对人类生命健康造成了极大威胁,亟需寻找安全有效的治疗手段.间充质干细胞(MSC)具有强大的免疫调节和抗炎功能,可通过调节免疫细胞的功能、降低炎症因子分泌水平、升高抗炎因子水平以及分泌多种细胞生长因子等方式,来减轻...     

人脐带间充质干细胞过敏性试验

目的：观察人脐带间充质干细胞对豚鼠的过敏性反应,为临床使用人脐带间充质干细胞的安全性提供参考。方法：培养扩增人脐带来源的间充质干细胞,制备成细胞生理盐水混悬液。将30只豚鼠分成3组,分别是模型1组、模型2组和对照组。2个模型组隔日肌注细胞生理盐水混悬液3次,实验1组于首次注射后第14天,实验2组于首次注射后第21天分别静脉注射混悬液进行攻击。观察动物有无过敏反应症状。结果：动物无明显过敏反应症状,反应级数为0级。结论：人脐带间充质干细胞免疫原性低,不易导致过敏反应。     

人脐带间充质干细胞在临床治疗中的研究进展

人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)是指存在于新生儿脐带中的一种多功能干细胞,其具有自我更新及多向分化潜能。与其他组织来源的干细胞相比,hUCMSCs具有来源丰富、易于分离、生物学形状稳定、增殖率高、低免疫原性和不违背伦理道德等优点,被认为是再生医学领域中一种具有广泛临床应用前景的细胞。经过多年来的大量研究和实验后,hUCMSCs被应用于人类临床疾病的治疗,且取得了不错的成效,为临床疾病的治疗提供了新思路。     

人脐带间充质干细胞在帕金森病的应用进展

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种复杂的神经系统疾病,其典型病理特征为与黑质多巴胺能(DA)神经元丢失有关的运动系统功能受损.目前尚无有效的治疗方法逆转DA神经元的进行性损失阻止PD的恶化.近年来,干细胞移植意逐渐被临床用于治疗神经退行性疾病,包括间充质干细胞(mesenchvmal ste...     

不同途径移植人脐带间充质干细胞治疗糖尿病大鼠

目的观察不同途径移植人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对糖尿病大鼠的治疗效果。方法 60只SD大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素(70 mg.kg-1)建立糖尿病模型,成模后随机分为糖尿病模型组、胰腺被膜下移植组、肾被膜下移植组及肝实质内移植组,每组14只;另取10只大鼠为正常对照组。分别于各干细胞移植组大鼠胰腺被膜下、左肾被膜下、肝实质内注射0.5 mL hUCMSCs悬液(1×106个);糖尿病模型组及正常对照组于胰腺被膜下注射生理盐水0.5 mL。移植后动态观察空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、体质量变化,6周后处死大鼠,取相关组织行病理学检查及胰岛素、胰十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)、巢蛋白mRNA表达测定。结果移植前各组大鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);各干细胞移植组及糖尿病模型组大鼠FBG值高于正常对照组(P<0.05),FINS水平低于正常对照组(P<0.05);各干细胞移植组及糖尿病模型组大鼠FBG和FINS水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。移植5周末,与正常对照组比较,各干细胞移植组及糖尿病模型组大鼠体质量及FINS降低,FBG增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病模型组比较,各干细胞移植组大鼠体质量及FINS升高,FBG降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与胰腺被膜下移植组比较,肾被膜下及肝实质内移植组大鼠体质量降低,FBG升高,FINS水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比,各实验组大鼠平均阳性染色面积均降低(P<0.05);胰腺被膜下移植组阳性染色面积大于糖尿病模型组(P<0.05);所有组织切片均未检测到人胰岛素的表达。与正常对照组比较,胰腺被膜下移植组、糖尿病模型组大鼠胰岛素mRNA表达量均降低(P<0.05),大鼠PDX-1及巢蛋白mRNA表达量均增高(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,胰腺被膜下移植组大鼠胰岛素、PDX-1及巢蛋白mRNA表达量均增高(P<0.05)。各实验组均未检测到人胰岛素、PDX-1及巢蛋白mRNA表达。结论不同移植途径对hUCM-SCs治疗糖尿病的效果有影响,胰腺被膜下移植效果优于其他途径。hUCMSCs并未分化为β细胞,但其能够促进内源性胰腺干细胞增殖、分化。     

人脐带间充质干细胞治疗失代偿期肝硬化的疗效观察

目的 观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)治疗失代偿期肝硬化患者的疗效.方法 24例肝硬化失代偿期患者,经HUC-MSCs移植,于移植前、移植后1、2、4、8、12周检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBiL)、凝血酶原时间(PT)和白蛋白(ALB)平.于移植前、移植后8、12周分别行CT检查,观察临床症状改善情况及不良反应.结果 移植后2周各项肝功能指标无显著变化(P>0.05);移植后4周,ALT由(106±18)IU/L降至(82±12)IU/L,AST由(121±23)IU/L至(87±14)IU/L,较移植前明显改善(P<0.05),其余指标无明显改善;移植后8周各项肝功能指标均有改善(P<0.05).12周有显著改善(P<0.01).临床症状随时间进展逐步改善且无不良反应.肝脏最大横截面积改善(P<0.05),但肝脏CT值无显著变化(P>0.05).结论 HUC-MSCs移植可显著改善失代偿期肝硬化患者肝功能及临床症状,并能促进肝脏修复.     

人脐带间充质干细胞治疗失代偿期肝硬化的早期疗效

目的:探究人脐带间充质干细胞治疗失代偿期肝硬化的早期治疗效果,为失代偿期肝硬化的治疗提供新的方向。方法:选取2014年5月1日~2015年5月31日诊断为失代偿期肝硬化患者90例,随机分为试验组(45例)和对照组(45例),试验组应用外周静脉注入脐带间充质干细胞+常规治疗方案,对照组应用常规治疗方案,观察两组患者在治疗第0周、4周、8周后的临床表现、体征指标。结果:两组患者在1~3周内水肿、乏力、尿少等症状有所缓解,4~8周内症状持续好转,其中试验组在第8周后肝功能合成指标(ALB)较治疗前具有明显的改善(P<0.05),对照组治疗前后效果不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组干细胞治疗期间,安全且无不良反应出现。结论:人脐带间充质干细胞治疗失代偿期肝硬化具有良好的治疗效果,可明显改善失代偿期肝硬化患者白蛋白、凝血酶原的功能,在临床值得推广应用。     

人脐带间充质干细胞移植治疗小鼠慢性输卵管炎

摘 要： 【目的】 观察人脐带间充质干细胞（ｈＵＣ－ＭＳＣ）移植对小鼠慢性输卵管炎的治疗作用,为慢性输卵管炎的临床治疗提供新策略。【方法】 从脐带中分离培养人脐带间充质干细胞,流式细胞术鉴定其免疫表型,并诱导成脂、成骨分化验证其多向分化潜能。通过阴道内接种沙眼衣原体建立小鼠输卵管炎模型,感染后４周随机分成ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组及对照组。ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组小鼠阴道内接种人脐带间充质干细胞,对照组小鼠阴道内注射等体积ＰＢＳ。感染后８周,观察小鼠输卵管有无阻塞、积水等慢性输卵管炎表现,病理切片观察组织形态学改变。【结果】分离培养的人脐带间充质干细胞符合间充质干细胞的一般生物学特性。感染后８周,对照组小鼠均出现输卵管阻塞、积水等慢性输卵管炎表现,而ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组仅２例出现输卵管阻塞及积水,对照组小鼠慢性输卵管炎的发生率明显高于ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组,差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０１）。ｈＵＣ－ＭＳＣ移植组输卵管病理切片显示,输卵管周围炎症细胞浸润较少。【结论】 ｈＵＣ－ＭＳＣ移植可明显减少小鼠慢性输卵管炎的发生和减轻其炎症程度,有可能为输卵管性不孕的临床治疗提供新的途径。     

人脐带间充质干细胞治疗IgA肾病模型小鼠后VEGF的表达变化

目的研究IgA肾病模型小鼠经人脐带间充质干细胞治疗后VEGF的表达变化,从而探讨人脐带间充质干细胞对IgA肾病的治疗机制。方法 SPF级雄性昆明小鼠60只,按随机数字法随机分为空白组、阴性对照组和人脐带间充质干细胞治疗组。利用牛血清白蛋白灌胃和皮下注射CCl4并联合应用脂多糖的复合方法造出小鼠IgA肾病模型。10周造模成功,尾静脉注射人脐带间充质干细胞,于第7、21、56天处死小鼠取材,做HE染色,免疫组化检测VEGF。结果 15只小鼠出现镜下血尿,25只小鼠肉眼血尿;人脐带间充质干细胞治疗后,免疫组化观察VEGF表达增强。结论人脐带间充质干细胞注入IgA肾病小鼠模型后,可以通过VEGF的表达增强来促使新生血管生成,修复受损肾小球系膜组织,使IgA肾病的一系列症状得到改善。     

人脐带间充质干细胞治疗IgA肾病模型小鼠后VEGF的表达变化

目的研究IgA肾病模型小鼠经人脐带间充质干细胞治疗后VEGF的表达变化,从而探讨人脐带间充质干细胞对IgA肾病的治疗机制。方法 SPF级雄性昆明小鼠60只,按随机数字法随机分为空白组、阴性对照组和人脐带间充质干细胞治疗组。利用牛血清白蛋白灌胃和皮下注射CCl4并联合应用脂多糖的复合方法造出小鼠IgA肾病模型。10周造模成功,尾静脉注射人脐带间充质干细胞,于第7、21、56天处死小鼠取材,做HE染色,免疫组化检测VEGF。结果 15只小鼠出现镜下血尿,25只小鼠肉眼血尿;人脐带间充质干细胞治疗后,免疫组化观察VEGF表达增强。结论人脐带间充质干细胞注入IgA肾病小鼠模型后,可以通过VEGF的表达增强来促使新生血管生成,修复受损肾小球系膜组织,使IgA肾病的一系列症状得到改善。     

人脐带间充质干细胞分离扩增方法的优化

【目的】 探究一种高效稳定分离、扩增人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）的方法。【方法】取材脐带20条,获得Wharton’s Jelly组织,分别用酶联合消化法（12例）和酶序贯消化法（8例）来分离、提取hUC-MSCs,比较两种方法分离hUC-MSCs的成功率、原代培养时间及获得的细胞数量;利用低糖DMEM（LG-DMEM）完全培养基和LD-Mesen培养基（MesenPro RSTM与LG-DMEM的混合培养基）分别培养hUC-MSCs,比较两种培养体系的扩增效率。对所获取细胞的免疫表型以流式细胞术进行鉴定,并诱导成脂、成骨分化验证其多向分化潜能。【结果】 酶联合消化法和酶序贯消化法成功率分别为100%（12/12）和12.5%（1/8）,二者相比有显著统计学差异（P=1.03×10-4）,前者原代培养平均时间为（14.17±1.14）d,获得细胞（1.30±0.14）×106个。2×105个hUC-MSCs用LD-Mesen和LG-DMEM两种体系培养12d后,扩增所得的细胞数分别为(14.86±0.08)×106和(5.08±0.08)×106,二者有显著统计学差异（P=1.38×10-8)。hUC-MSCs高表达CD73、CD105、CD90、CD29、CD44,不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR;并可向成骨细胞及脂肪细胞诱导分化。【结论】 酶联合消化Wharton’s Jelly组织并以LD-Mesen体系进行扩增可高效获取hUC-MSCs,效率明显优于传统方法。     

人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性

目的探讨C57/BL6J小鼠重复多次尾静脉输注人脐带间充质干细胞后的免疫反应和毒性。方法将SPF级别的32只C57/BL6J小鼠随机分为阴性对照组、细胞移植组,每组16只,雌雄各半,细胞移植组小鼠尾静脉注射分离培养的第5代人脐带间充质干细胞,一次5×106/只,每周注射一次,连续注射4周;阴性对照组每次注射相同容积的PBS。注射后后观察小鼠的一般症状,末次注射后1周、4周进行血细胞计数、血生化、免疫反应指标、脏器质量测定和组织病理学检查。结果细胞移植组小鼠血细胞计数、血生化、脏器重量和脏器系数与对照组无显著性差异(P>0.05),脏器组织病理学在光镜下检查结果与对照组无形态学差别,以及免疫结果测定(T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论人脐带间充质干细胞重复多次尾静脉输注C57/BL6J小鼠是安全可行的,对受者无明显免疫反应和毒副作用。     

人脐带间充质干细胞移植联合高压氧治疗外伤性癫痫的临床研究

目的探讨人脐带间充质干细胞移植联合高压氧治疗外伤性癫痫的临床疗效和安全性。方法选取我院收治的48例外伤性癫痫患者,应用随机数字表法分成联合治疗组和单一治疗组,每组各24例。联合治疗组采用人脐带间充质干细胞移植联合高压氧治疗方案,单一治疗组采用高压氧治疗方案。观察并分析两组患者的临床疗效及安全性。结果两组患者经过不同的治疗方案治疗后,联合治疗组的疗效(95.83%)较单一治疗组疗效好(33.33%),安全性高,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论人脐带间充质干细胞移植联合高压氧治疗外伤性癫痫临床疗效较好,安全性高,值得临床推广应用。     

人脐带间充质干细胞在软骨组织工程中的应用

目的人脐带间充质干细胞是一成体干细胞,其具有自我更新及多向分化潜能的特点,而且对供者没有影响,所以具有丰富的来源。它还具有以下优点,如采集和运输方便,无异体排斥反应,无伦理争议等,在体外可成功诱导分化成软骨细胞,是软骨组织工程中理想的种子细胞。     

人脐带间充质干细胞治疗小鼠急性肺损伤的安全性及有效性研究

目的 探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)治疗脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠模型的安全性及有效性。方法 通过致瘤性实验、体外溶血实验、急性毒性实验评价HUC-MSCs安全性。以6～8周龄C57BL/6雄性小鼠为实验对象,使用LPS滴鼻或腹腔注射构建急性肺损伤模型。造模后6 h给予HUC-MSCs治疗,将治疗组分为：尾静脉注射组(5×10⁷ cells/kg)、雾化组(HUC-MSCs条件培养基)。造模后96 h观察各组小鼠肺组织病理结果,瑞氏-姬姆萨染色法观察小鼠肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞计数和分类。结果 HUC-MSCs无致瘤性、无明显溶血反应,无急性毒性。与对照组相比,两种造模方法均出现一定程度的肺损伤,肺组织病理切片McGuigan评分结果显示腹腔注射LPS引起的肺损伤较滴鼻组严重。与模型组相比,治疗组肺组织损伤程度明显减轻,其中尾静脉注射组治疗效果优于雾化组,BALF中巨噬细胞数明显升高(P<0.001)。结论 LPS腹腔注射诱导的小鼠急性肺损伤模型优于滴鼻给药。尾静脉注射人脐带间充质干细胞可有效治疗小鼠急性肺损伤,使用HUC-MSC...     

IGFBP7促进人脐带间充质干细胞的软骨分化

目的：探究胰岛素样生长因子结合蛋白7（insulin?like growth factor?binding protein 7,IGFBP7）对人脐带间充质干细胞（human umbilical cord?derived mesenchymal stem cells,hUC?MSCs）软骨分化的影响。方法：用软骨诱导培养基高密度成球培养hUC?MSCs,诱导成软骨分化,通过real?time PCR和Western blot检测软骨分化标志基因Sox9的表达,甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖的表达,以反映细胞外基质沉积情况;real?time PCR和Western blot检测IGFBP7在hUC?MSCs软骨分化过程中的表达情况;在hUC?MSCs中分别瞬时转染IGFBP7的表达质粒和siRNA以改变内源性IGFBP7表达水平,然后成软骨诱导,采用甲苯胺蓝染色,real?time PCR和Western blot检测IGFBP7表达变化对于hUC?MSCs成软骨分化的影响。结果：在hUC?MSCs成软骨分化过程中,IGFBP7 mRNA水平和蛋白水平表达均显著升高。与对照组相比,过表达IGFBP7的hUC?MSCs经成软骨诱导后,Sox9表达量显著升高,甲苯胺蓝染色更深,软骨分化能力更强。反之,敲低IGFBP7表达后,hUC?MSCs的软骨分化能力降低。结论：IGFBP7促进人脐带间充质干细胞成软骨分化。     

BHA诱导人脐带间充质干细胞分化为神经细胞

目的:探讨丁基羟基茴香醚(BHA)能否将人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)诱导分化为神经细胞.方法:正常培养的第4代hUC-MSCs利用200 μmol·L-1 BHA加2 mmol·L-1巯基乙醇(β-ME)进行诱导.每12 h观察细胞形态变化,并于诱导后24和72 h收集细胞,提取RNA,RT-PCR检测基因表达情况,于第3天进行免疫荧光染色.结果:诱导12 h后即有少量细胞发生形态变化,随着时间的推移变化越来越明显,72 h时绝大部分细胞都已变成神经细胞形态.免疫荧光染色nestin、GFAP及NSE阳性.RT-PCR检测诱导后24 h开始有nestin、MAP及NF-L表达,72 h后nestin和NF-L表达减少,MAP表达增强,同时NeuroD1也有较强表达,表明此时已分化为成熟的神经元细胞.结论:BHA能快速地将hUC-MSCs诱导分化为神经细胞.