miR-876靶向Pax6抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-876靶向Pax6对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 采用RT-qPCR检测胃癌组织与癌旁组织中miR-876和Pax6的表达水平,分析miR-876表达与胃癌患者临床指标的关系。检测胃上皮细胞GES-1以及胃癌细胞MGC-803、BGC-823、SGC-7901中miR-876的表达水平。将MGC-803细胞分为对照组、miR-876 mimic组、mimic-NC组和miR-876 mimic+pcDNA-3.1-Pax6组,采用RT-qPCR和Western blotting检测各组细胞中miR-876以及Pax6的mRNA和蛋白表达水平;MTT检测各组细胞增殖情况;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭情况;双荧光素酶实验验证miR-876与Pax6的靶向关系。结果 与癌旁组织相比,miR-876在胃癌组织中低表达（t=13.962, P<0.05）,而Pax6 mRNA和蛋白在胃癌组织中均呈高表达（t=23.368, 13.757; P<0.05）,且两者呈负相关（r=-0.434, P<0.05）。miR-876低表达与胃癌患者TNM分期（χ²=12.000, P<0.05）和淋巴结转移（χ²=15.705, P<0.05）有关。细胞实验发现,miR-876在胃癌细胞系MGC-803、BGC-823、SGC-7901中均低表达（P<0.05）;转染miR-876 mimic后,miR-876表达水平显著升高,细胞增殖能力减弱,迁移和侵袭能力均受到抑制（P<0.05）。双荧光素酶实验结果表明：miR-876能够靶向结合Pax6。与mimic-NC组比,miR-876 mimic组Pax6 mRNA和蛋白表达水平显著下降（P<0.05）;与miR-876 mimic组比,miR-876 mimic+pcDNA-3.1-Pax6组细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著提高（P<0.05）。结论 miR-876靶向Pax6可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖、侵袭和迁移。     

敲减MCCC2对前列腺癌细胞系DU145增殖、迁移和凋亡的影响

目的 应用慢病毒载体shRNA对DU145细胞中的3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶β亚基编码基因（3-methylcrotonyl-coenzyme A carboxylase 2,MCCC2）进行敲减,探究MCCC2对前列腺癌细胞生物学功能改变的影响。方法 研究分为3组进行,其中shNC为未敲减MCCC2的DU145细胞对照组,shMCCC2为敲减MCCC2的DU145细胞实验组,DU145为未作任何处理的空白组。运用Western blot和qPCR检测DU145细胞系慢病毒shRNA敲减MCCC2后的表达,CCK8法检测敲减MCCC2对DU145细胞增殖的影响;Transwell检测敲减MCCC2对DU145细胞迁移的影响;流式细胞术检测敲减MCCC2对DU145细胞凋亡的影响。结果 前列腺癌细胞系DU145经慢病毒shRNA敲减MCCC2后,shMCCC2组的MCCC2表达水平明显低于shNC组（0.22 ±0.02对0.61 ±0.06,P < 0.001）,shMCCC2组增殖（2.24 ±0.04对3.13 ±0.15）和迁移（23.96 ±1.85对49.73 ±0.63）均明显低于shNC组（P<0.001）、而shMCCC2组凋亡（12.64 ±0.30对3.68 ±0.02）明显高于shNC组（P<0.001）。结论 敲减MCCC2可显著抑制DU145细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡,提示MCCC2下调与DU145细胞系肿瘤生物学特性的改变具有一定相关性,有望成为前列腺癌的潜在治疗靶标。     

miR-578调控长链脂酰辅酶A合成酶4表达对胃癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨miR-578调控长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）对胃癌细胞增殖及侵袭的影响。方法 选取人胃癌细胞MKN-45、SNU-1、MKN-7、KTAO3、N87及人正常胃黏膜细胞GES-1为研究对象,将MKN-45细胞分为对照组、miR-578 NC组、miR-578 mimic组、miR-578 mimic+pc-ACSL4组,测定各组MKN-45细胞活力及凋亡、侵袭、迁移能力,测定细胞中miR-578、ACSL4、凋亡相关蛋白（Bax、Caspase-3、Bcl-2）、侵袭相关蛋白（MMP-9、MMP-2）的表达,验证miR-578与ACSL4的靶向关系。结果 miR-578在人胃癌细胞中低表达;与对照组相比,miR-578 mimic组MKN-45细胞活力、侵袭、迁移能力、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）;与miR-578 mimic组相比,miR-578 mimic+pc-ACSL4组MKN-45细胞活力、侵袭、迁移能力、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;荧光素酶实验结果显示,miR-578与ACSL4存在靶向调节关系。结论 miR-578可抑制人胃癌细胞MKN-45的增殖及迁移能力,可能是通过抑制ACSL4表达实现的。     

二甲双胍在结肠癌中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应

目的 探讨二甲双胍（MET）对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。方法 采用CCK-8、流式细胞术及Transwell检测MET对结肠癌细胞SW480和SW620增殖、凋亡及侵袭的影响,qRT-PCR检测5种lncRNA在结肠癌细胞中的表达,Western blotting检测MET和/或MALAT1基因敲减在体外对PI3K/AKT和ERK通路活性的影响。结果 MET在体外对SW480和SW620细胞具有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P<0.05）。MET可促进SW480和SW620细胞凋亡（P<0.05）。在5种lncRNA中,lncRNA-MALAT1在SW480和SW620细胞中的表达水平最高（P<0.01）。siRNA可抑制lncRNA-MALAT1表达,并进一步增强MET介导的抗结肠癌作用（P<0.05）。MET可下调结肠癌细胞中lncRNA-MALAT1的表达（P<0.05）,并通过PI3K/AKT和ERK信号通路与lncRNA-MALAT1敲减协同抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡（P<0.01）。结论 MET在结肠癌细胞中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应。     

藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞协同抑制作用的研究

目的 探索藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用及相关调控机制。方法 取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,设置空白对照组（DMSO）、藏红花素组（400 μg·mL^-1）、顺铂组（5 μg·mL^-1）、联合组（藏红花素400 μg·mL^-1+顺铂5 μg·mL^-1）。干预48 h后,CCK-8检测HeLa细胞增殖抑制率,采用CompuSyn软件计算藏红花素与顺铂的联合指数（CI）,Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting检测激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、周期蛋白依赖激酶2（CDK2）的表达。结果 与顺铂组比较,联合组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,CI为0.68,具有中度协同效应;细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,G₀/G₁期细胞比例显著升高（P<0.05）,而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.05）,Cyclin D1、CDK2蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与空白对照组比较,藏红花素组G₀/G₁期细胞比例显著升高而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.01）,Cyclin D1、CDK2表达水平显著降低（P<0.05）。结论 藏红花素联合顺铂可协同抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和生长,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白的表达从而促进细胞凋亡、阻滞细胞周期进程有关。     

黄腐酚对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的影响及其机制★

目的 探讨黄腐酚降低人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的机制。方法 将KOV3/DDP细胞分为卵巢癌组（无干扰）、10 μmol·L^-1黄腐酚组（10 μmol·L^-1黄腐酚培养）、20 μmol·L^-1黄腐酚组（20 μmol·L^-1黄腐酚培养）、40 μmol·L^-1黄腐酚组（40 μmol·L^-1黄腐酚培养）、80 μmol·L^-1黄腐酚组（80 μmol·L^-1黄腐酚培养）、160 μmol·L^-1黄腐酚组（160 μmol·L^-1黄腐酚培养）。采用CCK-8检测SKOV3/DDP细胞存活率；克隆形成实验检测SKOV3/DDP细胞克隆数目；流式细胞仪检测SKOV3/DDP细胞凋亡率；CCK-8检测黄腐酚对SKOV3/DDP细胞DDP耐药性的影响；免疫印迹检测SKOV3/DDP细胞中耐药蛋白ABCB1、MDR-1和P-gp的表达。结果 与卵巢癌组相比，10 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞存活率无明显变化（P>0.05）；与10 μmol·L^-1黄腐酚组相比，20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞存活率均显著降低（P<0.05）。卵巢癌组及10、20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞克隆数目分别为（86±12）、（82±10）、（61±11）、（46±9）、（29±11）及（20±7），组间比较，差异有统计学意义（F=43.270， P<0.001）。卵巢癌组及10、20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞凋亡率分别为（2.56±0.20）%、（3.20±0.36）%、（15.21±1.22）%、（26.30±1.60）%、（33.20±2.25）%及（45.63±2.10）%，组间比较，差异有统计学意义（F=775.200， P<0.001）。与DDP相比，DDP联合黄腐酚对SKOV3/DDP细胞的活性抑制率较高，差异有统计学意义（P<0.05）；与卵巢癌组相比，10 μmol·L^-1黄腐酚组ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达水平无显著差异（P>0.05）；与10 μmol·L^-1黄腐酚组相比，20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞中ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。结论 黄腐酚可降低卵巢癌SKOV3/DDP细胞的耐药性，抑制细胞活性，促进细胞凋亡，可能与下调ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达相关。     

miR-10b-5p通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性★

目的 探讨miR-10b-5p在乳腺癌细胞放疗敏感性中的作用及相关机制。方法 采用qPCR和Western blotting检测正常乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231中miR-10b-5p mRNA、SUFU mRNA和蛋白的表达。在MDA-MB-231细胞中转染miR-10b-5p inhibitor对miR-10b-5p进行敲减，6 Gy ⁶⁰Co γ-射线照射2 h，分别采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡水平；双荧光素酶报告实验验证靶基因SUFU，回补实验验证miR-10b-5p是否通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性。结果 3种乳腺癌细胞系中miR-10b-5p的表达均显著高于正常乳腺细胞MCF-10A（P<0.05）。与miR-NC组相比，miR-10b-5p inhibitor组细胞增殖水平明显下降（P<0.05），凋亡水平显著上升（P<0.05）。敲减miR-10b-5p可增加野生型SUFU 3''UTR的荧光强度（P<0.05），而对突变型SUFU 3''UTR的荧光强度无明显影响（P>0.05）。此外，miR-10b-5p inhibitor组SUFU蛋白表达水平显著高于miR-NC组（P<0.05）。与miR-NC+si-NC组相比，miR-10b-5p inhibitor+si-NC组细胞增殖水平显著降低（P<0.05），miR-10b-5p inhibitor+si-SUFU#2组细胞增殖水平明显回升，且高于miR-10b-5p inhibitor+si-NC组（P<0.05）。结论 乳腺癌细胞中miR-10b-5p呈高表达，敲减miR-10b-5p可增强乳腺癌细胞对放疗的敏感性，其机制可能与靶向抑制SUFU相关。     

氧化苦参碱通过下调miR-155-5p对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭作用

目的 探讨氧化苦参碱通过调节miR-155-5p表达对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭中的作用和其潜在机制。方法 使用TRIzol法提取组织标本和细胞系的总RNA,检测胃癌组织与癌旁组织中的miR-155-5p表达情况。采用qRT-PCR评估miR-155-5p在人胃癌细胞系（SGC7901、MGC803）与正常胃黏膜上皮（GES-1、AGS）细胞中的表达情况。将MGC803分为空白组、转染错义序列siRNA组、miR-155-5p模拟物组、miR-155-5p抑制剂组、氧化苦参碱（100 μmol/L）组、氧化苦参碱＋miR-155-5p模拟物组。采用MTT法观察不同干预下胃癌细胞的生长抑制作用,用细胞集落形成试验检测不同干预下胃癌细胞的增殖情况。用流式细胞技术分析不同干预对胃癌细胞凋亡的影响。Transwell法检测不同干预后胃癌细胞的迁移、侵袭情况。蛋白质印迹法检测MGC803细胞中Claudin 1、c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果 与癌旁组织和胃黏膜细胞（GES-1、AGS）相比,在胃癌组织和胃癌细胞系（SGC7901、MGC803）中miR-155-5p相对表达量升高（P＜0.001）。而氧化苦参碱通过调节miR-155-5p表达抑制胃癌细胞生长。MTT实验表明,miR-155-5p模拟物的转染后MGC803细胞活力显著增加,而氧化苦参碱可显著抑制胃癌细胞、转染和miR-155-5p模拟物的细胞活力（P＜0.001）。与空白组、错义序列siRNA组相比,miR-155-5p模拟物转染后MGC803细胞活力显著增加,细胞集落生成增加,而氧化苦参碱可显著抑制胃癌细胞的活力和转染miR-155-5p模拟物的细胞活力,及细胞集落生成数（P＜0.001）。miR-155-5p-模拟物组的细胞迁移和侵袭细胞数显著增加、凋亡比例降低,而氧化苦参碱组和miR-155-5p-抑制剂组细胞迁移和侵袭细胞数量降低、凋亡比例升高（P＜0.001）。miR-155-5p模拟组的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2相对表达量增加,而Caspase-3相对表达量降低（P＜0.01、0.001）。而miR-155-5p抑制剂组、氧化苦参碱组和氧化苦参碱＋miR-155-5p抑制剂组的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2表达较miR-155-5p模拟组显著下降,Caspase-3表达增加（P＜0.001）。结论 miR-155-5p可能是胃癌的治疗靶点,氧化苦参碱可通过miR-155-5p的调节作用发挥抗肿瘤作用。     

芹菜素对顺铂化疗所致肾损伤及Nrf2/HO-1通路的影响

目的 探索芹菜素（APG）对顺铂（DDP）化疗所致肾损伤大鼠的保护作用及机制研究。方法 将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氨磷汀组（阳性对照组）及APG低、中、高剂量组,每组10只。模型组、氨磷汀组及APG低、中、高剂量组大鼠均采用一次性腹腔注射DDP（7.5 mg·kg^-1）的方法建立DDP致肾损伤大鼠模型,空白组大鼠仅腹腔注射生理盐水（不造模）;然后分别腹腔注射给药（APG低、中、高剂量组分别给予10、20、40 mg·kg^-1 APG,氨磷汀组给予1 mg·kg^-1氨磷汀,空白组和模型组均给予生理盐水）,1次/d,连续给药28 d。测定各组大鼠24 h尿蛋白量和血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量,HE染色法、TUNEL法分别行肾脏病理学检查和细胞凋亡检测,生化分析法检测MDA含量和抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性,ELISA法检测炎症细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）水平,Western blotting检测核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、核因子-κB（NF-κB）、激活型半胱胺酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,APG中、高剂量组和氨磷汀组大鼠24 h尿蛋白量和血清Scr、BUN含量显著降低（P<0.05）,肾脏组织病理学改变和细胞凋亡状况明显改善,凋亡指数（AI）显著降低（P<0.01）,MDA含量显著降低且SOD、GSH-Px活性显著升高（P<0.05）,TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低（P<0.05）,Nrf2、HO-1表达显著上调而NF-κB、Cleaved Caspase-3表达显著下调（P<0.01）。与氨磷汀组比较,APG高剂量组大鼠血清Scr、BUN含量显著降低（P<0.05）,肾脏组织病理学改变和细胞凋亡状况明显改善、AI显著降低（P<0.01）,MDA含量显著降低且SOD活性显著升高（P<0.01）,TNF-α、IL-1β水平显著降低（P<0.05）,Nrf2、HO-1表达显著上调且Cleaved Caspase-3表达显著下调（P<0.05）。结论 APG对DDP所致肾损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1通路而抑制氧化应激损伤、炎症反应和细胞凋亡有关。     

miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 检测miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平,探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞MGC-803、SGC-7901、MKN-45和永生化胃上皮细胞GES-1中miR-1915-3p的相对表达水平;转染实验将miR-1915-3p质粒和对照质粒（miR-NC）转染至MGC-803和SGC-7901中,分别设置MGC-803细胞miR-1915-3p组和miR-NC组及SGC-7901细胞miR-1915-3p组和miR-NC组;细胞增殖实验和凋亡实验分别检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的光密度（OD）值和凋亡率;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的Bcl-2蛋白表达情况。结果 MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞中miR-1915-3p的相对表达水平分别为（0.46±0.06）、（0.42±0.05）、（0.33±0.04）,均低于GES-1细胞中miR-1915-3p的相对表达水平（P<0.05）。MGC-803细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）;SGC-7901细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）。结论 miR-1915-3p在胃癌细胞系中表达降低,上调miR-1915-3p的表达可抑制胃癌细胞增殖,减弱Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡。     

ALCAM基因1沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨活化白细胞黏附分子（ALCAM）基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法 将ALCAM 和对照 shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量（RT-PCR）技术和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况。采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响。结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA（1.01±0.26）和蛋白质的表达水平（1.66±0.23）低于对照 shRNA组细胞ALCAM mRNA（0.12±0.06）和蛋白质水平（0.23±0.09）,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照shRNA稳定细胞系比较,ALCAM shRNA 稳定细胞系细胞增殖活性下降（P<0.05）、凋亡水平升高（P<0.05）、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓（P<0.05）。ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B（AKT）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路。结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡。     

STAT-3及其相关蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 探讨STAT-3与Bcl-2在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 选择2015年1月—12月在我院接受切除手术的胃癌患者100例,收集其癌组织及对应的癌旁组织石蜡标本。采用免疫组织化学染色法检测标本中STAT-3和Bcl-2的表达,分析STAT-3和Bcl-2与临床病理特征的关系,分析STAT-3和Bcl-2对预后的影响。结果 STAT-3和Bcl-2在胃癌组织中的阳性率（73.00%、62.00%）均高于癌旁组织（12.00%、20.00%）,差异有统计学意义（P<0.001）。STAT-3的阳性表达与胃癌患者的侵袭深度、组织学分型、TNM分期及淋巴结转移有关（P<0.05）,与性别、年龄及肿瘤大小无关（P>0.05）;Bcl-2的阳性表达与胃癌患者的侵袭深度、TNM分期、淋巴结转移有关（P<0.05）,与性别、年龄、组织学分型、肿瘤大小无关（P>0.05）。STAT-3与Bcl-2在胃癌组织中的表达水平呈正相关（P<0.05）。STAT-3的阳性表达与胃癌患者的生存时间有关（P<0.05）,Bcl-2的阳性表达与胃癌患者的生存时间无关（P>0.05）。结论 STAT-3和Bcl-2在胃癌组织中均呈高表达,均与胃癌的发生和发展密切相关,检测其表达水平可为胃癌患者的病情评估、临床诊疗及预后提供一定的理论指导。     

胃癌组织中自噬相关蛋白与上皮间质转化的关系及意义★

目的 探讨胃癌组织中自噬蛋白微管相关蛋白轻链3B（LC3B）和上皮间质转化（EMT）标志物的表达及其临床意义。方法 随机选取2018年1月—2019年12月我院收治的胃癌患者术后癌组织110例和癌旁组织40例，采用免疫组织化学法检测LC3B、E-cadherin和vimentin的表达，并分析这些标志物与胃癌患者临床病理特征的关系。结果 与癌旁正常组织相比，胃癌组织中LC3B和vimentin蛋白表达水平显著升高，E-cadherin表达水平显著降低（P<0.05）；LC3B、E-cadherin和vimentin表达水平与肿瘤分化程度、T分期、TNM分期及淋巴结转移密切相关（P<0.05），与年龄、性别和肿瘤大小无关（P>0.05）；LC3B表达与vimentin呈正相关（r=0.320， P=0.001），与E-cadherin呈负相关（r=-0.484， P<0.001）。结论 胃癌组织中LC3B、vimentin表达上调，E-cadherin表达下调，且三者与肿瘤分化程度、T分期、TNM分期及淋巴结转移密切相关，可能作为预测胃癌的潜在生物标志物。     

Survivin、Bcl-2在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胃癌组织中Survivin、Bcl-2的表达及其与临床病理特征的关系。方法 收集2018年5月—2019年9月间我院收治的86例胃癌患者的癌组织及对应癌旁正常组织石蜡标本,采用免疫化学染色法检测标本中Survivin与Bcl-2的表达,分析Survivin与Bcl-2与胃癌临床病理特征的关系以及胃癌组织中Survivin与Bcl-2表达的相关性。结果 Survivin与Bcl-2在胃癌组织中的阳性率（80.23%、63.95%）显著高于癌旁正常组织（43.02%、20.93%）,差异均有统计学意义（P<0.001）。Survivin表达阳性与组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关（P<0.05）,而与性别、年龄、侵袭深度、肿瘤直径无关（P>0.05）。Bcl-2蛋白表达阳性与淋巴结转移有关（P<0.05）,而与性别、年龄、侵袭深度、组织分化程度、肿瘤直径及TNM分期无关（P>0.05）。Survivin与 Bcl-2共同阳性表达率为58.14%,共同阴性表达率为13.95%,二者在胃癌组织中的表达水平呈正相关（P<0.05）。Survivin与Bcl-2在胃癌组织中同时阳性表达的敏感度、特异度及Youden index均明显高于单项阳性表达（P<0.05）。Survivin与 Bcl-2在胃癌组织中同时阳性表达与单项阳性表达时,患者总生存期和无进展生存期的差异无统计学意义（P>0.05）。结论 Survivin与Bcl-2在胃癌组织中均呈高表达,均与胃癌的发生发展密切相关,检测其表达水平可为胃癌的临床诊断及治疗提供一定的指导依据,从而改善患者预后。     

RNAi沉默PCDGF基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学特性的影响

目的 研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子（PCDGF）表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell 小室检测细胞侵袭能力。结果 喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织（t=6.88,P=0.005）。PCDGF在喉鳞癌组织中高表达。PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）,Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组（P<0.05）,细胞增殖率显著低于空白对照组（P<0.05）,细胞侵袭数显著低与空白对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于空白对照组（P<0.05）。结论 抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡。     

EHD2与HER-2阳性乳腺癌细胞曲妥珠单抗敏感性的关系及作用机制

目的 研究EH结构域蛋白2（EHD2）对HER-2阳性乳腺癌细胞曲妥珠单抗（TZB）敏感性的影响及作用机制。方法 联合分析GEO、Kaplan-Meier plotter及TCGA数据库,筛选出与乳腺癌细胞TZB敏感性密切相关的基因EHD2。体外培养人乳腺癌细胞BT474,将其分为敏感组、抵抗组及干扰组,敏感组用PBS处理12周后转染PX459-Control载体,抵抗组用0.5、1、2、4、8、16 μg·mL^-1 TZB诱导12周后转染PX459-Control载体,干扰组用0.5、1、2、4、8、16 μg·mL^-1 TZB诱导12周后转染PX459-sgEHD2载体。CCK-8实验检测细胞的TZB半抑制浓度（IC₅₀）,实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测EHD2及其潜在下游基因血小板源性生长因子β受体（PDGFRβ）的表达。结果 GEO数据库显示,EHD2在TZB抵抗的乳腺癌细胞中表达显著上调（P<0.05）;Kaplan-Meier plotter数据库分析发现,EHD2高表达与HER-2阳性乳腺癌患者预后不良显著相关（P<0.05）,与HER-2阴性乳腺癌患者生存时间延长显著相关（P<0.05）;TCGA数据库分析显示,乳腺癌组织中EHD2与PDGFRβ表达水平呈正相关（P<0.01）。与敏感组比较,抵抗组与干扰组TZB的IC₅₀显著升高,抵抗组EHD2、PDGFRβ的表达均显著上调,干扰组EHD2表达显著下调,PDGFRβ表达显著上调,差异均有统计学意义（P<0.05）;与抵抗组比较,干扰组TZB的IC₅₀显著降低,EHD2、PDGFRβ的表达均显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 EHD2可促进HER-2阳性乳腺癌细胞的TZB抵抗,其机制可能与上调PDGFRβ表达有关。     

来氟米特通过调节miR-449a在肺纤维化中的机制研究

目的 探究来氟米特（leflunomide,LEF）通过调节微小RNA（microRNA,miR）-449a在肺纤维化中的机制研究。方法 将人肺成纤维细胞MRC-5分为6组,即对照组、LEF组、LEF+mimic组、mimic组、LEF+inhibitor组和inhibitor组。通过质粒转染miR-449a mimic或inhibitor来过表达或沉默miR-449a,在5 mg/L LEF的条件下培养48 h。分别通过CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞活力、细胞增殖能力和凋亡率。使用免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白（α smooth muscle actin,α-SMA）胶质蛋白I（collagen I,col I）。分别使用qPCR和Western blot检测miRNA和蛋白的水平。结果 mimic组miR-449a水平显著高于对照组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的miR-449a水平显著低于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的miR-449a的表达水平显著高于LEF组,LEF+inhibitor组的miR-449a水平显著低于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的细胞活力和细胞增殖能力显著高于对照组（P<0.05）。mimic组的细胞活力和细胞增殖能力显著低于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的细胞活力和细胞增殖能力显著低于LEF组而LEF+inhibitor组的细胞活力显著高于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的细胞凋亡率低于对照组（P<0.05）,mimic组的细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的细胞凋亡率显著高于LEF组而LEF+inhibitor组的凋亡率显著低于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的α-SMA和Col I蛋白的荧光强度显著高于对照组（P<0.05）,mimic组的相对荧光强度低于对照组（P<0.05）。LEF+mimic组的α-SMA和Col I蛋白相对荧光强度显著低于LEF组,LEF+inhibitor组的α-SMA和Col I蛋白相对荧光强度显著高于LEF组（P<0.05）。LEF组和inhibitor组的p-JNK/JNK水平高于对照组（P<0.05）,mimic组的p-JNK/JNK水平显著低于对照组（P<0.05）,LEF+mimic组中p-JNK/JNK水平显著低于LEF组而LEF+inhibitor组的p-JNK/JNK水平显著高于LEF组（P<0.05）。结论 LEF可能通过抑制肺成纤维细胞中miR-449a的表达激活JNK途径,从而诱导成纤维细胞的活化和增殖,抑制其凋亡,从而引起肺纤维化。     

白细胞介素1β对结直肠癌细胞HCT116迁移能力和上皮-间质转化的影响

目的 研究白细胞介素1β（IL-1β）诱导结直肠癌细胞HCT116转移的分子机制。方法 HCT116细胞分为空白对照组（不进行任何处理）,IL-1β处理组（加入200 pmol/L IL-1β处理）,干扰阴性对照+IL-1β处理组（转染阴性干扰对照再加入IL-1β处理）,干扰锌指绑定增强蛋白1（ZEB1）+IL-1β处理组（转染ZEB1干扰RNA）。使用Transwell迁移实验研究各组细胞的迁移能力。荧光定量聚合酶监链式反应（PCR）检测各组细胞中E-cadherin和ZEB1基因的表达。免疫印迹实验检测各组细胞E-cadherin和ZEB1蛋白的表达。结果 空白对照组穿过Transwell小室的细胞数量为（58.3±7.2）个,IL-1β处理组为（129.6±12.1）个,差异有统计学意义（P<0.05）;干扰阴性对照+IL-1β处理组穿过Transwell小室的细胞数量为（108.7±15.9）个,干扰ZEB1+IL-1β处理组为（68.2±11.4）个,差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组HCT116细胞中E-cadherin基因的相对表达量、E-cadherin蛋白相对灰度值均高于IL-1β处理组,差异均有统计学意义（P<0.05）;干扰阴性对照+IL-1β处理组HCT116细胞中E-cadherin基因的相对表达量、E-cadherin蛋白相对灰度值均低于干扰ZEB1+IL-1β处理组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-1β通过诱导ZEB1表达促进结直肠癌细胞HCT116发生EMT转化并提高其迁移能力。     

β-榄香烯对人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤放疗增敏作用的研究★

目的 建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤模型，用增敏剂量的β-榄香烯联合放疗对移植瘤进行干预，探讨放疗增敏机制是否与抑制葡萄糖转运蛋白1（GLUT-1）表达有关。方法 采用细胞悬液接种法建立裸鼠移植瘤模型，将肿瘤体积达到75 mm³左右的20只裸鼠随机分为空白对照组（NS组）、β-榄香烯单药组（ELE组）、β-榄香烯联合放疗组（ELE+RAD组）和单纯放疗组（RAD组）。监测干预后各组裸鼠肿瘤体积的变化，获得各组裸鼠的肿瘤生长曲线。通过计算增敏系数，检测45 mg·kg^-1 β-榄香烯是否发挥增敏作用，采用Real-Time PCR、Western blotting及免疫组化染色检测各组移植瘤中GLUT-1的表达水平。结果 成功建立A549细胞株裸鼠移植瘤模型，依据各组移植瘤体积变化绘制生长曲线。测得增敏系数（EF）为2.44，提示β-榄香烯的剂量已达到增敏效果。与NS组相比，实验组移植瘤GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）；ELE组与RAD组GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平无显著差异（P>0.05）；与ELE组、RAD组相比，ELE+RAD组GLUT-1 mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。免疫组化结果显示，与NS组比较，实验组GLUT-1的表达均被显著抑制（P<0.05）；其中ELE组和RAD组GLUT-1的表达抑制作用相对较弱，RAD组的抑制作用略强于ELE组，但两组差异无统计学意义（P>0.05）；而ELE+RAD组GLUT-1的表达抑制作用较强（P<0.05）。结论 增敏剂量的β-榄香烯与放疗联合应用可显著抑制裸鼠移植瘤中GLUT-1 mRNA及蛋白表达，明显增强放疗对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制效果，提示β-榄香烯可能通过抑制GLUT-1表达发挥放疗增敏作用。     

铜绿假单胞菌注射液对NCI-N87胃癌细胞株增殖能力的影响及其机制研究

目的 探讨铜绿假单胞菌注射液（Pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin,PA-MSHA）对NCI-N87胃癌细胞增殖能力的影响及其分子作用机制。方法 MTT法检测PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化,Western Blot检测PTEN蛋白和p-AKT蛋白的表达变化,转染PTEN siRNA敲低PTEN表达后,再次行MTT法检测PA-MSHA对细胞增殖的影响。结果 PA-MSHA抑制NCI-N87胃癌细胞的增殖具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,NCI-N87细胞经PA-MSHA处理后,凋亡率显著增加（P<0.05）,迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）。与对照组比较,PA-MSHA显著提高PTEN蛋白表达,降低p-AKT蛋白表达（P<0.05）。通过siRNA转染敲低PTEN表达后,PA-MSHA抑制NCI-N87细胞增殖的能力较对照组显著下降（P<0.05）。结论 PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡、抑制侵袭转移的作用,其机制与PTEN/AKT信号通路有关。