下调Notch3表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的 观察Notch3在骨肉瘤细胞中的表达及下调Notch3表达后对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,探讨Notch3在骨肉瘤细胞生物学功能中的作用.方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S,采用Real-time PCR和Western blot检测3种骨肉瘤细胞系中Notch3的mRNA和蛋白表达水平;利用siRNA敲低Notch3在骨肉瘤U20S细胞中的表达,并将细胞分为siNotch3组和阴性对照组,检测下调Notch3的表达后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭、迁移等生物学特性的变化.结果 Notch3在骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S中均呈阳性表达,并且在低级别骨肉瘤细胞系MG63中的表达明显低于高级别细胞系Saos2和U20S(P ＜0.05),下调Notch3的U20S细胞(siNotch3组)增殖、侵袭、迁移能力较阴性对照组减弱,凋亡率增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在骨肉瘤细胞U20S中下调Notch3的表达可明显抑制细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进凋亡.Notch3可能是Notch 通路在骨肉瘤中的关键受体之一,并参与了骨肉瘤的发生、发展.     

DADS对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响

目的：探讨二烯丙基二硫(DADS)对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响。方法将人骨肉瘤U-20S细胞随机分为DADS处理组与空白组,DADS处理组又分为15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L 4个不同浓度小组,每组分别作用于U-20S细胞24 h、48 h、72 h后进行相关检测,每组实验重复3次。采用MTT比色法测量不同的吸光值以检测DADS对人骨肉瘤细胞U-20S的抑制作用;Annexin V-FITC/PI染色法及流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡率及细胞周期变化情况;Transwell侵袭实验通过计量同一视野下细胞数量以检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 MTT比色法结果显示,浓度为60 mg/L DADS处理组作用于U-20S细胞24 h后其吸光值比对照组低(P<0.05)。随着浓度的增加,DADS对骨肉瘤细胞抑制作用无明显增强,表明DADS对骨肉瘤细胞有抑制作用,但并不呈剂量-效应依赖关系;染色法及流式细胞术结果显示,60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h凋亡率为15.89%,高于空白组细胞的8.65%;60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h,G2/M期的细胞为10.44%,高于空白组G2/M期的细胞8.18%(P<0.05);侵袭试验结果显示,DADS处理组细胞计数为(63±2)个,较空白组细胞计数(104±3)个显著减少(P<0.05),表明DADS处理组能抑制细胞侵袭能力;细胞划痕试验结果显示,60 mg/L DADS处理组细胞划痕之间的距离大于空白组,以作用48 h抑制作用最为显著(P<0.05),表明DADS (浓度为60 mg/L)能抑制U-20S细胞的迁移,并且随着时间的增加,48 h抑制作用更加显著。结论 DADS能抑制骨肉瘤细胞株U-20S增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞的侵袭和转移。     

松乳菇多糖对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:研究松乳菇多糖体外对人骨肉瘤Saos-2细胞生长、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养Saos-2细胞,将不同浓度的松乳菇多糖作用于细胞,MTT法检测不同时间点和不同浓度的松乳菇多糖对细胞生长的抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blot法检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白和核转录因子(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路蛋白的表达。结果:松乳菇多糖以时间和浓度依赖性抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的生长,促进人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡,抑制人骨肉瘤Saos-2细胞侵袭和迁移,抑制人骨肉瘤Saos-2细胞COX-2、NF-κB和NF-κB p65蛋白的表达。结论:松乳菇多糖可抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的生长,降低其侵袭和迁移能力,其作用机制可能与阻滞NF-κB信号通路和下调COX-2蛋白表达有关。     

松乳菇多糖对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:研究松乳菇多糖体外对人骨肉瘤Saos-2细胞生长、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养Saos-2细胞,将不同浓度的松乳菇多糖作用于细胞,MTT法检测不同时间点和不同浓度的松乳菇多糖对细胞生长的抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blot法检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白和核转录因子(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路蛋白的表达。结果:松乳菇多糖以时间和浓度依赖性抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的生长,促进人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡,抑制人骨肉瘤Saos-2细胞侵袭和迁移,抑制人骨肉瘤Saos-2细胞COX-2、NF-κB和NF-κB p65蛋白的表达。结论:松乳菇多糖可抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的生长,降低其侵袭和迁移能力,其作用机制可能与阻滞NF-κB信号通路和下调COX-2蛋白表达有关。     

丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的探讨丹参酮ⅡA在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA处理J82细胞,分别采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）/碘化丙锭（PI）双标记流式检测法、Transwell侵袭实验及划痕实验检测J82细胞的增殖、凋亡、侵袭及迁移情况。结果丹参酮ⅡA可抑制J82细胞增殖,且呈浓度与时间依赖性（均P＜0.05）。1、3、5滋mol/L丹参酮ⅡA处理组总凋亡率分别为12.23%、14.74%、18.40%,均高于对照组的3.36%（P＜0.05）,且呈浓度依赖性（P＜0.05）。对照组、1滋mol/L组、3滋mol/L组、5滋mol/L组细胞侵袭数比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,且呈浓度与时间依赖性（均P＜0.05）。对照组、1滋mol/L组、3滋mol/L组、5滋mol/L组划痕后12、24、36h划痕愈合率比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,呈浓度依赖性（P＜0.05）。结论丹参酮ⅡA在体外可抑制膀胱癌J82细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力。     

DHA对宫颈癌细胞株凋亡、侵袭和转移的影响

目的探讨多不饱和脂肪酸DHA对宫颈癌细胞（HeLa、Siha）凋亡、迁移侵袭的影响。方法HeLa、Siha细胞,分为空白对照 组、不同浓度DHA组,观察不同药物浓度作用于宫颈癌细胞后的形态学改变,Hoechst 33258染色检测48 h后细胞核凋亡情况; MTT法检测DHA作用于宫颈癌细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同浓度DHA作用于宫颈癌细胞48 h后 的凋亡率;细胞划痕实验和Transwell 迁移实验检测不同浓度DHA对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;Western Blotting检测 DHA刺激细胞48 h 后凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3）及肿瘤转移侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF表达情况。结果 倒置显微镜下及经Hoechst33258染色后,随着DHA浓度增加,宫颈癌细胞形态改变越明显,凋亡小体增多;MTT结果显示DHA 呈时间-浓度依赖性抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞划痕实验和transwell迁移实验提示DHA作用于细胞后,浓度越高, 对细胞的体外迁移能力的抑制作用越强;Western Blotting 显示DHA作用于细胞48 h 后,cleaved-caspase3、Bax蛋白表达增加 （P<0.05）,而Bcl-2、MMP-9、VEGF 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）。结论DHA 可通过调控 cleaved-caspase3、Bax及Bcl-2表达,促进宫颈癌细胞凋亡的作用并能通过降低MMP-9、VEGF的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和 侵袭。     

探讨HIF-1α 途径介导七氟烷/异丙酚对肺癌细胞恶性程度的调节作用

目的:探讨HIF-1α途径介导七氟烷和异丙酚单独或联合应用对肺癌细胞恶性程度的调节作用。方法:将非小细胞肺癌细胞系H1299分为空白组、七氟烷组、异丙酚组及联合组。取对数生长期的细胞,空白组不进行处理,以PBS代替;七氟烷组加入终浓度1 nmol/L的七氟烷;异丙酚组加入终浓度1 nmol/L的异丙酚;联合组加入终浓度为1 nmol/L的七氟烷和终浓度1 nmol/L的异丙酚。采用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞侵袭,Western blot检测HIF-1α蛋白表达。结果:细胞处理培养24 h与36 h后,七氟烷组、异丙酚组与联合组的细胞增殖率、侵袭能力和HIF-1α相对表达水平低于对照组(P<0.05);且联合组的上述指标均低于七氟烷组和异丙酚组(P<0.05)。七氟烷组、异丙酚组与联合组的细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),且联合组的细胞凋亡率高于七氟烷组和异丙酚组(P<0.05)。结论:七氟烷和异丙酚均可抑制HIF-1α途径的激活,从而发挥其对肺癌细胞恶性程度的抑制作用,且七氟烷和异丙酚联合应用具有协同作用。     

2-甲氧基雌二醇对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME)对恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)B16细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法将体外培养的小鼠MM B16细胞用不同浓度(10、20、40μmol/L)的2-ME处理。未经任何处理的小鼠MM B16细胞,记作B16-negative。倒置显微镜下观察细胞形态,平板克隆形成实验检测2-ME处理小鼠MM B16细胞2周后的克隆形成能力。Transwell方法观察药物在体外对细胞趋化侵袭能力的影响。观察药物在体外对细胞迁移能力的影响。细胞划痕实验观察经10μmol/L 2-ME处理MM B16细胞24h后划痕愈合程度。结果与对照组比较,不同浓度的2-ME处理MM B16细胞后克隆形成率差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,2-ME组细胞侵袭能力及迁移能力差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验证实对照组的MM B16细胞经过24h后几乎迁移至所有的划痕区域,而实验组MM B16-10μmol/L的划痕区域仅有部分由MM B16细胞占有。结论 2-ME对小鼠MM B16细胞的增殖具有抑制作用,能够抑制MM B16细胞的克隆形成能力。2-ME可以抑制小鼠MM B16细胞的侵袭和迁移运动能力。     

苯噻啶对人肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 观察不同浓度苯噻啶(Pizotifen)对人肺腺癌A549和PC9细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,并初步探究其机制。方法 取对数生长期的A549和PC9细胞,分为对照组(细胞对照组为培养基直接作用于细胞,溶剂对照组为含有0.1%DMSO的培养基作用于细胞)和实验组(浓度分别为10、20、30、40μmol/L的苯噻啶作用于细胞)。CCK-8法检测人肺腺癌细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell迁移实验检测其迁移能力,Transwell侵袭实验检测其侵袭能力,ELISA法检测Wnt3a/β-catenin信号通路蛋白、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果 与溶剂对照组相比：CCK-8结果显示,实验组A549和PC9细胞活力降低,出现不同程度的增殖抑制现象,在20、30、40μmol/L浓度组有一定的时间依赖性(P<0.05);划痕实验结果表明,实验组划痕愈合率小于对照组,苯噻啶浓度越高,划痕愈合率越低(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验结果显示,实验组穿过小室的肺腺癌细胞数量明显低...     

安石榴甙对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨安石榴甙(PUN)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:选取OS的U2 OS和MG63细胞,用不同浓度PUN处理,分别设置为不加PUN的对照组和50、75、100μmol·L-1 PUN组.用结晶紫法检测细胞增殖能力,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭和...