不同镁离子浓度对TTV核酸检测的影响

目的 :确定输血传播病毒TTV核酸检测方法中的最佳镁离子浓度。方法 :根据TTVORF2区基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。结果 :在确定最佳引物浓度之后 ,分别建立不同镁离子浓度的PCR检测体系 ,根据反应曲线选择最佳镁离子浓度。结论 :最佳镁离子浓度应为 4 .0mmol/L。     

心脏不停跳心内直视术围术期血浆镁离子的变化及意义

目的:探讨心脏不停跳心内直视术围术期血浆镁离子的变化及意义.方法:检测转机前,转机30min,停机,术后4、24、48h血浆中镁离子的浓度.结果:转机后血浆镁离子浓度增高,转机30min达最高值,术后血浆镁离子高于转机前.结论:心脏不停跳心内直视术围术期血浆镁离子明显增高,血浆镁离子的改变在心脏手术中具有重要意义.     

荧光定量PCR检测细胞代谢综合征相关基因表达的优化

目的优化MRSG mRNA表达的Taqman荧光定量PCR检测反应体系并进行系统评价。方法设计荧光PCR适用的引物和探针,从模板、引物、探针、镁离子浓度等方面优化荧光定量PCR检测反应体系,评价优化系统的特异性和稳定性。结果确定系统的模板取样量为2μl,引物浓度为0.4μmol/L,探针浓度为0.2μmol/L,Mg~（2＋）浓度为4mM,建立了稳定的MRSG mRNA表达的Taqman荧光PCR检测方法。结论优化后的MRSG mRNA荧光PCR检测方法特异性和稳定性较好。     

50例慢性非甲-庚型肝病患者中TTV的感染状况及部分序列的基因分析

目的:探讨新型肝炎相关病毒(TTV)在慢性非甲-庚型肝病患者中的感染状况,分析国内病毒的基因结构特点.方法:根据国内外报道的部分基因序列,自行设计特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)法检测了50例慢性非甲-庚型肝病患者,并对阳性标本克隆后进行序列分析.结果:慢性非甲-庚型肝病患者中TTV感染率为52%,对TTV病毒株进行序列分析发现与N22克隆同源性可达97.8%.结论:我国也存在严重的TTV感染,TTV可能为慢性非甲-庚型肝病的致病因子.我国TTV感染株与国外报道的N22克隆有高度同源性.     

啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立

目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,引物浓度为0.625μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。     

PCR技术反应体系镁离子浓度的优化

成功的体外DNA扩增,镁离子浓度的优化是十分重要的。镁离子浓度可以影响到Taq DNA聚合酶的活性、精度及产物的特异性,还可影响模板与PCR产物的解链温度,引物二聚体的形成等,镁离子在PCR技术反应体系中的优化最终要求模板DNA、引物和dNTP能够满足Taq DNA聚合酶结合的镁离子。     

全自动生化分析仪镁离子测定干扰去除方法

大多数实验室都采用二甲苯胺蓝比色法检测血清镁离子的浓度.其具体原理为在碱性条件下,镁离子与二甲苯胺蓝形成蓝色复合物,于500nm波长处有吸收峰,根据一定范围内吸光度计算镁离子的浓度.本实验室近期镁离子测定中,空白值明显偏高,质控及标本都显示高值或大于最大测定范围,甚至低值质控测定值高于高值质控测定值.根据这一情况,本实验室设定一系列试验以去除镁离子测定的干扰.……     

人细小病毒B19实验诊断技术研究

目的建立一种快速、准确、特异和定量检测人细小病毒B19的实验检测方法。方法以B19病毒NS1基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,建立对细小病毒B19进行荧光定量检测的实验方法。同时利用荧光定量PCR技术检测本院收集的490例孕妇血清。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子浓度为2.5mmol/L时,反应的本底最低,荧光信号最强。该方法的灵敏度为1.0×101拷贝,有较好的特异性和重复性。检测的490例临床孕妇血清标本,人细小病毒B19DNA阳性为44例,感染率为8.9%(44/490)。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应,能够准确快速定量检测血清中的人细小病毒B19。     

TTV部分传播途径的初步研究及西安地区TTV部分片段测序分析

目的　研究输血传播肝炎病毒 (TTV)有否直接垂直传播途径及尿液传播的可能性 ,初步了解西安地区 TTV结构部分特点 .方法　参照文献 [1]在 TTV DNA ORF1区设计一套套式 PCR引物 ,建立 TTV DNA套式 PCR检测方法 ,对 16例血清检测TTV DNA阳性的患者尿液做了 TTV DNA检测 ,对 5 2例正常顺产孕妇血清及其婴儿脐带血同时检测 TTV DNA;并且对西安地区 1例原因不明而 TTV阳性肝炎患者的 TTV套式 PCR扩增终产物纯化直接测序 .结果　 16例血清检测 TTV DNA阳性的患者尿液 TTV DNA检测未发现 1例阳性 ;在 5 2例顺产妇外周血中 ,9例 TTV DNA阳性 TTV基因检测阳性率为 17.3%(9/5 2 ) ;而新生儿脐带血 TTV基因检测阳性率为 7.7%(4 / 5 2 ) ;其中 ,母子同时 TTV DNA阳性 2例 ,单纯母亲血 TTV DNA阳性 7例 ;单纯婴儿脐带血 TTV DNA阳性 2例 .直接测序法测序 ,测得的 143bp序列用 DNAsis分析软件中国 1株 (BDH1)序列比较 ,二者同源性为 6 5 .0 %,差异率为 35 .0 %(>30 %) .结论　 TTV可能不能通过尿液传播 ,但能经胎盘直接垂直传播 ,西安地区TTV流行毒株可能存在新的 TTV基因型 .     

PCR-RFLP法检测葡萄糖激酶基因启动子-30位点变异的实验条件研究

目的：确定PCR扩增葡萄糖激酶基因启动子区以及用Alw21I内切酶切割-30位点的最佳实验条件。方法：对影响PCR反应以及酶切的实验因素进行系统研究。结果：最佳引物浓度为0．3μmol／L；以1 U酶量效果最满意；最适dNTP浓度为167μ mol／L；最适镁离子浓度为1．5mmol／L。20μL的酶切体系中，最佳酶切产物为5μL，最佳内切酶量为5 U，酶切时间应超过9h。以上参数偏离最适条件将会导致实验失败。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。