纯化胰蛋白酶用的亲和层析柱的制备

在碱性条件下将对β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)通过醚化连接于4%琼脂糖,制备得到了对氨基苯磺酰乙基-琼脂糖(ABSE-琼脂糖),然后将纯化的卵粘蛋白共价结合于ABSE-琼脂糖上,得到机械强度好,活力回收较高的固定化卵粘蛋白。我们对制备固定化卵粘蛋白时的最适条件以及对它的热稳定性,操作稳定性等方面进行了研究,并将亲和层析法与分级沉淀法作了比较,结果表明亲和层析法有周期短、收率和纯度高等优点。     

抑肽酶的亲和层析——Tosy1（对甲苯磺酰氯）在固定化酶上的应用

以4%琼脂糖为载体，对甲苯磺酰氯为活化剂，对胰蛋白酶的固定化条件及固定化酶的性质进行了研究。其固定化条件为pH7.4，温度15℃，时间8hr，酶量20mg/g(wet-gel）。同时研究了温度、pH值、时间以及载体与酶的比例等因素对胰蛋白酶固定化的影响。最后报道了该固定化酶的最适pH，热稳定性，pH贮存稳定性和操作稳定性。用这种固定化胰蛋白酶纯化抑肽酶，抑肽酶纯度提高50倍，回收率在85%-95%。     

降血糖药喹啉-8-羰酰氨烷基-苯磺酰胺衍生物

从口服抗糖尿药优降糖(Glybenclamid,HB419)出发,制备和试验过一系列的酰氨基-苯磺酰脲、酰氨基-苯磺酰氨基脲和酰氨基-苯磺酰氨基杂环化合物,改变酰氨烷基可增强或延长药效。本文以喹啉-8-羧酸等为酰化取代基制备了酰氨烷基-苯磺酰脲(Ⅰ,Ⅱ)酰氮烷基-苯磺酰氨基脲(Ⅲ)和酰氨烷     

抑肽酶的亲和层析

介绍用琼脂糖、β-硫酸酯基乙砜基苯胺(SESA)和胰蛋白酶制备亲和吸附剂,以及用该亲和柱纯化抑肽酶的条件。本亲和吸附剂经α-萘酚处理后稳定性有显著提高;经亲和层析纯化后的抑肽酶圆盘电泳呈一条谱带。     

胰蛋白酶的固定化研究进展

固定化胰蛋白酶比自由酶有更好的热稳定性和pH稳定性、易于分离、可重复利用,因此更适合于实际应用。此文对近年来发展比较快的制备固定化胰蛋白酶固定化载体和方法进行综述。     

固定化胰蛋白酶的制备

目的 制备一种高活力的固定化胰蛋白酶，通过优化其制备条件提高活力回收。方法 将壳聚糖敷涂在硅胶的表面制成载体，以戊二醛为交联剂，通过交联反应将胰蛋白酶固定至载体上制得。对固定化后的滤液做回收再利用实验。结果 优化后制得的固定化胰蛋白酶的活力单位(AU)高达6848．4U．g-1，活力回收(AR)为21．8％。回收再利用实验得到的固定化胰蛋白酶活力单位仍高达5907．20U.g-1。结论 制备的固定化胰蛋白酶活力单位高，活力回收也较高，有利于工业运用。     

用CHITOSAN固定化青霉素酰化酶

本文报道以Chitosan为载体制备固定化青霉素酰化酶的研究结果。1.4％ Chitosan醋酸溶液先用12.5％戊二醛交联,洗涤,研磨,得颗粒。再用1.5％pH5.5和1.5％pH8.5多聚磷酸处理,得机械强度良好的载体。此载体先后经0.5％戊二醛和对甲苯磺酰氯双活化后,再与青霉素酰化酶偶联。所得固定化酶的活力达20.8u/g。固定化青霉素酰化酶的反应最适温度略高于游离酶,最适pH略低于游离酶;其Km值基本接近游离酶。固定化酶经反复使用,活力基本不变。     

固定化氨基酰化酶拆分制备L-色氨酸、L-蛋氨酸工艺研究的新进展

上海医药工业研究院生化药物研究室固定化酶法拆分制备L-型氨基酸工艺研究最近取得了新进展: (1)α-氨基酰化酶与DEAE-Sephadex离子交换多糖体进行离子结合,获得了活性高和稳定性强的固定化氨基酰化酶,酶活力由1000～1500单位提高到2000～2500单位,折合每克干重固定化酶活力达20000～25000单位,反     

以褐藻酸为载体的钆淋巴靶向MR造影剂的合成工艺研究

淋巴核磁共振成像(MRI)作为一种分辨率高的非创伤性技术获得了广泛应用。本课题组以大分子褐藻酸为载体,连接1-O-氨基乙基甘露糖为其靶向基团,对氨基苄基二乙基三胺五乙酸螯合Gd 离子为磁共振造影影基团,形成钆淋巴靶向MR造影剂。本文旨在通过对1-O-氨基乙基甘露糖和对氨基苄基二乙基三胺五乙酸片段工艺路线优化以提升两者收率,进而提升终产物淋巴靶向造影剂的收率。其中1-O-氨基乙基甘露糖的合成中,变更合成方法,去除了危险剧毒易爆试剂叠氮钠的使用,反应步骤由六步减少到四步,且收率由3.6%提高到了37%,后处理简单易操作,适于放大制备；对氨基苄基二乙基三胺五乙酸片段的工艺优化主要为后处理方法的改进,易操作,且提高了收率,由原来的28%提升至57%。进一步以这两个片段为原料通过酰化、缩合及螯合反应成功制备造影剂,为后续的成药性研究提供了基础。     

大黄中酶抑制剂的研究

酶抑制剂广泛分布于植物、动物和微生物中,大黄是我国应用最广的中药之一,我们研究发现,它的根茎的水溶性部分有抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶的作用。本文报道了应用水提取、乙醇沉淀、硫酸铵沉淀、透析、Sephadex G-100凝胶过滤以及胰蛋白酶-琼脂糖凝胶亲和层析等方法,首次从大黄根茎水溶醇不溶部位中分离纯化到二种新的胰蛋白酶抑制剂Ⅰ和Ⅱ。抑制Ⅰ和Ⅱ除能抑制胰蛋白酶外,还能抑制胰凝乳蛋白酶。用苯甲酰精氨酸β-萘酰胺(BANA)为底物,分别求出抑制剂Ⅰ、Ⅱ对胰蛋白酶的重量抑制比值为1:0.94和1:1.35。两者对胰蛋白酶的抑制常数在10~(-7)～10~(-8)范围内。用葡聚糖凝胶过滤测定了抑制剂Ⅰ、Ⅱ     

N-保护的甘氨酸活性酯的抗生育作用

最近研究证明,许多化学的和内源性的物质具有抑制精子顶体酶(Acrosin)的蛋白水解作用,因而减少卵细胞的受精机会。精子顶体酶的酶促作用与胰蛋白酶的蛋白水解作用相似,因而前者也可被胰蛋白酶抑制剂所抑制。小鼠阴道内每天给予10mg/kg 的一系列N-苯酯基甘氨酸、L-亮氨酸和 L-脯氨酸酯,它们的受精抑制率与 N-α-对-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲酮及对-甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲酮一样都是100％。由于乙     

在丹宁-氨基己基纤维素上吸附固定氨基酰化酶

1969年以来,田边药厂已用固定化酶柱进行工业化连续生产L-氨基酸,固定化酶是由酶离子结合到DEAE-Sephadex上制得。该方法利用L-氨基酸和未水解的酰基-D-氨基酸洗脱液浓缩后的溶解度的不同而分离。因此,假如能够利用高浓度底物,可预料有减少要蒸发的溶液体积之优点。由于氨基酰化酶是通过离子结合吸附在DEAE-Sephadex上,因此若利用高浓度底物,就会释出一些酶。为了克服上述局限,以及制备价廉的固定化氨基酰化酶,该厂研究了各种固定化氨基酰化酶的方法,并报道了它的制备性质及适用性。最近发现,将丹宁共价结合到氨     

胰蛋白酶的固定化及其在玻璃酸制备中的应用

纸纤维为载体,对β－硫酸酯乙砜基苯胺为活化剂,以共价介联法固定化胰蛋白酶。在偶联反应ｐＨ８．０、酶量７．２６ｍｇ／ｍｌ的最佳固定化条件下,固定化酶活力达９３．３Ｕ／ｇ（湿纸纤维）,酶活回收率为５７．５％。固定化酶具有较高热稳定性和抗氯仿能力。采用固定化胰蛋白酶酶解工艺,所得玻璃酸成品符合质量标准,其酶解反应半衰期为４８０ｈ。     

高活力胰酶制备工艺的研究

本文报告了高活力胰酶的简易制备方法。本法用稀醇提取,加适量保护剂与激活剂,将酶原激活,获高活力胰酶。按干品计算,每克胰酶粉的酶活力平均含胰蛋白酶为281,000个单位、胰淀粉酶为37,400个单位、胰脂肪酶为18,300个单位;炽烧残渣为4.59％;干燥失重为3.97％;收率为10.47％;脂肪含量小于20毫克。本法工艺简单、稳定、生产周期短、易推广。     

3-(4-甲磺酰氨基/乙酰氨基)苯甲酰基-2H-1-苯并吡喃-2-酮类化合物的设计、合成及α-糖苷酶抑制活性

目的: 在研究非糖类α-糖苷酶抑制剂的过程中,发现3-(4-苯磺酰氨基)苯甲酰基-2H-1-苯并吡喃-2-酮类化合物具有显著的α-糖苷酶抑制活性。为进一步探讨该类化合物的构效关系,将4-位的苯磺酰氨基替换为甲磺酰氨基和乙酰氨基,合成3-(4-甲磺酰胺基/乙酰基)苯甲酰基-2H-1-苯并吡喃-2-酮类化合物,并评价其α-糖苷酶抑制活性。 方法: 以4-硝基苯甲酸为原料,经氯代、酰化、水解、还原反应制得4-氨基-β-氧代苯丙酸乙酯,与甲磺酰氯/乙酰氯经酰化反应得4-甲磺酰氨基/乙酰氨基-β-氧代苯丙酸乙酯,再与取代水杨醛经Knoevernagel缩合,同时环合得到目标化合物。采用酵母α-葡萄糖苷酶对所合成的目标化合物进行α-糖苷酶抑制活性评价。 结果: 合成了22个目标化合物,结构经1H-NMR和IR确证。大部分3-(4-甲磺酰氨基/乙酰氨基)苯甲酰基-2H-1-苯并吡喃-2-酮类化合物未表现出α-糖苷酶抑制活性,只有化合物3-(4-甲磺酰氨基)苯甲酰基-6,8-二叔丁基-2H-1-苯并吡喃-2-酮(10f)表现出良好的α-糖苷酶抑制活性,IC50值为10.16 μmol﹒L-1。 结论: 对于3-苯甲酰基-2H-1-苯并吡喃-2-酮类化合物,其苯甲酰基以4-位甲磺酰氨基/乙酰氨基取代对该类化合物的α-糖苷酶抑制活性不利,该类化合物的构效关系值得进一步研究。     

国产活性染料艳红M=2B亲和柱分离人血清白蛋白

<正> 1973年Travis和Pannell用蓝色葡聚糖-琼脂糖凝胶从人血清中分离出血清白蛋白。1976年他们又把活性染料直接偶联到琼脂糖上,由此获得的亲和层析柱,层析效果更好。亲和层析的效果与载体的选用,配基的类型、层析条件的选择(pH、离子强度,温度)等密切相关。染料亲和层析为有效分离高纯度的人血清白蛋白和其他动物血清蛋白提供了较为理想的分离方法。     

用离子交换树脂为载体固定化青霉素酰化酶制备6-氨基青霉烷酸的研究

6-氨基青霉烷酸(6-APA)是半合成抗生素的母核。在 6-APA的氨基上引入不同侧链,可获得高效、广谱、服用方便的各种半合成抗生素。目前6APA的制备方法有化学法和固定化酶法。固定化酶法是将青霉素酰化酶固定在水不溶性载体上,直接用于裂解青霉素G生成6-APA。1973年英、美、西欧等国已应用固定化酶生产6-APA。本研究以大孔离子交换树脂为载体使青霉素酰化酶固定化。大孔离子交换树脂具有大孔径、高比表面积、高交换率、耐磨性好等优点。本文报导初步研究结果。 材料与方法     

水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备及评价(英文)

酶固定化过程中,固定化酶的方法及其载体的选择是酶固定化过程的关键因素,适宜的固定化法和良好的载体微环境对酶活保持率提高和稳定性增强尤其重要。在本研究中,利用96孔微分析板评价了用于高通量筛选的水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备方法及其对酶活性(保存时间,精度和重现性)的影响。胰蛋白酶(trypsin)成功地包埋在单凝胶和双网络凝胶中并且固定在磁性粒子上,然而,包埋在单凝胶和双网络凝胶,或固定在磁性粒子上的胃蛋白酶无法与底物反应。在对酶的适应性方面,与双网络凝胶比较,单凝胶和磁性粒子固定化法更加优越,适用于多种酶(如:胰蛋白酶,葡糖苷酸酶,CYP1A1)的固定。然而,我们也发现浸置后,以单凝胶包埋的固定酶有较多的损失。双网络凝胶包埋法只限于包埋胰蛋白酶,无法用于包埋其它酶,例如葡糖苷酸酶、CYP1A1和胃蛋白酶,因为双网络凝胶包埋法会由于丙烯酰胺和过硫酸胺的存在而使酶失去活性。在三种酶固定方法中,磁性粒子固定酶的方法能够最好地保留酶活性。另外,磁性粒子固定酶的稳定性比其他两种方法好,存放一周后胰蛋白酶和葡糖苷酸酶的活性没有任何下降。其次,磁性粒子固定法的重复利用重现性也良好。此外,尽管双网络凝胶法包埋酶的种类有限,但是我们认为通过改变丙烯酰胺等载体的选择和设计,改进载体微环境,可以使包埋酶的效率得到提高。     

利用固定在不同载体上的双酶系统一步转化头孢菌素C成为7—氨？…

利用Ｄ－氨基酸氧化酶（ＤＡＯ）和戊二酰－７－氨基头孢烯酸（ＧＬ－７－ＡＣＡ）脱酰酶酶促转化头孢菌素Ｃ（ＣＰＣ）为７－氨基头孢烯酸（７－ＡＣＡ）时,为了最大限度提高催化活性和稳定性,将这两种酶分别固定在不同载体上。反应是同时利用这两种酶以类似一步方式进行。ＤＡＯ制剂中的过氧化氢酶杂质的影响可通过外加过氧化氢解决。在最适条件下,ＣＰＣ转化为７－ＡＣＡ的转化率高于９０％,副产物形成率低于４％。这种固定化     

从除去IgG的组织培养液提纯单克隆抗体

作者报道一种方法,利用G蛋白(一种重组链球菌生物工程制品)能和免疫球蛋白G(IgG)结合的特性,将其作为配基,连接在载体琼脂糖凝胶上,经亲和层析,分离纯化杂交瘤细胞培养上清里的IgG单克隆抗体(McAb)。由于G蛋白无法将IgG McAb和培养基中小牛血清IgG区分开来,作者采用在杂交瘤细胞培养前,先通过G蛋白琼脂糖凝胶亲和层析的方法除去小牛血清IgG。