克隆有恶性疟原虫MSP1基因片断的pQE质粒在减毒鼠伤寒杆菌X4064株中的表达

为探讨克隆有恶性疟原虫ＭＳＰ１基因片断的重组ｐＱＥＭ１质粒在减毒鼠伤寒杆菌中的表达。使用转化和转导的方法构建减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＲＥＰ４／ｐＱＥＭ１）；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＱＥＭ１）和减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＲＥＰ４／ｐＱＥＭ１）的表达。实验结果成功地构建了减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＱＥＭ１），Ｘ４０６４（ｐＲＥＰ４／ｐＱＥＭ１）的诱导型表达量高于Ｘ４０６４（ｐＱＥＭ１）的组成型表达量。结果指出不受调控的表达将降低重组ｐＱＥＭ１质粒在减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４中的表达量     

表达恶性疟原虫裂殖子表面蛋白-1片段的减毒鼠伤寒杆菌的构建

目的 检测恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１基因在减毒鼠伤寒直蓖Ｘ４０６４株中的表达。方法 将７个克隆有恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１基因片段的表达质粒ｐＱＥＭ用氯化钙法转化到修饰系统正常、限制系统缺陷的鼠伤寒杆菌ＬＢ５０００中,再通过专一性噬菌体Ｐ２２转导入腺苷酸环化酶基因、环腺苷酸受体基因双重突变的减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４株中,用质粒酶切、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定构建的重组菌株 组菌株的表达。结果 成     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1-17区基因的原核表达、纯化及表达产物鉴定

目的　为进一步研究和应用恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１ 的１７区基因（ＭＳＰ１－ １７）,本文原核表达了ＦＵＰ株ＭＳＰ１ 的１７ 区基因,并纯化及鉴定了表达蛋白。方法　将ＭＳＰ１－ １７ 基因片段克隆入原核表达载体ｐＧＥＸ－ ４Ｔ－ １,形成ｐＧＥＸ－ ４Ｔ－ １／ＭＳＰ１－ １７。ＩＰＴＧ诱导ｐＧＥＸ－ ４Ｔ－ １／ＭＳＰ１－ １７ 转化的ＢＬ２１菌,纯化并用ＭＳＰ１－ １７ 特异性单克隆抗体鉴定表达产物。结果　成功地构建了ｐＧＥＸ－ ４Ｔ－ １／ＭＳＰ１－ １７,转化菌经诱导表达出与ＧＳＴ融合的蛋白（约４０ＫＤ）,纯化后纯度达７２％ ,ＭＳＰ１－ １７ 特异性单克隆抗体可识别表达蛋白。结论　成功表达并纯化了ＭＳＰ１－ １７ 蛋白,为深入研究和应用ＭＳＰ１－ １７ 打下基础     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1—17区基因的原核表达,纯化及表？…

为进一步研究和应用恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１的１７区基因,本文原核表达了ＦＵＰ株ＭＳＰ１的１７区基因,并纯化及鉴定了表达蛋白。方法将ＭＳＰ１－１７基因片段克隆入原核表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１,形成ｐＧＥＸ－４Ｔ－１／ＭＳＰ１－１７,ＩＰＴＧ诱导ｐＧＥＸ－４５－１／ＭＳＰ１－１转化的ＢＬ２１菌,纯化并用ＭＳＰ１－１７特异性生有达产物。结果成功地构建了ｐＧＥＸ－４Ｔ－１／ＭＳＰ１－１７,转化菌经诱导表     

重组质粒pGEX—6P—1／Sj—FABPc的构建及在大肠杆菌中的表达

目的 构建基因工程菌株、获得重组蛋白Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ（日本血吸虫脂肪酸结合蛋白）。方法 用ＰＣＲ法从日本血吸虫ｃＤＮＡ文库中扩增Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ基因片段，再将该片段重组于ｐＧＥＭ－Ｔ中并进行ＤＮＡ测序鉴定，经酶切后将目的片段构建成重组质粒ｐＧＥＸ－６Ｐ－１／Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ，转化于大肠杆菌ＢＬ２１，ＩＰＴＧ诱导表达。用Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ＾ＴＭ ４Ｂ亲和层析柱对表达产物进行纯     

编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1的17区片段的核酸疫苗诱？…

目的 初步研究编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１（ＭＳＰ１）的１７区片段的核酸疫苗（ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－１７）诱导小鼠的体液免疫反应。方法 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６小鼠分别经每次每只２００μｇ／１００μｌ和１００μｇ／１００μｌ的ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－１７三闪肌注免疫后，用ＥＬＩＳＡ间接法检测铭疫鼠血清中抗ＭＳＰ１１７区的抗体。结果 两种不均产生明显的抗ＭＳＰ１１７区的抗体，ＢＡＬＢ／ｃ     

类风湿关节炎患者Th1／Th2细胞平衡的研究

目的 在单个细胞水平上研究类风湿关节炎（ＲＡ）患者滑液及外周血中Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞平衡状态及其与疾病活动程度的关系。方法 用酶联免疫斑点法（ＥＬＩＳＰＯＴ）检测ＲＡ患者滑液单个核细胞（ＳＦＭＣ）和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的细胞内细胞因子ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的表达情况结果 ＲＡ患者ＳＦＭＣ中Ｔｈ１、Ｔｈ１／Ｔｈ２比值与自身及正常人ＰＢＭＣ相比显著升高（Ｐ〈０．０１），Ｔｂ１／Ｔｈ２比值与患者Ｓｒ     

口服丙型肝炎复合多表位DNA减毒鼠伤寒沙门活菌苗的实验研究

目的　利用减毒鼠伤寒沙门菌作为载体,探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 口服ＤＮＡ 疫苗的可行性。方法　把ＨＣＶ 复合多表位抗原基因ＰＣＸ 克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３（ＣＭＶ 启动子） ,构建ＨＣＶ 真核表达载体ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ,转化减毒鼠伤寒沙门菌ＳＬ３２６１ ,获得ＨＣＶ 重组口服ＤＮＡ 活菌苗ＳＬ３２６１ （ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ） ,免疫小鼠及家兔后,检测特异性免疫应答及安全性。结果　ＳＬ３２６１（ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ） 在小鼠及家兔中均可诱发低水平的特异性体液免疫及细胞免疫应答,免疫动物未见明显的毒性反应。结论　ＨＣＶ 口服减毒鼠伤寒沙门菌ＤＮＡ 疫苗可诱发特异性的免疫应答,为ＨＣＶ 疫苗的研究提供新的理论及实验依据     

脂多糖和抗炎药物对肺血管内巨噬细胞核因子κB的影响

目的观察脂多糖（ＬＰＳ）致肺血管内巨噬细胞（ＰＩＭ）核因子κＢ（ＮＦκＢ）的活化及抗炎药物地塞米松（ＤＥＸ）和阿斯匹林（ＡＳＡ）对ＮＦκＢ的影响。方法用改良法分离、培养猪ＰＩＭ,设正常对照、ＬＰＳ刺激、ＤＥＸ和ＡＳＡ干预组,共４组。用凝胶电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）法和放射免疫分析（ＲＩＡ）法,分别检测ＰＩＭ核提取物ＮＦκＢ的活性和细胞培养上清肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）的含量。结果ＬＰＳ刺激组ＮＦκＢ活性于刺激后０５～４小时、ＴＮＦα含量于刺激后１～２小时高于刺激前和正常对照组（Ｐ＜０．０１）;二者在刺激后１小时呈显著正相关（ｒ＝０．９９１,Ｐ＜０．０１）。ＤＥＸ组和ＡＳＡ组ＮＦκＢ活性、ＴＮＦα含量虽较刺激前和正常对照组有所升高,但均显著低于ＬＰＳ组（Ｐ＜０．０１）。结论ＬＰＳ可诱导ＰＩＭＮＦκＢ激活,并进而导致ＴＮＦα的基因转录和表达增加;ＤＥＸ和ＡＳＡ可通过抑制ＮＦκＢ的活化而减少ＴＮＦα的释放。     

脑型疟患者红细胞膜蛋白分子的表达

目的： 为研究脑型疟发病机制及防治提供理论依据。方法： 应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ＳＤＳ－ＰＡＧＥ） 技术, 对云南省１９ 例脑型疟患者感染红细胞 （ＰＥ） 表达的红细胞膜蛋白１（ＰｆＥＭＰ－１） 进行分析, 并分别与４３ 例恶性疟、９ 例间日疟患者ＰＥ表达的ＰｆＥＭＰ－１和ＰｖＥＭＰ－１及６ 例健康人红细胞膜蛋白（ＥＭＰ） 进行比较。结果： 脑型疟患者ＰＥ存在高表达的高分子量ＰｆＥＭＰ－１, 分子量为２６０～３２０ ｋＤａ。恶性疟及间日疟患者ＰＥ不表达２６０ ｋＤａ 以上的高分子量ＰｆＥＭＰ－１,分别测到分子量最大为２４０ｋＤａ 的ＰｆＥＭＰ－１和１８０ ｋＤａ的ＰｖＥＭＰ－１。健康人对照组ＥＭＰ分子量为１４０ ｋＤａ。结论： 脑型疟患者ＰＥ高表达的不同高分子量ＰｆＥＭＰ－１ ２６０～３２０ ｋＤａ, 与脑血管内皮细胞（ＥＣ） 不同受体蛋白ＣＤ３６、血小板反应蛋白 （ＴＳＰ）、细胞间粘附分子１ （ＩＣＡＭ－１）、血管细胞粘附分子１ （ＶＣＡＭ－１） 和内皮白细胞粘附分子１（ＥＬＡＭ－１） 及硫酸软骨素Ａ （ＣＳＡ） 的结合是脑型疟发病的分子基础, 可导致脑型疟患者发生昏迷。     

日本血吸虫（中国大陆株）FABPc重组抗原高效融合表达,纯化及 …

目的 构建Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ表达克隆,获得大量纯化ｒＳｊ－ＦＡＢＰｃ重组（日本血吸虫脂肪酸结合蛋白）抗原,了解其作为侯选疫苗抗原的潜能。方法 以ＰＣＲ法从Ｓｊ－ｃＤＮＡ库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体ｐＧＥＸ－６Ｐ－１进行融合表达,经Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＾ＴＭ ４Ｂ亲和层析柱和ＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ＾ＴＭ Ｐｒｏｔｅａｓｅ酶切后纯化出ｒＳｊ－ＦＡＢＰｃ,Ｗｅｓｔｅｒｎ     

编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1的17区片段的核酸疫苗诱导小鼠体液免疫反应的研究

目的初步研究编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１（ＭＳＰ１）的１７区片段的核酸疫苗（ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－１７）诱导小鼠的体液免疫反应。方法ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６小鼠分别经每次每只２００μｇ／１００μｌ和１００μｇ／１００μｌ的ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－１７三闪肌注免疫后,用ＥＬＩＳＡ间接法检测免疫鼠血清中抗ＭＳＰ１１７区的抗体。结果两种小鼠均产生明显的抗ＭＳＰ１１７区的抗体,ＢＡＬＢ／ｃ小鼠较Ｃ５７ＢＬ／６小鼠产生的抗体略高,但总体抗体水平不是很高。结论该核酸疫苗具有一定的免疫原性,其保护性仍需进一步研究     

肾综合征出血热病毒结构蛋白致病作用的研究

为阐明肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）发病机制，用免疫组化法检查了３０例患者ＨＦＲＳ病毒的膜蛋白（ＭＰ）、核蛋白（ＮＰ）在外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的表达情况，同时用放免等技术检测了血浆内皮素（ＥＴ）、Ｐ物质（ＳＰ）和肾功能相关指标。发现ＨＦＲＳ患者从４～５病日起至１３病日，ＰＢＭＣ中均有ＭＰ和ＮＰ表达，但随着病情的好转，其表达强度逐渐减弱。经染色鉴定ＭＰ与ＮＰ阳性细胞主要是单核细胞。入院时ＰＢＭＣ中ＭＰ和ＮＰ表达强度并不相同，ＭＰ的表达强度与血浆ＥＴ／ＳＰ比值、病情及肾脏损伤轻重呈平行关系。提示ＨＦＲＳ病毒能侵犯ＰＢＭＣ并在其中复制，表达病毒结构蛋白，而ＭＰ与ＨＦＲＳ病毒的致病作用相关；病程中血浆ＥＴ／ＳＰ比值升高是使肾损加重的重要因素。     

用IRMA法和ELISA法检测同批新生儿脐血TSH的结果比较

以ＩＲＭＡ和ＥＬＩＳＡ两种方法检测足月产正常新生儿脐血２６４份，结果：９６．２％的样品检测值为ＩＲＭＡ＞ＥＬＩＳＡ，其Ｍ±Ｓｍ分别为７．６４±０．２７ｍＩＵ／Ｌ和４．０７±０．２５ｍＩＵ／Ｌ，（ｕ＝９．７０，Ｐ＜０．０１）；ＴＳＨ值＜５ｍＩＵ／Ｌ的百分率分别为２２．１％和６１．４％，（ｕ＝２．１４，Ｐ＜０．０５）；经配对比较，两法呈现良好的正相关关系，ｒ＝０．７０６（ｔ＝１６．１２，Ｐ＜０．０００５）。根据本实验求得以ＥＬＩＳＡ检测值推算ＩＲＭＡ值的直线回归方程式是：Ｙ＝３．５９９５＋１．０４８０Ｘ。作者认为：用国产ＩＲＭＡ纸片法试剂盒检测新生儿脐血ＴＳＨ时，其上限值可界定在≤９ｍＩＵ／Ｌ。     

老年人胫骨超声检测的临床意义

目的了解老年人胫骨骨强度的变化。方法用骨定量超声仪（ＱＵＳ）测量１５５例老年人和３８５例青年人胫骨超声速度（ＳＯＳ），女性同时用双能Ｘ线骨密度仪（ＤＥＸＡ）测左前臂中、远端１／３交界处骨矿密度（ＢＭＤ）。结果两组（６０～６９岁组和≥７０岁组）老年人ＳＯＳ，女性分别为３７６８±１２１和３７４８±１３２ｍｓ－１，男性分别为３９０６±１２３和３９２５±６６ｍｓ－１。老年人ＳＯＳ显著低于青年人（Ｐ＜０．００１），女性分别低５．２％±３．０％和５．７％±３．３％，男性分别低１．８％±３．１％和１．３％±１．７％，男女差异有显著性（Ｐ＜０．００１）。两组老年人骨质疏松症（ＯＰ）检出率女性分别为４６．５％和６１．１％，男性分别为１１．４％和９．１％，女性显著高于男性（Ｐ＜０．００１）。ＱＵＳ与ＤＥＸＡ的相关系数（ｒ）为０．６５７（Ｐ＜０．００１），ＯＰ检出率分别为４９．４％和５５．１％，诊断符合率为６０．０％。结论老年人胫骨ＳＯＳ明显下降，老年女性ＳＯＳ明显低于老年男性。     

重组体pCD—HCV1诱发小鼠免疫反应的研究

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组体诱发小鼠免疫反应。方法将编码Ⅱ型ＨＣＶ结构蛋白的基因片段Ｃ、Ｅ１和大部分Ｅ２插入到真核细胞表达载体ｐＣＤＳＲα１中,构建成重组体ｐＣＤＨＣＶ１。经肌内注射将此重组体免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果ｐＣＤＨＣＶ１（１００μｇ／只,ｎ＝１２）３～４次接种小鼠后,血清抗体水平达０．７１～０．７７（Ａ值,下同）,空载体ｐＣＤＳＲα１免疫鼠（ｎ＝８）,血清抗体阴性;对其中８只免疫鼠持续检测１８周,未见抗体水平有下降趋势（０．６８～０．７５）。重组体ｐＣＤＨＣＶ１免疫鼠（ｎ＝１２）的脾细胞对ＨＣＶ合成肽ＣＰ９、基因重组抗原Ｃ、Ｅ１刺激后,均出现增殖反应（ｃｐｍ）,ＳＩ分别为４．１４±０．９,３．９８±１．６,４．０２±１．２,与ｐＣＤＳＲα１免疫鼠（ｎ＝８）相比,差异有显著性（Ｐ＜０．００１）。结论构建的ＨＣＶＤＮＡ重组体可诱发Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生免疫反应。     

弓形虫主要表面抗原基因( P30)大肠杆菌中以融合蛋白形式的初步表达(英文)

根据已发表的弓形虫主要表面抗原（ Ｐ３０）的基因序列,设计合成了一对引物,通过聚合酶链反应,扩增出 Ｐ３０ 基因,将 Ｐ３０ 基因克隆入表达质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｍ Ｅ Ｘ１ 中,经酶切鉴定后,阳性重组质粒转化宿主菌 Ｊ Ｍ １０９（ Ｄ Ｅ３ ）,宿主菌经 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导表达后,产物进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ和 Ｗ ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果显示, Ｐ３０ 基因以融合蛋白的形式表达,表达产物具有特异的免疫反应性。     

纤溶酶原激活物抑制物—1基因转导对肾小球系膜细胞外基质积聚 …

目的 利用体外基因转染技术使纤溶酶原激活物抑制物－１（ＰＡＩ－１）基因过表达,直接观察局部ＰＡＩ－１对大鼠系膜细胞外基质（ＥＣＭ）积聚的影响,解析ＥＣＭ积聚的分子机制。方法 以绿色导入体外荧光蛋白（ＧＦＰ）为报告基因,构建ＰＡＩ－１／ＧＦＰ融合基因真核表达载体,利用脂质体将外源ＰＡＩ－１ ＣＤＮＡ导入体外增减的大鼠系膜细胞。在活细胞状态下,动态观察外源基因的表达。用Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交、ＥＬＩＳＡ方     

小儿病毒性心肌炎的氧自由基变化及其相关因素

对６１例病毒性心肌炎（ＶＭＣ）患儿检测了ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ、ＭＤＡ。发现ＶＭＣ患儿发病１周内ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ下降,ＭＤＡ升高;经大剂量维生素Ｃ治疗后,ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ、ＭＤＡ于４～６周恢复正常。ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ与ＣＫ－ＭＢ呈负相关;与ＥＦ、ＦＳ呈正相关;ＭＤＡ与ＣＫ－ＭＢ呈正相关,与ＧＳＨ－ＰＸ、ＳＯＤ呈负相关。ＭＤＡ升高与否和心电图ＳＴ－Ｔ改变有关,ＧＳＨ－ＰＸ、ＳＯＤ降低与否和心     

血管内皮细胞生长因子与脑膜瘤瘤周脑水肿的相关关系

应用免疫组化方法检测３３例脑膜瘤组织中血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）蛋白表达,根据颅脑ＭＲＩ或ＣＴ扫描估计瘤周脑水肿程度。结果：脑膜瘤ＶＥＧＦ表达率７５％,４例可疑表达,表达系数（Ｘ±Ｓ）为２０３±０９６,脑水肿系数（Ｘ±Ｓ）为２３９±１２７,ＶＥＧＦ蛋白表达与ＰＶＢＥ存在相关关系（ｒ＝０７３５２,ｐ＜０００１）。证明ＶＥＧＦ存在于脑膜瘤组织中,在瘤周脑水肿方面发挥重要作用。