PCR-RFLP鉴别微小按蚊亲缘种A和C

目的　建立微小按蚊复合体不同亲缘种A和C的分子鉴别方法—PCR产物酶切片段长度多态性分析 (PCR RFLP)。　方法　用单蚊蚊腿消化提取基因组DNA ,PCR特异扩增核糖体 2 8S第 3结构域 (D3 )基因 ,对PCR产物进行纯化、克隆和测序 ;分析微小按蚊A和CD3基因的酶切图谱 ,选择合适的限制性内切酶对两者PCR产物进行特异性切割 ,按照酶切片段长度区分两亲缘种。　结果　微小按蚊A被限制性内切酶MboII切割后在约 3 76bp、2 68bp和 10 8bp处出现 3条条带 ,而微小按蚊C因第 96bp、97bp位点突变 ,不存在限制性内切酶MboII的特异识别位点而未被消化 ,仅在 3 76bp处存在唯一条带。　 结论　本实验建立的PCR RFLP分子鉴别方法能有效地将形态难以鉴别的微小按蚊亲缘种A和C(GenBank :AF416782 ,AF415 5 94)区分开来。     

进化速率不同的分子标记对微小按蚊新亲缘种的研究

目的选择进化速率不同的核糖体rDNA-ITS2、rDNA-28S-D3基因和线粒体DNA（mtDNA）COⅡ基因作为分子标记，研究我国微小按蚊变异及新的亲缘种。方法用蛋白酶K消化单蚊蚊腿，提取基因组DNA，PCR特异扩增rDNA-ITS2、rDNA-28S-D3和mtDNA-COⅡ基因片段，对PCR产物进行纯化、测序和序列分析，并基于mtDNA-COⅡ基因采用最大似然法构建种系发生树。分析微小按蚊变异地位和进化关系。结果1）云南元江微小按蚊rDNA-ITS2扩增片段约700bp，其他微小按蚊为480bp左右；2）ITS2和D3序列分析显示3种单倍型，其中元江微小按蚊基因长度与碱基组成显著不同；3）mtDNA-COⅡ种系发生树显示元江微小按蚊与其他微小按蚊的亲缘关系较远。结论我国存在微小按蚊A和C之外的新的微小按蚊亲缘种。     

微小按蚊A、C的PCR和同工酶鉴别比较研究

目的?摇比较PCR和同工酶两种鉴别微小按蚊A、C亲缘种的方法。 方法 将现场采集后经形态初步鉴定为微小按蚊的样本，经PCR产物酶切片段长度多态性分析（PCR-RFLP）与乌头按蚊和杰普尔按蚊区分，等位基因特异扩增法（PCR-ASA）进一步鉴别微小按蚊A和C。再将用此方法鉴别后的微小按蚊羽化24 h内单只虫体样本，采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳，加以辨别区分。 结果 经测序验证，PCR方法可以简单明确地将微小按蚊A、C加以鉴别。几种用于鉴别的同工酶中，只有酯酶（EST）同工酶对微小按蚊A、C具鉴别意义。 结论 对于微小按蚊A、C的鉴别，PCR方法明显优于同工酶方法。     

海南省与云南省两地微小按蚊杂交试验

目的： 观察海南省与云南省两地微小按蚊之间是否存在种间差异。方法： 在两地牛房采集微小按蚊,单雌驯养繁殖, 用强迫交配方法进行杂交试验, 观察 Ｆ１ 代的可育性。制作杂种 Ｆ１ 卵巢营养细胞多线染色体标本, 观察染色体各区域的联会情况。结果： 云南省微小按蚊（ Ｙ） ♀×海南省微小按蚊（ Ｈ） ♂杂交组卵孵化率为０ , 卵内无胚胎形成。（ Ｈ♀× Ｙ♂） Ｆ１ 各回交组中, 大多数卵孵化率显著低于亲本。（ Ｈ♀× Ｙ♂） Ｆ１ 雌蚊卵巢营养细胞多线染色体３ Ｒ 的２９ 区、３６ 区及３７ 区, Ｘ 性染色体的４ 区和６ 区出现恒定不联会。结论： 海南省与云南省两地微小按蚊已出现明显生殖隔离, 系两个不同的亲缘种。     

海南省与云南省两地微小按蚊杂交试验

目的： 观察海南省与云南省两地微小按蚊之间是否存在种间差异。方法： 在两地牛房采集微小按蚊,单雌驯养繁殖, 用强迫交配方法进行杂交试验, 观察 Ｆ１ 代的可育性。制作杂种 Ｆ１ 卵巢营养细胞多线染色体标本, 观察染色体各区域的联会情况。结果： 云南省微小按蚊（ Ｙ） ♀×海南省微小按蚊（ Ｈ） ♂杂交组卵孵化率为０ , 卵内无胚胎形成。（ Ｈ♀× Ｙ♂） Ｆ１ 各回交组中, 大多数卵孵化率显著低于亲本。（ Ｈ♀× Ｙ♂） Ｆ１ 雌蚊卵巢营养细胞多线染色体３ Ｒ 的２９ 区、３６ 区及３７ 区, Ｘ 性染色体的４ 区和６ 区出现恒定不联会。结论： 海南省与云南省两地微小按蚊已出现明显生殖隔离, 系两个不同的亲缘种。     

广西和云南两地微小按蚊的杂交试验

对广西和云南两地微小按蚊进行杂交试验。结果杂种F_1雌蚊都能育,卵巢发育正常。(Y×G)F_1雄蚊均不能育,其睾丸畸形胀大。(G×Y)F_1雄蚊虽能育,但睾丸略显萎缩,与亲本回交所产的卵孵化率均极低。杂种雌蚊卵巢营养细胞多线染色体的X染色体和常染色体均有不联会区段,以38区的不联会最为恒定。上述结果表明两地微小按蚊已出现不完全生殖隔离现象,有可能是微小按蚊复合体的两个亲缘蚊种。     

微小按蚊和溪流按蚊翅斑形态的比较

目的：比较微小按蚊和溪流按蚊翅斑的形态，了解它们的变异情况，寻找可靠的鉴别特征。方法：微小按蚊采自云南省景洪县基诺乡，溪流按蚊采自广西壮族自治区凌云县。将母蚊产的卵，在实验室饲养至成蚊，再将成蚊的翅制成玻片标本，在显微镜下测量标本的翅长和部分翅斑的长度。结果：共检查微小按蚊雌蚊翅５２个，雄蚊翅６０个，溪流按蚊雌蚊翅４０个，雄蚊翅６０个。认为翅前缘脉上分脉前白斑（ＰＳＰ）的有无和分脉白斑与分脉暗斑比例（ＳＰ／ＳＤｒａｔｉｏ）的大小，是鉴别微小按蚊和溪流按蚊的重要依据。结论：无论是雌蚊还是雄蚊，微小按蚊的翅斑形态与溪流按蚊的翅斑形态均有较为明显的差异。     

云南微小按蚊A和C栖性的比较研究

目的 对我国云南地区微小按蚊A、C栖息习性进行初步探讨。 方法 在云南省勐腊县和元江县各选取一个自然村的人房和牛房，采用紫外灯通宵悬挂诱捕法采集蚊虫样本，将经形态学鉴定的微小按蚊的样本，分别取单蚊蚊腿，经多重PCR方法鉴别为微小按蚊A或C，统计其在人房和牛房的分布差异。对疑为微小按蚊A/C杂合子的，采用等位基因特异扩增法、PCR产物酶切片段长度多态性分析和测定D3序列进行鉴定。 结果 在人房中，微小按蚊A所占比例为21.4%，微小按蚊C为78.6%；牛房中，微小按蚊A所占比例为18.5%，微小按蚊C为81.5%，分布差异无统计学意义（χ²=0.4157，P>0.05）。疑为微小按蚊A/C杂合子的样本，等位基因特异扩增法（PCR-ASA）、PCR产物酶切片段长度多态性分析（PCR-ASA）结果同时出现微小按蚊A、C的特征条带(PCR-ASA: 376、294和112 bp, PCR-RFLP: 108、268和376 bp)，其D3序列在微小按蚊A与C的所有5个变异位点均出现杂合峰信号，即同时具有微小按蚊A和C相应碱基的峰信号。 结论 尚未发现我国云南微小按蚊A、C在人房和牛房的栖息比例存在差异。在我国云南勐腊县首次发现微小按蚊A/C杂合子。     

我国微小按蚊A、C的形态和染色体核型研究

目的对微小按蚊A、C的形态和有丝分裂期染色体核型进行比较研究,观察并筛选具有鉴别意义的特征。方法将现场采集后经形态学鉴别初步认定为微小按蚊的样本带回实验室单管饲养,待其产卵后,经多重PCR方法鉴别为微小按蚊A或C。子代羽化后的成蚊标本使用解剖镜、光学显微镜和扫描电镜进行形态学观察和比较。取子一代四龄幼虫的脑神经节制作染色体核型,吉氏染色,显微镜下观察。结果微小按蚊A和C的形态学差异主要表现为是否存在膊白斑（HP）、V2．1白斑及喙腹面白斑,尤其是V2．1白斑和喙腹面白斑,微小按蚊A不出现或出现率极低,微小按蚊C则有很高的出现率,具有稳定差异。光学显微镜和扫描电镜下微小按蚊A、C翅前缘脉、V2．1及翅燧处鳞片及翅目上小钩均未见差异。微小按蚊A、C的常染色体着丝点指数和相对长度均无明显差异,性染色体均为近中着丝粒核型,但略有不同。结论我国微小按蚊A、C的形态和染色体核型均存在一定的差异。     

微小按蚊种团mtDNA-COII基因变异的研究

目的　研究我国微小按蚊种团成员 (微小按蚊A/C、乌头按蚊、瓦容按蚊及杰普尔按蚊 )的线粒体DNA(mtDNA)COII基因的分子变异和种系发生关系。　方法　单蚊提取DNA ;mtDNA COII基因的扩增和测序 ;用最大似然法DNAML构建种系发生树。　结果与结论　我国存在微小按蚊A、C两个亲缘种 ,两者COII基因 1 6个位点存在碱基置换 ,突变频率为 2 .3 % ,变异小于其它种团成员     

微小按蚊种团酯酶同工酶比较研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)技术比较分析了 3种 (微小按蚊、乌头按蚊、溪流按蚊 )雌按蚊酯酶 ( EST)酶谱 ,EST出现两组区带 ,微小按蚊 (含 2个不同地株 )存在遗传上的多态现象 ,乌头按蚊 EST酯酶相对简单。各自均有稳定的酶带 ,并可根据 Rm值结合各自特殊酶带区分成 3个不同的种     

微小按蚊复合研究进展

近年来，有关微小按蚊复合体的研究相继开发，尽管现代分子生物学技术在按蚊复合体研究中日渐重要，但传统的生物学方法在微小按蚊复合近缘种鉴别研究中仍占主导地位。本文从以上两方面对其研究进展进行综述。     

微小按蚊复合体研究进展

摘要 近年来,有关微小按蚊复合体的研究相继开展,尽管现代分子生物学技术在按蚊复合体研究中日渐重要,但传统的生物学方法在微小按蚊复合体近缘种鉴别研究中仍占主导地位。本文从以上两方面对其研究进展进行综述。     

广西、海南、云南微小按蚊3种同工酶谱比较研究

目的 探索我国微小按蚊复合体同工酶谱鉴别指标。方法选择广西微小按蚊（A.m.G）、海南微小按蚊（A.m.H）和云南微小按蚊（A.m.Y）的单雌线蚊匀浆，采用不连续性聚丙烯酰胺凝胶垂直板状电泳法分离，特异性底物染色，比较观察乳酸脱氢酶（LDH）、醇脱氢酶（ADH）和酯酶（EST）3种同工酶谱。结果三地微小按蚊的LDH同工酶谱相同，均具1条Rm14酶带；ADH酶谱中三地微小按蚊均显一条酶带，A.m.G与A.m.H具相同酶带Rm34，而A.m.Y则是1条Rm40酶带；EST的主带谱A.m.G与A.m.H基本相似，前者显示Rm18、35和61、后者显示Rm18、35、39和61。而A.m.Y明显不同于A.m.G和A.m.H显示Rm18、39、43、50、56和59六条主带。结论ADH和EST同工酶谱在不同种的微小按蚊中存在明显差别，可能在区别我国微小按蚊姐妹种中有较大的应用价值。     

云南省微小按蚊A、C种群密度高峰及嗜血习性的观察

目的研究云南省勐腊县微小按蚊A、C种群密度高峰及其与当地疟疾发病的相关性,并比较微小按蚊A、C的嗜血习性。方法在云南省勐腊县选取人房,逐月收集微小按蚊,以复合PCR方法分子鉴别其为微小按蚊A或C,观察密度高峰;收集当地疟疾发病情况,分析其与微小按蚊A或C密度高峰的相关性。对勐腊和元江县人房和牛栏采集的吸血蚊经复合PCR方法分子鉴别后,以ELISA方法检测胃血来源。结果微小按蚊A的密度高峰出现在9月,微小按蚊C则在7月,两者密度高峰的出现均会引起当地疟疾发病人数的增加。微小按蚊A的吸人血率(19 .1 %)略高于微小按蚊C的(12 .8 %) ,但无统计学意义。结论微小按蚊A、C的的种群密度高峰略有不同,两者均嗜吸牛血,尚不能认为微小按蚊A、C的嗜血习性存在差异。     

海南垦区大劣按蚊和微小按蚊分布与疟疾发病的关系

海南农垦系统主要分布在山林地带 ,少数单位居住在丘陵及滨海平原地区 ,其疟疾发病情况各不相同。 1991～ 1998年对垦区进行按蚊调查 ,并对不同按蚊分布区疟疾的发病情况进行系统观察。1　材料与方法1.1　按蚊调查　晚 8～ 12ｈ ,以人与牛诱捕成蚊 ,每小时捕蚊 15ｍｉｎ ,并带回鉴别蚊种。1.2　疟疾病例的发现　对“四热”病人采血涂片 (厚、薄血膜各一 ) ,染色后镜检疟原虫并鉴别虫种。2　结果与分析2 .1　媒介按蚊情况　对海南省中高疟区的儋州市、澄迈县、屯昌县、琼海市、万宁市、陵水县、三亚市、保亭县、通什市、琼中县、白沙县和乐东…     

微小按蚊抗药性的历史及现状

微小按蚊是我国疟疾传播的主要媒介,为控制疟疾的流行,人们研制并使用了大量的杀虫剂.与此同时,蚊虫也对杀虫剂产生了抗药性.目前,蚊虫的抗药性问题已成为世界性难题,该文从微小按蚊抗性发展、影响蚊虫抗性的遗传基因两方面作了综述,以期为微小按蚊控制提供基础资料.     

广西、海南、云南微小按蚊3种同工酶谱比较研究

目的　探索我国微小按蚊复合体同工酶谱鉴别指标。　方法　选择广西微小按蚊 (A .m .G)、海南微小按蚊(A .m .H)和云南微小按蚊 (A .m .Y)的单雌线雌蚊匀浆 ,采用不连续性聚丙烯酰胺凝胶垂直板状电泳法分离 ,特异性底物染色 ,比较观察乳酸脱氢酶 (LDH)、醇脱氢酶 (ADH)和酯酶 (EST) 3种同工酶谱。　结果　三地微小按蚊的LDH同工酶谱相同 ,均具 1条Rm14酶带 ;ADH酶谱中三地微小按蚊均显一条酶带 ,A .m .G与A .m .H具相同酶带Rm 3 4,而A .m .Y则是 1条Rm 40酶带 ;EST的主带谱A .m .G与A .m .H基本相似 ,前者显示Rm18、3 5和 61,后者显示Rm18、3 5、5 9和 61。而A .m .Y明显不同于A .m .G和A .m .H ,显示Rm18、3 9、43、5 0、5 6和 5 9六条主带。　结论　ADH和EST同工酶谱在不同种的微小按蚊中存在明显差别 ,可能在区别我国微小按蚊姐妹种中有较大的应用价值。