过继性转移TGF-β诱导CD4＋CD25＋调节性T细胞对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响

目的观察过继性转移转化生长因子-β（TGF-β）诱导生成CD4＋CD25＋调节性T细胞对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响。方法从正常妊娠CBA/J孕鼠脾脏中分选CD4＋CD25-T细胞,体外经TGF-β诱导转化为CD4＋CD25＋调节性T细胞,流式细胞仪检测其对自身反应性T细胞增殖的抑制作用。实验小鼠随机分为正常妊娠组和自然流产模型组,后者根据干预方式的不同分为空白组（自然流产模型未干预）、CD4＋CD25＋T细胞组（自然流产模型过继性转移天然CD4＋CD25＋调节性T细胞）、TGF-β诱导CD4＋CD25＋T细胞组（自然流产模型过继性转移TGF-β诱导CD4＋CD25＋调节性T细胞）和对照组（自然流产模型注射CD4＋CD25-T细胞）。于孕第14日采集血样后处死小鼠。ELISA法检测血清白介素-10（IL-10）、TGF-β1和γ干扰素（IFN-γ）水平,Western blotting和Real-time PCR检测蜕膜组织Foxp3 mRNA和蛋白的表达。计算各组孕鼠胚胎丢失率。结果与空白组和对照组比较,天然CD4＋CD25＋T细胞组和TGF-β诱导CD4＋CD25＋T细胞组血清IL-10、TGF-β1水平升高,IFN-γ水平降低;蜕膜组织中Foxp3 mRNA和蛋白的表达上调;胚胎丢失率显著降低（P〈0.05）。结论向自然流产模型小鼠过继性转移TGF-β诱导生成CD4＋CD25＋调节性T细胞,可诱导小鼠体内Th1/Th2免疫反应向Th2优势偏移,降低胚胎丢失率。     

从黑色素瘤荷瘤小鼠中分离纯化髓系抑制性细胞

目的：从黑色素瘤荷瘤小鼠脾脏中分离得到CD11b＋Gr-1＋的髓系抑制性细胞（ Myeloid derived suppressor cells ,MDSCs）。方法给C57BL/6小鼠注射LPS或者小鼠黑色素瘤细胞株B16BL6后,取小鼠的脾脏细胞,检测其中CD11b＋Gr-1＋的MDSCs 细胞的比例。通过流式细胞仪（ flow cytometry, FCM）分选出CD11b＋Gr-1＋的细胞,培养24小时后,CBA（cytometric bead array）法检测其分泌IL-10的情况;提取CD11b＋Gr-1＋细胞的总RNA,利用RT-PCR的方法检测其表达IFN-β、TGF-β、iNOS、ARG-1和IDO的情况。结果与注射LPS相比,注射B16BL6细胞株的小鼠脾脏中CD11b＋Gr-1＋的MDSCs细胞的比例更高;利用FCM分选得到CD11b＋Gr-1＋的MDSCs,进一步鉴定发现其表达IL-10、IFN-β、TGF-β、iNOS、ARG-1和IDO。与先前报道的MDSCs的特征相一致。结论可从B16BL6荷瘤小鼠脾脏中获得高纯度的MDSCs用于实验研究。     

转化生长因子β1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达的影响

目的：研究转化生长因子β1（TGF-β1）对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达水平的影响。方法：以丝裂霉素处理的Balb／C（H-2^d）小鼠脾细胞为刺激细胞，羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）标记的C57BL／6（H-2^b）小鼠T细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞培养（MLC）。分别设立对照组（TGF—β10ne／ml）、低浓度组（TGF—β1ng／ml）、中浓度组（TGF—β15ng／ml）和高浓度组（TGF-β1 20ng／ml）。MLC结束后利用Alamar Blue检测T细胞增殖活性，流式细胞仪检测CD3、CD25表达水平。同时设立白细胞介素．2（IL-2）组（TGF—β15ng／ml＋IL-2100U／ml），以观测其对TGF-β1生物学效应的影响。结果：TGF-β1可明显降低同种抗原活化T细胞的增殖反应强度，而且随着TGF-β1剂量加大，免疫抑制能力增强。TGF-β1在抑制T细胞增殖的同时，也可使CD25^＋T细胞比例上调，但并无明显的剂量依赖性。加入外源性IL-2后，T细胞增殖活性增强，同时CD25^＋T细胞比例降低。结论：TGF-β1可明显抑制同种抗原活化T细胞的增殖，并使CD25^＋T细胞比例增加，而外源性IL-2则可逆转TGF-β1的免疫抑制功能，下调CD25^＋T细胞比例，说明外源性IL-2可以影响TGF-β1的生物学效应。     

哈萨克族食管癌外周血CD4＋CD2~＋Foxp3＋调节性T细胞与TGF-β1、IL-10的相关性研究

目的探讨哈萨克族食管癌患者外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Foxp3＋regulatory Tcells,Treg）的变化,及与转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-10（IL-10）表达水平的相关性。方法采用流式细胞术检测40例食管癌患者及26例健康体检者外周血单个核细胞（PBMCs）中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞占CD4＋T细胞的比例;采用ELISA法检测血清中TGF-β1、IL-10表达水平。结果哈萨克族食管癌患者外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞比例、TGF-β1和IL-10表达水平分别为（7.50±1.94）%、（46.41±11.12）μg/ml、（48.10±13.49）pg/ml,高于对照组（5.04±0.92）%、（35.21±7.46）μg/ml、（33.78±7.31）pg/ml（P〈0.05）。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期者与Ⅲ~Ⅳ期者Treg细胞比例及TGF-β1、IL-10表达水平差异有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1、IL-10表达水平与CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞比例明显相关（P〈0.01）。结论检测CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例对于判断食管癌的病期有一定价值。TGF-β1、IL-10的表达水平明显升高,可能参与Treg细胞对机体的免疫负调节机制。     

黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4IFN-γIL-10的影响

目的探讨黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4、IFN-γI、L-10的影响。方法将BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组和黄芪组。以卵蛋白（OVA）致敏激发法制备小鼠哮喘模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ、IL-10及血清中IL-10的含量;流式细胞术（FCM）、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测小鼠脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量及FoxP3 mRNA表达情况。结果哮喘组小鼠BALF中IL-4含量明显高于对照组（P〈0.01）而低于黄芪组（P〈0.01）。与对照组相比,哮喘组小鼠BALF中IFN-γI、L-10、血清中IL-10含量及脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量、FoxP3 mRNA表达水平明显降低（P〈0.01）;而黄芪组的上述改变较哮喘组显著增加（P〈0.05）。结论 CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与了支气管哮喘的发病过程,黄芪可通过上调CD4^＋CD25^＋调节性T细胞、FoxP3 mRNA的表达及增加IL-10含量减轻哮喘炎症。     

甘草养阴汤在改善小鼠银屑病样皮损和调节炎症反应中的作用

[目的] 探索自拟方甘草养阴汤（GNY）对咪喹莫特（IMQ）诱导的银屑病样皮肤损伤小鼠模型的疗效。[方法] 将小鼠分为健康对照组、模型组（IMQ诱导银屑病小鼠）和治疗组（给予银屑病小鼠GNY,浓度为2.5、5 g/kg）;共4组（动物数=8/组）。采用银屑病病灶面积和严重程度指数（PASI）、苏木-精伊红染色和Baker评分用于评估疾病的严重程度。采用免疫组织化学或免疫荧光染色法对真皮的Gr-1,CD11c,RORγt和TGF-β阳性的炎性细胞进行计数。采用流式细胞仪分析脾脏细胞中的CD4⁺IL-17+Th17细胞和CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例。使用qPCR半定量IL-6、IL-10、IL-17A、IL-22、IL-23、TNF-α、TGF-β和AMPK-1的相对mRNA表达。[结果] 与模型组相比,GNY治疗的小鼠在两种浓度下均能够改善了病灶的形态学特征,包括PASI评分和上皮角质细胞增生。较高浓度的GNY可显着降低银屑病小鼠模型真皮中的Gr-1,CD11c,RORγt和TGF-β阳性细胞比例;下调脾脏Th17细胞比例,增加Treg细胞的表达。此外,IMQ模型组小鼠的真皮内IL-6、IL-10、IL-17A、IL-22、IL-23、TNF-α、TGF-β和AMPKɑ1的相对mRNA表达升高,在以5g/kg浓度的GNY治疗的模型小鼠中表达明显降低。[结论] 研究表明GNY可改善IMQ诱导的小鼠银屑病样皮肤损伤表现、减轻炎症反应;为临床治疗银屑病提供依据。     

Notch1信号通路通过调控Th17细胞参与实验性自身免疫性甲状腺炎的发生和发展

目的 探讨Notch1信号通路是否通过调控辅助性T细胞17 (Th17)参与实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）的发生和发展。方法 将24只小鼠随机平均分为NC组、EAT-A组（给予猪甲状腺免疫球蛋白多点皮下注射）、EAT-B组（猪甲状腺免疫球蛋白多点皮下注射前给予γ分泌酶抑制剂腹腔注射）。HE染色观察甲状腺内淋巴细胞浸润程度;流式细胞术检测小鼠脾脏单核细胞（SMC）悬液中Th17细胞比例;ELISA法检测血清甲状腺球蛋白（TgAb）滴度和SMC培养上清白细胞介素-17A (IL-17A)浓度;实时PCR分析脾细胞中Notch1、Hes1、RORγt和IL-17A mRNA表达水平;Western blotting检测脾脏组织中IL-17A蛋白表达水平。结果EAT-A组和EAT-B组小鼠甲状腺中有不同程度淋巴细胞浸润,与NC组相比血清TgAb滴度显著升高（P <0.01）。EAT-A组和EAT-B组小鼠Notch1、Hes1、RORγt和IL-17A mRNA表达,以及SMC中Th17细胞比例、IL-17A浓度、IL-17A蛋白表达水平均高于NC组（均P <0.01）。EAT...     

苏木水提物对皮肤移植小鼠CD4^＋ CD25^＋ T细胞及IL-10 TGF-β1的影响

目的探讨苏木水提物在小鼠同种皮肤移植中对CD4＋ CD25＋ T细胞及IL-10、TGF-β1水平的影响。方法 C57BL/6和BALB/c小鼠分别为供体和受体,建立皮肤移植模型。实验分为对照组、苏木组、苏木加半量环孢素A（CsA）组、CsA组。术前3 d给药,术后逐日观察移植皮片存活情况;术后3 d、7 d时检测脾组织中CD4＋ CD25＋ T细胞数量变化及血清中IL-10、TGF-β1表达情况。结果与对照组比,苏木组、苏木加半量CsA组、CsA组移植皮片存活时间明显延长（P〈0.01）,移植后3 d、7 d时,CD4＋ CD25＋ T细胞数量增加（P〈0.01）,IL-10、TGF-β1水平在移植后7 d时均不同程度上调（P〈0.05）。结论苏木水提物可延长同种移植物的存活时间,上调CD4＋ CD25＋ T细胞及IL-10、TGF-β1的水平,有较强的免疫抑制作用。     

益髓颗粒对ITP小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及其相关因子影响的研究

目的建立免疫性血小板减少性紫癜（ITP）小鼠动物模型,观察益髓颗粒对模型小鼠脾脏CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞（Treg）及血清TGF-β1的影响,探讨益髓颗粒的免疫调节机制。方法 40只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松治疗组、益髓颗粒治疗组,除正常组外,其余各组均隔日一次按100μl/20g腹腔注射1：4豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS）建立ITP小鼠模型,造模第8天开始各组均按0.2ml/10g·d-1体积灌胃,正常组、模型组灌服生理盐水,益髓颗粒组治疗按0.3g/10g·d-1灌胃,连续8天后眼球取血分离血清,ELISA法检测TGF-β1,取脾制备脾单细胞悬液,用流式细胞仪检测脾Treg。结果模型组小鼠Treg细胞比例、TGF-β1水平明显低于正常组;泼尼松及益髓颗粒治疗组Treg细胞比例及TGF-β1水平均高于模型组,但Treg仍未达到正常水平,与正常组比仍存在差异,而TGF-β1与正常组比差异不明显无统计学意义。结论 ITP小鼠Treg细胞比例减少、TGF-β1水平降低可能与ITP的细胞免疫失调相关,益髓颗粒可通过提高ITP小鼠Treg细胞的比例及血清TGF-β1水平而对ITP的细胞免疫失调起调节作用。     

调节性T细胞治疗实验性小鼠多发性肌炎及机制研究

目的探讨CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞对于实验性自身免疫性肌炎（EAM）小鼠的治疗价值及机制。方法免疫磁珠分
选技术从BALC/c小鼠脾脏中分选出足量CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞以备回输,观察干预组及未干预组EAM小鼠肌肉组织
病理学变化,流式细胞仪检测两组小鼠脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞表面PD-1及CTLA-4的表达变化,双抗体夹心ELISA
法检测外周血IL-10、TGF-β的变化。结果干预组小鼠较未干预组肌肉病理炎性细胞浸润明显减轻,其外周血IL-10、TGF-β含
量较未干预组明显升高（P<0.05）,脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞表面PD-1及CTLA-4表达明显升高（P<0.05）。结论CD4+
CD25+ Foxp3+ Treg细胞回输对于EAM小鼠的治疗效果是通过增加外周血IL-10及TGF-β水平和增高脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+
Treg细胞表面PD-1及CTLA-4的表达发挥作用。
     

AIHA患者外周血调节性B细胞及IL-10和TGF-β1的检测

目的研究自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者外周血中CD19^＋Tim-1^＋调节性B细胞亚群数量和细胞因子的变化,探讨其在AIHA发病机制中的作用。方法选择30例AIHA患者,分离外周血单核细胞（PBMC）,采用流式细胞术（FCM）检测调节性B细胞的数量,用ELISA测定培养上清中IL-10及TGF-β1水平,与同期选择的健康对照组比较。结果 AIHA患者PBMC中CD19＋Tim-1＋B细胞数量低于健康对照组（[1.15±0.62）%vs（2.86.±0.67）%,P〈0.05],培养液上清中细胞因子IL-10的水平也低于健康对照组,TGF-β1的变化无统计学意义。结论CD19＋Tim-1＋调节性B细胞与相关的细胞因子的变化可能参与AIHA患者的免疫学发病机制。     

辛伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的：研究辛伐他汀（SIM ）对高糖培养肾小球系膜细胞（GMC）增殖和细胞周期的影响,并观察其炎症因子和细胞外基质的变化。方法将大鼠 GMCs 分为4组：低糖组[LG 组,葡萄糖（Glu）5．6 mmol／L ],高糖组（HG 组,Glu 30 mmol／L ）, HG ＋ SIM （10μg／L）组和 HG ＋ SIM （25μg／L）组。采用4-甲基偶氮四唑蓝（M TT ）法检测各组细胞的增殖能力,同时比较各组细胞的 G0／G1,G2＋ M 期和 S 期细胞比例。比较各组细胞上清液中的转化生长因子β1（TGF-β1）、纤维黏连蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（COL4）水平。结果 HG 组不同时刻的吸光度（A）高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG 组,差异有统计学意义（P＜0．05）。 LG 组的 G0／G1期细胞比例为（35．67±3．38）％,S 期细胞比例为（41．24±5．64）％;HG 组的 G0／G1期细胞比例为（25．88±4．02）％,S 期细胞比例为（28．65±1．88）％;HG ＋ SIM （10μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（28．12±2．01）％,S 期细胞比例为（35．55±2．09）％;HG ＋ SIM （25μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（31．85±3．52）％,S 期细胞比例为（39．82±2．23）％,差异有统计学意义（P＜0．05）。 HG 组上清液 TGF-β1、FN 和 COL4水平高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 SIM 可以通过降低 TGF-β1水平来抑制 GMCs 的增殖并调整细胞周期,抑制 GMCs 肥大。     

HBV相关性肝癌患者CD19+CD24+CD38+调节性B细胞和IL-10的检测及临床价值

目的 检测HBV相关性肝癌患者CD19+ CD24+ CD38+调节性B细胞(Bregs细胞)的分布频率及血清白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平并分析其临床意义.方法 收集93例HBV相关性肝癌患者、47例HBV相关性肝硬化患者和57例健康体检者的外周血,采用流式细胞术检测CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率,化学发光法检测血清IL-10水平,并分析其与疾病分期、肿瘤个数、血管侵犯等临床指标的关系;同时收集20例HBV相关性肝癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织,采用流式细胞术检测组织中CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率,并分析其与肿瘤位置的相关性.结果 HBV相关性肝癌外周血CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞显著高于肝硬化组和健康对照组,且HBV相关性肝癌晚期(C+D期)患者显著高于早期(0+A期)和中期(B期)患者(P ＜0.05,P＜0.01);HBV相关性肝癌和HBV相关性肝硬化患者血清IL-10水平显著高于健康对照组(P＜0.01);HBV相关性肝癌外周血CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率和血清IL-10水平与肿瘤个数、是否血管侵犯有密切关系;HBV相关性肝癌患者外周血CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率与血清IL-10呈正相关(r =0.46,P＜0.01);HBV相关性肝癌患者癌组织和癌旁组织CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞频率显著高于远癌组织(P＜0.01).结论 CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞可能通过分泌IL-10在HBV相关性肝癌免疫微环境中发挥调节作用,参与肿瘤的发生、发展.     

帕金森病患者血清活化T细胞趋化因子和炎症因子水平及其临床意义

目的:检测帕金森病（PD）患者血清活化T细胞趋化因子（RANTES）水平及炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α的变化,探讨其在PD免疫异常发病机制中的作用。方法:采用ELISA法检测60例PD患者（PD组）和35名健康体检者（对照组）血清RANTES、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,采用Hoehn-Yahr、UPDRS量表分别对PD患者进行病情评估,同时对2组年龄、性别、吸烟、饮酒、血糖、血压、血脂差异一般状况进行检查。结果:PD组患者血清RANTES、IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著高于对照组（P<0.01）;PD 1～5期患者血清RANTES水平差异均有统计学意义（P < 0.05～P < 0.01）,而1～5期患者血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平差异均无统计学意义（P>0.05）;PD患者UPDR评分组间血清RANTES水平轻、中和重度组差异均有统计学意义（P<0.01）,而IL-1β、IL-6和TNF-α水平轻、中和重度各组间差异均无统计学意义（P>0.05）,且PD组血清RANTES水平与UPDRS评分呈显著正相关关系（P<0.01）。结论:PD患者血清RANTES、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均较对照组有显著升高,提示炎症因子可能发动并维持了PD的发病进程,可为PD患者早期发现、防治提供优先依据。     

调节性B细胞在卵巢癌病人外周血中表达及其临床意义

目的探究调节性B细胞(Bregs)在卵巢癌病人外周血中的表达频率及其与FIGO分期间的关系,并分析其与调节性T细胞(Tregs)及IL-10之间的相关性。方法将卵巢癌(23例)和卵巢良性肿瘤病人(26例)纳入研究,流式细胞术检测外周血CD19+CD24hiCD38hiBreg和CD4+CD25+Treg细胞表达频率及血清IL-10表达水平。并分析两种细胞与FIGO分期、IL-10浓度的关联及两者间的相关性。结果卵巢癌病人外周血中Bregs、Tregs百分比高于卵巢良性肿瘤病人(P < 0.01),并与FIGO分期密切相关,卵巢癌Ⅲ期+Ⅳ期病人高于Ⅰ期+Ⅱ期(P < 0.01);卵巢癌病人血清IL-10高于卵巢良性肿瘤病人(P < 0.01)。相关性分析显示:卵巢癌病人外周血Breg细胞与Treg细胞比例呈正相关关系(P < 0.05);卵巢癌病人血清IL-10与Bregs、Tregs细胞均呈正相关关系(P < 0.05)。结论Bregs和Tregs在卵巢癌病人外周血中所占比例显著升高,能够通过分泌IL-10参与卵巢癌免疫反应,这可能为卵巢癌的免疫治疗提供新靶点。     

Role of interleukin-10 and transforming growth factor beta 1 in otitis media with effusion

Background Otitis media with effusion （OME） is a disease with complicated pathogeneses which are not clearly known Increasing interest has been focused on immunological cells, cytokines and their roles in chronic inflammatory states. This study was designed to disclose the existence and roles of interleukin-10 （IL-10） and transforming growth factor beta1 （TGF-β1） in the cause of OME in adults, and to investigate the probable role of Foxp3^＋CD4^＋CD25^＋ T cells in OME. Methods The concentrations of IL-10 and TGF-β1 in the middle ear effusions （MEEs） and plasmas of 36 adults （45 ears） with OME were measured by means of enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. As contrast, the concentrations of IL-10 and TGF-131 in the plasma of 30 normal volunteers were measured using the same method. Furthermore, the proportion of Foxp3^＋CD4^＋CD25^＋ T cells in CD4^＋ T cells of blood was tested by flow cytometry. Results （1） The concentrations of IL-10 in all MEEs and plasmas of the chronic OME patients were higher than those in patients with acute OME （both P 〈0.05）, so was TGF-131 （both P 〈0.01）. The concentration of IL-10 in MEEs was significantly higher than that in plasmas, not only in acute OME （P〈0.01）, but also in chronic OME （P〈0.01）. In chronic OME, the concentration of TGF-β1 in MEEs had no statistical difference with those in plasmas of the same patients. However, the concentration of TGF-β1 in plasmas of patients with chronic OME was significantly higher than that in plasmas of normal volunteers （P 〈0.01）. （2） The concentrations of IL-10 and TGF-β1 in MEEs of the patients who had been treated more than once were higher than those MEEs of the patients who were treated for the first time, respectively （P〈0.05, P〈0.01）. The level of TGF-β1 in plasmas of the patients who had been treated more than once was higher than in those of the patients who were treated firstly （P 〈0.05）, while the level of IL-10 in plasmas had no difference. The concentration of IL-10 in mucoid MEEs was higher than those in serous ones （P〈0.05）, while TGF-β1 had no statistical difference between mucoid and serous MEEs （P〉0.05）. The concentration of IL-10 in MEEs had a strong correlation with the duration of the illness （r=0.547, P〈0.01）. The same correlation was also found between the concentration of TGF-β1 in MEEs and the times patients being treated （r=0.579, P 〈0.01）. （3） The proportion of Foxp3^＋CD4^＋CD25^＋T/CD4^＋ T cells in the blood of chronic OME was not only significantly higher than that in the acute OME （P〈0.01）, but also higher than that in normal volunteers （P 〈0.01）. In chronic OME, there was a correlation between the proportion of Foxp3^＋CD4^＋CD25^＋ T/CD4^＋ T cells in the blood and the concentration of IL-10 in the plasmas （r=0.602, P 〈0.05）. Conclusions IL-10 and TGF-β1, as two important immunoregulatory mediators, participate in middle ear inflammatory response, especially in chronic course of OME in adults. Foxp3^＋CD4^＋CD25^＋ T cells may play some immunoregulatory roles in the course of this disease.     

Role of PLC-PIP2 and cAMP-PKA Signal Pathways in Radiation-induced Immune-suppressing Effect

Objective The purpose of the present study was to observe the changes in CD4+CD25+Nrp1+Treg cells after irradiation with different doses and explore the possible molecular mechanisms involved. Methods ICR mice and mouse lymphoma cell line(EL-4 cells) was used. The expressions of CD4,CD25,Nrp1,calcineurin and PKC-α were detected by flow cytometry. The expressions of TGF-β1,IL-10,PKA and cAMP were estimated with ELISA. Results At 12 h after irradiation,the expression of Nrp1 increased significantly in 4.0 Gy group,compared with sham-irradiation group(P0.05) in the spleen and thymus,respectively,when ICR mice received whole-body irradiation(WBI). Meanwhile the synthesis of Interleukin 10(IL-10) and transforming growth factor-β1(TGF-β1) increased significantly after high dose irradiation(HDR)( or = 1.0 Gy). In addition,the expression of cAMP and PKA protein increased,while PKC-α,calcineurin decreased at 12h in thymus cells after 4.0 Gy X-irradiation. While TGF-β1 was clearly inhibited when the PLC-PIP2 signal pathway was stimulated or the cAMP-PKA signal pathway was blocked after 4.0 Gy X-irradiation,this did not limit the up-regulation of CD4+CD25+Nrp1+Treg cells after ionizing radiation. Conclusion These results indicated that HDR might induce CD4+CD25+Nrp1+Treg cells production and stimulate TGF-β1 secretion by regulating signal molecules in mice.     

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

目的：探讨高迁移率蛋白 A1（HMGA1）siRNA 对人肝星状细胞 HMGA1、α-SMA 、E-钙黏素（E-cadherin）基因的表达调控作用及增殖活性的影响,并探讨其可能的机制。方法将有效的人工合成的 HMGA1 siRNA 转染人肝星状细胞 LX-2（LX-2）后沉默 HMGA1基因的表达。通过实时荧光定量 PCR（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 LX-2细胞中HMGA1、α-SMA 和 E-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑盐（M TT ）法检测 LX-2细胞增殖水平。结果以HMGA1-siRNA 序列1组沉默效果最好。 TGF-β1刺激组与 TGF-β1＋ NC-siRNA 组之间细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 、E-cad-herin 的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义（P ＞0．05）,细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 表达均明显高于正常对照组（P ＜0．05）,E-cadherin 表达显著低于正常对照组（P＜0．05）;TGF-β1＋ HMGA1 siRNA 组细胞增殖水平及 HMGA1、α-SMA 的 mR-NA 及蛋白表达水平较另外3组均显著下降（P＜0．05）,E-cadherin 表达水平显著增高（P＜0．05）。结论靶向 HMGA1的 siRNA能够沉默 LX-2中 HMGA1的表达;抑制 TGF-β1诱导的 LX-2增殖水平,提示 HMGA1参与了 TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。     

三种成体干细胞对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症状态的影响

目的比较人羊膜上皮细胞（（human amniotic epithelial cell, H-AEC））、羊膜间充质细胞（human amniotic mesenchymal
cell, HA-MSC）和脐带间充质细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC）分泌的细胞因子对脂多糖刺激巨噬细胞
系RAW264.7炎症状态的影响。方法将LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型作为对照组,比较H-AEC、HA-MSC、UC-MSC和
RAW264.7共培养或条件培养基培养RAW264.7对RAW264.7炎症状态的影响。比较各组RAW264.7细胞的迁移能力;检测各
组细胞分泌一氧化氮（NO）的水平;用实时定量多聚酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞经典激活的巨噬细胞（classically
activated macrophage, M1 macrophage）相关的促炎基因如白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死基因а（TNFа）、一氧化氮合成酶-2
（NOS-2）以及M2 macrophage相关的抑炎基因如精氨酸酶（Arg-1）、甘露糖受体基因CD206、B类清道夫受体CD36）表达情况。
结果（1）H-AEC、HA-MSC、UC-MSC 处理后RAW264.7 的迁移率分别为14.7%±4.5%、9.6%±0.7%、13.0%±0.9%,与对照组
（31.1%±11.0%）相比,3 种细胞的条件培养基处理后RAW264.7 的迁移率均降低,差异具有显著性（P<0.05）;（2）H-AEC、
HA-MSC、UC-MSC共培养后RAW264.7 细胞分泌NO的水平分别为24.26±0.72、44.52±2.51、42.25±0.76 μmol/L,与对照组
（45.65±1.78 μmol/L）相比,H-AEC组细胞分泌的NO有显著性下降（P<0.05）;（3）促炎基因与抑炎基因的表达改变：（A）H-AEC
处理组促炎基因IL-1β、TNFа、NOS-2、INFβ的表达下调,与对照组相比有显著差别;HA-MSC、UC-MSC处理组促炎基因INFβ表
达下调显著,其余基因均上调表达;抑炎相关基因如Arg-1、CD206、CD36均上调;（B）3组细胞干预后抑炎症相关基因Arg-1、
CD206、CD36表达均上调,与对照组有显著差异。结论人羊膜上皮细胞、羊膜间充质细胞和脐带间充质细胞可以促进巨噬细
胞向M2型分化,但其效果和机制存在不同。
     

Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的　了解慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血中辅助性T细胞（Th）内干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）和转化生长因子-β（TGF-β）的表达情况,以测定Th1/Th2 /Th3细胞的百分数,探明Th细胞各极化群体在慢性HBV感染中的作用.方法　常规分离外周血单个核细胞（PBMC）,在佛波脂（PMA）、钙离子导入剂伊屋诺霉素Ionomycin、细胞内转运阻断剂莫能星Monensin的刺激下,采用流式细胞分析术（FACS）对慢性HBV感染者外周血单个Th细胞内IL-4、IFN-γ和TGF-β的表达进行分析.结果　正常对照组,2.3%-18.6%的CD4+T细胞为Th1细胞,0.9%-9.2%为Th2细胞；0.7%-7.1%的细胞仅表达TGF-β, 为Th3细胞.在慢性HBV感染者外周血单个CD4+T细胞中,以Th0细胞居多；而Th1细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎,其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎；Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定(P>0.05),但明显高于对照组(P<0.05).Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧,其比例也明显减少(P<0.05),在无症状携带者（AsC）组,Th3细胞的百分数远高于慢性乙型肝炎组及对照组(P<0.05) .Th3细胞重叠于Th2细胞之中.结论　Th1细胞类因子与炎症活动呈正相关,Th2细胞可能与HBV感染的慢性化相关联.而Th3细胞与Th2细胞协同发挥负性免疫调节作用,并可能与慢性HBV感染的免疫耐受状态相关联.