川芎嗪对顺铂耳毒性保护作用的实验研究

目的探讨活血化瘀中药川芎嗪是否对顺铂的耳毒性具有保护作用。方法将听力正常的30只豚鼠随机分为3组,每组10只。对照组：生理盐水3 ml/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂组：顺铂3 mg/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂加川芎嗪组：先腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）3天,从第4天起腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）后再注射顺铂3 mg/（kg.d）6天。给药前后通过听觉脑干诱发电位（ABR）检测豚鼠听功能的变化;然后在麻醉状态下断头取耳蜗,半数标本切片后用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测耳蜗内细胞凋亡情况;半数标本进行耳蜗基底膜铺片观察毛细胞形态及酶学变化。结果顺铂组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损,琥珀酸脱氢酶（SDH）活性减弱,有部分毛细胞凋亡,与对照组及川芎嗪组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。顺铂加川芎嗪组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损较轻,凋亡细胞较少,与顺铂组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论川芎嗪能降低顺铂的耳毒性。     

顺铂对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的影响

目的 观察顺铂对豚鼠听力的影响及豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SCG)毒性作用的关系.方法 将20只耳廓反应灵敏的豚鼠随机分成两组,实验组连续5 d腹腔内注射顺铂3 mg/(kg·d),对照组连续5 d腹腔内注射生理盐水3 mg/(kg·d),给药后11 d检查耳蜗电图,然后处死动物,制作耳蜗标本,其中实验组中4只4耳做透射电镜观察、6只12耳做吖啶橙荧光染色,观察耳蜗螺旋神经节细胞的变化.结果 实验组动物耳蜗神经复合动作电位(CAP)阈值明显提高,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);实验组潜伏期延长,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).形态学检查见实验组髓鞘层变薄,结构稀疏,部分可见融合,细胞膜破裂,胞浆内线粒体结构模糊,粗面内织网脱颗粒,核内结构减少.结论 顺铂对豚鼠耳蜗螺旋神经节有明显的损害作用,是顺铂致耳毒性,引起听力下降的机制之一.     

顺铂对豚鼠耳蜗损害作用实验研究

目的观察顺铂对耳廓反射正常的健康豚鼠耳蜗功能的损害作用，以探讨顺铂对豚鼠耳蜗毒性作用及其损伤机制，为防治顺铂耳毒性作用提供理论依据。方法将60只耳廓反射灵敏的健康豚鼠随机分成两组，顺铂组腹腔注射顺铂4mg／（k·d），1次／d，连续注射5d。正常对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水。实验前和实验5d后分别行耳廓反射和听性脑干反应测听。测定麻醉状态下豚鼠听觉脑干诱发电位，比较实验前后两组听觉诱发电位阈值及各波潜伏期、波幅变化。结果顺铂组豚鼠听性脑干反应测试听闽明显提高，各波潜伏期延长，波幅降低，甚至出现波形变异不易辨认，两组比较差异有显著性。结论顺铂可导致豚鼠耳蜗功能损害，表现为豚鼠耳蜗听性脑干反应阂值显著提高，各波潜伏期延长。波幅降低。     

丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠耳蜗血管纹的作用

目的探讨丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠血管纹的作用。方法将 1 8只豚鼠随机分成 3组 ,对照组连续 5d腹腔注射生理盐水 2ml/ (kg·d) ,丹参组连续 7d肌注丹参 8g/ (kg·d) ,第 3d时加腹腔注射顺铂 2ml/(kg·d) ,观察豚鼠的一般状况和耳廓反应。应用电反应测听仪测试听觉阈值 ,应用激光多普勒探测耳蜗血流的变化 ,并铺片观察血管纹的改变 ,统计学处理。结果丹参组豚鼠实验后一般情况较顺铂组明显减轻 ,除 3只豚鼠耳廓反应迟缓外 ,余反应灵敏 ,听觉阈值为 (32 .5± 7.5 )dB ,耳蜗底转血流测试为 1 5 5 .8mV ,与对照组相比均无显著性改变 (P <0 .0 1 )。耳蜗铺片显示红细胞聚集及血管扩张程度较轻 ,偶尔可见到细胞碎片及溶解 ,未见血池现象。结论丹参通过改善血管纹功能 ,对顺铂内耳毒性可起到一定的防治作用     

蛋氨酸对化疗药物引起内耳损伤的保护作用

目的 研究蛋氨酸对化疗药物顺铂导致耳毒性的保护作用.方法 将30只昆明小鼠随机分为3组.顺铂组(n=10):给予顺铂3.5mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续7d;蛋氨酸+顺铂组(n=10):蛋氨酸300mg·kg-1·d-1腹腔注射,30min后给予顺铂3.5mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续7d;对照组(n=10):生理盐水3.5mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续7d.实验第8天,利用听觉脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)对3组小鼠进行听功能测试,然后迅速断头取出双侧内耳,解剖耳蜗基底膜,铺片并HE染色,普通光学显微镜下观察.结果 在ABR测试中,对照组小鼠实验前后听力无明显变化;顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比变化明显;蛋氨酸+顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比也出现变化,但变化程度较顺铂组明显减轻.光镜观察:对照组动物耳蜗基底膜外毛细胞排列整齐;顺铂组基底膜外毛细胞有不同程度的坏死、脱落,尤以底转缺失严重;蛋氨酸+顺铂组耳蜗毛细胞损伤较顺铂组明显减轻.结论 化疗药物顺铂对耳蜗毛细胞引起损害,而蛋氨酸对这种损害有较好的保护作用.     

熊果酸对顺铂所致小鼠耳毒性的防护作用研究

目的研究熊果酸对顺铂所致小鼠耳毒性的防护作用。方法 40只健康成年BALB/c小鼠随机分成对照组(腹腔注射等量生理盐水)、顺铂组(腹腔注射顺铂4.5 mg/kg)、顺铂+熊果酸组(一侧腹腔注射顺铂4.5 mg/kg,同时对侧腹腔注射熊果酸80 mg/kg)和熊果酸组(腹腔注射熊果酸80 mg/kg),每组10只。各组动物均连续注射5 d,每天1次。应用听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试,观察用药前后小鼠听功能的改变;并采用异硫氰酸四甲基罗丹明(tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC)标记的鬼笔环肽荧光染色方法,观察小鼠耳蜗毛细胞的形态变化。结果顺铂组小鼠ABR阈移较对照组明显增大(P<0.05),并且耳蜗毛细胞破坏严重;而给予熊果酸可有效降低顺铂对小鼠耳蜗的破坏(P<0.05)。结论熊果酸可有效防护顺铂的耳毒性,改善听功能。     

脑神经生长素防护顺铂致耳蜗螺旋神经节损伤的研究

目的探讨脑神经生长素 (cerebralnervegrowthfactor,CNG)作为防护药物拮抗顺铂致耳蜗螺旋神经节毒性作用。方法选 2 4只豚鼠 ,随机分为 3组 ,每组 8只。顺铂组连续 5d腹腔注射顺铂 2mg/(kg·d) ;CNG组在给予顺铂前 2d开始大腿内侧肌肉注射CNG 2mg/(kg·d) ;正常对照组连续 5d腹腔注射生理盐水 2mg/(kg·d) ;用药前后测试听性脑干反应 (auditorybrainstemresponse ,ABR)阈值 ,处死动物制作耳蜗标本 ,应用透射电镜观察并用免疫组化法测定诱导型一氧化氮合酶 (inducednitricoxidesynthase ,iNOS)的表达。结果顺铂组动物ABR听阈值显著升高 ,透射电镜下见螺旋神经节细胞的细胞器损伤严重 ,iNOS阳性染色 ,呈棕黄色。CNG组动物ABR阈值略有升高 ,但较顺铂组为低 (P <0 .0 1)。螺旋神经节细胞的细胞器损伤较轻 ,iNOS显色浅 ,呈浅黄色。结论CNG可减少耳蜗iNOS表达 ,保护耳蜗螺旋神经节 ,从而保护听力     

顺铂致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的研究

目的：通过顺铂（CDDP）致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的观察,探讨CDDP致耳毒性的作用机制。方法：实验组和对照组豚鼠各10只,前者以CDDP 2.0 mg/（kg.d）连续腹腔注射6 d,后者以等量生理盐水替代。通过ABR测试用药前后豚鼠听力的变化,应用TUNEL法检测耳蜗凋亡细胞,免疫组化法检测caspase-3在耳蜗中的表达。结果：实验组耳蜗凋亡细胞明显增多,caspase-3的表达亦明显增强。结论：caspase-3介导的信号传导机制,可能参与了CDDP所致的耳蜗细胞凋亡过程,导致耳毒性的发生。     

顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞损害的形态及机理研究

目的：观察顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞的损害，并阐述一氧化氮（nitric oxide,NO）在其耳毒性机制中的作用。方法：将20只豚鼠随机分成两组，试验组腹腔注射顺铂0．5ml，对照组给予同等量的生理盐水，5天后做听性脑干反应（auditory brainstem respones,ABR)测听，此后处死动物，取出耳蜗，应用免疫组化技术、光镜及扫描电镜观察耳蜗毛细胞的损害。结果：试验组动物测试ABR听阈明显提高，光镜下见耳蜗毛细胞明显变性，诱导型一氧化氮合酶阳性染色，电镜下见毛细胞的纤毛散乱、倒伏甚至散失。结论：顺铂对豚鼠耳蜗毛细胞有明显的损害作用，而O在其耳毒性机制中发挥着重要的作用。     

硫代硫酸钠减轻豚鼠顺氨氯铂耳毒作用的电生理和组织学研究

本实验以内耳生物电及耳蜗浦片为指标,观察硫代硫酸钠对顺氨氯铂(CDDP)耳中毒预防。实验豚鼠分三组,各10只。对照组注射生理盐水,阳性对照注射CDDP2mg/kg;预防组注射硫代硫酸钠800mg/kg,同时给予CDDP2mg/kg;三组均每日一次腹腔给药,共6d。结果:①耳内生物电0～80dB不同程度短声引起的耳蜗微音器电位与听神经动作电位幅值,预防组动物均高于阳性对照组,但两者均低于对照组;②耳蜗铺片,阳性对照组大部分动物耳蜗各回的毛细胞严重性缺损,预防组耳蜗病变仅局限在底回。结果表明硫代硫酸钠能减轻CDDP的耳毒性,为CDDP致聋的防治提供了一条新的研究途径。     

天鼓冲剂对噪声性听损伤防治作用的实验研究

目的:观察补肾活血中药天鼓冲剂对豚鼠噪声性听损伤的防治作用.方法:将豚鼠随机分为正常组、模型组、预防组和治疗组,后三组豚鼠暴露在4KHz、110dB SPL的稳态白噪声中6h×6d,预防组和治疗组分别于噪声暴露前7d和噪声暴露结束后给予天鼓冲剂灌胃,模型组与预防组同期灌胃相同剂量的生理盐水,正常组不予给药.以听觉脑干诱发电位(ABR)观察各组动物反应阈、波潜伏期及波间期的变化,耳蜗基底膜铺片毛细胞计数比较各组动物毛细胞损伤率,扫描电镜观察各组动物耳蜗形态学的变化.结果:与模型组和治疗组比较,预防组豚鼠的ABR阈值、毛细胞损伤率均明显降低(P＜0.05),波潜伏期显著缩短(P＜0.01),电镜下毛细胞受损程度较轻;与模型组比较,治疗组豚鼠的ABR阈值明显降低(P＜0.05),波潜伏期显著缩短(P＜0.01),但毛细胞损伤率无明显差异(P＞0.05),电镜下两组毛细胞损伤程度均较重.结论:天鼓冲剂对噪声性听力损伤具有显著的预防作用,在改善听功能方面具有一定的治疗作用,预防效果明显优于治疗效果.     

Bcl-2和Bax蛋白在糖尿病大鼠耳蜗中的表达

目的：探讨糖尿病耳聋大鼠的耳蜗病变与凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的相关性。方法： 35只大鼠随机分为糖尿病组和对照组。糖尿病组（25只）采用STZ腹腔一次性注射制备，对照组(10只)注射等量生理盐水。在成模后3个月时采用免疫组织化学方法，对大鼠耳蜗组织进行Bcl-2和Bax的表达检测。结果：糖尿病大鼠耳蜗结构未见异常的形态学改变。对照组大鼠耳蜗内、外毛细胞及血管纹、螺旋神经元均有少量的Bcl-2表达，糖尿病组仅血管纹组织表达的Bcl-2明显高于正常组，毛细胞和螺旋神经元的表达与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。计算机定量分析显示，糖尿病组和对照组耳蜗血管纹的Bcl-2表达灰度值分别为135.32±21.69和45.32±9.08,两组比较差异有显著性 (P<0.01)。糖尿病组与对照组大鼠耳蜗组织均不表达Bax蛋白。结论：糖尿病大鼠血管纹组织表达过量的Bcl-2蛋白可能是糖尿病耳蜗早期病变的影响因素之一。     

前列地尔联合针刺对噪音性耳聋大鼠耳蜗毛细胞血管内皮生长因子、Bcl-2及Bax表达的影响

目的:观察针刺联合前列地尔对噪音性耳聋大鼠耳蜗毛细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、Bax及Bcl_2表达的影响.方法: 32只雄性Wistar大鼠按照随机数字法分为4 组:空白对照组、模型组、前列地尔治疗组和针刺联合前列地尔治疗组.除对照组外,其余3组制备噪音性耳聋大鼠模型.对各组大鼠进行听觉脑干诱发电位( au-ditory brainstem response,ABR)听力阈值测试.联合治疗组的针刺治疗穴位选取三焦经腧穴翳风(双)、外关(双).对各组大鼠进行耳蜗VEGF、Bax及Bcl-2表达检查.结果: 造模结束后,各组大鼠ABR听力阈值显著高于对照组;模型组VEGF水平较空白对照组低,耳蜗Bcl-2 mRNA表达减弱, Bax mRNA表达增强,差异有统计学意义(P＜0. 05);联合治疗组与模型组相比,大鼠耳蜗基底膜毛细胞VEGF水平显著恢复,耳蜗Bcl-2 mRNA表达增强, Bax mRNA表达减弱,差异有统计学意义( P＜0. 01).结论: 针刺联合前列地尔治疗能改善噪声导致的听力损害,其改善听力、保护耳蜗结构是通过调节耳蜗基底膜毛细胞VEGF、耳蜗相关凋亡因子Bcl-2、BaxmRNA的表达而达到的.     

豚鼠椎基底动脉缺血-再灌注对耳蜗损伤的实验研究

目的：探讨椎基底动脉缺血－再灌注耳蜗组织损伤方式有其可能的损伤机制。方法：选用耳廓反射灵敏，体得300－500g的健康杂色豚鼠72只，随机分成6组，即正常对照组，假手术组，缺血30min组，再灌汪1h、6h、24h组。各组动物分别于手术前有处死前分别测试ABR、耳蜗标本HE染色病理检查、耳蜗电镜检查、测定耳蜗组织超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量、耳蜗组织诱导型－氧化氮合酶（iNOS）免疫组化。结果：缺血组及再灌汪各组脑干诱发电位（ABR）发生明显异常，咯波潜伏期明显延长，阈值升高（P＜0．01）；外毛细胞变形，细胞超微结构改变；耳蜗组织MDA含升高、SOD活力降低；iNOS在耳蜗组织表达明显增强。结论：在底动脉缺血－再灌注损伤呵引起豚鼠ABR各波潜伏期延长和阈值增高，可造成耳蜗毛细胞及血管纹等组织病理损伤。耳蜗组织SOD活力下降及MDA升高参与了椎基底动脉缺血－再灌注耳蜗损伤。耳蜗组织在正常情况下，血管纹、毛细胞及螺旋神经节细胞均有iNOS弱阳性表达，在缺血及再灌注期间iNOS表达增强。     

谷氨酸钠对新生豚鼠耳蜗螺旋神经节的毒性损伤

目的研究谷氨酸钠不同用药剂量对新生豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞及听力的影响,探索稳定而可靠的谷氨酸钠耳聋模型.方法豚鼠随机分成四组,每组(G0,G1,G2,G4)分别按0,1,2,4 g*kg-1*d-1,ip.给予谷氨酸钠(Glutamate,G),连续7d,停药后饲养35d. 测耳廓反射以及脑干听觉诱发电位;后取耳蜗,纵向石蜡切片,焦油紫染色、观察.结果 G0组死亡率为0/10,听阈为43.5±3.4 dB,平均细胞密度为4345.7±241.4个/mm2;G1组死亡率为2/10,听阈为43.8±9.4 dB,细胞密度为4215.4±295.2个/mm2;G2 组死亡率为4/10,听阈为67.3±23.3 dB,细胞密度为1997.5±1019.8个/mm2 ;G4组死亡率为20/20 .经方差分析,G2组与其他组比较,差异显著,P<0.01,GO组与G1组,差异无显著性,P>0.05.结论谷氨酸钠对新生豚鼠毒性损伤存在剂量依赖关系,2g*kg-1*d-1,ip.可引起均匀一致的耳蜗螺旋神经节细胞的消失,伴明显听力下降,死亡率较低.     

新生小鼠耳蜗基底膜体外培养观察

目的建立新生昆明小鼠耳蜗基底膜体外培养的模型并观察耳蜗基底膜培养的组织学形态。方法取出生2³ d的昆明小鼠耳蜗基底膜,置入24孔细胞培养板,在含有体积分数10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔/F12培养基中进行培养。采用四甲基异硫氰酸罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色毛细胞,抗神经丝蛋白荧光染色听神经纤维及螺旋神经节。观察耳蜗毛细胞、听神经纤维及螺旋神经节的生长情况。结果耳蜗基底膜经培养6 d,基底膜保持结构完整,毛细胞和螺旋神经节生长良好。结论本培养方法简便易行,可用于耳蜗基底膜体外培养实验研究。     

豚鼠暴露于娱乐噪声后的听觉电生理及形态学改变

目的观察豚鼠暴露于娱乐噪声后的听觉电生理及耳蜗形态学改变，探讨噪声暴露后电生理与毛细胞缺失变化之间的可能联系及其机制。方法豚鼠随机分为正常对照组及噪声实验组，各10只。实验组每日定时暴露于高强度迪厅音乐2h，连续暴露14d。观察两组听觉脑干诱发电位(auditory brainstem response，ABR)、畸变产物耳声发射(distort product otoacoustic emission，DPOAE)及耳蜗形态学的变化。结果实验组动物出现ABR反应阈上升和DPOAE幅值下降，两者都有极显著性意义；基底膜铺片示噪声组3排外毛细胞均有不同程度的缺失、琥珀酸脱氢酶活性减弱或消失，但与正常对照组相比，差异无统计学意义。螺旋神经节计数差异亦无显著性意义。扫描电镜示噪声组外毛细胞、静纤毛异常。结论所应用的娱乐噪声能引起豚鼠听觉系统的损害，表现为电生理功能异常和外毛细胞静纤毛紊乱。而光镜下所观察到的毛细胞缺失并不总与电生理变化相平行，这可能与噪声所致外毛细胞亚细胞结构非致命性损伤或耳蜗其他部位的损伤有关。     

丁胺卡那霉素对豚鼠耳蜗毛细胞凋亡及听力阈值的影响

目的探讨丁胺卡那霉素作用于耳蜗系统时毛细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法15只豚鼠随机分为3组,各组肌内注射丁胺卡那霉素400mg·kg-1·d-1,分别于用药1d,3d,6d后处死。处死前检测其听脑于反应(auditorybrainstemresponses,ABR)的变化,并利用光镜和TUNEL标记技术检测耳蜗毛细胞发生凋亡的情况。结果①豚鼠肌内注射丁胺卡那霉素1d后耳蜗毛细胞即出现凋亡现象,连续用药3～6d,毛细胞凋亡呈强阳性表达;②耳蜗毛细胞凋亡出现的早期豚鼠听力阈值无明显改变,连续用药6d后听力阈值则明显提高。结论①丁胺卡那霉素作用于耳蜗毛细胞可引起毛细胞凋亡,细胞凋亡是豚鼠耳蜗毛细胞损伤的一条途径;②丁胺卡那霉素耳毒性作用机制可能与其引起耳蜗毛细胞凋亡有关。     

耳蜗听神经亚临床损伤模型的制备

目的 采用庆大霉素联合呋塞米建立小鼠耳蜗听神经亚临床损伤模型.方法 5～6周的C57/BL6小鼠32只,随机平均分成4组,分别取生理盐水（A组）、20mg/kg（B组）、30mg/kg（C组）、40mg/kg（D组）不同浓度的硫酸庆大霉素注射液溶液皮下注射,后分别40mg/kg速尿腹腔注射.用药后7、14天测定各组小鼠的ABR值、行耳蜗组织切片HE染色及耳蜗基膜铺片.结果 A、B、C3组听性脑干反应（ABR）值比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,而D组ABR值的升高存在明显差异（P＜0.05）.耳蜗组织切片HE染色显示：相对于A组,B未见明显受损的螺旋神经元细胞,C组开始出现受损的螺旋神经元细胞,D组更多.基膜硝酸银染色铺片显示：A、B、C3组均可见内、外毛细胞及其表面的纤毛;而D组未见明显的内、外毛细胞,纤毛也缺失.结论 庆大霉素引起小鼠耳蜗听神经亚临床损伤模型的最小剂量为30mg/kg.