幽门螺杆菌空泡毒素、毒素相关蛋白的表达及分型

目的：分析分离自我国临床患者的幽门螺杆菌（Hp）毒力因子空泡毒素（VacA)和毒素相关蛋白(CagA)的表达状况及其分型分布。方法：从临床分离培养19株Hp，用细胞测毒法检测VacA，用Western blot法分析CagA，根据毒力因子表达情况进行分型。结果：VacA阳性率为57．9％，CagA表达阳性率为89．48％；I型，Ⅱ型,中间型Hp分别占52．63％，5．27％，42．10％。结论：所研究的临床分离Hp菌株的毒力因子属高表达。     

幽门螺杆菌的空泡毒素与细胞毒素相关蛋白

幽门螺杆菌 (ＨＰ)是慢性胃病重要病因之一。为什么感染ＨＰ后可致不同的疾病 ?研究提示可能与感染的菌株不同或宿主对感染的敏感性不同有关。其中ＨＰ毒素在致病性中的作用很重要。1988年发现ＨＰ能产生一种使真核细胞产生空泡变性的毒素 ,称为空泡毒素Ａ (ＶａｃＡ) ,它是一种分子量为 87ＫＤ的蛋白质。后来在ＶａｃＡ阳性的ＨＰ菌株培养液上清中发现另一种 12 8ＫＤ的蛋白 ,而在无ＶａｃＡ活性的ＨＰ菌株培养液上清中无此种蛋白质 ,由此结果认为ＶａｃＡ活性与 12 8ＫＤ蛋白质密切相关 ,把 12 8ＫＤ蛋白质称之为细胞毒素相关蛋白 ,用Ｃａ…     

幽门螺杆菌细胞空泡毒素基因毒性片段的克隆与表达

目的：通过基因于程技术获得具有良好抗原性的重组细胞空泡毒素毒性亚单位蛋白。方法：利用PCR从幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素基因中扩增毒性片段Ⅴ，克隆及序列分析后在大肠杆菌中高效表达，用免疫印迹法(Western blotting)检测其抗原性。结果：序列分析所得片段完整，与标准株AF361700比较有1．5％的bp及一个氨基酸发生变异。与文献报道的中国菌株相比有高度的同源性。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为27000，表达量为30％以上，Western blotting显示该蛋白可被HP全菌抗血清所识别。结论：基因重组Hp细胞空泡毒素毒性蛋白具有良好的抗原性，可用于制备Hp感染的诊断试剂与疫苗。     

山西省地区儿童幽门螺杆菌相关毒素的检测及临床意义

目的 探讨不同H．pylori菌株类型与小儿胃十二指肠粘膜疾病的关系，了解本地区儿童感染的H．pylori菌株类型。方法 胃镜下活检及快速尿素酶试验诊断H．pylori感染及观察胃十二指肠粘膜病理变化，用免疫印迹法测定153例H．pylori阳性患儿血清多种H．pylori毒素抗体。结果胃炎患儿Ⅰ型H．pylori菌株为14例（27％），十二指肠球部溃疡患儿Ⅰ型H．pylori菌株为43例（74％），两组检出率比较差异有显著性。CagA抗体阳性者粘膜中重度炎症58例（92％），CagA抗体阳性者粘膜轻度炎症21例（35％），两组检出率比较差异有显著性。结论本地区儿童感染的H．pylori为Ⅰ型和Ⅱ型毒力菌株，CagA抗体阳性能引起胃十二指肠粘膜较重的炎症。     

幽门螺杆菌空泡毒素基因的PCR分型与上消化道疾病的关系

目的 探讨幽门螺杆菌（Hp)空泡毒素基因的两种亚型vacA1和vacA2与上消化道疾病的关系。方法 采用特异性引物扩增Hp尿素酶基因及vacA基因。结果 66．4％（81／122）的患者胃粘膜检测出Hp尿素酶基因,其中消化性溃疡患者的检出率（74．6％ 53／71）高于慢性胃炎患者（54．9％ 28／51）,二者差异有显著性。vacA的两种亚型vacA1和vacA2各占80．2％（65／81）和19．8％（16／81）,每种胃粘膜只能扩增出一种产物,其中80．7％（47／53）的消化性溃疡患者感染的是vacA1基因型Hp,而慢性胃炎患者的检出率是64．3％（18／28）,差异有显著性。结论 vacA1基因型Hp与消化性溃疡关系密切。     

幽门螺杆菌空泡毒素基因分型

目的：探寻幽默门螺杆菌（Hp）基因分理方法。方法：用自行设计的引物对16株临床分离Hp和2株标准菌的空泡毒素基因vaeA进行扩增,用7种限制性内切酶对基因扩增产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析;对18株Hp VacA活性进行检测。结果：18珠Hp的VacA扩增产物达2.7kb左右,但并不完全相同;HeaⅢ酶切电泳可将18株Hp的VacA基因分为12种谱型。未发现与VacA表达相关的谱型。结论：VacA基因的PCR产物经HeaⅢ酶切RFLP分型可作为Hp基因分型较理想的选择,但不能反映毒素活性的表达情况。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A及细胞空泡毒素A与胃及十二指肠疾病的关系

<正> 自1983年Warren和Mashall发现幽门螺杆菌(HP)以来,普遍认为HP与慢性胃炎及消化性溃疡密切相关,近来更认为HP是致胃癌的强危险因子。在人群中约有一半的人受到HP感染,不少人发展为慢性胃炎。然消化性溃疡及胃癌的发生毕竟为少数,这除了与人类的个体差异等因素有关外,还与HP感染的类型有关,即某些菌株可产生细胞毒素。在HP诸多的致病因素中,细胞毒素相关蛋白A(CagA)及细胞空泡毒素A(VacA)备受关注。     

幽门螺杆菌空泡毒素活性的体外观察

目的研究幽门螺杆菌(Hp)液体浓缩上清液对胃上皮细胞的空泡毒性作用,为进一步开展空泡变性细胞毒素(VacA)的纯化及探讨VacA的致病机制奠定基础。方法将Hp菌株液体培养上清液制成粗制VacA蛋白,粗制VacA经倍比稀释(1∶160～1∶2)后与胃癌SGC7901细胞共同孵育后观察胃癌细胞形态变化,同时观察1∶2及1∶5滴度组于0、2、4、8、16和24h时的空泡活性。采用中性红摄入法(NRU)评价空泡活性。结果1∶2及1∶5滴度组胃癌细胞于24h时空泡形成细胞达100%,空泡细胞比例随毒素滴度递减。孵育24h时粗制VacA产生空泡活性的最小剂量约为6μg,超过120μg可导致细胞死亡。当毒素滴度为1∶2时,孵育4h即产生明显空泡[550nm光吸收值(A550)=0.43±0.06],至16h达最高吸收值(A550=0.71±0.03),至24h时因细胞大量死亡,A550反而下降至0.06±0.04,与空白对照组的差异无显著性(P>0.05)。1∶5毒素滴度的时间曲线较1∶2滴度更恰当反映出空泡活性随孵育时间变化的特性。结论Hp液体培养上清浓缩液对胃癌细胞具有明显的空泡毒性作用,VacA导致的空泡毒性具有明显的浓度及时间依赖性,且易受多种因素的影响,适当的浓度及孵育时间是VacA致病机制研究过程中的关键因素。     

幽门螺杆菌空泡毒素活性检测方法的比较

目的　分别采用细胞计数法及中性红摄入法 (NRU)检测幽门螺杆菌 (Hp)空泡毒素活性 ,探讨NRU检测空泡毒素活性的应用价值。方法　采用Hp液体培养上清浓缩液作为粗制VacA毒素 ,经倍比稀释(1∶16 0～ 1∶2 )后与胃癌SGC 790 1细胞共同孵育 2 4h。用细胞计数法及NRU同时评价VacA的空泡毒素活性 ,比较两种方法检测VacA空泡毒素活性的差异。结果　经中性红染色后 ,胃癌细胞吸收大量染料 ,空泡更加明显。NRU对空泡毒素活性的判断结果与细胞计数法基本符合 ,细胞计数法显示 1∶2 0～ 1∶2滴度样本均呈阳性结果 ,NRU于 1∶2 0～ 1∶5滴度亦得到阳性结果 ,1∶2滴度组因细胞大量死亡得到“假阴性”结果 (A550 =0 .0 6±0 .0 4 )。 1∶4 0滴度组细胞计数法判断为阴性 ,但NRU检测阳性 (A550 =0 .12± 0 .0 4 ,P <0 .0 5 )。结论　NRU检测空泡毒素活性具有简便、快速的特点 ,有助于对空泡毒素活性的定量评价 ,敏感性高于细胞计数法 ,可广泛用于空泡毒素活性的体外检测     

幽门螺杆菌CagA、VacA基因分型在2型糖尿病患者中的表达与分析

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)不同基因分型在2型糖尿病(T2DM)患者中的表达及临床意义.方法:170例T2DM患者纳入观察组,并将同时期的170例非T2DM患者纳入对照组,比较2组空腹血糖、体质量指数、腰臀比等一般资料;比较2组间Hp感染、Hp细胞毒素相关蛋白、空泡毒素相关蛋白基因型感染的差异性;同时比较观察组中Hp感染患者与非Hp感染患者糖化血红蛋白、空腹胰岛素以及胰岛素敏感指数水平.结果:观察组患者空腹血糖、体质量指数、腰臀比、Hp感染率、糖化血红蛋白以及Hp细胞毒素相关蛋白、空泡毒素相关蛋白阳性率均显著高于对照组(P＜0.01);同时观察组中Hp感染组患者的糖化血红蛋白和空腹胰岛素水平显著高于非感染组,而胰岛素敏感指数则显著低于非感染组(P＜0.01).结论:Hp细胞毒素相关蛋白基因和空泡毒素相关蛋白基因分型在T2DM的发生过程中具有重要意义.     

中药头花蓼对幽门螺杆菌CagA及VacA表达的影响

目的:观察中药头花蓼对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hpylori)细胞毒素相关蛋白(cytotoxin-associated protein,CagA)和空泡毒素(vacuolating cytotoxin,VacA)表达的影响.方法:HpyloriATCC700392接种于含头花蓼的哥伦比亚血平板上为实验组,同批未经药物作用的H.pyloriATCC700392为对照组,分别提取两组细菌的RNA和蛋白,用Real-time PCR定量检测头花蓼作用后cagA和vacA的mRNA表达,ELISA检测蛋白表达量.结果:经头花蓼作用的实验组与对照组相比,H.pylori的CagA和VacA蛋白表达水平分别降低了36.4％、55.1％(P＜0.05),cagA和vacA的mRNA表达水平分别降低了69％、51％ (P＜0.05).结论:头花蓼可能通过下调ca-gA和vacA的mRNA和蛋白的表达来发挥其对H.pylori的抑制作用.     

幽门螺杆菌CagA抗体与胃十二指肠疾病的相关性探讨

目的探讨本地区表达细胞毒素相关蛋白A(CagA)的幽门螺杆菌(HP)与胃十二指肠疾病的关系。方法将127例消化系统疾病患者分为四组。采用金标免疫斑点法检测各组患者血清中HP抗体,采用间接ELISA法测定各组CagA-IgG,并作组间的比较。结果慢性胃炎(CG),十二指肠溃疡(DU),胃溃疡(GU),胃癌(GC)患者及无症状组(AC)血清中HP抗体的检出率分别为74.2%,85.7%,81.5%,77.8%,61.6%,CagA-IgG的检出率分别为61.3%,66.7%,63.0%,70.4%,34.0%。经χ2检验显示,在DU与GU组,HP及CagA HP感染率均明显高于AC组(P<0.05、P<0.01),而CG及GC组与AC组比较,HP感染率无显著性差异(P>0.05),而CagA HP感染率仍有显著性差异(P<0.01)。各胃肠疾病组间的HP及CagA HP感染率均无显著性差异(P>0.05)。结论在广州地区,仅DU与GU组的HP感染率高于AC组,而CagA HP感染率在CG、DU、GU与GC组,均高于AC组,可见CagA-IgG的表达情况,可为胃十二指肠疾病的致病因素与诊疗、防治提供依据,但不能作为区分CagA HP感染所致胃十二指肠疾病的单一指标。     

幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及其对常用抗生素的敏感性.方法 从胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,用PCR测定VacA基因型,并采用琼脂稀释法进行对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑3种抗生素的药物敏感性试验.结果 108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性85株(78.7%),VacA s1b阳性22株(20.4%),VacA m1阳性29株(26.9%),VacA m2阳性77株(71.3%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90.0%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为93.8%(15/16).对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑的耐药率分别为18.5%、5.6%、65.7%,对阿莫西林耐药的20株菌株中,19株为VacA s1a型.结论 H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中.本地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药率较低,对甲硝唑的耐药率较高,而对阿莫西林耐药的菌株多数为VacA s1a型.     

海口地区胃十二指肠疾病患者幽门螺杆菌vacA基因亚型分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)vacA基因亚型在海口地区胃十二指肠疾病患者中的分布.方法 从176例胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,PCR法测定vacA基因亚型.结果 176例患者中的基因型vacAs1 78.98%(139/176),vacAs2 15.34%(27/176),vacAm1 28.41%(50/176),vacAm2 71.59%(126/176);vacA亚型组合形式为:vacAs1/ml 28.41%(50/176),vacAs1/m2 56.25%(99/176),vacAs2/m2 15.34%(27/176),未发现va-cAs2/ml型菌株;消化性溃疡、胃癌、慢性萎缩性胃炎患者H.pylori的vacAs1、vacAm2、vacAs1/m2基因型阳性率高于慢性浅表性胃炎患者(均P<0.01),其余基因型在不同类型疾病中的分布无统计学差异(P>0.05).结论 海口地区胃十二指肠疾病患者H.pylori菌株的优势基因型为vacAs1、vacAm2、vacAs1/m2;在消化性溃疡等严重疾病患者中多见.     

Lack of correlation of vacA genotype, cagA gene of Helicobacter pylori and their expression products with various gastroduodenal diseases

目的　研究幽门螺杆菌vacA基因型、cagA基因 ,空泡形成细胞毒素和血清CagA抗体与胃十二指肠疾病的关系。　方法　应用多聚酶链反应方法对 6 2例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定 ;应用Hela细胞方法测定体外空泡形成细胞毒素活性 ;应用酶免疫测定方法检测同一患者的血清CagA抗体。结果　 6 2株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因 ,所有菌株的vacA基因型均为sla/m2型。cagA基因的总阳性率为5 6 4 5 % ;慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为 5 5 5 6 %、5 4 17%和6 3 6 4 % (P >0 0 5 )。空泡形成细胞毒素的阳性率为 37 10 % ,慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株表达空泡形成细胞毒素的阳性率分别为 33 33%、2 9 17%和 6 3 6 4 % (P >0 0 5 )。慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者血清CagA抗体分别为 70 37%、79 17%和 4 0 0 0 % (P >0 0 5 ) ,血清CagA抗体的总阳性率为 6 8 85 %。结论　幽门螺杆菌vacA基因型、cagA基因、空泡形成细胞毒素和血清CagA抗体不能预示H pylori感染个体将更可能发生何种类型胃十二指肠疾病。     

幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系.方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H.pylori,PCR测定VacA基因型.结果:108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性为85株(79%),VacA s1b阳性22株(20%),VacA m1阳性29株(27%),VacA m2阳性77株(71%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为94%(15/16).结论:H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中,无s2型.     

幽门螺杆菌空胞毒素与血小板的结合反应

目的探讨幽门螺杆菌空胞毒素（VacA）与血小板的相互作用。方法采用流式细胞仪检测VacA与血小板的结合;蔗糖梯度离心法分离血小板细胞膜脂质筏（GEMs）,用Western blot检测VacA在血小板表面的结合部位;生物素标记血小板后,用免疫沉降法检测与VacA结合的血小板表面蛋白。结果VacA结合于血小板表面,并存在于GEMs上,结合蛋白的分子量为140kd和40kd。结论VacA可能通过与血小板表面的特异蛋白结合于GEMs上而参与血小板的活化过程。     

幽门螺杆菌毒力菌株感染与胃十二指肠疾病的关系

应用间接ELISA法 ,测定 1 674例经胃镜检查患者的血清幽门螺杆菌 (HP)细胞毒素相关基因A(CagA)抗体 ,探讨HP菌型差异与其致胃十二指肠疾病的关系。结果 :疾病组血清CagA抗体检出率为 4 9.70 % ,高于健康组的38% (P <0 .0 5) ;活动期十二指肠溃疡 (DU)的抗体检出率显著高于活动期胃溃疡 (GU)、胃癌 (GC)和慢性胃炎 (CG)(P <0 .0 1 ) ;活动性炎症的抗体检出率显著高于非活动性炎症 (P <0 .0 1 )。随CG炎症程度加重 ,抗体阳性率呈递增性增加 (P <0 .0 5,P <0 .0 1 ) ;GC及各癌前病变抗CagA检出率与健康组比较无差异。提示 :HP产毒菌感染与胃十二指肠粘膜炎症活动及损伤程度有关     

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A、空泡毒素基因A抗体与胃十二指肠疾病的关系

目的 研究不同幽门螺杆菌(Hp)菌株感染与胃十二指肠疾病发生的关系.方法 采用蛋白芯片技术测定血清中Hp细胞毒素相关基因A(CagA)、空泡毒素基因A(VacA)抗体.结果 消化性溃疡组和胃癌组CagA和VacA抗体阳性者显著高于慢性胃炎组(P＜0.01),而CagA和VacA抗体阴性在慢性胃炎组显著高于溃疡组和胃癌组(P＜0.01),溃疡组和胃癌组之间CagA和VacA抗体阳性和阴性率比较,差异无显著性(P＞0.05).结论 含CagA基因和VacA基因的Ⅰ型Hp可能是致病力强的高毒力株.