PCNA基因反义RNA表达质粒的构建及对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应

为观察ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应,用ＤＮＡ重组法将人ＰＣ－ＮＡ基因反向克隆到真核细胞表达质粒ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中,构建成ＰＣＮＡ基因真核表达质粒ｐＤＲ－ＰＣＮＡ,用ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＴＭ介导转染人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,并接种于裸鼠背部皮下。经Ｇ４１８筛选获得的转染细胞系ＳＧＣ／ＰＣＮＡ与亲本细胞相比,其生长速度减慢,ＲＮＡ、蛋白质生物合成受到抑制,Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＤＮＡ含量降低,移植瘤生长速度减慢,瘤体平均直径（０．５４±０．１３）ｃｍ,明显小于对照组（１．５１±０．１１）ｃｍ。结果表明,ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ表达质粒对胃癌裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用。     

受电离辐射的细胞中p53介导增殖细胞核抗原表达的调控

增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）是一种高度保守的细胞蛋白,在ＤＮＡ复制和修复中起作用。本实验用γ射线照射大鼠胚胎成纤维细胞（ＣＲＥＦ）诱导ｐ５３,研究照射后ＰＣＮＡ表达的机制。方法：实验用ｐＢＡＣＡＴ（其ＰＣＮＡ－氯霉素转移酶报告基因区域内含有人ＰＣＮＡ启动子序列）和ｐＣＭＶ－ＤＭｐ５３（表达突变型ｐ５３蛋白）两种质粒,照前２４小时用磷酸钙介导法将报告质粒转染细胞,６小时后实行甘油休克;转染２４小时后用１３７　Ｃｓγ射线照射ＣＲＥＦ１２Ｇｙ,剂量率为１．２５Ｇｙ·ｍｉｎ－１。照后在４８小时内进行细胞瞬…     

HLA—DR基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

获得表达ＨＬＡ－ＤＲ基因的小鼠墨色素瘤细胞，方法应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞Ｒａｊｉ中克隆了ＨＬＡ－ＤＲ３α和β链ｃＤＮＡ，并经测序证实。将其分别插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ和ｐＣＥＰ４中，用脂质体转上鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，然后用Ｇ４１８和Ｈｙｇ双重筛选。     

胶质细胞源性神经营养因子基因的克隆及其在大肠杆菌中 …

目的;分离胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＧＤＮＦ）基因,并在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达。方法：从人多形性成胶质细胞瘤细胞株ＢＴ３２５中提取总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离ＧＤＮＦ基因,构建表达载体ｐＢＶ－ＧＤＮＦ,转化大肠杆菌,温控诱导ＧＤＮＦ的表达。结果与结论;分离得到的人ＧＤＮＦ基因,在大肠杆菌中得到高效表达,表     

胶质细胞源性神经营养因子基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的：分离胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＧＤＮＦ）基因,并在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达。方法：从人多形性成胶质细胞瘤细胞株ＢＴ３２５ 中提取总ＲＮＡ ,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离ＧＤＮＦ基因,构建表达载体ｐＢＶ－ＧＤＮＦ,转化大肠杆菌,温控诱导ＧＤＮＦ的表达。结果与结论：分离得到的人ＧＤＮＦ基因,在大肠杆菌中得到高效表达,表达产物占全菌总蛋白的２４．７％ ,初步纯化后纯度达９０％ 以上。     

p53及其效应分子p21和Gadd45在纺锤体检查点调控中的作用

目的：观察ｐ５３效应分子ｐ２１、Ｇａｄｄ４５是否参与人源细胞纺锤体检查点调控。方法：利用基因转染技术构建稳定表达ｐ２１、Ｇａｄｄ４５反义ＲＮＡ的ＭＣＦ－７细胞系,观察纺锤体抑制剂诺考达唑是否诱导多倍体细胞产生,细胞纺锤体检查点调控是否异常。结果：诺考达唑诱导２３ｈ、６０ｈ均未观察到稳定表达ｐ２１、Ｇａｄｄ４５反义ＲＮＡ的ＭＣＦ－７细胞多倍体产生,但表达ｐ２１反义ＲＮＡ的ＭＣＦ－７细胞,诺考达唑引起     

人CD40分子基因的克隆及其在COS—7细胞中的表达

目的：克隆编码人ＣＤ４０分子基因的全长ｃＤＮＡ,在ＣＯＳ－７细胞中获得高表达。方法：提取人Ｂ淋巴细胞看Ｄａｕｄｉ总ＲＮＡ,以ＲＴ－ＰＣＲ技术克隆了编码人ＣＤ４０基因全长ｃＤＮＡ,序列测定证实其正确性。将测序正确的ＣＤ４０基因克隆入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１构建重组表达载体。采用脂质体转染试剂脂染胺（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）杂ＣＯＳ－７细胞,用流式细胞仪,免疫细胞化学和免疫荧光法检测ＣＤ４０基     

ENDOVASCULAR EMBOLIZATION TO TREAT CAROTID CAVERNOUS FISTULAE

ＥＮＤＯＶＡＳＣＵＬＡＲＥＭＢＯＬＩＺＡＴＩＯＮＴＯＴＲＥＡＴＣＡＲＯＴＩＤＣＡＶ┐ＥＲＮＯＵＳＦＩＳＴＵＬＡＥＬＩＢａｏ－ｍｉｎ（李宝民），ＺＨＡＮＧＪｉ（张纪），ＺＨＯＵＤｉｎｇ－ｂｉａｏ（周定标），ＭＥＮＧＸｉａｎｇ－ｈｕｉ（孟祥辉），ＤＵＡＮ...     

小鼠内皮抑素基因克隆、表达及其抑瘤活性鉴定

利用ＲＴ－ＰＣＲ法从小鼠肝细胞扩增出Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ基因,重组人ｐＵＣ１９质粒。经测序后,将片段重且人大肠杆菌表达载体ｐＤＨ并用温度诱导表达。将表达的蛋白经纯化及复性后直接注入大鼠Ｃ６胶质瘤模型内,检测其对胶质瘤生长的抑制作用。结果,在小鼠肝组织中成功扩增到Ｅｎｄｏｗｓｔａｔｉｎ基因,测序与报道列一致重组进一致。重组进ＰＤＨ后经温度诱导表达,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳上得到一条新的蛋白表达带,分子     

PERIPHERAL NERVE REPAIR IN RATS USING VASCULARIZED FROZEN IN-SITU MUSCLE AUTOGRAFT

ＰＥＲＩＰＨＥＲＡＬＮＥＲＶＥＲＥＰＡＩＲＩＮＲＡＴＳＵＳＩＮＧＶＡＳＣＵＬＡＲＩＺＥＤＦＲＯＺＥＮＩＮ┐ＳＩＴＵＭＵＳＣＬＥＡＵＴＯＧＲＡＦＴＷＡＮＧＹａｎ（王岩）１，ＺＨＵＳｈｅｎｇ－ｘｉｕ（朱盛修）１，ＨＵＮＧＬＫ２，ＬＥＵＮＧＰＣ２１．Ｄｅｐ...     

特异性表达新霉素耐药基因NeoR的人乳腺癌细胞模型的建立

将含有Ｎｅｏ＾Ｒ基因的ＰＳＶ２－ｎｅｏ质粒经扩增,提取及纯化,以磷酸钙共沉淀法转染入ＭＤＡ人乳腺癌细胞系,经Ｇ４１８长期高压筛选出７株ＭＤＡ细胞克隆,采用Ｎｅｏ＾Ｒ基因特异性引物进聚合酶链反应,证实了Ｎｅｏ＾Ｒ基因在各株Ｇ４１８抗生ＭＤＡ细胞基因组中的整合。     

DNA错配修复基因MutS的克隆和表达

目的：克隆ＭｕｔＳ基因并构建高效表达菌株，为建立ＤＮＡ错配突变检测系统和应用于临床肿瘤的检测等打下重要的基础。方法与结果：通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）从Ｅ．ｃｏｌｉ基因组中扩增得到ＭｕｔＳ基因（２．６ｋｂ），克隆在ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，构建了重组质粒载体ｐＧＥＭ－Ｔ／ＭｕｔＳ，核酸序列分析表明所克隆的基因与Ｇｅｎｂａｎｋ的ＭｕｔＳ一致。然后亚克隆到原核表达载体ｐＢＶ２２０上，构建了重组菌株ＤＨ５α／ｐＢＶ２２０－ＭｕｔＳ，４２℃热诱导表达ＭｕｔＳ蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示在相对分子质量９７×１０３左右处出现一条表达量高达３０％以上的表达蛋白带，而对照菌株表达量很低。将重组质粒ｐＢＶ２２０－ＭｕｔＳ转化到ＭｕｔＳ缺陷菌株ＥＳ１３０１互补了该菌株ＭｕｔＳ的缺陷，使其链霉素、利福平抗性（Ｓｔｒｒ，Ｒｉｆｒ）的突变频率分别降低９９％、９６％。结论：克隆得到ＭｕｔＳ基因并在大肠杆菌中得到高效表达，表达的ＭｕｔＳ蛋白在菌体内具有生物学功能     

我国登革2型病毒株NS1基因的克隆与表达

目的：通过对登革病毒ＮＳ１基因的表达,研究表达的ＮＳ１蛋白的抗原性,为研制新型登革疫苗提供依据。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ和分子克隆技术将扩增的ＮＳ１基因插入到ｐＢＶ２２０载体中,通过温控诱导进行外源蛋白的表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹法分别测定表达产物的相对分子质量及特异性。结果：获得正向插入的ＮＳ１－ｐＢＶ２２０重组质普,表达产物的相对分子质量约为５１０００,与预期大小一致,并且可与登革２型     

登革2型病毒NS3基因的扩增及序列测定

采用热酚法从登革２ 型病毒４３ 株（Ｄ２ ４３） 感染的Ｃ６／３６ 细胞中提取了病毒ＲＮＡ,以病毒ＲＮＡ 为模板,进行Ｄ２ ４３ 株ＮＳ３ 基因ｃＤＮＡ 片段的反转录 ＰＣＲ 扩增,片段长度为１１７６ ｂｐ。将扩增的ｃＤＮＡ 片段克隆到Ｔ 载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｋｓⅡ（ ＋ ） 中。通过双脱氧法测定了ｃＤＮＡ片段序列,与国际标准株ＮＧＣ株序列一致。     

抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

尝试将一株来源于人源性噬菌体抗体库的抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ,转换成完整的抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ。方法：采用重叠ＰＣＲ方法,在抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ的Ｖｋ和ＶＨ基因的５’端接上合工合成的人ｋ链的前导序列,构建表达完整ＩｇＧ１的真核表达载体,转染ＣＨＯ（ＤＨＦＲ＾－）细胞,用ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹检测抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ的表达,通过ＤＨＦＲ／ＭＴＸ体系及金属离子诱导提高Ｉｇ表达。结果：获得表达量     

INTRADURAL HERNIATION OF LUMBAR INTERVERTEBRAL DISC：ARE－PORTOFSEVENCASESANDDISCUSSIONOFTHEPATHOLOGICALMEC

ＩＮＴＲＡＤＵＲＡＬＨＥＲＮＩＡＴＩＯＮＯＦＬＵＭＢＡＲＩＮＴＥＲＶＥＲＴＥＢＲＡＬＤＩＳＣ：ＡＲＥ－ＰＯＲＴＯＦＳＥＶＥＮＣＡＳＥＳＡＮＤＤＩＳＣＵＳＳＩＯＮＯＦＴＨＥＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡＬＭＥＣＨ－ＡＮＩＳＭＬｉａｎＰｉｎｇ连平ＳｕｎＲｏｎｇ－...     

原发性支气管肺癌MRI相对信号强度与PCNA相关性的研究

目的 探讨肺癌组织的ＭＲＩ相对信号强度与增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）之间的关系。材料与方法 ２６例肺癌患者,术前用Ｒｅｓｏｎｅｘ ０．３８Ｔ磁共振成像系统,行横断而ＳＥ Ｔ１ＷＩ,ＧＲ序列成像,增强后行ＳＥ Ｔ１ＭＩ。术后标本采用ＡＢＣ免疫组化技术,观察ＰＣＮＡ在２６例肺癌中的表达。结果 Ｇｄ－ＤＴＰＡ增强后增殖活性较低的肿瘤细胞（５％〈ＰＣＮＡ≤５０％）,其ＭＲＩ相对信号强度啬值明显瘤细胞吸收Ｇｄ     

小鼠神经生长因子cDNA的克隆及核苷酸序列分析

用Ｔ４－ＤＮＡ连接酶在限制性内切酶ＳｍａＩ存在下，将神经生长因子ｃＤＮＡ片断克隆到具有双向转录启动子的载体质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）中。Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其核苷酸顺序表明，所克隆的ＮＧＦｃＤＮＡ片断，长３６３ｂｐ，包含了成熟神经生长因子的全部编码。该重组质粒可分别用于制备ＮＧＦｃＤＮＡ探针和ＲＮＡ探针，是研究ＮＧＦ基因结构及表达调控等方面的重要工具。     

GROSS TRANSPLANTATION OF A LEG IN CASES OF MULTISEVERED LIMBS AND LITERATURE REVIEW

ＧＲＯＳＳＴＲＡＮＳＰＬＡＮＴＡＴＩＯＮＯＦＡＬＥＧＩＮＣＡＳＥＳＯＦＭＵＬＴＩ┐ＳＥＶＥＲＥＤＬＩＭＢＳＡＮＤＬＩＴＥＲＡＴＵＲＥＲＥＶＩＥＷＹＩＮＹｕｎ－ｓｈｅｎｇ（尹芸生），ＷＡＮＧＤｏｎｇ（王东），ＧＡＯＦｕ－ｇｕｉ（高富贵），ＬＵＺｈｉ（吕...     

THE INJURIOUS EFFECTS OF HEMODYNAMIC CHANGES RESULTING FROM GUNSHOT WOUNDS ON REMOTE ORGANS

ＴＨＥＩＮＪＵＲＩＯＵＳＥＦＦＥＣＴＳＯＦＨＥＭＯＤＹＮＡＭＩＣＣＨＡＮＧＥＳＲＥＳＵＬＴ┐ＩＮＧＦＲＯＭＧＵＮＳＨＯＴＷＯＵＮＤＳＯＮＲＥＭＯＴＥＯＲＧＡＮＳＬＩＳｈｕ－ｇｕａｎｇ（李曙光），ＬＩＵＹｉｎ－ｑｉｕ（刘荫秋），ＷＡＮＧＪｉａｎ－ｍｉｎ...