脂多糖介导的人牙周膜成纤维细胞损伤过程中TRAF-6蛋白表达的研究

目的观察在不同浓度脂多糖(LPS)干预下,肿瘤坏死因子受体相关分子(TRAF)6在人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)损伤过程中表达的情况。方法取原代培养至5～7代的HPLFs,以LPS梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF-6在HPLFs中的表达。结果TRAF-6在正常的HPLFs中呈阴性表达,随LPS干预浓度由0.1μg/ml增加到100μg/ml,TRAF-6表达有先逐渐增高然后又降低的趋势。结论TRAF-6在LPS引发的HPLFs炎症损伤中发挥重要的作用,为细胞因子调控网络增添新资料。     

抗肿瘤坏死因子单抗对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞TRAF-2的调控作用

目的观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF-2)的诱导作用及抗肿瘤坏死因子单抗(抗TNF单抗)对其的影响,探讨TRAF-2参与牙周病的可能作用机制。方法牙周膜成纤维细胞培养至第6代,加入不同浓度的脂多糖(0、0.1、1、10、100μg/ml)培养24 h,分别命名为Z0组、Z0.1组、Z1组、Z10组、Z100组,并取Z1组浓度的脂多糖,在加药的同时加抗TNF单抗75μg/ml(Z1+75组)。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和蛋白印迹法测定TRAF-2 mRNA及蛋白的表达。结果 Z1组、Z10组和Z100组(依次为:2.92±0.49,2.84±1.56,2.76±0.61)HPLFs TRAF-2 mRNA的表达水平显著高于Z0组或Z0.1组(依次为:1,2.17±0.27)(均P<0.05),Z1组、Z10组、Z100组3组之间和Z0组、Z0.1组2组之间差异均无统计学意义(均P>0.05)。TRAF-2蛋白的表达水平在Z0组0.05)。Z1+75组(依次为:1.51±0.22,0.05±0.01)TRAF-2 mRNA及蛋白的表达水平显著低于Z1组(分别为:P<0.05,P<0.01)。结论脂多糖能诱导HPLFs TRAF-2的表达,且随脂多糖的浓度变化而变化,这种诱导作用能被抗TNF单抗所抑制。     

脂多糖对人皮肤成纤维细胞表型变化的影响及意义

目的 探讨被细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后的人正常皮肤成纤维细胞的表型改变与增生性瘢痕形成的关系.方法 体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织和人正常皮肤成纤维细胞,正常成纤维细胞分别经不同浓度(0、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500、1.000 μg/ml)LPS刺激,并对刺激后细胞进行传代,通过病理学、免疫组化染色、电镜观察等方法,观察成纤维细胞表达增殖细胞核抗原(PCNA)、α1(Ⅰ)前胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白的规律及透射电镜下超微结构的变化,并以相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照.结果 经LPS刺激后,正常皮肤成纤维细胞被激活,随着刺激浓度的增加,光镜下核浆比例逐渐增大;免疫组化染色显示PCNA表达阳性细胞逐渐减少,α1(I)前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白阳性细胞逐渐增多;电镜下显示细胞形态多样化,核浆比例增加,核膜变得不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体进一步增多,微丝微管增加,肌微丝出现.上述变化在LPS浓度为0.100 μg/ml时最明显,接近瘢痕组织成纤维细胞,表明成纤维细胞逐渐向增殖表型、合成表型或收缩表型变化.此后,随着LPS浓度继续升高,上述表型标志的表达和细胞形态均趋向于正常成纤维细胞.结论 一定浓度的LPS可能与增生性瘢痕形成有关.     

脂多糖对人皮肤成纤维细胞表型变化的影响及意义

目的探讨被细菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激后的人正常皮肤成纤维细胞的表型改变与增生性瘢痕形成的关系。方法体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织和人正常皮肤成纤维细胞,正常成纤维细胞分别经不同浓度（0、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500、1.000μg/ml）LPS刺激,并对刺激后细胞进行传代,通过病理学、免疫组化染色、电镜观察等方法,观察成纤维细胞表达增殖细胞核抗原（PCNA）、α1（Ⅰ）前胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白的规律及透射电镜下超微结构的变化,并以相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照。结果经LPS刺激后,正常皮肤成纤维细胞被激活,随着刺激浓度的增加,光镜下核浆比例逐渐增大;免疫组化染色显示PCNA表达阳性细胞逐渐减少,α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白阳性细胞逐渐增多;电镜下显示细胞形态多样化,核浆比例增加,核膜变得不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体进一步增多,微丝微管增加,肌微丝出现。上述变化在LPS浓度为0.100μg/ml时最明显,接近瘢痕组织成纤维细胞,表明成纤维细胞逐渐向增殖表型、合成表型或收缩表型变化。此后,随着LPS浓度继续升高,上述表型标志的表达和细胞形态均趋向于正常成纤维细胞。结论一定浓度的LPS可能与增生性瘢痕形成有关。     

热休克蛋白72在兔视网膜缺血再灌注损伤中的表达及重组人碱性成纤维细胞生长因子对其表达的影响

目的研究兔视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)后重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)对其组织中热休克蛋白(HSP)72活化程度的影响。方法选取66只大耳白兔,随机分为3组:缺血再灌注模型组(RIRI组30只)、rh-bFGF治疗组(RIRI+rh-bFGF组30只)、正常假手术组(6只),RIRI组、RIRI+rh-bFGF组又平均分为5个亚组(缺血再灌注后6、12、24、48、72h),每组6只大耳白兔。造模初期,RIRI组和rh-bFGF治疗组实验动物分别往玻璃体腔内注入相同剂量的0.9%氯化钠注射液和rh-bFGF溶液,并分别于制模后5个时间点处死动物摘取眼球,组织标本行苏木精-伊红(HE)染色及原位杂交。正常假手术组实验动物给予前房穿刺,无其他操作。常规HE染色后观察各组兔视网膜组织病理学变化,免疫组织化学法检测HSP72表达情况。结果正常假手术组兔视网膜各层次清晰、细胞平行排列且形态规则,视网膜神经节细胞呈单层排列、规则,无空泡变性。RIRI组兔视网膜出现高度水肿,层次紊乱、细胞结构疏松,视网膜神经节细胞出现空泡样变性,神经节细胞数目减少。RIRI+rh-bFGF组兔视网膜结构层次和细胞组织变化与RIRI组变化大致相同,但损害程度较其明显减轻。正常假手术组兔视网膜中没有发现HSP72;与RIRI组比较,RIRI+rh-bFGF组RIRI后5个时间点视网膜组织中HSP72的表达水平增高(P均<0.05)。结论 rh-bFGF对兔视网膜损伤有保护作用,其机制可能与上调HSP72的活化水平有关     

人牙周膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的体外分离培养人牙周膜成纤维细胞,进一步研究细胞因子对牙周膜细胞功能的调控作用。方法利用组织块法原代培养牙周膜成纤维细胞并传代,通过形态学及免疫细胞化学方法对其进行鉴定。结果牙周膜成纤维细胞培养成功传代,5代后细胞生长旺盛,表现为长梭形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。结论组织块法培养出的细胞符合牙周膜成纤维细胞的形态学及免疫学特征,生长状态良好,可作为体外的细胞模型为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定基础。     

不同灭菌方法对人牙周膜成纤维细胞培养的研究

目的比较2种不同的灭菌方法对人牙周膜成纤维细胞原代培养成活率的影响，寻找较为合适的灭菌方法，旨在提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成活率。方法28例牙齿标本分为5倍抗生素溶液灭菌组15例和次氯酸钠溶液灭菌组13例，2组分别采用5倍抗生素溶液与次氯酸钠溶液对取得的人牙周膜组织进行灭菌后，均采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞，并对细胞进行形态学和免疫组织化学染色鉴定，比较2种不同灭菌方法细胞培养的成活率。结果次氯酸钠溶液灭菌组无1例细胞成功传代，5倍抗生素溶液灭茵组细胞培养成活率为46．7％，且符合人牙周膜成纤维细胞的形态学和免疫学特征。结论利用舍5倍抗生素溶液灭菌效果与次氯酸钠溶液无差别，但相对更利于人牙周膜成纤维细胞的成活。     

热休克蛋白27在前列腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)在前列腺癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化(EnVision)法分别检测前列腺增生和前列腺上皮内瘤变各30例及前列腺癌70例组织中HSP27的表达情况.结果 HSP27表达阳性率前列腺增生组为6.67%,前列腺上皮内瘤变组中为26.67%,前列腺癌组中为60.00%,3组比较差异有统计学意义(P<0.01).HSP27的表达水平低分化组高于高-中分化组,Ⅲ-Ⅳ组高于Ⅰ-Ⅱ组,有骨转移组高于无骨转移组,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05).结论 HSP27可能参与了前列腺癌发生发展的演变过程,其过表达不仅预示患者预后差,而且也为临床的综合治疗提供理论依据.     

牙周膜成纤维细胞多种培养法的研究

目的：提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率,提高组织块贴壁率,缩短培养时间,加快细胞增殖。方法以高血清结合改良组织块培养法培养原代 HPDLCs 与传统组织块法及改良组织块培养法作比较。通过免疫组化方法鉴定细胞的来源,绘制细胞的生长曲线,对三种方式的培养成功率、组织块贴壁率及细胞增殖速度进行比较。结果三种方法所培养的原代细胞生长均趋于正常,细胞呈长梭形或多角形,波形蛋白鉴定呈阳性,角蛋白鉴定呈阴性,符合正常 HPDLCs 的正常形态及生物学特点。高血清结合改良组织块培养法的成功率为86．67％,明显高于其他两种方法（P ＜0．01）。结论高血清结合改良组织块培养法明显提高了 HPDLCs 原代培养的成功率,适合在临床上运用。     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜韧带细胞多向分化潜能的比较

目的 体外培养人牙周膜韧带细胞 （HPDLCs） 和人牙龈成纤维细胞 （HGFs）, 对比两者成骨、 成软骨以及成脂的多向分化潜能的差异。方法 运用酶消化结合组织块法体外培养 HPDLCs 和 HGFs, 选择生长状态良好的 3~4 代 HPDLCs 和 HGFs, 进行成骨、 成软骨、 成脂诱导, 未分化诱导的细胞作为对照组。分别用茜素红染色、 油红 O 染色以及阿利新蓝染色分别检测两种细胞的成骨、 成软骨及成脂分化能力。半定量逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR） 检测 HPDLCs 和 HGFs 中相关标志基因骨钙素(OCN)、 Ⅰ型胶原蛋白 （Col 1）、 runt 相关转录因子 2 （RUNX2）、 过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 （PPARγ2）、 X 型胶原蛋白 （Col 10） mRNA 的表达。结果 成骨诱导两种细胞培养至 28 d 时, 细胞周围均有红染钙结节形成, HPDLCs 形成的钙结节明显多于 HGFs; 成软骨诱导两种细胞 14 d 时均可见胞质蓝染的细胞, HGFs 较 HPDLCs 明显; 成脂诱导两种细胞 21 d 时, 可见红色脂肪滴形成, HPDLCs 形成的脂肪颗粒明显少于 HGFs。HGFs 和 HPDLCs 分化培养 7 d 和 14 d 后, 均有 OCN、 Col 1、 RUNX2、 PPARγ2 和 Col 10 的表达, 在 14 d 时的表达均高于 7 d; HPDLCs 中 OCN、 Col 1、 RUNX2 的表达高于 HGFs, PPARγ2、 Col 10 的表达低于 HGFs（均 P＜ 0.05）。结论 HPDLCs 的成骨能力较 HGFs 强, 成软骨和成脂能力较 HGFs 弱。     

干细胞在牙周病学中的应用进展

牙周病是造成牙齿缺失的常见病因之一。随着对干细胞的深入研究,牙周膜干细胞得以从牙周膜提取分离,具有分化成牙周组织细胞的能力。通过分析近年的组织工程学文章,探讨牙周膜干细胞的应用前景。     

组织块法和酶消化法培养人牙周膜细胞

目的：作者分别采用酶消化法和组织块法培养人牙周膜细胞，并对这两种方法进行比较。方法：倒置相差显微镜连续观察体外培养的人牙周膜细胞原代和传代生长情况，从形态学、免疫组化及细胞增殖方面对比两种方法培养细胞的异同。结果：两种方法培养的细胞形态大致相同，来源一致，增殖和生长曲线大体一致。组织块法培养的细胞同源性好，但初代培养时间长；酶消化法培养的细胞一次可获得的细胞量大，但容量污染，且初代培养的细胞混有较多的上皮细胞，需多次传代才能去除。结论：组织块法培养HPLFs适用于细胞纯度要求较高的实验，而酶消化法培养HPLFs适用于短期内获得大量细胞的实验。     

人牙周膜细胞接种于纳米-羟基磷灰石上的形态学研究

目的观察人牙周膜细胞接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石上的组织形态学表现。方法将原代培养的人牙周膜细胞接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石上，培养15天后，采用扫描电子显微镜观察细胞的生长情况，探讨两者的复合情况。结果作为种子细胞的人牙周膜细胞接种到支架材料上后，细胞粘附充分，生长旺盛，并有钙结节和少量胶原纤维形成。结论三维多孔纳米羟基磷灰石支架材料是一种比较符合牙周组织工程学条件的支架材料。     

Anti-inflammatory effects of lindenenyl acetate via heme oxygenase-1 and AMPK in human periodontal ligament cells

The molecular basis for the anti-inflammatory effects of lindenenyl acetate (LA) was investigated in the lipopolysaccharide (LPS)-stimulated human periodontal ligament (HPDL) cell model. LA concentration-dependently inhibited LPS-induced inducible nitric oxide synthase (iNOS) derived nitric oxide (NO) and cyclooxygenase-2 (COX-2) derived prostaglandin E2 (PGE₂) production in HPDL cells. LA also attenuated the production of LPS-induced tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6 and IL-12. LA stimulated heme oxygenase-1 (HO-1) protein expression and enzyme activity of HPDL cells in a dose-dependent manner. Pretreatment with the HO-1 inhibitor, tin protoporphyrin (SnPP), attenuated the inhibitory activities of LA on LPS-induced inflammatory NO, PGE₂, IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-12 production. LA induced translocation of Nrf-2. Furthermore, an inhibitor of JNK MAPK abolished LA-induced HO-1 expression. LA exposure up-regulated the levels of phosphorylated adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK) and its upstream kinase activators, including LKB1 and Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase-II. Furthermore, compound C, a specific AMPK inhibitor, partially blocked the LA-induced anti-inflammatory effect. Taken together, these results indicate that LA has anti-inflammatory activity in HPDL cells that might be mediated by the HO-1, AMPK, JNK MAPK, and Nrf-2 pathways. Thus, LA may serve as a potential therapeutic agent in periodontal disease.     

神经生长因子和重组骨形态蛋白对人牙周膜细胞增殖与分化作用的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)和重组骨形态蛋白(rhBMP)分别及联合作用对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法采用小鼠骨髓微核试验。体外培养hPDLCs,与不同浓度的NGF、rhBMP或NGF+rhBMP作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDLC增殖的情况,用APL活性检测法检测ALP的活性。结果NGF、rhBMP都可促进人PDLC的增殖及ALP的活性,这种促进作用呈一定的浓度依赖性。NGF与rhBMP联合应用对人PDLC的增殖及ALP的活性有协同作用,与单独应用相比差异有统计学意义。结论NGF、BMP都可促进人PDLC的增殖及ALP的活性,且二者联合具有协同作用。