大黄素对膀胱癌细胞BIU87增殖和凋亡的影响

目的探讨大黄素对人膀胱癌细胞BIU87生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养BIU87细胞增殖的影响,同时应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化,免疫组化SP法检测细胞内bcl-2和caspase-3蛋白的表达水平。结果在一定范围内,大黄素的浓度（10—80μg/ml）越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高[分别为（9．84±21．13）％、（18．32±22．14）％、（29．73±1．42）％、（42．13±2．36）％],与对照组[（2．01±20．92）％]相比,差异均有统计学意义（F=531．85,P〈0．01）;大黄素可在G0／G1期阻滞人膀胱癌细胞BIU87的增殖,使S期细胞比率降低[分别为（33．27±1．26）％、（29．17±1．39）％、（16．94±0．86）％、（10．85±1．47）％],与对照组[（35．45±0．38）％]相比,差异均有统计学意义（F=524．64,P〈0．01）。大黄素作用48h后,BIU87细胞中bel-2蛋白表达下降（灰度值分别为122．65±2．12、131．37±1．62、134．81±1．36、145．55±2．01）,easpase-3蛋白表达上调（灰度值分别为135．26±1．41、130．22±1．74、126．11±1．77、118．36±1．53）,呈浓度依赖性,与对照组（灰度值分别为108．42±3．73、149．35±1．82）相比,差异均有统计学意义（F=216．23、224．83,P〈0．01）。结论大黄素在体外能抑制人膀胱癌细胞株BIU87的生长、诱导细胞凋亡,其作用与下调bcl-2蛋白表达、上调easpase一3蛋白表达和阻滞细胞周期于Go／G．期有关。     

罗格列酮与全反式维甲酸对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响

目的 研究PPARγ激动剂罗格列酮（RSG）与全反式维甲酸（ATRA）对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响及其机制的研究.方法 体外培养SGC7901细胞,实验分为空白对照组、10μmol/L ATRA组、12.5 μmol/L RSG、25 μmol/L RSG组,10 μmol/L ATRA和25 μmol/L RSG联合组.MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期,HE染色检测细胞形态,免疫细胞化学检测PPARγ蛋白,RT-PCR检测PPARγmRNA.结果 10 μmol/L ATRA、12.5 mmol/L RSG、25 mmol/L RSG及两药联合时皆可抑制SGC7901细胞的增殖,且存在浓度及时间依赖,两药联合作用72 h时,生长抑制率为（29.73±0.69）%.ATRA、RSG皆可使细胞周期G0/G1期延长,S期下降,两药联合作用时,S%为（12.87±0.35）%,细胞形态向正常方向转化,细胞的PPARγ蛋白核内表达及PPARγmRNA表达上调,两药联合后作用进一步加强,PPARγ/GAPDH的浓度比值高达0.646.结论 ATRA、RSG均可抑制SGC7901细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞分化和上调PPARγ蛋白及PPARγmRNA的核内表达,ATRA和RSG联合较单药作用效果更强.     

EGCG对人前列腺癌裸鼠移植瘤生长和间隙连接蛋白43表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸脂（EGCG）对前列腺癌裸鼠移植瘤生长和间隙连接蛋白43（Cx43）表达的影响,探讨EGCG防治前列腺癌的作用机制。方法分别采用四甲基偶氮唑蓝法、膜联蛋白／碘化丙锭双标流式细胞术和划痕标记荧光染料传输技术,体外观察不同浓度的EGCG（10、20、40mg/L）对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制率、凋亡率、细胞间间隙连接通讯功能（GJIC）的变化。采用PC-3细胞建立裸鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为对照组和不同剂量的EGCG组（10、20、40mg/kg）,14d后称量移植瘤体重并计算抑瘤率,DNA原位缺口末端标记法和免疫组织化学分别检测凋亡指数（AI）和肿瘤微血管密度（MVD）,半定量逆转录聚合酶链反应检测移植瘤组织cx43mRNA的表达水平。结果20mg/L和40mg／L的EGCG均能明显抑制PC-3细胞的生长[（22．33±4．62）％,（38．67±5．67）％VS（3．47±0．31）％,P〈0．01]和诱导细胞凋亡[（7．84±1．37）％,（24．53±2．28）％V8（2．17±0．70）％,P〈0．01],并增强细胞间的GJIC功能。不同剂量的EGCG均能抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,减少肿瘤血管生成。（20、40mg/kg）EGCG能显著上调移植瘤组织Cx43mRNA的表达（0．58±0．08,0．80±0．07V80．42±0．04,P〈0．01）。EGCG对前列腺移植瘤的抑制作用、诱导细胞凋亡和上调Cx43表达的效应均随剂量的增加而增强,呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论EGCG能上调Cx43在裸鼠前列腺癌组织中的表达和增强Cx43介导的间隙连接通讯功能,从而有效抑制前列腺癌移植瘤的生长。     

酒石酸锑钾对人结肠癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原的影响

目的 探讨酒石酸锑钾（potassium antimony tartrate,PAT）对人结肠癌移植瘤裸鼠模型抑瘤及凋亡诱导作用.方法 60只裸鼠皮下注射结肠癌细胞株SW480建立移植瘤模型,随机分为4组（n=15）.分别为生理盐水组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）50 mg/（Kg·d）组、酒石酸锑钾组[（20 mg/（Kg·d）和40 mg/（Kg·d）],给药15 d,每3日测量肿瘤大小1次,绘制肿瘤生长曲线;末次给药24 h后,免疫组织化学法检测结肠癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）的表达.结果 使用PAT后,肿瘤体积增长较慢,PAT处理组细胞PCNA表达[（63.63±8.88）%,（59.13±6.15）%,（33.38±12.76）%]较对照组[（69.88±8.81）%]明显下调（P〈0.05或P〈0.01）.结论 PAT能有效抑制结肠癌细胞生长和诱导结肠癌细胞凋亡.     

神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究

目的观察神经生长因子（nerve growthfactor,NGF）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellatecell,HSC）凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC—T6,将HSC—T6与100ng／mlNGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因P^53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况;免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况。结果NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[（22．364±9．51）％VS（5．88±1．36）％,P〈0．05]。凋亡相关蛋白P^53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[（78．41±4．00）％、（39．26±1．57）％VS（34．96±3．84）％、（9．27±1．01）％,P〈0．05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[（18．12±1．38）％vs（91．53±2．98）％,P〈0．05]。NGF作用HSC后NGF表达增多（6．53±1．40vs1．77±0．17,P〈0．05）,而p75NTR表达无明显变化（3．52±0．36VS4．24±0．38,P〉0．05）。结论NGF可能通过使凋亡相关基因p、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡。NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响。     

Survivin在冬凌草甲素介导下对人前列腺癌细胞PC-3凋亡的作用

目的观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株-PC-3细胞的诱导凋亡作用,探讨Survivin在此过程中的作用。方法用不同浓度的冬凌草甲素干预PC-3细胞,MIT试验分析观察其对PC-3细胞活力的影响;通过用流式细胞仪分析PC．3早期凋亡细胞的百分率;用Western印迹检法、实时荧光定量PCR方法检测PC-3细胞Survivin的蛋白和mRNA表达的变化。结果（1）细胞生长抑制力呈一定的时间、剂量依赖性,冬凌草甲素浓度为2．5、5、10、20、40μmol／L时,干预48h后相对应的平均细胞生长抑制率依次为9．2％、25．3％、39．3％、77．2％、92．5％,药物抑制PC-3细胞活力的IC50约为10．29μmol／L;流式细胞仪检测经不同浓度的冬凌草甲素（0,10,20,40μmol／L）干预48h后,PC-3细胞的早期凋亡率分别为4．8％,15．4％,19．5％和27．4％（P〈0．05）。（2）冬凌草甲素以浓度依赖性方式抑制PC-3细胞的Survivin的蛋白和mRNA表达。结论冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导PC-3细胞凋亡。冬凌草甲素通过影响Survivin的表达来诱导PC-3细胞凋亡。     

雷帕霉素抑制人前列腺癌细胞PC-3生长及转移的实验研究

目的观察雷帕霉素（RPM）对人前列腺癌细胞PC-3生长、周期、凋亡及转移的影响,探讨RPM抑制前列腺癌细胞生长、转移的可能机制及临床应用前景。方法体外培养前列腺癌PC-3细胞,用不同浓度的RPM（10、25ng／m1）干预PC-3细胞。采用MTT法检测RPM对于PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测PC-3细胞周期及凋亡的变化;动物体内荷瘤实验检测对PC-3侵袭转移的影响。结果RPM能显著抑制PC-3细胞生长增殖,且呈时间和浓度依赖性,在25ng／36h时抑．ml36h制率达到（42．23±0．78）％,差异有统计学意义（P〈0．05）;流式细胞分析显示RPM能显著抑制细胞周期,使Go／G,期细胞增多（P〈0．05）,在25ng／ml、36h时Go／G1期细胞达到（92．17±0．69）％,并促进肿瘤细胞的早期凋亡（P〈0．05）,在25ng／ml、36h时凋亡率达到（28．75±1.31）％;动物体内荷瘤实验较对照组差别明显,对照组肿瘤重量与转移比率明显高于RPM组[（3．41±0．28）gVS（1．19±0．23）g,100％（7／7）vs 14．29％（1／7）,P〈0．05],肿瘤增长和转移被显著抑制。结论RPM明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长及迁移,以RPM为基础的前列腺癌治疗方案可能在临床中具有良好的应用前景。     

雷公藤内酯醇诱导PC3细胞凋亡的机制研究

目的观察雷公藤内酯醇（triptolide,TPL）对去势后抵抗性前列腺癌（Castration—Resistant Prostate Cancer,CRPC）PC3细胞的生长增殖抑制作用,对其诱导凋亡相关基因进行分析。方法MTY比色法观察TPL对PC3细胞的生长增殖抑制作用;Annexin—V／PI标记分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12、24h BCL-2、BAX、PIG3、P21、FAS、CASPASE3等与凋亡相关基因表达变化。结果什L抑制PC3细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48h半数抑制浓度分别为18．3ng／ml和13．5ng／ml,与24h组相比,48h组低浓度（5ng／ml,t=1．47,P〉0．05）和高浓度（160ng／ml,t=0．91,P〉0．05）差异无统计学意义。而10ng／ml（t=3．26,P〈0．05）、20ng／ml（t=4．21,P〈0．05）、40．g／ml（t=4．09,P〈0．05）、80ng／ml（t=2．91,P〈0．05）差异有统计学意义。Annexin-v／PI检测经18．3ng／ml,I’PL处理后的PC3细胞凋亡随着作用时间的延长而增多,相对于对照组,6、12、24h组Anexin—V阳性／PI阴性表达率分别为（5．42±2．21）％（t=3．52,P〈0．05）、（13．51±3．37）％（t=6．53,P〈0．01）、（29．3±4．53）％（t=8．74,P〈0．01）差异有统计学意义,并且各组间差异有统计学意义（P〈0．05）;RT—PCR显示经18．3ng／ml TPL处理后,BAX、HG3表达递增,P21、BCL-2表达递降,FAS、CASPASE3表达无明显改变。结论TPL可以抑制PC3生长增殖并诱导细胞凋亡,而在凋亡的过程中,BAX、BCL-2、PIG3、P21等基因的改变可能扮演着重要的角色。     

芦荟大黄素诱导硬皮病成纤维细胞凋亡的研究

目的探讨芦荟大黄素对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞凋亡的影响。方法以不同浓度的芦荟大黄素处理体外培养的成纤维细胞,用TUNEL法和荧光显微镜观察法测定芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的诱导。结果芦荟大黄素对患者皮肤成纤维细胞的凋亡具有显著的诱导作用,该作用在一定范围内随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强。结论芦荟大黄素可诱导硬皮病患者皮肤成纤维细胞的凋亡,从而抑制其增殖,减少其胶原蛋白的合成。     

罗格列酮与全反式维甲酸对人胃癌SGC7901细胞株生长和凋亡的影响

Objective To investigate the influence of PPARγ excitomotor RSG and ATRA on gastric cancer SGC7901 cell line proliferation in vitro and its potential mechanism study.Methods Human gastric cancer SGC7901 cell line was cultured in vitro.Experiment samples were divided to blank group,10μmol/L ATRA group, 12.5μmol/L RSG group, 25μmol/L RSG group, 10μmol/L ATRA + 25μmol/L RSG group.Proliferation inhibitory effect was determined by MTI assay.Flow cytometry was used to detect cell cycle, H.E stain was used to observed micrography alteration.Expression of PPARγ protein in gastric cancer cells were measured by immunohistochemistry.PPARγ mRNA in gastric cancer cells were measured by RT-PCR.Results ATAR at concentration 10μmol/L, RSG at 12.5 μmol/L and RSG at 25 μmol/L could inhibit the proliferation of SGC7901 cells in a dose-and time-dependent, and when both agents were combined for 72h, growth inhibition ratio was (29.73 ± 0.69) %.Flow cytometry analysis revealed a cell cycle arrest at G1 and S phase, and when both agents combined, S% was (12.87 ± 0.35 )%, cell micrography tended to be normal when both agents combined.Up-regulation of PPARγ protein and PPARγ mRNA expressions were also observed, those effects were enhanced when both agents combined, and grey scale ratio was 0.646.Conclusion The ATRA and RSG could significantly induced growth inhibition of human gastric cancer SGC7901 cell, which may be associated with cell cycle arrest and inducing differentiation, activation of PPARγ protein and PPARγ mRNA expression.Synergistic effect could be caused by the combined use of the two agents.     

辛伐他汀和非诺贝特对小鼠肝脏载脂蛋白M表达的影响及调控机制

目的 探讨辛伐他汀和非诺贝特及两者联合对小鼠肝脏载脂蛋白M（apoM）表达的影响及其机制,为防治动脉粥样硬化提供依据.方法 32只C57BL/6N小鼠按数字表法分为四组,对照组：普通饮食喂养;他汀组：辛伐他汀[10 mg/（kg·d）]干预;贝特组：非诺贝特[100 mg/（kg·d）]干预;联合组：辛伐他汀[10 mg/（kg·d）]和非诺贝特[100 mg/（kg·d）]干预,4周后分别检测小鼠肝脏apoM mRNA和蛋白、肝细胞核因子-1α（HNF-1α）mRNA、肝X受体-α（LXRα）mRNA的表达.结果 辛伐他汀和非诺贝特均上调apoM mRNA（1.97±0.04;2.02±0.02）和蛋白、HNF-1α mRNA（1.74±0.05;1.71±0.04）的表达,联合组（3.07±0.03;2.57±0.03）升高程度高于他汀组（1.97±0.04;1.74±0.05）和贝特组（2.02±0.02;1.71±0.04）（P＜0.05）.辛伐他汀下调LXRα mRNA（1.00±0.02）表达（P＜0.05）,非诺贝特上调LXRα mRNA（2.80±0.04）表达（P＜0.05）,联合组LXRα mRNA表达（1.56±0.03）与对照组（1.53±0.03）比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 辛伐他汀和非诺贝特可上调apoM表达,两者联合疗效更显著;其机制可能与两者调控HNF-1α和LXRα有关.     

NDGA联合塞来昔布对结肠癌细胞诱导凋亡的研究

目的观察5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LOX）抑制剂去申二氢愈创木酸（nordi-hydroguaiaretic acid,NDGA）联合选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂塞来昔布（Cele-coxib）对结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的影响。方法用不同浓度NDGA及塞来昔布处理HT-29细胞,应用甲基偶氮唑蓝（MTT）法、倒置相差显微镜观察、AnnexinV／PI法和RT-PCR方法,研究其抑制HT-29细胞增殖,诱导凋亡的作用。结臬M1丫r法显示,与对照组相比,NDGA和塞来昔布及两药联用组细胞活性下降（0．432±0．024、0．425±0．013、0．303±0．014VS0．693±0．018itz18．79,25．75,37．64,P〈0．01）。NDGA联合塞来昔布组与单独应用NDGA或塞来昔布差异有统计学意义（t=10．21,14．14,P〈0．01）。倒置相差显微镜下显示两种药物都能使体外培养的结肠癌HT-29细胞的形态发生明显变化,而两种药物联合应用后变化更明显。激光共聚焦显微镜下显示应用NDGA及塞来昔布后可以引起HT-29细胞凋亡。RT—PcR检测发现药物作用后Caspase-3表达上调,两种药物联合应用后上调最多。结论MDGA联合塞来昔布较之单独应用可以更强抑制体外培养的HT09细胞增殖,并诱导凋亡,其抑制HT-29细胞诱导凋亡机制与激活Caspase-3途径有关。     

葡萄糖对人外周血内皮祖细胞凋亡的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养条件下的健康人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）凋亡的影响.方法 经密度梯度离心法分离出健康成年人外周血中的单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）,在体外诱导分化后,用FITC标记的荆豆凝集素Ⅰ（Dil-acLDL）和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（FITC-UEA-1）双染色鉴定为内皮祖细胞.观察不同浓度的葡萄糖对所获取的内皮祖细胞凋亡的影响.结果 11.1 mmol/L葡萄糖干预组较5.6 mmol/L葡萄糖干预组的凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）;25.5 mmol/L葡萄糖干预组的凋亡率较5.6 mmol/L葡萄糖干预组的差异有统计学意义（P＜0.05）,且随干预时间的延长凋亡率增加（P＜0.05）.结论 高浓度葡萄糖能增加体外培养条件下人外周血内皮祖细胞的凋亡,且这种作用呈时间依赖性.