散发性激素耐药型肾病综合征患儿30例足细胞基因突变分析

目的分析散发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)儿童足细胞基因突变及其特点。方法研究对象为30例散发性SRNS患儿和50例尿检正常的健康志愿者。采用PCR扩增NPHS1、NPHS2和CD2AP基因全部外显子及其周围的部分内含子,WT1基因外显子8和9及其周围的部分内含子;应用DNA序列直接测定法对其PCR产物进行测序。结果在10例应用激素和免疫抑制剂治疗肾病无缓解的SRNS患儿中,发现1例携带WT1基因杂合突变——1180C>T(R394W),1例携带NPHS1基因复合杂合突变——2677A>G(T893A)和*142T>C,1例携带CD2AP基因杂合突变IVS13-137G>A。在20例应用激素或免疫抑制剂治疗肾病缓解的SRNS患儿中,发现4例患儿携带NPHS1基因单杂合突变——928G>A、IVS8+30C>T、IVS21+14G>A和IVS25-23C>T,1例患儿携带CD2AP基因单杂合突变(IVS7-135G>A)。结论对激素和免疫抑制剂均耐药的SRNS患儿需进行足细胞基因突变分析。     

Frasier综合征1例报告及基因分析

目的分析Frasier综合征的临床病理及致病基因特征。方法回顾分析1例Frasier综合征患儿的临床、病理特点,基因检测结果及诊治过程,并复习相关文献。结果患儿具有女性外生殖器,染色体核型46,XY,性腺发育不良(双侧卵巢未发育);肾病起病年龄为6岁,激素治疗无效。先后使用他克莫司、利妥昔单抗,虽血清白蛋白、胆固醇有所改善,肾功能无异常,但尿蛋白始终不能转阴。肾脏活检病理示局灶节段性肾小球硬化症,非特殊型,伴部分肾小球硬化。未发现性腺肿瘤、Wilms瘤等。基因检测WT1基因外显子9的c.1432+5GA剪接突变,为自发突变,已报道与Frasier综合征致病相关。结论 Frasier综合征临床表现主要为进展性肾病、男性假两性畸形、泌尿生殖系统畸形,与WT1基因突变有关。     

NPHS2 基因突变致遗传性肾病综合征患儿临床特点

目的探讨NPHS2基因突变所致激素耐药型肾病综合征的临床特点。方法回顾分析2例NPHS2基因突变所致激素耐药型肾病综合征患儿的临床资料,并结合文献进行复习。结果 2例患儿均为男性,发病年龄2岁、3岁。临床表现为大量蛋白尿、低白蛋白血症、高胆固醇血症。肾脏病理1例为局灶节段性肾小球硬化,另1例为微小病变。均伴有反复发作性腹股沟斜疝,1例伴左侧睾丸发育不全。相关基因检测均证实存在NPHS2突变。病初即激素耐药,其后激素联合多种免疫抑制剂治疗仍无效。发病3年内均进入终末期肾病阶段。结论对于激素耐药性肾病综合征男性患儿,伴多发疝或睾丸发育异常等肾外表现时,应注意除外NPHS2基因突变所致遗传性肾病综合征可能。     

分子诊断在性别发育异常诊断中的应用

目的 性发育异常是一组多基因介导的遗传性疾病,其遗传学病因异常复杂,但临床表型的多样化,导致临床实践中诊断比较困难.近年来,基因测序技术广泛应用于多种先天性疾病的诊断领域,本研究利用基因测序和基因芯片技术对临床诊断为性发育异常患儿进行基因检测,初步探讨性发育异常的分子病因,探索分子诊断技术用于性发育异常诊断的可能性.方法 22例患儿临床诊断为性发育异常,取全血2 ml并获取DNA.其中5例采用基因芯片技术检测已知的性发育异常相关基因,另17例采用全外显子测序技术检测可能的基因变化.检测结果再采用一代的Sanger测序进行验证.对于阳性发现患儿,取其父、母全血各2 ml,采用Sanger测序探究基因变化来源.结果 5例基因芯片检测患儿中,1例卵睾型性发育异常存在17号染色体中SOX9基因重复(Chr17:70,117,161-70,122,560).其余行全外显子测序17例患儿中5例发现阳性基因变化.这5例致病性基因变化分别为:1例肾上腺发育不良存在DAX1基因错义突变(c.871T＞G,p.W291G),1例肾上腺皮质增生为CYP21A2基因中2个致病性无义突变(c.292+ 1G＞A,c.293-13 A/C＞G),1例Charge综合征为CDH7基因移码突变(c.2916_2917delGT;p.Gln972HisfsX22),2例雄激素不敏感综合征患儿分别存在AR基因错义突变(c.2612C＞T;p.Ala871Val) AR基因错义突变(c.528C＞A;p.Ser176Arg).结论 二代测序技术及基因芯片发现可导致性发育异常的基因突变,可帮助明确病因,提高了诊断精准度.分子诊断技术在性发育异常诊断中的作用已初步显现.     

WT1����ͻ��������������˥��1����ϵ���Ŵ���ѯ�Ͳ�ǰ�������

目的探讨WT1突变致慢性肾功能衰竭产前基因诊断的方法。方法北京大学第一医院于2007年12月对1例先证者家系进行详细的遗传咨询和基因突变分析,提取患儿母亲第2胎孕20周羊水细胞基因组DNA,根据先证者基因突变分析,PCR扩增相应基因相应外显子检测胎儿突变情况,PCR扩增SRY联合核型分析检测胎儿性别,通过3个X染色体微卫星标记(AR、DXS6797和DXS6807)连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能。结果先证者基因突变分析结果为WT1基因IVS9+5G>A杂合突变,同时合并NPHS2第7外显子g.860A>G杂合突变。核型分析显示,患儿核型为46XY。家系突变分析显示,患儿母亲携带NPHS2第7外显子g.860A>G杂合突变,无WT1基因IVS9+5G>A杂合突变,父亲未发现异常。患儿母亲第2胎产前羊水细胞基因组DNA检测显示,胎儿无WT1和NPHS2相应位点突变。PCR扩增SRY基因和核型分析均显示胎儿为女性,连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染。结论本研究建立了WT1突变所致慢性肾衰竭产前基因诊断的方法。     

汉族散发性激素耐药型肾病综合征15例NPHS2和WT1基因遗传学变异

近年来的研究证实NPHS2基因(NPHS2)突变可引起散发性激素耐药型肾病综合征(steroid-resistant nephroticsyndrome,SRNS)[1];WT1基因(WT1)突变可引起孤立性SRNS等肾脏疾病[2].我们对15例汉族散发性SRNS患儿进行了NPHS2和WT1基因检测.     

WT1基因突变致慢性肾功能衰竭1例家系的遗传咨询和产前基因诊断

探讨WT1突变致慢性肾功能衰竭产前基因诊断的方法。方法　北京大学第一医院于2007年12月对1例先证者家系进行详细的遗传咨询和基因突变分析,提取患儿母亲第2胎孕20周羊水细胞基因组DNA,根据先证者基因突变分析,PCR扩增相应基因相应外显子检测胎儿突变情况, PCR扩增SRY联合核型分析检测胎儿性别,通过3个X染色体微卫星标记（AR、DXS6797和DXS6807）连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能。结果　先证者基因突变分析结果为WT1基因IVS9+5G >A杂合突变,同时合并NPHS2第7外显子g. 860A > G杂合突变。核型分析显示,患儿核型为46 XY。家系突变分析显示,患儿母亲携带NPHS2第7外显子g. 860A > G杂合突变,无WT1基因IVS9+5G > A杂合突变,父亲未发现异常。患儿母亲第2胎产前羊水细胞基因组DNA检测显示,胎儿无WT1和NPHS2相应位点突变。PCR扩增SRY基因和核型分析均显示胎儿为女性,连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染。结论　本研究建立了WT1突变所致慢性肾衰竭产前基因诊断的方法。     

隐睾及隐睾合并其他泌尿生殖系统畸形的外显子测序分析

目的对隐睾及隐睾合并其他泌尿生殖系统畸形的不同表型患儿进行外显子测序,以探索不同临床表型的分子病因。方法提取19例隐睾及隐睾合并其他泌尿生殖系统畸形患儿外周血基因组DNA进行外显子测序,并对测序结果进行生物信息学分析,其中3例行全基因外显子测序,16例行常见基因外显子测序,再采用Sanger测序对获得候选致病突变的患儿及其父母的外周血样本进行突变位点验证。结果本研究纳入的19例患儿中,6例外显子测序结果经生物信息学分析后发现存在异常结果,并提示有3个基因可能与相关表型发病有关:①AR基因发生3处错义突变(c.1600C>A;p.Pro534Thr)、(c.2599G>A;p.Val867Met)和(c.528C>A;p.Ser176Arg);②NR5A1基因发生移码突变(c.442delG;p.Glu148Serfs*148)和错义突变(c.43G>A;p.Val15Met);③ATRX基因发生剪切位点突变(c.4317+13T>C)。其中c.2599G>A和c.43G>A为已知突变,其余4处未见相关研究报道,为新发突变。Sanger测序结果表明6处突变均得以验证,5例患儿母亲存在对应位点突变、患儿父亲未见异常,1例患儿父母均未见异常。结论AR基因错义突变、NR5A1移码和错义突变及ATRX的剪切位点突变可能是隐睾及隐睾合并其他泌尿生殖系统畸形发病的危险因素。     

磷脂酶CE1在儿童原发性肾病综合征中的作用机制研究进展

磷脂酶CE1(PLCE1)是磷脂酶家族中一类特殊的磷脂酶C同工酶,表达于成熟肾小球的足细胞,通过多种方式参与细胞的信号转导,从而促进其生长发育及表达。PLCE1的单基因突变、与其他致病基因的杂合突变、该酶与其他因子的相互作用均有可能导致儿童原发性肾病综合征(PNS)。目前已有因PLCE1突变引起的激素耐药型肾病综合征患儿服用钙调蛋白抑制剂后痊愈的案例,为治疗此类疾病带来了新的治疗方案。现主要就PLCE1的表达、生物学功能、导致儿童PNS的机制及对该病的治疗作一综述。     

7例Wiskott-Aldrich综合征回顾性分析

目的分析7例Wiskott-Aldrich综合征患儿的临床特征。方法对2010—2019年于河北医科大学第二医院就诊的Wiskott-Aldrich综合征患儿的临床资料进行回顾性分析。结果 7例患儿均为男性,2例为同一家系,基因检测6例突变位于外显子(5例为错义突变,1例为缺失突变),1例突变位于内含子,属于剪接位点突变,5例患儿进行亲代验证,母亲均为杂合突变。首发症状均为出血,皮肤出血点4例,便血3例;7例中有3例伴有严重的湿疹;最常见表现为上呼吸道感染或支气管炎,重度感染共计12例次,其中细菌感染7例次(58%),病毒感染2例次(17%),真菌2例次(17%),结核1例次(8%); 3例淋巴细胞亚群分析均表现为CD3+T细胞比例减低,主要为CD3+CD8+细胞比例减低,CD3-CD56+细胞比例增加,可伴或不伴B细胞比例异常。结论 1.该病为X-连锁隐性遗传,男性发病,突变以错义突变为主; 2.临床上主要表现为出血,湿疹伴感染;3.免疫状态存在异质性。     

Broad and unexpected phenotypic expression in Greek children with steroid-resistant nephrotic syndrome due to mutations in the Wilms’ tumor 1 (<Emphasis Type="Italic">WT1</Emphasis>) gene

Mutations in the Wilms’ tumor suppressor gene 1 (WT1), most commonly within exons 8 or 9 or intron 9, are found in cases with the overlapping conditions of Denys–Drash and Frasier syndromes, as well as in patients with steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS). This study investigated the presence of WT1 gene mutations in cases with childhood SRNS, along with an evaluation of their clinical outcome. Twenty-seven Greek children with sporadic (19 cases) and familial (8 cases) SRNS were tested. Four phenotypically female patients with sporadic SRNS were found to carry de novo WT1 mutations, including two cases with p.R394W, and one case each with p.R366H, or n.1228+5G>A. Karyotype analysis found 46XX in three cases, but 46XY in one. No phenotype–genotype correlations were apparent in the WT1 gene positive cases since their clinical presentation varied broadly. Interestingly, one patient with a pathological WT1 nucleotide variation responded fully to combined therapy with cyclosporine A and corticosteroids. This study further illustrates that investigation of WT1 gene mutations is clinically useful to support definitive diagnosis in children presenting with SRNS in order to direct the most appropriate clinical management.     

儿童肾病综合征致病基因筛查策略的探讨

目的 通过儿童散发性肾病综合征（NS）致病基因及其突变特点,探讨儿童NS致病基因的筛查策略。方法 收集复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科2011年1月1日至2013年12月31日的所有住院NS患儿的临床资料,依据发病年龄分为先天性NS（3月龄内）、婴儿型NS（～12月龄）、儿童早发型NS（～5岁）和儿童迟发型NS（～14岁）;对儿童早发型和迟发型NS再依据对糖皮质激素（GC）治疗反应分为GC敏感（SSNS）和GC耐药（SRNS）,SRNS又分为初发型和迟发型SRNS。先天性NS行NPHS1、NPHS2、PLCE1、LAMB2、LMX1B、COQ2基因所有外显子和WT1基因8、9外显子直接测序;婴儿型NS行NPHS1、NPHS2、PLCE1基因所有外显子和WT1基因8、9外显子直接测序;儿童早发型和迟发型NS行NPHS2基因所有外显子和WT1基因8、9外显子直接测序,以及NPHS1等8个基因42个常见突变位点的SnapShot分析。结果 238例NS患儿进入本文分析,男139例。①8/10例（80％）先天性NS患儿检出NPHS1基因致病性突变;②12例婴儿型NS患儿检出3例WT1（25.0%）、2例NPHS2（16.7%）和1例NPHS1（8.3%）基因突变;③8/132例（6.1％）早发型NS患儿检出基因突变,均属于初发型SRNS（8/32,25.0%）,其中WT1 3例（9.4％）、NPHS2 2例（6.3%）、NPHS1 2例（6.3%)和INF2 1例（3.1%),19例迟发型SRNS和81例SSNS患儿均未检出相关基因突变;④84例儿童迟发型NS中未检出基因致病性突变。结论 先天性NS、婴儿型NS和儿童早发型NS中的初发型SRNS患儿应是临床基因筛查的对象。NPHS1是本文先天性NS患儿的主要致病基因,推荐在先天性NS患儿行NPHS1基因检测。NPHS1、NPHS2和WT1基因突变频率在婴儿型NS和儿童早发型NS中的初发型SRNS患儿中较高,推荐这些人群中优先选择这3个基因作为目标基因进行筛查。不推荐常规在SSNS和迟发型SRNS患儿中行基因检测。     

Mutations in the Wilms' tumor 1 gene cause isolated steroid resistant nephrotic syndrome and occur in exons 8 and 9

Primary steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS) is characterized by childhood onset of proteinuria and progression to end-stage renal disease. Approximately 10-25% of familial and sporadic cases are caused by mutations in NPHS2 (podocin). Mutations in exons 8 and 9 of the WT1 gene have been found in patients with isolated SRNS and in SRNS associated with Wilms' tumor (WT) or urogenital malformations. However, no large studies have been performed to date to examine whether WT1 mutations in isolated SRNS are restricted to exons 8 and 9. To address this question, we screened a worldwide cohort of 164 cases of sporadic SRNS for mutations in all 10 exons of the WT1 gene by multiplex capillary heteroduplex analysis and direct sequencing. NPHS2 mutations had been excluded by direct sequencing. Fifteen patients exhibited seven different mutations exclusively in exons 8 and 9 of WT1. Although it is possible that pathogenic mutations of WT1 may also reside in the introns, regions of the gene that were not able to be screened in this study, these data together with our previous results (Ruf et al.: Kidney Int 66: 564-570, 2004) indicate that screening of WT1 exons 8 and 9 in patients with sporadic SRNS is sufficient to detect pathogenic WT1 mutations and may open inroads into differential therapy of SRNS.     

A novel WT1 gene mutation associated with wilms' tumor and congenital male genitourinary malformation

WT1 is located on the short arm of human chromosome 11 and consists of 10 coding exons. Mutations of this gene have been reported to be the cause of Wilms' tumor, congenital male genitourinary malformations, and/or renal disorders. We describe here a novel WT1 gene mutation, i.e. a point mutation at intron 7 (+2) in both the tumor and the germline cells of a patient with Wilms' tumor and congenital male genitourinary malformation, but without renal disorder. The position of the mutation is at a splice donor site of intron 7, which causes the splicing out of exon 7 and generates a truncated protein. This type of mutation in the WT1 zinc finger domain has not been reported before. The mutation is of paternal origin and is heterozygous in the germline cells. In the tumor cells, however, the maternal allele is largely lost, from 11p12 to 11p15, which results in maternal loss of heterozygosity. These results, together with the data from previous reports, suggest that WT1 may function in gonadogenesis, nephrogenesis, and Wilms' tumor tumorigenesis.     

Pulmonary thromboembolism associated with Klippel-Trenaunay syndrome

Klippel-Trenaunay syndrome (KTS) is a rare congenital anomaly characterized by unilateral limb overgrowth, venous varicosities, and capillary malformations (port wine stains) of the affected limb or limbs. Large venous malformations such as those observed in KTS are rare, and many physicians are unfamiliar with the potential complications, which include hypercoagulability, thrombosis, and pulmonary embolism (PE). As a result, patients may suffer from delayed diagnosis of a potentially life-threatening thromboembolic event. We present 2 cases of children with KTS complicated by PE, and we review the English-language literature regarding pathophysiologic features, interventions, and outcomes of PE in the setting of KTS among both pediatric and adult patients, with emphasis on issues relevant to pediatricians.     

激素耐药型肾病综合征单卵孪生姐妹WT1基因突变

目的分析1个汉族激素耐药型肾病综合征(SRNS)家系WT1基因突变及其特点。方法研究对象为1个汉族SRNS家系先证者及其单卵孪生姐姐、父母和大姐;健康对照人群为50例尿检正常的汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3 mL,提取基因组DNA,PCR扩增WT1基因全部10个外显子及其周围的部分内含子序列,对PCR产物直接进行DNA序列测定。结果先证者患儿临床表型为不完全型Denys-Drash综合征,其孪生姐姐临床表型为孤立性SRNS。在该对单卵孪生姐妹中均检测到WT1基因1180C>T(R394W)杂合突变,在先证者父母及其大姐和50例健康对照人群未检测到该突变;此外,还在对该孪生姐妹检测到3个相同的WT1基因多态性——126C>T、903A>G和IVS7-32C>A。结论本研究在1个汉族SRNS家系临床表型不同的单卵孪生姐妹中发现了相同的WT1基因R394W杂合突变。     

Bilateral gonadoblastoma with dysgerminoma and pilocytic astrocytoma with WT1 GT‐IVS9 mutation: A 46 XY phenotypic female with Frasier syndrome

Frasier syndrome is characterized by a 46 XY disorder of sex development, nephropathy, and increased risk for gonadoblastoma due to Wilms tumor 1(WT1) mutation in the donor splice site of intron‐9, resulting in the splice form +KTS. Germ cell tumors and gonadoblastomas have been reported previously in Frasier syndrome. We present the clinical, radiological, and genetic (WT1 mutation analysis) of a 46 XY phenotypic female with Frasier syndrome with bilateral gonadoblastoma with dysgerminoma who developed pilocytic astrocytoma. Pediatr Blood Cancer 2009; 53:1349–1351. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

一个中国汉族人家族性激素耐药型肾病综合征家系NPHS2基因新突变

目的　分析中国汉族人家族性激素耐药型肾病综合征 (SRNS)家系NPHS2基因及突变特点。方法　研究对象为一个中国汉族人家族性SRNS家系中的先证者及其兄和父母 ,对照人群为 5 3例尿检正常成年人。取肾组织做常规光镜检查和 podocin、nephrin、α actinin、WT1表达的检查。提取外周血白细胞基因组DNA ,PCR扩增NPHS2基因 8个外显子 ;应用变性高效液相色谱(DHPLC)分析PCR产物 ,对DHPLC洗脱曲线异常者进行DNA序列测定。结果　先证者及其兄肾脏病理示 :局灶节段性肾小球硬化。先证者肾组织 podocin重组蛋白P35染色弱阳性 ,P2 1染色阴性 ;nephrin、α actinin和WT1染色的范围、定位、分布和荧光强度与对照组无差异。DHPLC示先证者及其父母洗脱曲线异常 ;DNA测序证实先证者为 4 6 7_4 6 8insT与 5 0 3G >A复合杂合突变 ,其父为 5 0 3G >A杂合突变 ,其母为 4 6 7_4 6 8insT杂合突变。结论　首次发现了一中国汉族人家族性SRNS家系中NPHS2基因突变——— 4 6 7_4 6 8insT与 5 0 3G >A复合杂合突变 ,且 5 0 3G >A突变为新发现的突变 ;同时还发现该复合杂合突变引起肾组织中抗 podocin重组蛋白P35的染色明显减弱 ,抗 podocin重组蛋白P2 1的染色阴性。     

以激素耐药型肾病综合征起病的Alport综合征15例临床分析

目的 对以儿童激素耐药型肾病综合征(steroid-resistant nephrotic syndrome,SRNS)起病的Alport综合征(Alport syndrome,AS)的临床资料、病理和基因检测情况进行临床分析,以提高对AS的认识.方法 选取2015年1月至2019年12月广州医科大学附属广州市第一人民...