血小板生成素基因治疗的研究

血小板生成素（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ），又称巨核细胞生长发育因子，能特异性地作用于巨核细胞增殖和分化阶段［１］。研究表明，当向正常动物供以重组蛋白ＴＰＯ时，能明显提高动物体内血小板计数［２］。这一发现为治疗那些由于接受高剂量化疗和放疗而遭受生命危险的血小板减少症病人提供了可能性。鉴于重组ＴＰＯ对病人来说属外源蛋白，具有不同程度的副作用，本文以基因治疗技术探索一条新的ＴＰＯ给药途径，即把基因导入动物体内，使动物自身表达ＴＰＯ，维持高水平血小板。１　材料与方法１．１　质粒　本室利用ＲＴ…     

血小板生成素基因注射促血小板生成作用的实验研究

本文研究了 ＴＰＯ 基因注射法对健康小鼠血小板的促生成效果。将带有 ＴＰＯ ｃＤＮＡ 的ｐｃＤＮＡ３ 质粒按６０μｇ／只剂量注射到昆明小鼠后肢内侧肌肉内，每天断尾采血，对白细胞和血小板计数。一定时间内采股骨骨髓推片，计数单位面积内的巨核细胞数。以同期未注射的小鼠作为对照组。结果显示，在基因注入后的第三天起即出现血小板和巨核细胞增多。在所观察的三周内，血小板有一可持续一周的高水平期，平均约为同期对照的１８４％ ，最高可达三倍以上。计数高峰后血小板计数在高于对照水平上呈波动状态。小鼠脾脏出现以巨细胞增生和内皮细胞活化为特点的组织学变化，提示ＴＰＯ 具有刺激免疫功能的作用     

再生障碍性贫血患者外周血γδT细胞亚群与红细胞生成素、血小板生成素水平关系

目的 探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血γδT细胞亚群与红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)水平的关系。方法 选取自2019年2月至2023年2月于通州区人民医院门诊及住院部治疗的193例AA患者纳入AA组。另选取同期58例健康体检者纳入健康组。比较两组外周血γδT细胞亚群、EPO、TPO水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血γδT细胞亚群、EPO、TPO水平对AA严重程度的评估价值。采用Logistic回归分析影响AA患者病情的危险因素。比较不同病情严重程度患者外周血γδT细胞亚群、EPO、TPO水平。分析各指标联合检测对AA病情严重程度的评估价值及对患者病情加重的影响。于治疗后3个月将患者分为有效组(n=154)与无效组(n=39),比较两组治疗后γδT细胞亚群、EPO、TPO水平。结果 AA组γδT细胞、CD4⁺γδT细胞、CD8⁺γδT细胞、EPO、TPO水平高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。AA患者外周血γδT细胞、CD8⁺γδT细胞与EPO、TPO水平呈正相关(P<...     

—6°卧床对T淋巴细胞增殖功能和细胞因子产生的影响

探讨了短时间－６°卧床模拟失重对外周血Ｔ淋巴细胞受到多克隆刺激剂植物凝集素（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ，ＰＨＡ）刺激后增殖能力和细胞因子产生的影响，结果表明：卧床模拟失重２ｄ后Ｔ淋巴细胞受到ＰＨＡ刺激后增殖明显下降；白细胞介素－２ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）的活性呈下降趋势；白细胞介素－２受体（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ｒｅｃｅｐｔｉｒ，ＩＬ－２Ｒ）的表达无明显改变，白细胞介素     

免疫因子对血小板生成素的负调节作用

鉴于ＴＰＯ 在体内长期表达会给机体带来一些负面影响，以及在较长期作用模式下，机体血小板的生成能力与ＴＰＯ 在体内水平的不一致，本文对免疫因子与ＴＰＯ 表达及其生物活性间的关系进行了研究。在ＴＰＯ ｃＤＮＡ 转移到体内后，血液中ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－ α和ＩＬ－２ 迅速升高。其中，ＩＦＮ－γ与血小板计数呈明显负相关， 在血小板计数回落后保持在对照水平的 ９～１２ 倍；ＴＮＦ－α仅在第 １ 周内与之成正相关，且可达对照水平的１２０ 倍，此后局限于对照水平；ＩＬ－２ 升高幅度较小，与ＴＰＯ 的变化相一致。另外，血液中Ⅱ型组织相容性抗原分子也呈升高趋势，与ＩＬ－２ 的变化类似；而Ⅰ型分子与ＴＮＦ－ α的变化相似。结合基因转移后的组织学特点，可以认为ＩＦＮ－γ在血小板生成过程中起主要的逆向调节作用，而机体出现了以巨噬细胞、内皮细胞和Ｔ 淋巴细胞活化为特点的免疫学改变     

稳定,高效表达血小板生成素的真核细胞株的构建

目的：血小板生成素（ＴＰＯ）在治疗血小板减少症方面具有潜在的应用前景，为构建体外稳定表达ＴＰＯ的真核细胞株，进行了ＴＰＯ的稳定表达研究。方法：采用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从水囊引产的胎儿肝组织中得到ＴＰＯ ｃＤＮＡ并进行表达。结果：经过序列分析证明获得了没有错义突变的ＴＰＯ全长ｃＤＮＡ（约１ｋｂ）。在此基础上构建的ＴＰＯ的真核表达质粒在ＣＯＳ－７细胞中瞬时表达的产物能够维持并刺激ＴＰＯ     

白细胞介素-11和血小板生成素治疗血小板减少症的研究进展

化疗依然是目前癌症治疗中最主要的措施之一。化疗所致的严重粒细胞减少症随着粒细胞集落刺激因子（ＧＣＳＦ）、粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）等造血刺激因子的应用而得以明显改善,由此而加大的化疗剂量也大大提高了癌症患者的治愈率或缓解率。但随之而来...     

血小板生成素注射用于小鼠肿瘤辅助性治疗的初步研究

本文利用ＴＰＯ基因注射治疗接受环磷酰胺化疗后小鼠的血小板及白细胞减少症。将克隆于ｐｃＤＮＡ３的ＴＰＯ质粒按不同剂量注射到试验组２７只小鼠后肢内侧肌肉内，其中３只小鼠注射空质粒。三日后其中接受ＴＰＯ基因注射的１２只小鼠每只腹腔内注射环磷酰胺２ｍｇ（１００ｍｇ／ｋｇ体重），其余１２只不化疗的小鼠作为基因对照组；另设化疗对照组动物１５只，按相同剂量注射环磷酰胺。每周尾静脉采血，检测白细胞和血小板水平。结果基因＋化疗组的两项血液指标在化疗后两周内明显优于单纯化疗组，无毛发脱落；化疗组和注射空质粒组动物绝大多数发生脱毛现象，并有７只动物死亡。两周后进行第二次环磷酰胺攻击，结果化疗组的死亡数达８只，存活动物体况很差，基因＋化疗组动物尚无任何不良表现。此时两组的血液指标已无明显差异，提示在基因注射后ＴＰＯ的有效表达期在２－３周。本研究发现ＴＰＯ基因注射后，不但动物血小板和白细胞水平提高，而且其它化疗后的不良症状也得到改善，提示ＴＰＯ有着更为广泛的作用     

中国人血小板生成素cDNA的克隆及测序

中国人血小板生成素ｃＤＮＡ的克隆及测序卢柏松，黄培堂（北京军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０）调控血小板生成的血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）基因序列最近被阐明，这为人们了解血小板的发育调节打开了缺口，同时也为临床治疗血...     

严重烧伤患者T淋巴细胞免疫功能变化及其与患者预后的关系

目的明确严重烧伤后患者外周血T淋巴细胞免疫功能的变化规律,并探讨其在患者不良预后中的临床意义。方法对106例烧伤总体表面积(TBSA)≥30%的患者进行动态观察,对所采集临床病例资料进行分析。试验分组:(1)按烧伤面积将患者分为3组:Ⅰ组41例(TBSA 30%～49%),Ⅱ组34例(TBSA 50%～69%),Ⅲ组31例(TBSA 70%～99%);(2)将59例并发脓毒症患者根据其预后分为死亡组(17例)与存活组(42例)。同时设正常对照组(25位健康献血员)。分别于烧伤后1、3、7、14、21天采集患者外周静脉血,分离外周血T淋巴细胞,分别检测T淋巴细胞增殖活性和T淋巴细胞孵育上清中白细胞介素(IL)-2分泌水平等。结果与正常对照组比较,严重烧伤患者各烧伤面积组外周血T淋巴细增殖活性及IL-2表达水平均明显降低,Ⅰ组与Ⅲ组比较存在显著差异(P0.01)。死亡组患者T淋巴细胞增殖活性及IL-2表达水平在伤后3～21天明显低于存活组(P0.01或P0.05)。结论严重烧伤后T淋巴细胞免疫功能明显受抑,机体免疫功能障碍程度与烧伤面积和患者预后密切相关。     

蜂胶对慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴细胞的功能的影响

 目的 通过观察蜂胶对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者T淋巴细胞增殖及分泌白细胞介素-2(IL-2)影响,为蜂胶对COPD的治疗提供理论依据.方法 用四甲基偶氨唑盐(MTT)比色法观察蜂胶对T淋巴细胞增殖的影响;采用酶联免疫吸附试验法测定蜂胶对T淋巴细胞分泌的细胞因子IL-2影响.结果 COPD患者T淋巴细胞生成的IL-2水平与对照组比较显著减低(P＜0.01),T淋巴细胞增殖反应亦明显减低(P＜0.01);蜂胶和慢阻肺组,PHA刺激T淋巴细胞,T淋巴细胞生成IL-2的较慢阻肺组高(P＜0.01),T淋巴细胞增殖反应亦明显增加(P＜0.01).结论 COPD患者T淋巴细胞生成的IL-2减低,T淋巴细胞增殖反应亦减低,免疫失衡;蜂胶促进COPD患者T淋巴细胞分泌IL-2,增强T淋巴细胞增殖反应.     

多发性骨髓瘤外周血T细胞亚群和B细胞相关免疫表型分析

 目的分析不同临床期多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)细胞免疫功能的变化和外周血肿瘤相关B淋巴细胞的免疫表型特点.方法采用直接或间接免疫荧光标记流式细胞术分析MM患者外周血T和B淋巴细胞的免疫表型.结果初治MM患者CD4、CD25及CD4/CD8比值显著降低(P＜0.05),CD8升高(P＜0.01);稳定期除了CD25降低外,T细胞亚群正常;进展期CD3,CD4及CD4/CD8比值均显著降低(P＜0.05或P＜0.01),CD8细胞升高(P＜0.01).结论不同临床期细胞免疫功能不同,细胞免疫调节与MM发病和病情进展有关,MM患者外周血肿瘤相关B细胞表达CD10抗原.     

人参茎叶皂甙提高创伤小鼠T细胞功能的分子机制研究

目的研究人参茎叶皂甙（ＧＳＬ）提高创伤小鼠Ｔ细胞功能的分子机制。方法利用闭合性创伤小鼠模型，观察ＧＳＬ在体内外对创伤小鼠活化的Ｔ细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）、ＩＬ－２受体α链（ＩＬ－２Ｒα）基因转录水平，ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量以及磷脂酰肌醇代谢的调节作用。结果ＧＳＬ体内应用（５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×４ｄ）可明显逆转创伤小鼠活化的Ｔ细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ、ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ、ＩＬ－２及ＩＬ－２Ｒα的受抑状态，降低细胞内ｃＡＭＰ含量，增加ｃＧＭＰ与三磷酸肌醇（ＩＰ３）含量，升高激离钙［Ｃａ２＋］ｉ）浓度、钙调素（ＣａＭ）、ＣａＭ依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－ＰＫ）及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活性。０．１～１００μｇ／ｍｌ的ＧＳＬ在体外可升高创伤小鼠活化的Ｔ细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ及ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ水平，降低ｃＡＭＰ含量，升高ｃＧＭＰ含量、［Ｃａ２＋］ｉ浓度及ＰＫＣ活性。结论ＧＳＬ可通过调节Ｔ细胞内环核苷酸含量及促进磷脂酰肌醇代谢，进而增强创伤后活化的Ｔ细胞内ＩＬ－２及ＩＬ－２Ｒα的基因转录表达     

纳米氧化铈对X射线照射小鼠外周血免疫细胞分布及脾脏T淋巴细胞增殖能力的影响

目的 观察纳米氧化铈对X射线引起的小鼠免疫损伤是否具有保护作用。方法 小鼠按体重分层分为7组：对照组、模型组、模型+不同剂量纳米氧化铈组（模型+10 ng组、模型+100 ng组、模型+1 μg组、模型+10 μg组、模型+100 μg组）,每组各6只。模型组和纳米氧化铈组小鼠经X射线1次性全身照射,照射剂量4 Gy,纳米氧化铈组小鼠于照射前4 d开始,分别腹腔注射10、100 ng/kg,1、10和100 μg/kg体重的纳米氧化铈,每周2次,照射后第10天处死小鼠。采用全自动血细胞计数仪进行外周血白细胞计数及分类;采用流式细胞术检测T、B、NK、CD4+、CD8+ T淋巴细胞的百分比,计算CD4/CD8比值;采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测脾脏T淋巴细胞增殖能力。结果 与对照组相比,经X射线照射小鼠外周血的白细胞总数和NK细胞绝对值,中性粒细胞、单核细胞、总淋巴细胞、T淋巴细胞、CD4+和CD8+ T淋巴细胞的绝对值及百分比,脾脏T淋巴细胞增殖能力均降低（t=2.26~3.18,P<0.05）;B淋巴细胞百分比和CD4/CD8比值升高（t=2.45、3.18,P<0.05）。X射线照射小鼠腹腔注射不同剂量的纳米氧化铈对上述免疫学指标有改善作用,其中以10和100 μg纳米氧化铈组改善效果明显,而10 μg组改善作用最佳。结论 纳米氧化铈能够提高X射线照射小鼠的免疫功能。     

Gene expression and gene therapy imaging

The fast growing field of molecular imaging has achieved major advances in imaging gene expression, an important element of gene therapy. Gene expression imaging is based on specific probes or contrast agents that allow either direct or indirect spatio-temporal evaluation of gene expression. Direct evaluation is possible with, for example, contrast agents that bind directly to a specific target (e.g., receptor). Indirect evaluation may be achieved by using specific substrate probes for a target enzyme. The use of marker genes, also called reporter genes, is an essential element of MI approaches for gene expression in gene therapy. The marker gene may not have a therapeutic role itself, but by coupling the marker gene to a therapeutic gene, expression of the marker gene reports on the expression of the therapeutic gene. Nuclear medicine and optical approaches are highly sensitive (detection of probes in the picomolar range), whereas MRI and ultrasound imaging are less sensitive and require amplification techniques and/or accumulation of contrast agents in enlarged contrast particles. Recently developed MI techniques are particularly relevant for gene therapy. Amongst these are the possibility to track gene therapy vectors such as stem cells, and the techniques that allow spatiotemporal control of gene expression by non-invasive heating (with MRI guided focused ultrasound) and the use of temperature sensitive promoters.     

CO中毒致迟发性脑病大鼠脑内CD4+T淋巴细胞浸润及神经胶质酸性蛋白的表达

目的观察CO中毒致迟发性脑病（DNS）大鼠脑内CD4^＋T淋巴细胞浸润以及神经胶质酸性蛋白（GFAP）的表达情况，探讨CO中毒致DNS的病理过程。方法25只SD雄性大鼠随机分为对照组、染毒后3、7、10、20d组，每组5只。采用HE和免疫组织化学染色方法，观察染毒后各时间点大鼠脑内病理形态学变化，及CD4^＋T淋巴细胞浸润和GFAP的表达情况。结果HE染色结果显示：各染毒组在大脑皮层及海马均出现神经细胞不同程度的变性、坏死，染毒后7d组最重。免疫组织化学染色结果显示：对照组无CD4^＋T淋巴细胞浸润，有少量GFAP表达；各染毒组不同脑区CD4^＋T淋巴细胞、GFAP均有不同程度的浸润和表达。CD4^＋T淋巴细胞染毒后3d开始浸润，7d达峰值，两者在数量上差异有统计学意义（P〈0．01）。各组染毒后GFAP均有大量表达，随染毒时间延长表达数量呈上升趋势。结论CD4^＋T淋巴细胞可能参与了CO中毒致DNS的免疫病理过程，GFAP阳性细胞对CO中毒引发的DNS可能具有保护作用。     

老年胆总管结石患者开腹术后降钙素原T淋巴细胞亚群的变化及临床意义

 目的 探讨开腹手术对老年总管结石患者术后T淋巴细胞亚群的影响及降钙素原的变化。方法 将老年组与中青年组患者按胆总管结石分类分别行胆管切开取石、T管引流术或胆管空肠吻合术。于术前1 d和术后1、3、7 d分别测定外周血血常规、降钙素原、T淋巴细胞及其亚群的数量等指标,进行分析。结果 老年组降钙素原比中青年组各组均明显增加(P＜0.05),老年组组内第1、3 、7 天比术前均明显增加(P＜0.05),中青年组组内第1 、3 天比术前均明显增加(P＜0.05);老年组比中青年组CD3⁺细胞各组间明显减少(P＜0.05),老年组组内第3天比术前明显减少(P＜0.05);老年组比中青年组CD8+细胞组间术前及术后第7 天明显减少(P＜0.05);老年组与中青年组CD4⁺细胞组间术前、术后第1 、7 天明显减少(P＜0.05),老年组组内第3 天与术前明显减少(P＜0.05);中青年组组内术后第7天与术前明显减少(P＜0.05);老年组与中青年组CD4⁺/CD8⁺细胞各组间均明显减少(P＜0.05),老年组组内第3天与术前明显减少(P＜0.05)。结论 老年患者降钙素原比中青年增加,老年患者T淋巴细胞亚群数量减少,开腹手术对老年与中青年胆管结石患者免疫功能影响存在差异。     

tTSF基因的酵母表达及其基因治疗研究

目的 选择PF4，TSP1的高活性片段及肿瘤细胞靶向肽，设计合成融合基因—tTSF，进行酵母表达及小鼠基因治疗研究。方法 根据PF4和TSP1的抑制血管生成高活性片段设计合成TSF基因，并在N-端接上肿瘤细胞靶向肽，设计合成了tTSF。将tTSF基因构建到pPIC9质粒，重组质粒pPIC9／tTSF转化GSll5酵母菌株进行表达，并检测表达产物对血管内皮细胞生长的抑制作用。将tTSF基因克隆到pcDNA3．1（＋）载体，重组质粒pcDNA3．1（＋）／tTSF通过皮下注射治疗C57BL／6小鼠移植肿瘤Lewis肺癌。结果 重组质粒pPIC9／tTSF转化GSll5酵母菌株后，获得了tTSF的高效表达，表达产物对血管内皮细胞生长产生明显的抑制作用；皮下注射重组质粒pcDNA3．1（＋）／tTSF后，C57BL／6小鼠移植肿瘤Lewis肺癌的生长受到明显抑制。结论 tTSF基因设计成功，其酵母表达产物对血管内皮细胞生长产生具有明显的抑制作用，tTSF基因的体内基因治疗也具有显著的抗肿瘤效应。     

Suitability of T(1Gd) as the dGEMRIC index at 1.5T and 3.0T.

Delayed gadolinium-enhanced MRI of cartilage (dGEMRIC) is based on the theory that Gd-DTPA(2-) will distribute in inverse relation to cartilage glycosaminoglycan (GAG). T(1Gd) (T(1) after penetration of a 0.2 mmol/kg dose of Gd-DTPA(2-)) has been used as the dGEMRIC index, although (1/T(1Gd)-1/T(1o)) should be more representative of Gd-DTPA(2-) concentration (where T(1o) = T(1) before contrast). T(1o) and T(1Gd) were measured in 20 volunteers at both 1.5T and 3T and the correlation between the metrics of T(1Gd) and (1/T(1Gd)-1/T(1o)) was calculated. There was a high correlation coefficient between the two metrics at both field strengths, with R = 0.94, 0.93, and 0.90 for central medial femur, posterior medial femur, and medial tibia, respectively, at 1.5T and 0.87, 0.94, 0.96 at 3T. In all cases P < 0.0001. Therefore, these data suggest that, for native cartilage, the current practice of measuring T(1Gd) (but not also T(1o)) is adequate at both 1.5T and 3T.