VEGF反义寡核苷酸对裸鼠膀胱癌移植瘤的抑制作用研究

目的:观察以脂质体为载体介导血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸(Antisense oligonucteotides,ASODN)转染对裸鼠膀胱癌移植瘤的抑制作用.方法:建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型,以脂质体为载体介导VEGFASODN进行转染.观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化sP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数.结果:反义组与正义组的抑瘤率分别为71.08%和7.19%,反义组VEGF的表达、微血管密度、细胞增殖和凋亡指数与正义组及对照组相比均有明显差异,正义组与对照组之间各检测指标差异无显著性.结论:VEGF反义寡核苷酸能够抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的生长和微血管的生成,可能成为El后膀胱癌基因治疗的重要方向.     

VEGF反义核酸联合放射治疗对裸鼠移植瘤宫颈癌的作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸联合放射治疗对裸鼠移植瘤宫颈癌生长的抑制作用.方法 制备Balc/C裸鼠皮下宫颈癌模型20只,随机分为4组:VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、放射10Gy治疗组、VEGF反义寡核苷酸+放射10 Gy治疗组及对照组,每组5只.分别皮下注射ASODN,对照组注射生理盐水,每周2次,连续4周,放射剂量一次性给予.观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期,测量肿瘤直径并计算瘤体积.断颈处死裸鼠,天平称量肿瘤的重量.免疫组化法测肿瘤VEGF.结果 VEGF反义寡核苷酸和放射对肿瘤生长均有抑制作用,二者联合作用抑制更显著.放射使VEGF表达升高,ASODN使VEGF表达降低;肿瘤发生明显的凋亡形态学改变.结论 反义寡核苷酸可以下调VEGF的表达,对放射治疗宫颈癌移植瘤有增敏作用,为宫颈癌的综合治疗提供了实验依据.     

MMP-2反义寡核苷酸对膀胱癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)反义寡核苷酸对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用.方法 制备膀胱癌裸鼠移植瘤模型18只,随机分为3组:MMP-2反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、MMP-2正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组,每组6只.待瘤结节直径≥5mm后,分别在肿瘤细胞接种部位周围及中心皮下注射反义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物和生理盐水.每周2次,连续4周,断颈处死裸鼠,计算肿瘤体积,称量瘤重.常规切片,HE染色,观察组织学形态并进行病理学评估.结果 与对照组瘤重(7.49±0.53)g比较,ASODN组瘤重(4.18±0.53)g明显降低( P<0.01);ASODN组、正义寡核苷酸(SODN)组抑瘤率分别为44.19%、8.41%( P<0.01); ASODN组瘤体病理学特征改善.结论 MMP-2反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内移植瘤生长,通过反义寡核苷酸下调MMP-2的表达,有效逆转肿瘤的恶性表型,为膀胱癌的基因治疗提供了实验依据.     

Livin反义寡核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 利用Livin反义寡核苷酸在裸鼠体内抑制Livin基因表达,探讨Livin反义核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 设计靶向Livin基因的反义寡核苷酸,以Lipofectamine2000作为载体导入裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长情况.采用RT-PCR方法检测实验组和对照组Livin基因表达,TUNEL法检测凋亡指数.结果 ASODN组裸鼠皮下移植瘤后14 d,肿瘤体积明显变小.Livin rnRNA表达明显降低.结论 Livin反义寡核苷酸可以明显抑制肝癌裸鼠移植瘤的增殖.     

VEGF反义寡核苷酸抑制裸鼠骨肉瘤生长的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对裸鼠骨肉瘤生长的抑制作用。方法制备BALC/C裸鼠皮下骨肉瘤模型18只,随机分为3组:VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组,每组6只。接种MG-63人成骨肉瘤细胞后24 h内,分别皮下注射ASODN及SODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,每周2次,连续4周;观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期。断颈处死裸鼠,游标卡尺测量肿瘤体积大小,天平称量肿瘤的重量。结果与对照组瘤重(7.45±0.60 g)比较,VEGF ASODN组(4.13±0.80 g)能明显抑制裸鼠肿瘤生长(P<0.01),VEGF SODN组(6.92±0.69 g)则无明显抑制作用(P>0.05)。VEGF ASODN组、VEGFSODN组抑瘤率分别为44.56%、7.11%。结论VEGF反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内骨肉瘤生长,通过反义寡核苷酸下调VEGF的表达,可达到治疗骨肉瘤的目的,为骨肉瘤的基因治疗提供了实验依据。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠人肺癌细胞皮下移植瘤的抑制作用

目的 探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(HPSE ASODN)对人肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE ASODN,以阳离子脂质体Lipofectamine包埋后转染人肺癌A549细胞进行培养.实验分ASODN组、脂质体组和对照组,采用Western-blotting检测各组A549细胞HPSE蛋白的表达;将反义寡核苷酸(ASODN)转染成功的人肺癌A549细胞注射于裸鼠皮下复制移植瘤模型(ASODN组),绘制移植瘤生长曲线,以免疫组织化学方法检测移植瘤肿瘤微血管密度(MVD),比较3组间肿瘤体积和MVD的差异.结果 与对照组和脂质体组比较,ASODN组A549细胞HPSE蛋白的表达受到明显抑制,差异有统计学意义(P ＜0.01);ASODN组裸鼠成瘤时间晚,移植瘤体积明显小于脂质体组和对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).ASODN组、脂质体组和对照组移植瘤的MVD计数分别为(13.5±1.8)、(24.3±2.5)和(24.7±2.6),与脂质体组、对照组比较,ASODN组MVD计数明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HPSE ASODN明显抑制棵鼠人肺癌移植瘤的生长和血管生成,有希望成为一种有效的肺癌基因治疗方法.     

HIF-1α反义寡核苷酸治疗人胃癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用.方法 用人胃癌细胞株SCG-7901建立胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为反义寡核苷酸(ASOND)组、正义寡核苷酸(SOND)组和对照组,瘤体内分别注射阳离子脂质体包裹的HIF-1α ASOND、HIF-1α SOND和空白阳离子脂质体.观察各组动物的肿瘤生长曲线,测瘤重计算抑瘤率,光学显微镜下观察肿瘤细胞形态学变化,免疫组化方法 检测各组肿瘤组织HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达.结果 ASOND组裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制,ASOND组瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);ASOND组、SOND组抑瘤率分别为47.94%、16.88%,差异有统计学意义(P＜0.01);ASOND组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF和MVD的表达低于SOND组和对照组(P＜0.01).结论 肿瘤原位注射HIF-1α反义寡核苷酸治疗胃癌裸鼠皮下移植瘤能降低HIF-1α的表达,继而减少VEGF的生成和新生血管的形成,抑制肿瘤的生长.     

Effects of Survivin antisense oligonucleotide on molecular mechanism of inducing human gastric transplantable tumor apoptosis

目的 研究survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胃癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其诱导人胃癌移植瘤凋亡的分子生物学机制.方法 建立SGC-7901胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,即survivin-ASODN+脂质体组、survivin-ASODN组、脂质体组和空白对照组(蒸馏水).瘤体内隔日给药,停药后48小时处死裸鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率.western-blot法检测各组凋亡相关蛋白survivin、Caspase-3蛋白的表达.结果 survivin- ASODN+脂质体组的移植瘤生长速度明显减慢,其抑瘤率为:33.19％.survivin-ASODN+脂质体组的survivin蛋白表达量明显低于对照组(P＜0.05),Caspase-3蛋白表达高于对照组(P＜0.05).结论 survivin反义寡核苷酸转染胃癌移植瘤能够明显抑制肿瘤生长,其主要机制与降低survivin蛋白的表达,诱导Caspase-3高表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关.     

反义血管内皮生长因子(VEGF)转染体内抑制胆囊癌VEGF及其受体表达的研究

目的:探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞裸鼠移植瘤的生长及VEGF、Flt-1和KDR表达的影响。方法:通过裸鼠皮下接种体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞建立人胆囊癌裸鼠移植瘤模型,并将裸鼠分为对照组(A组)、VEGF SODN Oligifectamine组(B组)和VEGF ASODN Oligifectamine组(C组),各组裸鼠在接种后24h内,在接种部位皮下分别缓慢注射200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGF SODN100μg Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl)及VEGF ASODN100μg Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl),每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,并运用免疫组化技术检测胆囊癌裸鼠移植瘤中VEGF、Flt-1和KDR的表达变化。结果:A、B、C组裸鼠2周时的成瘤率分别为87.5%、87.5%和37.5%,C组显著低于A、B组(P<0.05),5周时各组的成瘤率均为100%。各组裸鼠移植瘤5周时的体积和瘤重分别为:A组(253.49±27.11)mm3和(1.96±0.17)g,B组(255.84±26.51)mm3和(1.86±0.21)g,C组(125.45±17.49)mm3和(0.97±0.13)g,C组显著低于A、B组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达均无统计学差异(P>0.05),而C组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达较A、B组明显减弱(P<0.05)。结论:VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF、Flt-1和KDR在蛋白水平的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长及血管的形成。     

VEGF反义寡核苷酸与顺铂联合治疗抑制裸鼠骨肉瘤的生长

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸和顺铂单用或联用对裸鼠骨肉瘤生长的抑制作用。方法制备BALC／C裸鼠皮下骨肉瘤模型24只,随机分为4组：VEGF反义寡核苷酸治疗（ASODN）组、顺铂治疗（DDP）组、联合治疗（ASODN＋DDP）、组和对照组,每组6只。接种MG-63人成骨肉瘤细胞后24h内采用瘤内注射和腹腔给药的方式,以VEGF反义寡核苷酸或（和）顺铂进行治疗;观察各组稞鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期。断颈处死裸鼠,测量肿瘤体积大小,称量肿瘤的重量。结果VEGF—ASODN治疗组、DDP治疗组和联合治疗组裸鼠骨肉瘤的生长均受到不同程度抑制,抑瘤率分别为44．56％、53．69％和86．80％,以联合治疗组的疗效最佳。结论VEGF反义寡核苷酸与顺铂联用比单用顺铂可更好地抑制骨肉瘤的生长,两者联用可发挥协同抗瘤效应。