三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF—1α蛋白表达的影响

目的观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制。方法采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变。结果三叶青提取物能在CoCl2（150μM）模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平。结论三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用。     

人参皂苷Rg3对低氧条件诱导的Hep-2细胞作用机制的初步研究

目的:研究人参皂苷Rg3对低氧条件下人喉鳞癌细胞Hep-2中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:通过体外低氧培养Hep-2人喉鳞癌细胞株,同时设立阴性对照组和阳性对照组(顺铂).人参皂苷Rg3作用24 h后,应用免疫细胞化学技术和流式细胞技术检测Hep-2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的变化;应用RT-PCR技术检测HIF-1α和VEGF mRNA表达的变化.结果:在低氧条件下,Rg3组和顺铂对照组的Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白表达低于阴性对照组(P<0.05);Rg3组的HIF-1α和VEGF mRNA水平明显低于阴性对照组(P<0.05),顺铂组的HIF-1α和VEGFmRNA水平无明显变化.结论:低氧条件下,人参皂苷Rg3抑制Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白和mRNA的表达,这可能是Rg3抗肿瘤作用的机制之一.     

雷帕霉素下调HIF-1α、VEGF基因表达抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的体外研究

目的 研究雷帕霉素对人胃癌SGC-7901细胞生长影响及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路下游作用靶点缺血诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的影响.方法 采用MTT法检查不同浓度(5、10、20、40、80、160) ng/ml雷帕霉素作用72 h对SGC-7901细胞增殖的影响;采用Western blot法检测雷帕霉素处理前、后SGC-7901细胞对HIF-1α、VEGF蛋白的影响.结果 雷帕霉素作用于SGC-7901细胞后,SGC-7901细胞增殖明显呈剂量依赖性抑制;雷帕霉素10、20、40 ng/ml作用于SGC7901细胞72 h后,HIF-1α和VEGF蛋白表达量均明显呈剂量依赖性下调(P＜0.05).结论 体外应用雷帕霉素可显著抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,这可能与抑制mTOR信号通路下游作用靶点HIF-1α和VEGF蛋白有关.     

胰腺癌细胞在低氧状态中HIF-1、VEGF蛋白的表达及可溶性VEGF水平变化的生物学意义

目的研究胰腺癌细胞在缺氧条件下HIF-1α、VEGF蛋白的表达以及可溶性VEGF的表达水平。方法利用CoCl2造成化学性缺氧,采用S-P免疫组织化学法,检测胰腺癌细胞株Patu8988、Sw1990在缺氧条件下,HIF-1α、VEGF蛋白的表达情况;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测实验组及对照组可溶性VEGF的水平。结果实验组中可溶VEGF的水平与与缺氧时间成正相关,随缺氧时间的延长,可溶VEGF水平明显升高;缺氧9h,HIF-1α、VEGF蛋白表达明显增强。结论在缺氧条件下,HIF-1α蛋白表达与VEGF蛋白表达及可溶性VEGF分泌的升高有密切关系;HIF-1α蛋白的表达可能是肿瘤细胞适应缺氧环境、促进肿瘤性血管形成的重要因子。     

通心络对Aβ_(1-42)损伤人脑微血管内皮细胞HIF-1α、VEGF表达的干预作用

目的通心络对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的人脑微血管内皮细胞中VEGF的分泌及VEGF和HIF-1α蛋白表达的干预作用。方法采用人脑微血管内皮细胞,给予不同剂量的通心络预处理,并用20μmol·L-1的Aβ1-42干预24h诱导细胞损伤,经处理后检测细胞形态的变化、VEGF分泌及VEGF和HIF-1α蛋白的表达。结果Aβ1-42可诱导人脑微血管内皮细胞损伤,VEGF分泌减少及VEGF蛋白表达降低,HIF-1α蛋白表达增强,通心络可升高Aβ1-42诱导的VEGF分泌、增强其蛋白的表达,增强HIF-1α蛋白表达,保护内皮细胞。结论通心络可通过HIF-1α途径增强VEGF蛋白的表达,增加上清液中VEGF蛋白的分泌,从而对Aβ1-42损伤的脑微血管内皮细胞起到保护作用。     

c-Myc通过缺氧诱导因子-1α调控结肠癌细胞HT-29的增殖

目的研究癌基因c-Myc对人结肠癌细胞HT-29中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响及其对肿瘤细胞增殖的作用。方法构建高表达c-Myc的质粒pcDNA3.1-c-Myc;将构建好的pcDNA3.1-c-Myc质粒转染入HT-29细胞中,通过Western blot印迹法检测c-Myc在HT-29细胞中的表达情况。应用Real-time PCR和Western blot印迹法检测常氧和乏氧状态下HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA和蛋白水平,同时检测HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA入HT-29细胞中。应用噻唑蓝(MTT)法检测HT-29细胞的增殖情况。结果成功构建pcDNA3.1-c-Myc质粒;常氧、乏氧状态下转染pcDNA3.1-c-Myc质粒后,HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA水平无变化,VEGF和eNOS的mRNA水平明显升高,HIF-1α蛋白水平明显增高。高表达c-Myc的HT-29细胞增殖能力明显增强。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA后,HT-29细胞的增殖能力明显降低。结论在HT-29细胞系中c-Myc通过HIF-1α调控HT-29细胞的增殖。     

雷帕霉素抑制mTOR活性诱导细胞的生长和下调EBV+人鼻咽癌细胞HIF-1α介导的VEGF表达

目的 观察雷帕霉素(Rap)体外对人鼻咽癌HNE-1EBV+和CNE-1EEBV-细胞乏氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及生长抑制作用.方法 采用MTT法检测Rap作用72 h IC50;用RT-PCR和ELISA分别测定Rap作用24 h后,细胞HIF-1α mRNA和培养上清液中VEGF的表达水平.结果 Rap呈剂量依赖性地抑制HNE-1EBV+和CNE-1EBV-细胞的生长,IC50分别为43.9、41.7 μmol·L-1;Rap使HNE-1EBV+细胞HIF-1α mRNA和VEGF表达水平分别下调了24％、55％,但对CNE-1EBV-细胞无明显影响.结论 Rap对两株鼻咽癌细胞具有相当的生长抑制作用,可显著下调HNE-1EBV+细胞HIF-1α介导的VEGF表达,提示Rap对于改善EBV+鼻咽癌的治疗预后具有潜在的作用.     

EGCG对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及对缺氧反应的影响

目的探讨表没食子儿荼素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响以及对肿瘤细胞出现缺氧反应的相关作用机制及其作用。方法用不同浓度的EGCG处理SMMC-7721细胞,用倒置显微镜进行细胞形态观察并拍照记录;将0,20,50,100,200,400μg/mL的EGCG分别作用于体外培养的对数生长期的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;缺氧和EGCG双因素共同处理SMMC-7721细胞,Western-blot法检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(即VEGF)蛋白表达方式;并建立相应的裸鼠肝癌移植瘤模型,通过对其行EGCG试验性治疗后,对移植瘤的生长情况进行观察,Western-blot方法检测组织中HIF-1α和VEGF的蛋白表达。结果 SMMC-7721细胞随着EGCG处理浓度的增高,细胞的贴壁能力减弱,贴壁细胞数量减少,细胞体积缩小,核的颜色加深;MTT结果显示EGCG呈时间、剂量依赖性抑制SMMC-7721细胞生长(P<0.05);SMMC-7721细胞在不同浓度EGCG作用下,缺氧培养12h,HIF-1α和VEGF的蛋白表达呈剂量依赖性降低;在200μg/mLEGCG作用下,SMMC-7721细胞随缺氧时间的延长,HIF-1α和VEGF的蛋白表达呈时间依赖性下降;荷瘤裸鼠在行EGCG腹腔内注射试验性治疗后,其结果显示,高剂量EGCG组裸鼠的肿瘤重量和体积与低剂量组以及对照组存在明显差异,具有统计学意义(P<0.01),低剂量组裸鼠的肿瘤重量和体积与对照组存在明显差异,具有统计学意义(P<0.05);在本研究中,裸鼠移植瘤的标本Western-blot检测结果显示,EGCG可呈剂量依赖性抑制HIF-1α和VEGF的蛋白表达。结论 EGCG能在体内外抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖;EGCG能抑制肿瘤缺氧反应及血管生长的作用;其机制可能为降低HIF-1α和VEGF的表达,从而抑制肝癌细胞、肝癌组织的生长及血管生成。     

靶向HIF—1α小干扰RNA对裸鼠MiaPaCa2细胞移植瘤生长的影响

目的:初步探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导的靶向缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)小干扰RNA对裸鼠Mia-PaCa2人胰腺癌细胞移植瘤生长的影响.方法:首先构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF.将rAAV-hrGFP、rAAV-siHIF分别转染对数生长的MiaPaCa2细胞,在乏氧条件下进行培养,应用Real-Time PCR、Western Blot和ELISA法观察其对MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA、蛋白和VEGF表达的影响.将MiaPaCa2细胞接种于裸鼠皮下,形成荷瘤小鼠后随机分别肌注ddH2O(空白对照组)、rAAV-hrGFP(空载病毒组)和rAAV-siHIF(干扰病毒组),30 d后处死荷瘤裸鼠,取出移植瘤并测量肿瘤的大小及肿瘤的质量,应用免疫组化染色观察各组肿瘤标本HIF-1α、VEGF、CD34的表达并计数微血管密度(MVD).结果:体外实验发现,干扰病毒组MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达以及VEGF的分泌低于空白对照组(均P<0.01).体内实验发现,干扰病毒组裸鼠移植瘤的生长和HIF-1α、VEGF及CD34的表达也低于空白对照组(P<0.01或P<0.05).而空载病毒组与空白对照组相比,体内外实验结果差别均无统计学意义(均P>0.05).结论:rAAV介导的靶向HIF-1α小干扰RNA有抑制裸鼠MiaPaCa2细胞移植瘤生长的作用,其机制可能是通过抑制移植瘤的血管生成而实现的.     

HIF-1αVEGF Survivin蛋白在子宫内膜癌中的表达

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及凋亡抑制因子(Survivin)在子宫内膜癌中的表达及其意义,并探讨与SurvivinHIF-1α及VEGF表达之间的关系.方法 应用免疫组织化学SP方法检测HIF-1α、VEGF、Survivin在40例子宫内膜癌、22例子宫内膜复杂性增生及18例子宫内膜单纯性增生组织中的表达情况.结果 HIF-1α、VEGF、Survivin在子宫内膜单纯性增生、子宫内膜复杂性增生及子宫内膜癌组织中阳性表达率依次增高,三组比较具有统计学意义(P＜0.05).子宫内膜癌组织中HIF-1α与VEGF蛋白表达呈显著正相关(r=0.469,P＜0.01);Survivin与VEGF蛋白的表达呈显著的正相关(r=0.452,P＜0.01);HIF-1α与Survivin的表达无显著相关性(r=0.209,P＞0.05).结论 子宫内膜癌组织中HIF-1α、VEGF、Survivin蛋白参与了子宫内膜癌的发生发展.子宫内膜癌组织的HIF-1α、Survivin蛋白表达与VEGF呈正相关,Survivin蛋白与HIF-1α的表达无相关性,提示HIF-1α与Survivin可能通过上调VEGF蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的凋亡和促进肿瘤的血管生成而促进子宫内膜癌的发生及发展.     

链霉素及H7对机械牵张离体心肌HIF-1α、VEGF的影响及机制探讨

目的研究链霉素及H7对机械牵张大鼠心肌组织低氧诱导分子-1α和血管内皮细胞生长因子表达的影响,并探讨二者在其中的作用机制。方法采用大鼠离体灌流心脏模型,膨胀左心室30min,RT-PCR法检测左室心肌细胞HIF-1α、VEGF mRNA的表达,免疫组化观察二者在心肌细胞中定位,Western blot检测HIF-1α蛋白的表达,利用链霉素作为牵张敏感离子通道(SACs)阻断剂研究SACs和PKC抑制剂H7在其中的可能作用。结果与不牵张组HIF-1α和VEGF mRNA无表达的比较,牵张可以明显增加HIF-1α和VEGF mRNA的表达(P<0·05或P<0·01);而链霉素、H7可以明显减少HIF-1α和VEGF mRNA的表达(P<0·05);但是二者不能完全抑制急性牵张刺激激活的HIF-1α和VEGF mRNA水平升高(P<0·05),HIF-1α和VEGF在胞质和胞核中均有表达,并检测到HIF-1α蛋白表达。结论链霉素、H7对膨胀左室致HIF-1α、VEGF表达有明显抑制作用,提示心室膨胀经SACs-PKC-激活胞内信号诱导HIF-1α、VEGF表达。同时链霉素并不能完全抑制HIF-1α、VEGF表达,提示膨胀心室致HIF-1α、VEGF表达进而引起心室肥厚尚有其他传导途径,仍需进一步研究。     

新藤黄酸干预肺腺癌血管生成的细胞学研究

目的 通过对人脐静脉内皮细胞HUVEC和人肺腺癌A549的培养,检测含新藤黄酸(GNA)条件培养基对血管内皮细胞存活率、成管和生长的影响.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)法和平板克隆实验法研究GNA对HUVEC存活率和克隆形成率的影响;应用薄层胶原建立血管内皮细胞的二维培养模型,观察GN A对于血管内皮细胞成管现象的影响;采用细胞划痕愈合和小室迁移实验考察GNA对HUVEC的迁移能力影响;Westernblot检测血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,HUVEC细胞存活率和克隆形成率随GNA剂量增加而降低.GNA可抑制HUVEC细胞的迁移.还可抑制HUVEC管腔样结构形成.此外,GNA可下调HUVEC中VEGF和HIF-1α蛋白的表达.结论GNA可在体外抑制血管生成,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞分泌的HIF-1α和VEGF有关.