儿茶素对脑胶质瘤细胞U251增殖的抑制作用及机制初探

目的:通过体外实验初步研究儿茶素对脑胶质瘤细胞U251增殖的抑制作用及其诱导凋亡的机制.方法:选取8个不同梯度浓度的儿茶素进行甲基噻唑蓝(MTT)实验,观察儿茶素的半致死浓度;倒置显微镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法及Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡,用流式细胞术检测儿茶素对细胞周期的影响.结果:儿茶素对U251细胞的半抑制浓度为62.25 μg/mL,儿茶素作用后U251细胞出现凋亡小体,阻滞于S期,Hoechst33342检测表明细胞凋亡明显.结论:儿茶素明显抑制U251细胞增殖,阻滞细胞周期于S期.儿茶素具有开发为治疗脑胶质瘤药物的可能性.     

泛素蛋白酶体通路以及蛋白酶抑制剂对NF-κB信号通路作用的研究进展

1 蛋白酶体及泛素-蛋白酶体通路(UPP) 蛋白酶体是指有蛋白降解作用的酶复合体,存在于所有真核细胞中,占细胞蛋白总量的近1%.大多数的蛋白酶体自由分布于胞核和细胞质中,而部分是与不同细胞成分固定结合,在个别被成为PML小体的亚核中浓缩存在.在细胞质中蛋白酶体亚群是与内质网(ER)表面、细胞骨架、中心体相伴随.     

青蒿素对体外培养人U251细胞凋亡和增殖的作用

目的:探讨青蒿素对体外培养的人U251胶质瘤细胞株是否具有诱导凋亡的作用。方法:(1)体外培养的U251细胞培养液中按10μg/mL终浓度加入青蒿素培养3d后进行实验;(2)倒置显微镜下观察U251细胞形态;(3)用台盼蓝拒染色法进行U251细胞的活细胞计数;(4)用MTT比色法检测青蒿素对U251细胞的抑制率;(5)透射电镜下观察U251细胞的形态。结果:(1)光镜下U251细胞部分出现碎裂崩解;(2)台盼蓝法U251细胞的活细胞计数青蒿素组少于对照组(7.6±1.273vs16.7±1.593,P<0.05);(3)MTT比色法检测青蒿素对U251细胞的抑制率为(50.0±3.2)%;(4)透射电镜下U251细胞的亚细胞结构发生凋亡变化。结论:青蒿素对体外培养的人U251胶质瘤细胞株具有诱导凋亡和抑制增殖的作用。     

泛素蛋白酶体通路以及蛋白酶抑制剂对NF—κB信号通路作用的研究进展

1蛋白酶体及泛素-蛋白酶体通路（UPP） 蛋白酶体是指有蛋白降解作用的酶复合体,存在于所有真核细胞中,占细胞蛋白总量的近1％。大多数的蛋白酶体自由分布于胞核和细胞质中,而部分是与不同细胞成分固定结合,在个别被成为PML小体的亚核中浓缩存在。在细胞质中蛋白酶体亚群是与内质网（ER）表面、细胞骨架、中心体相伴随。     

塞来昔布对神经胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响

目的探讨非甾体类抗炎药(NSAIDs)对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法选用神经胶质瘤细胞U251,分别加入0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的塞来昔布进行处理。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测U251细胞增殖水平及抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随塞来昔布浓度的增加,神经胶质瘤细胞U251增殖水平明显降低,增值抑制率升高。不同浓度和不同作用时间,塞来昔布对U251细胞增殖抑制率有显著性差异(P<0.05);流式细胞术细胞凋亡率检测显示,80μmol/L塞来昔布处理48 h的U251细胞凋亡率(17.86%)较0μmol/L(11.23%)增高(P<0.05)。结论塞来昔布可抑制人胶质瘤细胞U251的生长和增殖,促进U251的凋亡发生,以80μmol/L为佳。     

芹菜素对胶质瘤细胞增殖抑制作用的研究

目的 探讨芹菜素对人胶质瘤细胞U251的增殖抑制作用.方法 用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,检测不同浓度(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)的芹菜素作用不同时间(24h、48h、72h),对人胶质瘤细胞株U251生长的影响.结果 低剂量的芹菜素(20μmol/L)无明显抑制胶质瘤U251细胞增殖的作用,而中剂量(40μmol/L)及高剂量的芹菜素(80μmol/L)能抑制胶质瘤U251细胞增殖,且抑制作用呈剂量和时间依赖性.结论 芹菜素有抑制人胶质瘤细胞U251增殖的作用.     

MiR-195对人脑胶质瘤细胞 U251和 SHG-44增殖的抑制作用

目的探讨 miR-195过表达对体外培养的人脑胶质瘤细胞U251和 SHG-44增殖的影响。方法通过脂质体将miR-195 mimics转染至U251和SHG-44细胞,同时设立空白对照组和阴性对照组,实时荧光定量PCR检测转染前后miR-195的表达水平;用CCK-8法评价细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期。结果胶质瘤细胞转染miR-195 mimics后,发现U251细胞和SHG-44细胞中miR-195的表达分别为5.93＆#177;0.43和6.43＆#177;0.48,较空白对照组和阴性对照组均增高约6倍左右。与空白对照组和阴性对照组相比,转染miR-195 mimics后的胶质瘤细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞减少。结论过表达miR-195可以阻滞胶质瘤细胞周期进展,从而抑制其增殖,为胶质瘤的基因治疗提供新的策略。     

CM通路AEA对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的观察在神经酰胺(CM)通路中,大麻受体激动剂花生四烯酸乙醇胺(AEA)抑制人胶质瘤U251细胞增殖及在诱导细胞凋亡中的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法,分别测定不同浓度的CM(5~20μmol/L)和烟曲霉毒素(FB1)(10μmol/L)预处理24h后对AEA(1~10μmol/L)抑制人胶质瘤U251细胞增殖作用的影响;流式细胞仪Annexin-V/PI双染色法定量分析FB1(10μmol/L)预处理24h后对AEA(10μmol/L)促细胞早期凋亡作用的影响。结果不同浓度的AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用不同,且与CM具有协同作用;10μmol/L FB1预处理24h后可显著对抗AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;AEA(10μmol/L)可诱导人胶质瘤U251细胞发生早期凋亡,而FB1(10μmol/L)预处理24h后凋亡发生率明显下降。结论 AEA可通过CM从头合成通路,与CM呈浓度依赖性协同,从而抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导其早期凋亡。     

顺铂联合血管内皮抑制素对体外培养的U251人胶质瘤细胞生长的影响

目的以体外培养的U251人胶质瘤细胞作为模型,观察顺铂联合血管内皮抑制素对肿瘤细胞生长的影响。方法采用不同浓度的顺铂和血管内皮抑制素及顺铂与血管内皮抑制素的组合作用于体外培养的U251人胶质瘤细胞,以MTT比色法检测其对肿瘤细胞生长的影响。结果不同浓度的顺铂与血管内皮抑制素联合应用对体外培养的U251人胶质瘤细胞生长具有非常明显的协同抑制作用,强于单独使用顺铂或血管内皮抑制素组。结论顺铂联合血管内皮抑制素对体外培养的U251人胶质瘤细胞具有协同杀伤作用。     

泛素-蛋白酶体途径与疾病

泛素-蛋白酶体途径（ubiquitin—proteasome pathway，UPP）是一种高效的蛋白分解途径。其生物学作用非常广泛，该途径的异常与诸多疾病如遗传性疾病、炎症、自身免疫性疾病及肿瘤等有密切关系。泛素-蛋白酶体自被发现以来。受到了极大的关注和重视。在2004年，以色列科学家阿龙．切哈诺沃、阿夫拉姆．赫尔什科和美国科学家欧文．罗斯因发现了泛素对蛋白质降解的调节。获得了诺贝尔化学奖。近期已注意到UPP在癌肿治疗中的作用，并已开展了以泛素-蛋白酶体为靶的治疗试验。目前对UPP的研究已经取得了很大的进展。本文就UPP与疾病和治疗的关系进行综述。     

营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响

目的探讨营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响。方法复苏培养人脑胶质瘤U251细胞,建立转染小干扰RNA(siRNA)的NAF1组(si-NAF1组)、阴性对照组(si-NC组)、未转染siRNA对照组(control组),采用CCK-8实验检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与control组比较,NAF1-siRNA干预U251细胞后,si-NAF1组NAF1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),其增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞增殖能力下降,克隆形成能力明显减弱,迁移能力明显降低,穿过Transwell膜的细胞数量明显减少(P均<0.05)。si-NC组与control组各项结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染siRNA后NAF1表达下降,进而下调PCNA水平,抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力;同时MMP-9蛋白表达水平下降,抑制U251细胞的迁移和侵袭能力。     

泛素蛋白酶体抑制剂的分子机制

<正>生物体细胞在精细的调节之下进行蛋白质合成,这有助于维持机体细胞的正常增殖、分化和代谢运转,以及选择性地降解多余无用的蛋白质。泛素化蛋白质降解系统,是机体内蛋白质降解的另一主要方式。该系统步骤多、过程复杂,主要包括底物蛋白质的多泛素化修饰和26S蛋白水解酶复合物对底物蛋白质的降解。由机体细胞自然识别程序识别出需要降解的蛋白质,泛素蛋白分子通过共轭双键与底物蛋白质连接形成标签蛋白(即泛素降解底物蛋白质),再被26S蛋白水解酶复合物     

蛋白酶体抑制剂MG132对姜黄素诱导K562和Raji细胞HDAC1、P300表达的研究

近年来的研究显示泛素-蛋白酶体通路在细胞组蛋白乙酰化、去乙酰化的调控中发挥了重要的作用.有研究报道姜黄素可抑制肿瘤细胞增殖,影响细胞周期,姜黄素可通过调节组蛋白乙酰化、去乙酰化而发挥其作用.我们通过探讨姜黄素和蛋白酶抑制剂MG132联含姜黄素作用K562细胞、Raji细胞对组蛋白乙酰化酶（HDAC1）、P300蛋白的影响进一步明确了姜黄素发挥作用是否是通过泛素-蛋白酶体通路.     

蛋白酶体抑制剂对白血病作用的研究进展

蛋白酶体负责细胞内蛋白的降解,其活性的异常改变是肿瘤发生的标志。研究证实,蛋白酶体抑制剂对许多恶性肿瘤有抗癌活性,第一个获准临床试验和上市的蛋白酶体抑制剂硼替佐米治疗多发性骨髓瘤患者获得了较高的总体有效率和完全缓解率。国外学者也开展了一系列蛋白酶体抑制剂对白血病细胞治疗作用的研究,本文就蛋白酶体抑制剂对浆细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、成人T细胞淋巴瘤/白血病、慢性髓系白血病、急性髓系白血病作用的研究进展作一综述。     

靶向wnt-1基因的RNA干涉质粒构建及抑制U251细胞增殖的实验研究

目的构建靶向wnt-1基因的RNA干涉表达载体,转染人胶质瘤细胞U251中,研究该质粒的抑瘤效果。方法根据siRNA设计原则,通过软件设计,选取含有21个核苷酸(21nt)靶序列,形成siRNA的DNA模板并克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,获得靶向抑制wnt-1基因表达的siRNA表达载体,并经酶切测序鉴定。用该干涉质粒转染U251细胞,通过逆转录PCR、Western blotting方法检测wnt-1基因mRNA和蛋白表达水平,用MTT法、流式细胞术初步评价对U251细胞的增生、细胞周期影响。结果成功构建针对靶向wnt-1基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA-wnt-1 RNA干涉质粒,可显著抑制U251细胞wnt-1基因的mRNA和蛋白表达。MTT法分析转染细胞增生明显抑制,流式细胞仪分析细胞周期证实转染后比空白对照组受到阻滞。结论靶向wnt-1基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA-wnt-1 RNA干涉质粒构建成功,并可特异性的沉默wnt-1基因蛋白表达,使细胞增长减慢,细胞周期阻滞,本实验通过wnt-1的RNA干涉,为由wnt-1介导的wnt信号通路在胶质瘤发病机制中的抑瘤作用提供了依据,并为进一步该基因的基因治疗临床实验提供了可靠基础。     

芹菜素对宫颈癌U14细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:探讨芹菜素对宫颈癌U14细胞增殖的抑制作用.方法:在昆明鼠腹腔孵育宫颈癌U14瘤株后,无菌抽取腹水,制成细胞悬液接种于培养瓶中,取对数生长期细胞用于实验.实验当日配制芹菜素液,浓度分别为0、20、40、80 μmol/L,以MTT法检测不同浓度芹菜素分别在24、48、72 h对宫颈癌U14细胞增殖活性的影响.结果:芹菜素(20 ～ 80 μmol/L)能够抑制小鼠宫颈癌U14细胞增殖,并表现为时间、浓度的依赖性.结论:芹菜素在一定浓度下可抑制体外U14细胞增殖并有时间依赖性.     

MicroRNA-664对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究microRNA-664(miR-664)对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-664模拟剂(miR-664 mimics)、miR-664抑制剂(miR-664 inhibitor)转染至人脑胶质瘤细胞U251中,并设置相应对照组(miR-NC、anti-NC);采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-664的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验及Tanswell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9的表达。结果与miR-NC相比,转染miR-664 mimics后明显上调U251细胞中miR-664的表达,并促进U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著上调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05);与anti-NC相比,转染miR-664 inhibitor后明显下调U251细胞中miR-664的表达,并抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著下调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05)。结论 miR-664可能通过上调Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达,促进人脑胶质瘤细胞U251细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为潜在的肿瘤标志物。     

p27^kipl及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27^kipl为CIP／KIP家族的主要成员，对细胞周期起负调节作用。由于p27^kipl的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase—associated protein 2，Skp2）介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节，因此p27^kipl降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要。Skp2为人类F-box蛋白家族成员，介导p27^kipl的多聚泛素化及随后的蛋白水解。研究发现Skp2在人类多种肿瘤中都有表达，并且与肿瘤组织的分化程度及预后相关。我们旨在对Skp2参与介导的p27^kipl的泛素-蛋白酶体途径降解与p27^kipl的稳定性之间的关系进行探讨，运用目前比较公认的血清饥饿合并释放方法同步化处理U937细胞，结合Western blot、免疫荧光双标记及激光共聚焦技术检测在不同生长状态下p27^kipl、Skp2及其他细胞周期相关分子在U937细胞内的表达和定位情况。     

蛋白酶体抑制剂靶向治疗套细胞淋巴瘤的前景

套细胞淋巴瘤(MCL)是一种具有独特病理学特征和高度异质性的B细胞型非霍奇金淋巴瘤(B-NHL),较其他NHL更具侵袭性,虽然MCL患者对一线治疗有效,但是大多数患者易复发,预后差,是生存期最短的淋巴瘤亚型之一,且目前没有标准的治疗方案.故人们一直在需要寻找新的安全有效的治疗方法.硼替佐米作为全世界第一个靶向型抑制肿瘤...     

Src介导NEDD4-1在调控胶质瘤U251细胞侵袭性作用中的研究

胶质瘤是主要的颅内肿瘤之一,其预后不佳。探讨胶质瘤发生过程中增殖、侵袭的的分子病因学机制,以寻找相应的治疗靶点是临床和科研工作中的迫切需求[1]。黏着斑激酶（FAK）的激活,是肿瘤发生侵袭的重要机制,FAK通过增强整合素和生长因子介导的Ras-MAPK的通路活性,