转录因子NF-kB在非小细胞肺癌中的表达分析

目的 观察非小细胞肺癌组织与癌旁组织中NF-kB的基因转录和蛋白表达水平,探讨NF-KB在非小细胞肺癌发生发展中的可能作用,为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供参考.方法 反转录PCR和免疫印迹的方法分别检测60例临床确诊的非小细胞肺癌组织与癌旁组织中NF-kB基因p50和p65表达和NF-kB蛋白的水平,并与肺良性病变组织比较.结果 非小细胞肺癌组织的NF-kB/p50和NF-kB/p65 mRNA水平明显高于癌旁组织和肺良性病变组织(P<0.01),与性别、年龄、转移与否等其他临床病理相关因素无明显相关(r=0.56,0.72,0.69,P>0.05).蛋白表达检测结果与mRNA水平高度一致.结论 非小细胞肺癌组织中NF-kB基因和蛋白表达水平明显升高,可能促进了肿瘤的发生发展,可以考虑作为非小细胞肺癌临床分期和评价临床预后的参考指标.     

DDH与VEGF在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究二氢二醇脱氢酶（DDH）与血管内皮生长因子（VEGF）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况，探讨两者与NSCLC的关系。方法运用免疫组化方法检测42例NSCLC手术标本中DDH与VEGF的表达。结果DDH与VEGF在NSCLC组织中的阳性表达率（83．3％、81．1％）较癌旁组织（34．4％、31．2％）与良性肿瘤（12．5％、18．7％）明显增强（P〈0.05）；且与淋巴结转移和临床分期有关（P〈0．05）。结论DDH与VEGF高表达可能与NSCLC发生发展有关。     

miRNAlet7、Ras在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨miRNAlet7（1et7）、Ras在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义。方法利用原位杂交方法检测let7、免疫组化方法检测Ras在68例非小细胞肺癌（肺癌组）及20例癌旁正常肺组织（对照组）中的表达。结果let7在肺癌组中的阳性表达率（39．7％）低于对照组（75．0％）（P〈0．05）、Ras在肺癌组中的阳性表达率（66．2％）高于对照组（25．0％）（P〈0．01）;let7阳性率与患者年龄、性别及肿瘤组织类型、分化程度、分期无关（P〉0．05）,Ras阳性率与吸烟史、患者性别及肿瘤组织类型有关（P〈0．01）,与肿瘤分化程度、淋巴结转移及临床分期无关（P〉0．05）;let7与Ras在非小细胞肺癌组织中表达呈明显负相关（r=-0．627,P〈0．01）;let7阳性表达组2年生存率明显优于阴性表达组（X2=4．84,P〈0．05）;Ras阳性表达与阴性表达组2年生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论let7的低表达、Ras的高表达参与了肺癌的发生发展,let7阳性表达与预后密切相关;Ras可协同参与肺癌的发生发展。     

Notch1、HIF-1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌的表达及意义

目的探讨Notch1、缺氧诱导因子-1（HIF-1）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织的表达及其临床病理学意义。方法用免疫组化SP法分别检测65例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白的表达并分析它们与临床病理参数间的关系。结果Notch1、HIF-1、VEGF蛋白在非小细胞肺癌中阳性表达率分别为81.5%（53/65）、96.9%（63/65）、93.8%（61/65）,均明显高于正常支气管上皮组织阳性表达率的40%（6/15）、33.3%（5/15）、33.3%（5/15）（P〈0.05）;NSCLC中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白的表达均与肿瘤临床分期和有无淋巴结转移等临床病理参数有关（P〈0.05）;Notch1、HIF-1与VEGF蛋白的表达三者两两间均呈显著正相关（r=0.332,0.428,0.505,P〈0.01）。结论Notch1、HIF-1、VEGF蛋白在NSCLC中均表达上调且互相相关,提示其在肺癌癌变发生、发展中可能起协同作用;肺癌细胞分泌的Notch1可能诱导HIF-1表达,HIF-1的高表达调节VEGF基因的表达从而促进新生血管形成和肿瘤侵袭转移。     

α-连环素在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨α-连环素（α—cat）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与NSCLC的发生、发展及预后的关系。方法应用免疫组织化学PicTure^TM通用型二步法，观察43例NSCLC患者及7例正常肺组织中的α—cat表达情况。结果在43例NSCLC患者中，α—cat的异常表达率为72．1％；α—cat异常表达与分化程度和是否有区域淋巴结转移显著相关（P〈0．05）；α—cat异常表达患者生存期明显短于正常表达患者。结论α—cat表达与NSCLC的发生、发展及预后关系密切，可作为评估NSCLC患者进展及预后的有价值指标。     

E3泛素连接酶Iduna在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨E3泛素连接酶Iduna mRNA和蛋白在非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中的表达及其与临床病理因素和预后的关系.方法 应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western-Blot和免疫组织化学（EnVision）方法检测分析非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中Iduna mRNA和蛋白的表达,并分析其与临床病理因素和预后的关系.结果 RT-PCR及Western-Blot结果显示非小细胞肺癌组织中Iduna mRNA和蛋白表达水平分别为0.468±0.086和2.554±0.544,明显高于癌旁肺组织的0.203±0.070和1.570±0.316,差异均有统计学意义（P＜0.05）;免疫组织化学结果显示：Iduna在肺泡上皮细胞中呈阴性,在正常支气管黏膜上皮中呈阴性或弱阳性,在非小细胞肺癌组织中呈不同程度的阳性表达.Iduna的高表达率与肿瘤分化程度呈负相关（P=0.002）,与肿瘤大小（P=0.044）、TNM分期（P=0.015）、淋巴结转移（P=0.009）呈正相关,并与Ⅰ期非小细胞肺癌患者的预后有关（P=0.016）.结论 Iduna的高表达可能与非小细胞肺癌的侵袭、转移过程密切相关,有可能是提示非小细胞肺癌患者预后不良的指标.     

非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子的含量及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清血管内皮生长因子(sVEGF)含量水平。方法用酶联免疫吸附技术(ELISA)测定50例NSCLC患者sVEGF含量。结果NSCLC组sVEGF水平高于对照组及肺炎组(P<0.01)。sVEGF含量与临床TNM分期等有关,NSCLC患者Ⅰ、Ⅱ期sVEGF含量低于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.01)。经治疗后sVEGF水平下降(P<0.05),但肿瘤复发时sVEGF升高。结论sVEGF含量变化可能与肿瘤生长转移、复发及预后等有关。     

非小细胞肺癌组织中p33ING1和p53蛋白的表达及临床意义

目的研究p33ING1与p53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的相关性。方法用免疫组化SP法检测了63例NSCLC和17例正常肺组织中p33ING1和p53的表达。结果p33ING1在NSCLC组织中阳性率(58.7%)显著低于正常肺组织(100%)(P<0.01);p33ING1表达与肺癌、TNM分期及淋巴结转移有关。p53在NSCLC组织中阳性率(54.0%)显著高于正常肺组织(5.9%)(P<0.01);p53表达与肺癌的分化、TNM分期及淋巴结转移有关。p33ING1与p53在63例在NSCLC中表达呈正相关(P<0.01)。结论p53突变和p33ING1下调与对肺癌发生、发展可能起重要作用,p33ING1、p53蛋白在NSCLC中的表达呈正相关,p33ING1的存在可能还有其它不依赖p53蛋白的途径。     

非小细胞肺癌组织中Survivin和环氧合酶2的表达及其临床意义

目的 探讨Survivin和环氧合酶2(COX-2)在非小细胞肺癌组织中的表达及与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期的关系.方法 应用免疫组化SP染色法检测Survivin、COX-2在非小细胞肺癌组织(肺癌组,43例)和癌旁正常肺组织(对照组,20例)中的表达情况.结果 Survivin和COX-2在肺癌组中的阳性表达率分别为67.4%(29/43)和55.8%(24/43);在对照组中均无表达;Survivin和COX-2在两组中的表达差异有统计学意义(P<0.01). Survivin和COX-2在有淋巴结转移、临床分期为Ⅱ～Ⅲ期及低分化的非小细胞肺癌组织中阳性表达率显著高于无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ期及高、中分化的非小细胞肺癌组织(P<0.05). 结论 Survivin和COX-2在非小细胞肺癌组织中均有高表达,且与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期密切相关.     

转录因子NF-κB在非小细胞肺癌中的表达分析

目的观察非小细胞肺癌组织与癌旁组织中NF-κB的基因转录和蛋白表达水平，探讨NF-κB在非小细胞肺癌发生发展中的可能作用，为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供参考。方法反转录PCR和免疫印迹的方法分别检测60例临床确诊的非小细胞肺癌组织与癌旁组织中NF—κB基因pSO和p65表达和NF-κB蛋白的水平，并与肺良性病变组织比较。结果非小细胞肺癌组织的NF—κB／p50和NF—κB／p65mRNA水平明显高于癌旁组织和肺良性病变组织（P〈0．01），与性别、年龄、转移与否等其他临床病理相关因素无明显相关（r=0．56，0．72，0．69，P〉0．05）。蛋白表达检测结果与mRNA水平高度一致。结论非小细胞肺癌组织中NF—κB基因和蛋白表达水平明显升高，可能促进了肿瘤的发生发展，可以考虑作为非小细胞肺癌临床分期和评价临床预后的参考指标。     

CK-19mRNA、CEAmRNA检测在肺癌围术期的应用及其意义

目的探讨肺血管处理顺序的选择对癌细胞入血的影响。方法收集56例手术治疗的非小细胞肺癌患者，术前随机分为2组，即：先结扎肺静脉组和先结扎肺动脉组；术前1d和术后第7天分别采集患者的外周静脉血，用巢氏PCR检测外周静脉血中CK-19mRNA、CEAmRNA的表达。结果术后患者外周静脉血中CK-19mRNA、CEAmRNA的表达低于术前，先结扎肺静脉组的患者术后外周血中CK-19mRNA、CEAmRNA表达的阳性率低于先结扎肺动脉组。结论手术操作影响癌细胞的入血。先结扎肺静脉可减少癌细胞入血。     

荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测宫颈癌患者外周血CK19mRNA表达的临床意义

目的探讨宫颈癌患者外周血中CK19mRNA的表达及其临床意义。方法应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应（FQ—RT—PCR）技术检测138例经病理证实的宫颈癌及36例妇科良性肿瘤（对照组）外周血液中CK19mRNA的表达,并分析其与临床病理因素的关系。结果138例宫颈癌组外周血CK19阳性率（69．6％）高于对照组（13．9％,X2=36．34,P=0．000）。宫颈癌组中早期宫颈癌（I-ⅡA期）外周血CK19mRNA阳性率（57．9％）低于中晚期宫颈癌（Ⅱb-Ⅳ期,80．6％,x。=8．14,P=0．004）。早期宫颈癌患者CK19mRNA的表达与年龄（〈40岁、≥40岁）、肿瘤大小（〈4cm、≥4cm）、病理类型（鳞癌、非鳞癌）、浸润深度、淋巴转移（＋／-）均无关（P〉0．05）;与肿瘤分期（IA、IB、ⅡA）、组织分化（G1-2、G3）、脉管瘤栓（＋／-）有关（x。=9．59,7．27,9．94,P〈0．01）。早期宫颈癌患者Logistica多因素分析示CK19mRNA的表达与脉管瘤栓相关（x2=5．29,P=0．021）。结论荧光定量RT—PCR技术可检测出各期宫颈癌患者外周血中CK19的表达,其敏感性和特异性高,可作为检测宫颈癌微转移的生物学指标,对判断宫颈癌的预后具有一定指导意义。     

肿瘤坏死因子-α、细胞角蛋白20在结肠癌浸润中作用的研究

目的 研究TNF-α和细胞角蛋白20(CK20)在结肠癌患者组织中的表达和相关性,及与肿瘤生物学行为的关系.方法 选取手术切除并经病理检查证实为结肠癌患者30例,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测结肠癌患者癌组织、癌旁组织、切缘组织中TNF-α mRNA和CK20 mRNA的表达情况.结果 癌组织、癌旁组织、切缘组织中TNF-α mRNA阳性表达率分别为70.0%、43.3%、20.0%,三者之间比较及每两者之间比较差异均有统计学意义(P＜0.01);CK20 mRNA阳性表达率分别为63.3%、33.3%、16.7%,三者之间比较差异有统计学意义(P＜0.01),但在癌旁组织和切缘组织之间表达差异则无统计学意义(P＞0.05).TNF-α mRNA和CK20 mRNA在三种组织中的表达具有良好的相关性.TNF-α mRNA和CK20 mRNA与结肠癌分化程度无关(P＞0.05),但TNF-α mRNA与结肠癌Dukes分期、侵犯肠壁范围密切相关(P＜0.05).结论 TNF-α mRNA可以作为反映结肠癌浸润、侵袭能力的客观指标.     

吉非替尼联合择期放疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的 观察吉非替尼联合择期放疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和不良反应.方法 13例晚期NSCLC,应用吉非替尼治疗,对10例吉非替尼治疗获益的患者,根据患者及家属意愿分为联合组和对照组,每组5例,联合组联合放疗,对照组继续单独应用吉非替尼治疗直至病情进展.结果 到随访截止日期,全部患者1年生存率达53.8%(7/13),2年生存率达46.2%(6/13).联合组和对照组的中位无进展生存期(PFS)分别为24个月和8个月(P=0.0019),中位总生存期(OS)分别为32个月和10个月(P=0.0062).不良反应主要为皮疹和腹泻.无症状性肺纤维化3例.结论 吉非替尼联合择期放疗治疗晚期NSCLC可以显著延长PFS和OS,不良反应可以耐受,是NSCLC规范化治疗和个体化治疗的合理选择.

Abstract：

Objective To study the effect and toxicity ofgefitinib combined with selected radiotherapy in the treatment of patients with advanced non-small-cell lung cancer (NSCLC). Methods From March 2006 to February 2009,10 of 13 advanced NSCLC patients who got benefit from gefitinib were enrolled to treatment group (gefitinib concurrent selected radiotherapy) and control group (gefitinib only), with 5 cases in each group. The response was evaluated as progression free survival (PFS) and overall survival (OS).Results No patient got complete remission (CR). Ten of 13 patients got partial remission (PR) and stable disease (SD). The 1 year and 2 years survival rate was 53.8%(7/13) and 46.2%(6/13) respectively. The median PFS in treatment group and control group was 24 months and 8 months respectively(P= 0.0019). The median OS was 32 months and 10 months respectively (P= 0.0062). The main toxicities were reversible skin rash and diarrhea,and 3 patients developed asymptomatic radiation pulmonary fibrosis. Conclusions Gefitinib combining with selected radiotherapy is effective and tolerated in patients with advanced NSCLC. It may prolong PFS and OS. It may be a rational choice for the standard and individualized treatment of NSCLC.     

氢醌对A549细胞人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氢醌(hydroquinone,HQ)对人肺腺癌A549细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)、脂质过氧化损伤产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)、抗氧化酶活性以及氧化损伤修复酶人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human 8-oxo-guanine DNA glyeoslase,hOGG1)基因mRNA表达的影响,探讨HQ毒作用的分子机制.方法 不同浓度HQ作用于A549细胞,噻唑兰(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,荧光探针检测细胞内ROS的变化,比色法测定MDA含量和过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,逆转录聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分析hOGG1基因mRNA的表达.结果 随着HQ浓度的增加,各实验结果为:(1)A549细胞的吸光度值(A值)下降,160 μmol/L和320 μmoL/L浓度组[(0.584±0.098)、(0.328±0.066)]与对照组(0.989±0.150)相比差异有统计学意义(q值分别为5.56、9.07,P值均<0.05),且两组细胞存活率均低于80%;(2)A549细胞内ROS生成增多,40 μmol/L和80 μmoL/L浓度组A值[(39.80±4.15)、(101.99μ9.45)]与对照组(5.71±0.50)相比差异有统计学意义(q值分别为10.74、30.32,P值均<0.05);(3)SOD、GSH-Px活性下降,活性值在80 μmol/L时[(22.93±0.56)U/mg prot、(25.60±2.31)U/mg prot]均低于对照组[(25.62±0.28)U/mg prot、(38.97±2.61)U/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为12.17、8.78,P值均<0.05);MDA含量升高,在40 μmol/L和80 μmol/L[(1.07±0.01)nmol/mg prot、(1.19±0.08)nmol/mg plot]时高于对照组[(0.77±0.04)nmol/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为10.90、15.49,P值均<0.05);SOD(r=-0.95,F=20.00,P=0.04)与GSH-Px(r=-0.99,F=115.48,P=0.01)活力的下降和MDA(r=0.96,F=21.31,P=0.04)含量的升高均与HQ浓度的变化具有剂量-反应关系;(4)RT-PCR结果显示:HQ作用后,A549细胞hOGG1 mRNA的表达呈下降趋势,80 μmoL/L浓度组hOGG1 mRNA的表达(0.478±0.017)与对照组(0.715±0.038)相比降低较明显(q=11.70,P<0.05).结论 HQ可以诱导细胞活性氧增加和hOGG1基因mRNA表达水平下降,提示氧化损伤是HQ毒作用的重要机制.     

亲环素A基因在非小细胞肺癌中的功能

目的 研究亲环素A(CyPA)基因在非小细胞肺癌中的功能.方法 设计并合成4对针对CyPA siRNA靶序列的寡核苷酸单链,退火形成双链DNA,与经Hpal和Xhol酶切后的pGCL-GFP载体连接产生Lv-shCyPA慢病毒载体,该载体含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP),经聚合酶链反应(PCR)筛选阳性克隆并测序鉴定.将Lv-shCyPA、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共感染包装细胞293T细胞,包装成假病毒颗粒并感染非小细胞肺癌A549细胞,经免疫印迹法(Western blot)检测筛选CyPAsiRNA有效靶点和慢病毒颗粒,采用流式细胞技术分析细胞周期和凋亡率,进行裸鼠移植瘤实验.结果 PCR和测序结果证实,Lv-shCyPA慢病毒载体构建正确,经Western blot法筛选最有效的CyPA siRNA病毒颗粒滴度为2×10 9TU/ml,感染A549细胞凋亡率(5.01%±0.57%)增加,细胞周期G2-M期比例(11.40%±0.68%)减少,裸鼠移植瘤瘤体生长明显减缓,与未感染病毒的A549细胞细胞凋亡率(0.35%±0.17%)及G2-M期比例(14.52%±1.19%)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CyPA基因沉默在非小细胞肺癌的发生中有一定的抑瘤作用,对非小细胞肺癌的预防和分子流行学研究提供了新的理论依据.     

非小细胞肺癌组织中COX-2和HIF-1α的表达及其与肿瘤血管生成的研究

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）和缺氧诱导因子（HIF-1）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其与肿瘤生物学特征和肿瘤血管生成的关系。方法免疫组化法检测NSCLC组织COX-2和HIF-1α的表达,并测定肿瘤微血管密度（MVD）。结果NSCLC组织中COX-2及HIF-1α阳性表达率分别为55.55%,71.11%,显著高于正常肺组织（P均〈0.05）;有淋巴结转移组COX-2阳性表达率高于无淋巴结转移组;病理分级中Ⅱ-Ⅲ级组COX-2阳性表达率高于Ⅰ级组;肺腺癌组COX-2的阳性表达率高于肺鳞癌组,差异均有统计学意义（P均〈0.05）;HIF-1α的表达与淋巴结转移及临床分期有关（P均〈0.05）,与肿瘤的大小和肿瘤的分化程度无明显关系（P〉0.05）;COX-2与HIF-1α、MVD,HIF-1α与MVD的表达之间均呈正相关（r=0.417,0.673,0.448,P均〈0.01）。结论COX-2和HIF-1α的增强表达与非小细胞肺癌的浸润性发展和肿瘤血管生成有密切关系,联合检测COX-2和HIF-1α可作为判断肺癌转移潜能的重要指标。     

CT灌注成像的表面通透性参数在非小细胞肺癌化疗早期应用中的研究

目的 探讨CT灌注成像（CT-p）的表面通透性参数（PS）在晚期非小细胞肺癌化疗前及化疗早期（第1个化疗周期）的变化,及与化疗疗效的关系.方法 将80例经病理证实的晚期非小细胞肺癌患者采用一线药物进行标准化治疗,分别于化疗前、化疗1个周期后对原发肿瘤进行CT-p检查.在化疗4个周期后对肿瘤进行实体瘤评价标准（RECIST）评价,并按评价的结果将患者按完全缓解（CR）＋部分缓解（PR）、稳定（SD）、进展（PD）进行分组,分析比较各组化疗前与化疗1个周期后PS变化.结果 80例患者中,74例可评价疗效,经过4个周期化疗后患者缓解率为32.4％（24/74）,稳定率为78.4％（58/74）.CR＋ PR组（24例）和SD组（34例）患者化疗1个周期后PS较化疗前明显降低（12.38±1.86比18.13±2.45,13.24±1.97比17.93±2.38）,差异有统计学意义（P＜0.05）.PD组（16例）患者化疗1个周期后PS较化疗前无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 化疗早期PS能有效反映肺癌患者治疗前后肿瘤血管灌注情况的变化.在化疗早期可根据PS的变化来预判患者化疗的预后情况,可作为预测非小细胞肺癌化疗疗效的指标之一.     

RT—PCR检测胃癌患者外周血中细胞角蛋白20mRNA及其意义

目的检测胃癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达情况，并探讨其存在的临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测56例胃癌（胃癌组）、18例良性胃病（良性胃病组）、20例正常献血者（对照组）外周血中CK20 mRNA的表达情况。结果对照组及良性胃病组外周血中CK20 mRNA均为阴性表达，胃癌组外周血中阳性表达率为35．7％。胃癌组外周血中CK20 mRNA的阳性表达率在不同肿瘤组织学类型、TNM分期之间差异有统计学意义（P〈0．05），在不同肿瘤部位及患者性别之间差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论胃癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，有助于胃癌预后的判断。