吡格列酮对高糖培养的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达和合成的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂-吡格列酮对肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达和合成的影响,探讨其肾脏保护机制。方法体外培养肾小球系膜细胞,随机分组为正常对照糖（NG组）、高糖（HG组）及高糖＋不同浓度吡格列酮（P1、P2、P3组）。培养48小时后收集各组细胞及上清液,应用RT-PCR方法检测细胞MCP-1mRNA含量,采用ELLSA法检测细胞上清液中MCP-1蛋白浓度。结果 （1）肾小球系膜细胞可表达及合成MCP-1;（2）与NG组比较,高糖刺激后肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著增高（P〈0.05）;（3）加入吡格列酮干预后,肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著下降,且呈现浓度依赖性。结论吡格列酮可抑制肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达和蛋白合成,且呈现剂量依赖性,该作用可能与其肾脏保护部分有关。     

螺内酯对醛固酮刺激下大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的影响

目的探讨醛固酮对体外培养大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物－1（PAl-1）表达的影响及螺内酯的干预作用。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,设正常对照组、醛固酮（10-7mol·L-1）组、不同浓度螺内酯（10-7,10-8,10-9mol·L-1）干预组,48h后收集细胞及上清液,以RT-PCR检测PM-1、醛固酮受体（MR）和保护其配体特异性的11p羟类固醇脱氢酶2（11β-HSD2）的mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中PAI-1蛋白的浓度。结果RT-PCR结果,肾小球系膜细胞表达MR和118．HSD2mRNA,醛固酮可显著上调肾小球系膜细胞PM-1mRNA表达,螺内酯可抑制醛固酮诱导的PA／-1mRNA表达,且呈剂量依赖性;ELISA结果示醛固酮组上清液中PAI-1水平明显增加,螺内酯干预组PAI-1水平明显降低并与浓度有关。结论螺内酯与醛固酮竞争结合MR,抑制醛固酮刺激的大鼠。肾小球系膜细胞中PAI-1mRNA的表达和蛋白合成。     

罗格列酮对高糖时人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

【目的】探讨高糖对人肾小球系膜细胞（HRMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响，以及过氧化物酶增殖体激动剂罗格列酮对其影响及作用机制。【方法】将HRMC分为三组处理：①正常对照组（糖浓度5．5mmol／L）；②高糖（30mmol／L）组；③高糖加罗格列酮（5μmol／L，10μmol／L）组。用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测MCP-1mRNA表达，用EIISA方法测定细胞上清MCP-1蛋白浓度。【结果】高糖刺激系膜细胞后MCP-1mRNA表达明显升高，蛋白浓度增加，加入罗格列酮后MCP-1表达明显下降。且随罗格列酮浓度增大，作用更明显。【结论】高糖刺激HRMC，其MCP-1表达增强，可能是糖尿病肾病（DN）发病机制中的一个重要途径。罗格列酮能抑制MCp-1mRNA表达及蛋白合成，说明其具有抑制炎症的作用，在预防DN的发生发展中可能有重要意义。     

雷公藤内酯醇对高糖时人肾小球系膜细胞MC P-1表达的影响

目的探讨高糖及雷公藤内酯醇（TP）对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法将培养的人肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L 葡萄糖）、甘露醇组（5 mmol/L 葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）、TP甲组（30 mmol/L 葡萄糖＋5μg/L TP）、TP 乙组（30 mmol/L 葡萄糖＋10μg/L TP）、TP丙组（30mmol/L 葡萄糖＋15μg/L TP）,分别在24 h、48 h、72 h采用 RT-PCR法检测TP对高糖条件下系膜细胞内 MCP-1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果高糖组人肾小球系膜细胞 MCP-1 mRNA及蛋白较正常对照组增加,且差异有显著性（P＜ 0.01）;TP各组比高糖组有明显下降（P＜ 0.01）;不同浓度的TP对高糖诱导的系膜细胞 MCP-1的表达抑制程度不同（P ＜ 0.05）。结论 TP可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞 MCP-1的表达,且呈时间、剂量依赖关系,其可能对延缓糖尿病肾病中肾小球硬化有一定作用。     

血管紧张素Ⅱ对自发性高血压大鼠外周血单个核细胞NADPH氧化酶2表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠(SHR)外周血单个核细胞NADPH氧化酶2(NOX2)表达的影响.方法:分离SHR外周血单个核细胞并进行培养,将细胞随机分为4组(n=6):空白对照组、Ang Ⅱ(10-8 mol/L)组、Ang Ⅱ(10-7 mol/L)组和Ang Ⅱ(10-6 mol/L)组.RT-PCR检测NOX2 mRNA的表达,Western blot检测NOX2蛋白的表达.结果:与空白对照组相比,Ang Ⅱ(10-8、10-7mol/L)组NOX2 mRNA的表达差异无显著性(P>0.05),而NOX2蛋白的表达升高(P<0.01),Ang Ⅱ(10-6mol/L)组NOX2mRNA及蛋白的表达均明显升高(P<0.01).结论:Ang Ⅱ可以促进高血压外周血单个核细胞NOX2的激活.     

JNK通路在AngⅡ所致肾小球足细胞内质网应激性凋亡中的作用

目的研究内质网应激（ERS）在AngⅡ所致肾小球足细胞损伤中的作用及c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路在AngⅡ所致肾小球足细胞凋亡中的促进作用及其特异性抑制剂SP600125的保护。方法足细胞诱导分化,随机分为对照组（N组）;AngⅡ组（A组）;AngⅡ＋SP600125组（A＋S组）,作用48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量PCR测定GRP78mRNA、p-JNK mRNA表达,Western blot测定GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达。结果经统计学分析后,A组与N组比较,细胞凋亡率增加,GRP78mRNA、p-JNK mRNA的表达增多,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达较N组增多,差异有统计学意义（P〈0.05）;A＋S组足细胞凋亡率、p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达较A组均有减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高AngⅡ可以在体外诱导足细胞发生凋亡。高AngⅡ诱导足细胞凋亡是由ERS途径所介导的,并通过了JNK途径引起细胞凋亡。JNK途径特异性抑制剂SP600125通过抑制c-Jun氨基末端激酶通路的激活抑制了足细胞的凋亡。     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF及PEDF的影响

目的观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,探讨脂联素对糖尿病肾病的保护作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:常糖组、高糖A组、B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L,其中以高糖B组作为脂联素干预的对照组);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次分别为2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml),作用24 h,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR法)测定各组细胞VEGF mRNA、PEDFmRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF、PEDF蛋白的含量。结果与常糖组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达升高(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达降低(P﹤0.05);与高糖B组相比,脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达降低(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达升高(P﹤0.01)。结论高糖可上调大鼠肾系膜细胞VEGF表达,抑制PEDF的表达;脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达并提高其对PEDF的表达。     

血管紧张素Ⅱ对哮喘患儿单核细胞化学趋化蛋白和细胞间黏附分子表达的影响

目的观察哮喘患儿血管紧张素Ⅱ（AⅡ）表达和AⅡ对正常儿童外周血单核细胞（PBMC）表达单核细胞化学趋化蛋白（MCP-1）和细胞间黏附分子（ICAM-1）的影响。方法对21例急性发作期哮喘患儿和11例正常儿童进行AⅡ测定;对Ⅱ例正常儿童的PBMC．经AⅡ刺激,检测MCP．1、ICAM-1的表达。结果2l例哮喘患儿急性发作期AⅡ水平明显高于Ⅱ例正常儿童（P〈0．05）。11例正常儿童的PBMC与不同浓度的AⅡ浓度（10^-9、10^-88、10^-7、10^-6mol／L）混合培养,在刺激24h后．MCP-1、ICAM．1的表达明显高于对照组,以10^-6mol／L的AⅡ刺激的表达最高（P〈0．01）。10^-6mol／L的AⅡ条件下,刺激2、24、48h,在24、48hMCP-1、ICAM-1的表达均明显高于对照组,以24h表达最高（P〈0．01）。结论哮喘患儿急性发作期AⅡ水平增高,AⅡ可通过MCP-1、ICAM-l的表达参与了哮喘的慢性炎症过程。     

血小板源性生长因子-DD对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响

目的 探讨血小板源性生长因子-DD(PDGF-DD)对肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径的影响.方法 将实验用人肾小球系膜细胞分成对照组、PDGF-DD组(20μg/L)和PDGF-DD+AG490组(20 μg/L PDGF-DD+10 μmol/L AG490).采用免疫组化、蛋白印迹法、反转录聚合酶链反应等方法观察PDGF-DD对肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3的蛋白及mRNA表达的影响.结果 PDGF-DD刺激后肾小球系膜细胞p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1和SOCS3表达增强,AG490抑制上述蛋白的表达(P＜0.05或＜0.01).结论 PDGF-DD能够激活肾小球系膜细胞JAK/STAT信号途径,促进系膜细胞增殖.     

姜黄素对肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因表达的影响

目的：观察姜黄素对肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）mRNA基因表达水平的影响。方法：将高浓度葡萄糖液及不同浓度的姜黄素液与肾小球系膜细胞共孵育,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法,检测各组细胞PPAR-γ mRNA表达强度。结果：单纯高浓度葡萄糖组肾系膜细胞PPAR-γ mRNA表达量（0.394±0.026）显著低于正常对照组（0.995±0.016）,P〈0.01;当姜黄素的浓度达100mg/L时,其PPAR-γ mRNA积分吸光度比值为0.701±0.04,高于高浓度葡萄糖＋姜黄素（25mg/L）组（0.541±0.018）,显著高于高浓度葡萄糖＋姜黄素（6.25mg/L）组（0.432±0.024）,P〈0.01。结论：姜黄素拮抗高浓度葡萄糖对肾系膜细胞PPAR-γ基因表达的抑制作用,上调PPAR-γ mRNA的表达水平。     

缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞炎症介质的影响

目的 观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用.方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12、24、48小时,应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和蛋白质印迹法检测系膜细胞MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度.结果 高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显(0.815±0.007)A,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高(17.29±1.95)μg/L,缬沙坦干预后MCP-1及ICAM-1表达减弱,细胞增殖受抑制(0.652±0.004)A,Ⅳ型胶原浓度降低(13.19±0.89)μg/L.结论 缬沙坦可下调MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用.     

ERK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的研究在哮喘大鼠气道平滑肌细胞ASMC（airway smooth muscle cell）中ERK信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法原代培养ASMC,实验设未干预组（A组）、ERK阻断剂（U0126）组（B组）、PDGF组（C组）、PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。B组又分为B1组、B2组、B3组、B4组,加入浓度分别为0．1μmol／L、1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L的U0126;C组又分为C1组、C2组、C3组、C4组,加入浓度分别为1μg／L、10μg／L、25μg／L、50μg／L的PDGF—BB。免疫组化法测ERK。蛋白的表达（仅测A、B4、C4、D组）,RT—PCR法测其mRNA表达。结果ASMC中ERK,蛋白表达B4组显著低于A组（P〈0．01）,C4组显著高于A组（P〈0．01）,D组与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;B1组、B2组、B3组．B4组ERK,mRNA表达均显著低于A组（P〈0．01）,U0126以浓度依赖性的方式抑制PDGF—BB诱导ASMC中ERK的活化;C1组、C2组、C3组、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（P〈0．01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF—BB存在明显的浓度依赖关系,D组则与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF可剂量依赖地激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,ERK通路参与了PDGF诱导的ASMC增殖的细胞内信号转导过程。     

丹参酮ⅡA对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响。 方法培养Wistar大鼠原代心肌成纤维细胞,分为对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组、丹参酮A组（0.01 mmol/L丹参酮ⅡA）、丹参酮B组（0.1 mmol/L丹参酮ⅡA）、丹参酮C组（1 mmol/L丹参酮ⅡA）。采用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;采用酶联免疫吸附试验检测羟脯氨酸含量;采用实时定量聚合酶链式反应（PCR）法检测大鼠心肌成纤维细胞胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、基质金属蛋白酶2（MMP-2）及金属蛋白酶特异性组织抑制2（TIMP-2）mRNA的表达水平;采用Western-blotting测定半乳糖凝集素3蛋白表达水平。 结果5组心肌成纤维细胞间细胞增殖率、羟脯氨酸表达水平、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 14.440、13.510、15.860、42.950、3.727、7.357、127.600,P均< 0.001）。且与对照组相比,AngⅡ组及丹参酮ⅡA各浓度组细胞增殖率[（100.0 ± 2.8）%、（171.2 ± 11.4）%、（162.3 ± 15.9）%、（154.6 ± 17.5）%、（128.7 ± 13.2）%]、羟脯氨酸表达水平[（1.13 ± 0.14）、（2.07 ± 0.23）、（1.89 ± 0.17）、（1.74 ± 0.20）、（1.35 ± 0.16）μg/mg]、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平均明显上升（P均< 0.05）。与AngⅡ组比较,丹参酮ⅡA各浓度组细胞增殖率、羟脯氨酸表达水平、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平均显著下降,且丹参酮C组最低（P均< 0.05）。而MMP-2 mRNA表达水平在AngⅡ组与丹参酮ⅡA各浓度组间比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）,且丹参酮ⅡA各浓度组间MMP-2 mRNA表达水平比较,差异亦均无统计学意义（P均> 0.05）。 结论丹参酮ⅡA可有效抑制心肌成纤维细胞的增殖,其机制可能与抑制半乳糖凝集素3蛋白表达,降低TIMP-2表达相关。     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人血管平滑肌细胞分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的:观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)作用下人血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMC)分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)的影响。方法:采用体外培养第4～6代的人脐动脉VSMC,实验分为6组,即对照组、AngⅡ(1×10-6mol/L)组及AngⅡ+不同磁感应强度(1,5,10,50Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用24h后收集标本,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunoadsordentassay,ELISA)检测MCP-1的分泌量,免疫细胞化学检测MCP-1的蛋白表达。结果:AngⅡ1×10-6mol/L刺激VSMC24h,MCP-1的分泌量显著增高(P<0.05);而1,5,10,50Gs恒磁场组细胞MCP-1的分泌量显著低于AngⅡ组(F=752.89,P<0.05)。AngⅡ1×10-6mol/L与VSMC孵育24h后,MCP-1的表达显著增加(P<0.05和对照组);而1,5,10,50Gs恒磁场组MCP-1的表达显著低于AngⅡ组(F=238.26,P<0.05)。结论:1～50Gs的恒磁场可拮抗AngⅡ的作用,抑制VSMC分泌与表达MCP-1。     

不同浓度地塞米松对成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖的影响

目的：研究不同浓度地塞米松对成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖的影响。方法：从新生SD大鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,随机分为4组,A组加入1×10^-7mol/L地塞米松;B组加入5×10^-8mol/L地塞米松;C组加入1×10^-8mol/L地塞米松;D组作为空白对照。96h后提取细胞RNA,RT-PCR一步法分析成骨细胞骨钙素mRNA表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中骨钙素含量,MTT法测定成骨细胞增殖率。结果：A组、B组、C组与D组细胞骨钙素基因表达比值分别为0.359±0.026、0.386±0.017、0.447±0.024、0.414±0.013,4组之间差异均有显著性意义,A组低于D组（P〈0.01）,B组低于D组（P〈0.01）,C组高于D组（P〈0.01）。A组、B组、C组与D组细胞培养上清液中骨钙素含量分别为2.635±0.218、2.860±0.093、3.447±0.024、3.168±0.335ng/ml,4组之间差异均有显著性意义,A组低于D组（P〈0.01）,B组低于D组（P〈0.01）,C组高于D组（P〈0.01）。4组细胞增殖率之间差异均有显著性意义,A组低于D组（P〈0.01）,B组低于D组（P〈0.05）,C组高于D组（P〈0.01）。结论：1×10^-8mol/L的地塞米松促进成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖,5×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L的地塞米松则抑制成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖。     

迷迭香酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖中氧化应激及炎症介质分泌的影响

目的：观察PDGF—BB诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖过程中氧化与抗氧化系统的改变及炎症介质的分泌变化，并探讨迷迭香酸的干预作用。方法：培养大鼠系膜细胞，以PDGF刺激系膜细胞增殖及迷迭香酸干预。实验设正常对照组、增殖组、单纯迷迭香酸组和迷迭香酸干预组，利用分光法分别测定细胞上清液中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。应用双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TGF～β1，MCP～1及纤维连结蛋白的蛋白分泌量。结果：经PDGF—BB刺激系膜细胞后超氧化物歧化酶活性降低，丙二醛含量升高；而迷迭香酸干预能促进超氧化物歧化酶活性升高而降低丙二醛的产生。PDGF—BB（20ng／mL）同样刺激肾小球系膜细胞分泌TGF—β1与MCP-1，刺激GMC合成FN蛋白。RA则呈浓度依赖性地抑制肾小球系膜细胞中TGF-β1，MCP-1，FN蛋白分泌。结论：氧自由基、脂质过氧化及炎症介质参与了系膜细胞的增生，而迷迭香酸则能抑制系膜细胞的上述改变，具有抗氧化活性。同时在PDGF—BB诱导的肾小球系膜细胞增殖中，抑制肾球系膜细胞分泌TGF-β与MCP-1，并能抑制肾小球系膜细胞合成纤维连结蛋白。     

血管紧张素Ⅱ参与肾间质成纤维细胞自分泌TGF- β1 的实验研究

目的通过观察血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）对正常大鼠肾间质成纤维细胞株NRK．49F自分泌TGF- β1 的影响,探讨其参与肾小管间质纤维化的作用机制。方法用不同浓度Ang1I（10^-6,10^-7,10^-8, 10^-9mol／L）刺激NRK．49F（6h,12h,24h,和48h）。蛋白免疫印迹法检测TGF- β1 受体（T13RD的表达。ELISA方法检测细胞上清液中TGF-1的浓度。结果（1）AngⅡ（10^-7mol／L）能刺激NRK-49F细胞分泌TGF- β1 ,其表达量在刺激细胞6h后即开始增加,12h后达到峰值,24h和48h仍能维持较高的水平;（2）AngⅡ（10-9mol／L）能够上调NRK．49F细胞TBRI的表达。结论AngⅡ参与肾问质成纤维细胞自分泌TGF- β1 ,从而促进。肾小管问质纤维化的发生发展。     

丹参酮ⅡA抑制心肌细胞的纤维化

背景：转化生长因子β-Smads信号通路是心肌纤维化的关键通路;丹参酮ⅡA具有抑制心肌纤维化作用.目的：验证丹参酮ⅡA对转化生长因子β1致心肌纤维化的作用并探讨其机制.方法：取出生24 h内的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞.取上述第3代心肌成纤维细胞,用5μg/L转化生长因子β1培养15,30,60,120 min或6,12,24 h后收集细胞,用不同浓度（10-5 mol/L、10-4结果与结论：转化生长因子β1在一定范围内以时间依赖方式诱导结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原、磷酸化Smad3及Smad7的表达,刺激终末结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原mRNA的表达量明显上升（均P 〈0.01）;磷酸化Smad3及Smad7蛋白表达量在刺激后1 h达到峰值,表达量显著增加（均P 〈0.01）.高浓度丹参酮ⅡA预处理可显著下调磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原表达（均P 〈0.01）.两种浓度的丹参酮ⅡA预处理均可上调Smad7蛋白表达（P 〈0.05,P 〈0.01）.提示丹参酮ⅡA对心肌纤维化有抑制作用,可能与其上调Smad7蛋白表达,抑制转化生长因子β1诱导的Smad3磷酸化,部分阻断转化生长因子β1-Smads信号通路有关. mol/L）丹参酮ⅡA预处理2 h后再加入5μg/L转化生长因子β1培养120 min或24 h后收集细胞,并设空白对照组.免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定,反转录聚合酶链反应检测结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达,Western Blot检测Smad7及磷酸化Smad3蛋白表达.免疫组织化学染色及免疫荧光法检测磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白表达.     

系膜增生性肾小球肾炎炎症因子分泌的变化及其意义

目的：探讨在增生的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）及大鼠抗Thy1．1系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）模型肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）及纤维连接蛋白（FN）等炎症介质变化及其意义。方法：体外培养大鼠GMC，予血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）刺激，应用ELISA法检测培养上清液中TGF-β1、MCP-1及FN的蛋白分泌量。另外制备大鼠MsPGN模型，免疫组化方法检测大鼠肾皮质中增生细胞核抗原（PCNA）、TGF-β1、MCP-1及FN的相对表达量。结果：PDGF-BB诱导GMC增殖后，GMC分泌TGF-β1、MCP-1增多，FN蛋白合成增加。模型大鼠较正常大鼠于肾小球毛细血管襻及系膜区TGF-β1、FN和MCP-1表达明显增多。结论：增生的GMC分泌TGF-β1、MCP-1增多，并能刺激GMC合成FN。在大鼠MsPGN模型肾小球系膜区及毛细血管襻中TGF-β1、FN和MCP-1表达同样明显增多。因而MsPGN发病机制可能部分与TGF-β1及MCP-1的过高表达有关。[著者文摘]     

洛伐他汀对人肾小球系膜细胞转化生长因子-β1和细胞外基质的影响

目的　观察他汀类药物对人肾小球系膜细胞转化生长因子 β1 (TGF β1 )表达及纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响 ,探讨其在糖尿病肾病防治中的意义。方法　于体外培养人胎肾小球系膜细胞 ,观察低糖 ( 5 6mol/L)和高糖( 3 0mol/L)环境下系膜细胞TGF β1 mRNA的表达 ,并检测细胞培养液中TGF β1 、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原的含量。分别在培养液中加入洛伐他汀、西拉普利及洛伐他汀 +西拉普利 ,观察不同时间和不同药物浓度下细胞培养液中上述指标浓度的变化 ,并检测洛伐他汀和 /或西拉普利刺激 48h后对系膜细胞TGF β1 mRNA表达水平的影响。结果　高糖可刺激肾小球系膜细胞过度增殖 ,细胞培养液中TGF β1 、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原浓度升高 ,TGF β1 mRNA表达明显增加。加入洛伐他汀和西拉普利后 ,细胞增殖明显抑制 ,细胞上清液中TGF β1 、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原浓度下降 ,TGF β1 mRNA表达亦显著降低。联用洛伐他汀和西拉普利对系膜细胞TGF β1 表达的抑制作用较单独用药更强。结论　高糖可促进系膜细胞TGF β1 表达和基质蛋白的分泌 ,洛伐他汀和西拉普利均能一定程度地逆转上述现象 ,提示他汀类药物有直接抑制系膜细胞TGF β1 表达和基质蛋白分泌的?