辐射与悬浮球培养联合纯化乳腺癌干细胞

目的:利用悬浮球培养联合不同辐射模式,高度纯化人乳腺癌MCF-7细胞中辐射抵抗的CD44+/CD24Aow乳腺癌干细胞.方法:利用含细胞因子的无血清培养体系培养MCF-7细胞,将培养形成的球囊细胞连续传代.选择第2代球囊细胞分别行2 Gy×4次及单次8 Gy照射.利用滤网收集存活细胞生成的微球囊,流式细胞仪检测纯化后微球囊中CD44+/CD24Aow细胞的含量.克隆形成检测及单击多靶模型曲线拟舍分析纯化后微球囊细胞的辐射敏感性.结果:单纯悬浮球培养与联合X线照射组之问CD44+/CD24Aow细胞的含量差异存在显著性(P<0.05),联合组高度纯化CD44+/CD24Aow细胞;多次分割及单次大剂量照射对CD44+/CD24Aow细胞的富集作用差异无显著性(P=0.303).纯化细胞照射后存活分数显著高于贴壁MCF-7细胞.结论:辐射联合悬浮球培养进一步纯化辐射抵抗的CD44+/CD24Aow乳腺癌干细胞的方法是可行的.     

X线辐射对A549肺腺癌细胞周期和增殖的影响

目的探讨X线不同放射剂量对A549肺腺癌细胞周期和增殖的影响。方法培养A549肺腺癌细胞,分别用0Gy、0.5Gy、1Gy、1.5Gy、2GyX线照射细胞,并继续培养6h和12h后收集细胞,用PI法检测细胞周期,CCK8法检测细胞增殖。结果 G2期细胞6h检测结果显示,与0Gy组相比,各剂量组G2期细胞比例均显著增加(P0.001),与0.5Gy、1Gy、1.5Gy相比,2Gy组G2期细胞比例也显著增加(P0.05);12h检测结果显示,1Gy、1.5Gy、2Gy组G2期细胞比例均高于0Gy、0.5Gy组(P0.05);1.5Gy、2Gy组G2期细胞比例高于1Gy组。S期细胞6h检测结果显示,各剂量组S期细胞比例均高于0Gy组(P0.05),但各剂量组之间无明显差异;12h检测结果显示,各剂量S期细胞比例随辐射剂量增加而增加,除0Gy组与0.5Gy组、0.5Gy组与2Gy组外均具有统计学意义(P0.05)。6hCCK8结果显示,与0Gy、0.5Gy组相比2Gy组细胞增殖能力显著减弱(P0.05)。12hCCK8结果显示,与0Gy、0.5Gy组相比,1Gy、1.5Gy、2Gy组细胞增殖能力显著减弱(P0.05)。结论辐射能够诱导细胞周期阻滞从而抑制细胞增殖,且在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp63,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3．1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEg-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒坶hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞053基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEg-hp63构建正确。与0Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0．5-5Gy照射后,p53mRNA水平增高;A549．hp53在2-5Gy后,p53蛋白表达显著增高（P〈0．01）,SKOV-3-hp63其蛋白表达随剂量（0．5-5Gy）增加而明显增加（P〈0．05-P〈0．01）。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0．5Gy照射后明显下降（P〈0．05）,2-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）;SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0Gy时增高,0.5-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。     

低剂量辐射诱导Lewis细胞适应性反应的观察

目的了解低剂量辐射对Lewis细胞适应性反应的影响及其可能机制。方法体外培养Lewis细胞,分为假照组（D0组）、低剂量照射组（D1组）、高剂量照射组（D2组）、低剂量＋高剂量照射组（D1＋D2组）,D0组不照射,D1组给予75 mGyγ射线照射,D2组给予2 Gyγ射线照射,D1＋D2组给予75 mGy＋2 Gyγ射线照射（低剂量与高剂量照射时间间隔为8 h）。照射后10 d行GIEMSA染色,计算细胞存活分数;用流式细胞仪检测照射后30 min9、0 min3、h6、h、12 h2、4 h4、8 h细胞周期比例。结果 D2组和D1＋D2组的细胞存活分数明显低于D1组,差异有显著性（F=115.70,q=7.17、8.03,P〈0.01）,D2组与D1＋D2组比较差异无显著性（P〉0.05）。D1组与D0组比较、D2组与D1＋D2组比较细胞照射后30 min~48 h G1期差异无显著性（P〉0.05）;D2组、D1＋D2组与D0组和D1组比较照射后6 h即出现G1期阻滞,48 h仍未恢复正常,差异有显著性（F=107.78~150.92,q=7.14~15.21,P〈0.01）。各组不同时间S期和G2/M期比较差异无显著性（P〉0.05）。结论低剂量辐射不能诱导体外培养的Lewis细胞产生适应性反应,其机制可能与细胞周期调控有关。     

外源性硫化氢单独或联合131I对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨外源性硫化氢(H2S)单独或联合131I照射对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响,及其在γ射线中增敏或拮抗的作用.方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,1 500μmol/L硫氢化钠(NaHS)单独或联合0.3 mCi的131I作用于细胞;台盼蓝染色法检测细胞死亡率,Hoechst 33342/PI双染观察细胞形态改变,流式细胞术检测细胞周期分布的改变及细胞凋亡.结果:NaHS明显抑制MCF-7细胞增殖,使其阻滞于G0/G1期,G2/M期百分率则明显减少,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).NaHS联合131I作用于细胞96h,与131I照射组比较:照射时间≥2h时细胞凋亡率及死亡率显著增加(P＜0.05),并呈照射时间依赖性.结论:外源性H2S抑制MCF-7细胞增殖,但未能诱导明显凋亡;H2S增加MCF-7细胞对γ射线的辐射敏感性,可能与其使细胞G2/M期显著减少相关.     

ASPP1和ASPP2基因高表达对白藜芦醇诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡能力的影响

目的观察ASPP1和ASPP2基因高表达对白藜芦醇诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡能力的影响。方法采用瞬时转染法将pcDNA3／ASPPI和pcDNA3／ASPP2质粒分别转染入乳腺癌细胞MCF-7中,经G418筛选获得高表达ASPP1和ASPP2的MCF7阳性克隆细胞株MCF-7／ASPP1与MCF7／ASPP2。MCF-7、MCF-7／ASPP1与MCF-7／ASPP2细胞分刖加入0、25、50μmol／L 白藜芦醇,采用MTT法检测细胞增殖情况,RT-PCT法检测细胞p53下游基因bax与p21mRNA表达情况;3种细胞分别加入0、100、200μmol／L 白藜芦醇,采用ELISA法检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示,25、50μmol／L。白藜芦醇处理后,MCF7／ASPP1与MCF-7／ASPP2细胞存活细胞吸光度值均明显低于MCF-7细胞（P〈0．05）;RTPCR结果显示,25、50μmol／L白藜芦醇处理后,MCF7／ASPPI与MCF-7／ASPP2细胞中Bax和p21mRNA表达水平高于MCF-7细胞;细胞凋亡试验结果显示,100、200μmol／L白藜芦醇处理后,MCF7／ASPP1与MCF-7／ASPP2细胞凋亡细胞吸光度值均明显高于MCF-7细胞（P〈0．05）。结论ASPP1和ASPP2高表达可增强乳腺癌细胞对自藜芦醇的敏感性,且随浓度增高而敏感性增强。     

HRE 和 hTERT 修饰条件复制型腺病毒携带 Egr-1介导的 Smac 对人食管癌细胞 Eca109周期和凋亡的影响

目的：探讨以 HRE 和 hTERT 修饰条件复制型腺病毒携带 Egr-1介导的 Smac（CARd．pE-Smac）对人食管癌细胞 Eca109周期和凋亡的影响。方法利用氯化钴进行化学乏氧,病毒感染滴度为5 MOI [Multiplicity of infec-tion （virus/cell）]感染人食管癌 Eca109细胞24 h,并进行2 Gy 照射,12 h 后分别利用 Western blotting 检测 Smac 蛋白的表达,PI 染色和 AnnexinⅤ-FITC 双染,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡变化。实验分为 control、CARd．pE-Smac、hypoxia、2 Gy、H＋CARd．pE-Smac、CARd．pE-Smac＋2 Gy 和 H＋CARd．pE-Smac＋2 Gy 组。结果CARd． pE-Smac 感染常氧和乏氧的 Eca109细胞后均未见 Smac 蛋白表达增加,而2 Gy 照射后,常氧、感染 CARd．pE-Smac和乏氧再感染 CARd．pE-Smac 均能使 Smac 蛋白表达增加,尤其以三者联用后 Smac 表达增加最大;感染 CARd．pE-Smac 未对细胞周期有明显改变,而乏氧、2 Gy 和感染 CARd．pE-Smac 任二者（乏氧与2 Gy 除外）或者三者联用均能显著增加 S 期和 G2/M 期细胞百分比增加（P ＜0．05,P ＜0．01）,尤其以三者联用作用更强;而且,对于细胞凋亡的诱导作用与周期进程变化的规律相类似。结论HRE 和 hTERT 修饰条件复制型腺病毒携带 Egr-1介导的 Smac 在人食管癌细胞 Eca109中显著过表达,且能够导致细胞发生 S 期延迟和 G2/M 期阻滞,并诱导细胞发生凋亡。     

不同照射剂量对肝癌细胞生长抑制率的影响

目的探讨不同照射剂量对肝癌细胞生长抑制率的影响。方法对SMMC 7721肝癌细胞,应用国产X射线深部治疗机进行照射,肝癌细胞共分为7组,分别给予0Gy(假照组)、0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy进行照射。通过进行细胞克隆形成实验计算细胞存活分数。采用AnnexinⅤ和PI双染,然后采用流式细胞术检测不同辐射剂量对肝癌细胞早期凋亡的影响。结果细胞克隆形成实验结果表明,在不同剂量0、0.5、1、2、4、6和8Gy的照射组中,细胞存活分数分别为89.12±1.43、84.17±1.58、80.45±2.35、73.21±2.56、70.23±3.05、67.48±2.72、61.38±1.79%。与假照组(0Gy照射组)比较,其他照射组的细胞存活分数均明显低于假照组(P<0.05)。与0.5Gy和1Gy组相比,2、4、6、8Gy照射组的细胞存活分数明显减低(P<0.05)。而0.5Gy和1Gy照射组之间无显著差异。2、4、6Gy组之间比较无显著差异。而8Gy照射组的细胞存活分数明显低于任何其他组(P<0.05)。在不同剂量0、0.5、1、4、6和8Gy照射组中,细胞凋亡率分别为5.13±0.24、6.34±0.43、8.16±0.41、10.47±0.53、14.38±0.26、18.57±0.44和22.39±0.36%。与对照组相比,各实验照射组中细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.05),各组间比较均存在显著差异(P<0.05)。结论随着照射剂量的增加细胞凋亡比率明显增加,细胞存活分数减少。因此照射剂量是影响细胞生存率的重要因素。     

siRNA沉默VDAC1对MCF-7细胞增殖、周期的影响及其作用机制

[目的]观察siRNA沉默VDAC1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响.[方法]针对人VDAC1基因设计并合成siRNA,并将VDAC1-siRNA转染MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞中VDAC1的表达水平,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞术检测MCF-7细胞的周期分布,同时Western印迹法检测周期蛋白D1的表达.[结果]MCF-7细胞转染VDAC1-siRNA后能够有效抑制VDAC1的表达,显著抑制其增殖水平,促使MCF-7细胞发生G1期阻滞,同时下调Cyclin D1蛋白表达.[结论]VDAC1沉默能够有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促使细胞发生G1期阻滞.VDAC1可作为乳腺癌治疗的新靶点.     

hTERT基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性及COX-2表达的影响

目的本研究探讨hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞生物学特性及环氧化酶-2(COX-2)的影响。方法设计合成特异性针对hTERT mRNA的siRNA,电转染入乳腺癌细胞,以致目的基因沉默。应用RT-PCR及Western blot法检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白的表达状况;应用流式细胞仪检测细胞周期;并通过CCK-8增殖实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力;经小室侵袭实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。利用免疫组织化学法检测COX-2蛋白的表达。结果 hTERT基因沉默48h后,hTERT转染组在沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白表达呈现明显降低(P0.05);细胞周期检测结果示乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,三组比较统计学差异明显(P0.05);CCK-8增殖实验结果表明乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞在hTERT转染组的增殖得到显著抑制(P0.05);小室侵袭实验结果表明,hTERT转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P0.05);免疫组织化学法检测结果显示,COX-2蛋白在hTERT转染组的表达明显降低,并与hTERT基因的表达相关联。结论 hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞的增值和迁移能力均有影响,并能降低COX-2蛋白的表达,从而改善乳腺癌患者预后。     

反义血管内皮生长因子对乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的　构建表达反义血管内皮生长因子165(VEGF165)的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法　应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果　成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞增殖能力降低。结论　VEGF165反义RNA能够明显减少人乳腺癌细胞株MCF- 7内VEGF165的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖,证明了反义基因干预治疗的有效性,为乳腺癌的基因治疗进行了有益探索。     

艾塞那肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的:研究艾塞那肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及涉及的信号通路。方法:艾塞那肽以不同浓度、时间作用于人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法测细胞数目,流式细胞仪测定细胞周期,Western blot测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,Erk1/2)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)磷酸化程度。结果:艾塞那肽1、10 nmol/L作用24、48 h或100、1 000 nmol/L作用24、48、72、96 h,MCF-7细胞数目减少,但差异无统计学意义,艾塞那肽1、10 nmol/L作用72、96 h,MCF-7细胞数目较对照组明显减少(P<0.05)。艾塞那肽10 nmol/L作用96 h,S+G2/M期细胞数目减少(P<0.05),同时出现Erk1/2磷酸化程度下降、Akt磷酸化程度升高,但差异无统计学意义。结论:艾塞那肽1、10 nmol/L作用MCF-7细胞72、96 h,抑制细胞增殖,该作用未涉及Erk和PI3K/Akt信号通路。     

细胞周期蛋白D2的RNA干扰质粒转染对骨髓瘤细胞系LP-1细胞增殖和凋亡的影响

目的构建细胞周期蛋白 D2(CCND2)的短发夹 RNA 表达质粒,并观察对骨髓瘤细胞系 LP-1细胞增殖和凋亡的影响:方法设计、合成 CCND2短发夹 RNA 双链 DNA 模板,构建表达质粒 pGenesil-2/CCND2,转染 LP-1细胞,以 RT-PCR 检测对 CCND2表达的抑制作用,以锥虫蓝染色计数和 MTF 检测细胞增殖,以 Annexin V 检测细胞凋亡,流式细胞术榆测细胞周期。结果质粒 pGenesil-2/CCND2转染 LP-1细胞.转染率为34.2%,可以明显抑制 CCND2的表达,细胞增殖明显受抑制,72h后细胞凋亡率为(25.7+4.8)%。结论抑制 CCND2的表达可以抑制骨髓瘤细胞生长,并诱发骨髓瘤细胞的凋亡,可能是潜在的治疗靶点。     

Actions of a histone deacetylase inhibitor NSC3852 (5-nitroso-8-quinolinol) link reactive oxygen species to cell differentiation and apoptosis in MCF-7 human mammary tumor cells

NSC3852 (5-nitroso-8-quinolinol) has cell differentiation and antiproliferative activity in human breast cancer cells in tissue culture and antitumor activity in mice bearing P388 and L1210 leukemic cells. We investigated the mechanism of NSC3852 action in MCF-7 human breast cancer cells using electron spin resonance (ESR). Reactive oxygen species (ROS) were detected in MCF-7 cell suspensions incubated with NSC3852 using the spin trap 5,5-dimethyl-1-pyrroline-N-oxide (DMPO). Formation of the DMPO-OH adduct was quenched by the addition of superoxide dismutase but not by catalase, and we concluded that superoxide was generated in the NSC3852-treated cells. The flavoprotein inhibitor diphenylene iodonium suppressed ROS production, providing evidence for the involvement of a flavin-dependent enzyme system in the ROS response to NSC3852. A biologically significant oxidative response to NSC3852 occurred in MCF-7 cells. An early marker of oxidative stress was a decrease in the [glutathione]/[glutathione disulfide] ratio 1 h after NSC3852 addition. Oxidative DNA damage, marked by the presence of 8-oxoguanine, and DNA-strand breakage occurred in cells exposed to NSC3852 for 24 h. Apoptosis peaked 48 h after exposure to NSC3852. Pretreatment with the glutathione precursor N-acetyl-l-cysteine (NAC) prevented DNA-strand breakage and apoptosis. Pretreatment with NAC also reversed NSC3852 decreases in E2F1, Myc, and phosphorylated retinoblastoma protein, indicative of redox-sensitive pathway(s) in MCF-7 cells during G(1) phase of the cell cycle. We conclude that ROS formation is involved in the apoptotic and cell differentiation responses to NSC3852 in MCF-7 cells.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖周期的影响

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌细胞株增殖周期的影响.方法 培养乳腺癌细胞株MCF-7,用TSA、SAHA、CS055、MS-275 4种不同类型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂分别作用于细胞,于24、48、72、96 h用MTT比色法观察细胞生长情况,初筛出高效的抑制剂.用所选出的抑制剂的不同浓度处理细胞,流式细胞术检测S期细胞的比例和周期素Cyclin D1、Cyclin A2,并进行统计分析.结果 在TSA、SAHA、CS055和MS-275 4种不同类型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂中,SAHA显示出较强的抑制能力(P＜0.05);在一定时间和浓度范围内,其抑制能力有明显的时效关系;在抑制剂作用下,S期细胞比例和周期素Cyclin A2表达下降,Cyclin D1表达上升(P均＜0.05).结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA是乳腺癌细胞增殖的高效抑制剂,其抑制作用有一定的时效关系;周期素Cyclin D1、Cyclin A2参与了抑制剂对细胞增殖周期的调控.     

超声联合聚乙烯亚胺增强MCF-7癌细胞基因表达的转染参数优化

目的 探讨超声辐照并超声造影剂联合聚乙烯亚胺(PEI)增强MCF-7乳腺癌细胞质粒DNA转染的最优条件及协同作用.方法 制备PEI/荧光素酶质粒(pCMV-luciferase-GL3)复合物,用于MCF-7癌细胞基因转染,超声辐照前添加超声造影剂SonoVue.通过荧光素酶活性和细胞存活率的测定,对超声辐照参数进行优化,对质粒浓度、孵育时间、血清、溶媒类型、培养基体积等因素进行分析.结果 细胞活力和荧光素酶活性均受超声强度、辐照时间和占空比的影响,适当条件的超声辐照可促进PEI/DNA复合物渗透入胞内,从而提高质粒DNA的转染率.最优超声辐照条件为1 w/cm2,10%占空比,辐照3 min.超声辐照并超声造影剂联合PEI的转染效率显著高于单纯超声辐照和PEI转染(P<0.01).在超声辐照前将细胞与PEI/DNA复合物共孵育2h时,荧光素酶活性显著增强(P<0.01).此外,血清、培养基体积和溶媒类型也对转染效率有影响.结论 优化的超声和转染参数能显著提高MCF-7癌细胞的基因表达效率.超声辐照并超声造影剂联合PEI对DNA转染效率有协同作用,是一种增强质粒DNA基因表达简单而有应用前景的方法.     

Effect of 5-fluorouracil, Optison and ultrasound on MCF-7 cell viability

The aim of this study was to analyze cell viability and expression of apoptotic-related signaling proteins in MCF-7 breast cancer cells induced by combinations of ultrasound, the anticancer drug 5-fluorouracil (5-FU) and the ultrasound contrast agent Optison. MCF-7 cells were treated with 5-FU and sonicated at the frequency of 3.0 MHz and intensity of 3.0 W/cm2 for 1 min in the presence of Optison. The cells were analyzed for lactate dehydrogenase (LDH) release (a measure of cytotoxicity) and cell proliferation (by MTT assays). The LDH/MTT ratio was used for assessment of cell death. Expression of the apoptotic-related proteins, Bax and p27kip1, as well as phosphorylated forms of ERK and Akt proteins was assessed by Western blot analysis. We demonstrate that, immediately after treatment, cell death was most dependent on Optison; however, 24 h after treatment, cell death was more dependent on 5-FU. Ultrasound duty cycle increased cell death associated with either Optison or 5-FU. Furthermore, we show that treatment with 5-FU and ultrasound increased the levels of the Bax and p27kip1 proteins, but the addition of Optison appears to suppress apoptotic protein expression.     

细胞外基质蛋白1对乳腺癌MCF-7细胞和HUVEC生物学功能影响的研究

目的探讨细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)在肿瘤中的生物学功能。方法构建ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,利用脂质体介导的转染技术转染MCF-7细胞,药物G418筛选稳定转染细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,免疫组化检测ECM1蛋白表达。经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭力的变化;用MTT比色法分析ECM1对MCF-7和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响。结果成功构建了ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,并在MCF-7中稳定表达;转染ECM1后的MCF-7细胞的细胞形态、粘附性、侵袭力和增殖能力无明显变化;MTT比色法检测HUVEC增殖结果示培养液组、空载体转染上清组、ECM1转染上清组HU-VEC D570值分别为0.89±0.06,0.92±0.09和1.39±0.10,各组间差异具有显著统计学意义(p<0.01)。结论ECM1对乳腺癌细胞株MCF-7的生物学特性在体外未见明显影响,但能显著促进血管内皮细胞体外增殖。     

MiR-133通过RHOA蛋白调节乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭转移

目的:探讨miR-133通过调节RHOA蛋白的表达对乳腺癌低转移细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响.方法:(1)将has-miR-133a inhibitor经脂质体包裹转入MCF-7细胞,以Negative control作为阴性对照,未做任何处理的细胞作为空白对照.(2)通过qRT-PCR检测转染has-miR-133a inhibitor后细胞中miR-133的表达情况.(3)Transwell试验检测miR-133对于细胞迁移能力的影响.(4)细胞免疫荧光观察miR-133对于细胞骨架形态的影响.(5)Western blot检测miR-133对于RHOA蛋白表达的影响.结果:(1)转染has-miR-133a inhibitor后细胞中miR-133的表达较对照组明显减低.(2)Transwell试验结果表明抑制miR-133后可以增加细胞的迁移能力.(3)细胞免疫荧光结果提示抑制miR-133后细胞骨架形态发生明显改变,细胞具有较强的侵袭转移特性.(4)Western blot结果提示抑制miR-133后RHOA的表达较两个对照组明显上调.结论:miR-133可以通过调控RHOA蛋白的表达来抑制乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭转移.