银杏叶聚戊烯醇抗Aβ_(25-35)介导dPC12细胞损伤的保护机制

目的:研究银杏叶聚戊烯醇(GP)抗Aβ_(25-35)诱导dPC12细胞损伤的保护机制。方法:以鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆细胞系(PC12细胞)为研究对象,通过LDH比色法检测GP对Aβ_(25-35)处理后dPC12细胞存活率的影响;流式细胞术检测不同浓度GP对dPC12细胞凋亡的影响;应用活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)试剂盒检测Aβ_(25-35)对dPC12细胞的氧化损伤,并研究GP的抗氧化作用及其机制;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3在mRNA水平的表达,并采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3及Cleaved Caspase-3等凋亡相关因子在蛋白水平的表达。结果:GP可显著降低LDH漏出率以及细胞内ROS水平和MDA含量,对dPC12细胞有显著的抗氧化作用,具有显著的量效关系;GP对Aβ_(25-35)引起的dPC12细胞凋亡有一定的抑制作用,以高剂量组作用显著;GP能显著下调Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax mRNA水平,并上调Bcl-2 mRNA水平,Bax/Bcl-2 mRNA比值降低,抑制细胞凋亡;GP能降低Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax/Bcl-2比值,抑制凋亡执行因子Caspase-3活化,从而抑制细胞凋亡。结论:GP可减少Aβ_(25-35)致损伤dPC12细胞的凋亡,其作用可能与其抗氧化作用和抑制细胞凋亡途径激活有关。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响

目的:建市Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理。方法:原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型。采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达。结果:神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与C-Jun表达增加。补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显。Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显。结论:①补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。②其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现。③Tacrine对神经元存活率有提高作用,但抑制神经元凋亡的作用似不明显。补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine。     

调心方对β淀粉样蛋白所致原代培养海马神经元细胞毒模型的影响

目的建立β淀粉样蛋白(Aβ)所致的神经细胞毒模型,探讨调心方的药效及作用机理。方法原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型。采用乳酸脱氢酶(LDH)释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞仪检测判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因的表达蛋白(Bcl-2、Bax、c-Jun)。结果神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞仪检测可见亚二倍体峰;Bcl-2减少,而Bax与c-Jun增加。调心方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞仪检测显示凋亡率下降,Bcl-2增加,Bax减少,而c-Jun变化不明显。四氢氨基吖啶(THA)组神经元存活率增加,但其他指标的变化不明显。结论调心方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡,其抑制凋亡作用的机制可能是通过提高bcl-2、降低bax基因的蛋白表达而实现。THA对神经元存活率有提高作用,但抑制神经元凋亡的作用似不明显。调心方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于THA。     

参知健脑方组分对淀粉样β蛋白β25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探讨SZJ对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用机制。方法:以Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及SZJ/APP17肽对SH-SY5Y细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:25μmol/L的Aβ25-35减低SH-SY5Y细胞存活率,SZJ/APP17肽预处理24h可提高SH-SY5Y细胞存活率,相同浓度Aβ25-35 SZJ预处理组与非处理组比较差异显著(P<0.05);25μmol/L Aβ25-35处理的SH-SY5Y细胞Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3的表达增高,SZJ/APP17肽预处理能抑制其表达升高,与非预处理组比较差异显著(P<0.05)。结论:SZJ可对抗Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达,促进Bcl-2的表达有关。     

二苯乙烯苷调控CREB/BDNF信号通路对Aβ25-35损伤的小鼠神经元突触的保护作用

目的:研究中药何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)损伤的小鼠海马神经元的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:小鼠海马神经元细胞分离自新生48 h内胎鼠大脑海马,培养9 d待神经元成熟后,采用免疫荧光法对其进行鉴定。将培养成熟的神经元细胞分为正常组、模型组(Aβ25-35孵育造模)和TSG组(Aβ25-35孵育造模后,分别加入TSG 6.25,12.5,25,50,100μmol·L~(-1))。细胞增殖毒性检测(CCK-8)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞活性,免疫荧光法检测突触素-1(SYN-1)蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测突触后膜致密蛋白-95(PSD-95)和突触体素(SYP)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA的表达,免疫荧光法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CREB,磷酸化CREB(p-CREB)和BDNF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低,LDH释放量显著增高(P0.01),SYN-1,PSD-95和SYP的含量明显降低(P0.05,P0.01),p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达明显下调(P0.05,P0.01);与模型组比较,不同浓度TSG均可提高细胞存活率,降低LDH释放量(P0.05,P0.01),TSG对Aβ25-35造模的小鼠海马神经元细胞的最适治疗浓度为25μmol·L~(-1); 25μmol·L~(-1)TSG能够显著增强SYN-1的表达量(P0.01),明显提高PSD-95和SYP的含量(P0.05);上调p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达(P0.05,P0.01),但对CREB mRNA及蛋白的表达无显著影响。结论:TSG对Aβ25-35损伤的小鼠海马神经元突触具有保护作用,其机制可能与促进CREB的磷酸化使p-CREB表达增多,并促进神经营养因子BDNF的释放有关。     

调心方对β淀粉样蛋白所致原代培养海马神经元细胞毒模型的影响

目的：建立β淀粉样蛋白（Aβ）所致的神经细胞毒模型，探讨调心方的药敏及作用机理。方法：原代培养大鼠海马神经元，用25μmol/L 集状态的Aβ1－42建立神经细胞毒模型。采用乳酸脱氢酶（LDH）释放量来检测神经元存活率，通过透射电镜、流式细胞仪检测判断神经元凋亡，应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因的表达蛋白（Bcl-2、Bax、 c-Jun）。结果：神经元经Aβ1－42处理后，LDH释放增加；电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张；流式细胞仪检测可见亚二倍体峰；Bcl-2减少，而Bax与c－Jun增加。调心方使LDH释放减少，电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少，流式细胞仪检测显示凋亡率下降，Bcl-2增加，Bax减少，而c-Jun变化不明显。四氢氨基吖啶（THA）组神经元存活率增加，但其他指标的变化不明显。结论：调心方对Aβ1－42神经细胞毒有保护作用，可提高细胞存活率，抑制凋亡，其抑制凋亡作用的机制可能是通过提高bcl-2、降低bax基因的蛋白表达而实现。THA对神经元存活率有提高作用，但抑制神经元凋亡的作用似不明显。调心方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于THA。     

红景天苷通过Nrf2-HO-1保护Aβ25-35诱导的原代皮层神经元损伤

目的探讨红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元损伤的保护作用。方法:随机将培养成熟的原代皮层神经分为5组:正常对照组、模型组、红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、激动剂组。后3组分别使用5μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1TBHQ培养24 h,余组正常换液。然后除正常对照组,将余组更换为终浓度为20μmol·L^-1Aβ25-35并维持各药物组终浓度的培养液,24 h后使用CCK8试剂盒测细胞活性、LDH试剂盒测细胞LDH释放量、免疫组化和Western Blot测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2等蛋白的表达水平。结果红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够提高Aβ25-35损伤后细胞的活性、减少LDH的释放改善细胞损伤,红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够增加Nrf2、HO-1的表达水平,下调Caspase-3蛋白表达水平、上调Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。锌原卟啉ZnPP可逆转红景天苷及TBHQ对Aβ25-35诱导的皮层神经元的保护作用。结论红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元细胞的保护作用,可能主要通过改善凋亡相关蛋白、上调Nrf2/HO-1信号通路表达实现。     

芍药苷预处理对皮质酮损伤皮层神经元保护作用机制研究

目的:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芍药苷预处理对皮质酮损伤的大鼠皮层神经元凋亡相关基因以及营养因子BDNF mRNA表达的影响,初步阐明芍药苷对皮质酮损伤神经元的保护机制。方法:体外培养胎鼠皮层神经元,于原代第7天加入芍药苷低、中、高浓度(0.5,2,10μmol.L-1)预处理30 min后,加入皮质酮(200μmol.L-1)损伤,采用RT-PCR检测芍药苷预处理对神经元凋亡相关基因Bcl-2,Bax,Caspase-3以及营养因子BDNF mRNA表达的影响。结果:与模型组比较,芍药苷预处理组(2,10μmol.L-1)可显著下调Bax,Caspase-3 mRNA的表达,并显著上调Bcl-2和BDNF mRNA的表达(P0.05)。结论:芍药苷预处理对皮质酮损伤的大鼠皮层神经元的保护作用与芍药苷调控神经元凋亡相关基因Bcl-2,Bax,Caspase-3 mRNA的表达直接相关,同时可能与上调神经营养因子BDNF基因表达有关。     

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

丹酚酸B对谷氨酸诱导的 PC12 细胞兴奋毒保护作用的研究

目的:研究丹酚酸B对谷氨酸诱导PC12细胞兴奋毒的保护及作用机制。方法:以谷氨酸损伤PC12细胞24 h为模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率;LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率;AO/EB双染法荧光显微镜和PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:丹酚酸B可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞的损伤,阻止细胞LDH的释放,在50～200μmol.L-1剂量呈一定的量效关系;同时,丹酚酸B明显降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,抑制谷氨酸引起的ROS的累积,降低PC12细胞的凋亡率,在50～200μmol.L-1剂量呈量效相关性。结论:在一定剂量范围内,丹酚酸B对谷氨酸损伤的PC12细胞有保护作用,其保护的机制可能与丹酚酸B减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的凋亡相关。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度;增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的。结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

小檗碱对Aβ25-35损伤大鼠皮层神经元的保护作用

目的考察小檗碱对Aβ25-35损伤的神经元的保护作用,并初步探讨其机制。方法 40μg/mL Aβ25-35作用原代培养大鼠脑皮层神经元36 h,复制阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)细胞模型,同时加入小檗碱进行干预,实验分为对照组、模型组、0.5μmol/L小檗碱组、2μmol/L小檗碱组。通过Hoechst33258染色观察神经元凋亡形态,Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术检测早期凋亡情况,Western blotting检测活化的Caspase-3蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测雷帕霉素靶(target of Rapamycin,mTOR)相关基因表达。结果与对照组比较,AD细胞模型神经元凋亡明显增加。2μmol/L小檗碱能显著减少Aβ损伤神经元早期凋亡(P<0.05),0.5、2μmol/L小檗碱均能抑制异常活化的Caspase-3蛋白表达。0.5、2μmol/L小檗碱显著下调了AD模型异常活化的mTOR mRNA和下游底物核糖体S6蛋白激酶(S6kinase,S6K)P70S6K mRNA的表达(P<0.05、0.01),同时显著上调了AD细胞模型真核细胞始动因子4E结合蛋白1(4E binding protein,4EBP1)mRNA的表达(P<0.01)。结论小檗碱对Aβ25-35损伤的原代培养大鼠皮层神经元具有一定神经保护作用,其保护作用可能是通过抑制mTOR途径实现的。     

木犀草素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:研究木犀草素对β淀粉样肽(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及其机制。方法:从BALB/c乳鼠大脑皮层培养原代神经元,实验设计为对照组,模型组(7μmol·L-1Aβ25-35),不同木犀草素给药治疗组(10~90μmol·L-1),孵育12 h,水溶性四氢唑盐(WST-1)法检测细胞存活率,Hoechst 33258/碘化丙啶(PI)双染检测细胞凋亡,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达,荧光酶标仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,ELISA法检测细胞上清中白介素(IL)-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:模型组细胞存活率为48.5%,与对照组相比显著降低(P0.05)。10,30,60,90μmol·L-1木犀草素给药组细胞存活率分别为60.8%,62.4%,71.7%,73.6%,选取60μmol·L-1木犀草素为后续实验浓度。60μmol·L-1木犀草素可以明显提高Aβ25-35损伤神经元的细胞活力,由48.5%增至71.7%(P0.01),并且能抑制神经元的凋亡。与模型组相比较,降低凋亡蛋白Caspase-3的过表达(P0.01);降低细胞内ROS,由模型组100.4%降至64.2%(P0.01)。与模型组相比,调节抗炎因子IL-10,给药组IL-10上调至634.8 ng·L-1,下调促炎因子TNF-α至176.7 ng·L-1(P0.01)。结论:木犀草素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能是抑制ROS水平,调节炎症因子从而达到抗凋亡作用。     

苦参素通过p38/JNK信号途径对海马神经元凋亡的影响

探讨苦参素(oxymatrine,OMT)对海马神经元凋亡的影响及其机制。采用MTT法测定OMT对海马神经元存活率的影响;生物化学法测定OMT对LPS诱导的海马神经元乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率的影响;Hochest 33342染色观察海马神经元凋亡形态;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法检测海马神经元中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测海马神经元中p38,p-p38,JNK,p-JNK,Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结果发现,不同剂量的OMT(0.37~6.0 g·L~(-1))和海马神经元共培养24 h,海马神经元生长状态良好;LPS刺激后,海马神经元LDH释放率增加(P0.01),JNK和p38的磷酸化水平明显增加(P0.01),Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达上调(P0.01),海马神经元凋亡增加。OMT预处理后,能明显降低海马神经元经LPS刺激后的LDH释放(P0.05或P0.01),减少p38和JNK磷酸化水平,降低Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达(P0.01),海马神经元凋亡减少。综上,OMT能降低经LPS激活的p38和JNK磷酸化水平,下调Bax/Bcl-2的比例和Caspase-3的表达,从而抑制海马神经元凋亡。OMT通过p38/JNK信号途径抑制海马神经元的凋亡。     

丹酚酸B对三氧化二砷诱导HepaRG人肝细胞损伤的保护作用

目的:探讨丹酚酸B对三氧化二砷(As_2O_3)诱导的Hepa RG人肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用5μmol·L~(-1)As_2O_3孵育24 h建立Hepa RG人肝细胞损伤模型。实验设置空白组、模型组(As_2O_35μmol·L~(-1)),单给药组(丹酚酸B 10μmol·L~(-1)),丹酚酸B高浓度组(丹酚酸B 10μmol·L~(-1)+As_2O_35μmol·L~(-1)),丹酚酸B中浓度组(丹酚酸B5μmol·L~(-1)+As_2O_35μmol·L~(-1)),丹酚酸B低浓度组(丹酚酸B 2. 5μmol·L~(-1)+As_2O_35μmol·L~(-1))。丹酚酸B预孵育2 h,弃去含药培养基,继续用5μmol·L~(-1)As_2O_3孵育24 h;实验终止,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡,Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术定量检测细胞凋亡率,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),蛋白激酶B(Akt),磷酸化Akt(p-Akt)表达对丹酚酸B的肝脏保护作用机制。结果:As_2O_3浓度依赖性的降低Hepa RG细胞的存活率(P 0. 01);丹酚酸B单独作用2 h对正常细胞活力无影响;丹酚酸B(5,10μmol·L~(-1))预孵育2 h可显著增加由As_2O_3引起的细胞存活率下降(P 0. 01)。As_2O_3导致肝细胞凋亡比例显著上升(P 0. 01),丹酚酸B(10μmol·L~(-1))预孵育可降低细胞凋亡率(P 0. 01);As_2O_3孵育24 h引起线粒体膜电位下降,丹酚酸B可维持线粒体膜电位,提示丹酚酸B的抗凋亡作用与其抑制凋亡线粒体通路有关;与As_2O_3组比较,丹酚酸B预处理升高了Bcl-2/Bax水平(P 0. 01),增加了p-Akt/Akt水平(P 0. 01)。结论:丹酚酸B对As_2O_3诱导的肝细胞损伤具有保护作用,其作用机制与维持线粒体功能、抑制肝细胞凋亡有关。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法:Aβ25-35造成PC12细胞损伤,检测细胞的存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化.采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化.Western blot法检测细胞内HO-1,Cyt C和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平.结果:芍药苷组(5,10,20 μmol·L-1)能不同程度地对抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少LDH漏出率和MDA含量,增加抗氧化酶SOD,GSH-Px和HO-1的活性,减少细胞内ROS形成,提高线粒体膜电位,减少Cyt C释放和cleaved Caspase-3蛋白的表达.结论:芍药苷对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与抑制Aβ25-35诱导的氧化应激以及减轻线粒体损伤有关.     

麸炒前后茅苍术挥发油对缺氧/复氧损伤心肌细胞的抗氧化与抗凋亡作用

目的:考察茅苍术挥发油对缺氧/复氧(H/R)损伤H9c2心肌细胞的抗氧化与抗凋亡活性,并比较生品和麸炒品的作用差异。方法:以连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)诱导H9c2缺氧/复氧损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色评估细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2同源的水溶性相关蛋白(Bax)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、BAX、BCL-2的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组心肌细胞的存活率显著降低,SOD活力、Bcl-2 mRNA、蛋白表达明显降低,LDH、MDA含量、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、cleaved Caspase-3、BAX蛋白表达明显升高(P<0.05)。生品及麸炒茅苍术挥发油1μg/mL～100μg/mL能够提高H9c2心肌细胞的存活率;提高SOD的活力,降低LDH和MDA的含量;上调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,下调Caspase-3、Bax mRNA的表达;下调cleaved Caspase-3、BAX的蛋白表达,与同剂量的生品挥发油比较,麸炒品挥发油具有更好的作用。结论:茅苍术挥发油对H/R损伤心肌细胞具有抗氧化和抗凋亡的作用,麸炒品挥发油的作用优于生品挥发油。     

阿魏酸对Aβ25-35诱导PC12细胞的保护机制研究

目的:观察阿魏酸对β-淀粉样蛋白25-35(βamyloid peptide25-35,Aβ25-35)诱导的阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)模型细胞的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,以不同浓度阿魏酸对抗干预,以MTT比色法观测阿魏酸对AD模型细胞增殖的保护作用,以比色法检测阿魏酸对AD模型细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的影响。用RT-PCR法检测Apbb1,乙酰胆碱酯酶(Ache)基因的表达。结果:阿魏酸对损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,阿魏酸在2 mmol/L时可明显降低模型细胞培养液中MDA、LDH含量,提高SOD活力,差异有统计学意义(P<0.01)。阿魏酸可下调Apbb1和Ache的mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:阿魏酸对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能与提高细胞抗氧化能力相关,与下调Apbb1、Ache的mRNA表达量相关。     

肉苁蓉多糖对阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力及海马神经元Bcl-2和caspase-3表达的影响

目的 观察肉苁蓉多糖对阿尔茨海默病(Alzheimer'sdiseases,AD)模型大鼠的学习记忆能力及脑内海马神经元Bcl-2和Caspase-3表达的影响.方法 采用双侧海马注射Aβ25-35制备AD大鼠模型,采用Morris水迷宫检测肉苁蓉多糖对模型大鼠认知功能的的影响,通过病理形态观察肉苁蓉多糖对模型大鼠的脑保护作用.采用Western观察肉苁蓉多糖对模型大鼠海马神经元Bcl-2和Caspase-3的表达的影响.结果 肉苁蓉多糖(20,40,80 mg/kg,ig 6d)能改善模型大鼠的学习记忆能力,减轻大鼠海马神经元的损伤,增强受损海马神经元Bcl-2的表达,抑制Caspase-3的表达.结论 肉苁蓉多糖能通过增强Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达,抑制海马神经元的凋亡,改善AD大鼠学习记忆能力.