右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头血管修复的实验研究

目的：观察右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头的血管修复及疗效,探讨该方法在治疗冷冻坏死股骨头的作用机理。方法：毕格犬24只,随机分为4组：A组（模型组）、B组（右归饮组）、C组（干细胞介入组）、D组（干细胞介入加右归饮组）。液氮冷冻法造模;分离、培养、增殖骨髓基质干细胞（MSCs）;造模完成,C、D组行动脉灌注MSCs 1mL（细胞密度：5×10^6-1×10^7/mL）;术后,B、D组每天予以右归饮100mL;治疗4周及8周后分批处死。采用DSA、病理学,免疫组织化学和RT-PCR观察股骨头坏死修复、血管修复及VEGF、TGF-β表达情况。结果：DSA观察：D组的血管数量及直径较C组明显改善（P〈0.01）;组织病理学及免疫组织化学：各治疗组较A组的结构有明显改善,D组较其他各组的VEGF、TGF-β阳性表达率都明显增高（P〈0.01）;RT-PCR：D组VEGF、TGF-β较其他各组表达量增多（P〈0.01,P〈0.05）,各治疗组的表达都高于A组（P〈0.01）。讨论：右归饮联合干细胞介入法能够促进VEGF、TGF-β的表达增强,能够有效地改善坏死股骨头的血供,促进坏死修复。     

右归饮治疗激素性股骨头坏死的研究

目的:观察右归饮治疗SD大鼠激素性股骨头的疗效,探讨其药物作用机制及指导临床实践。方法:取30只SD大鼠随机分成3组:正常对照组、右归饮组、激素模型组;右归饮组和激素模型组采用大肠杆菌内毒素腹腔联合甲泼尼松龙琥珀酸钠进行造模,正常对照组在给予等量0.9%氯化钠溶液注射。右归饮组在造模的同时,每天右归饮灌胃,连续8周,激素模型组和正常对照组予等容积0.9%氯化钠溶液代替。各种动物在第8周末进行行为学检测,并取血测定血脂和血凝指标。结果:右归饮组能降低血脂中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白及血凝PT和APTT等相关指标(P<0.01),在高密度脂蛋白方面无作用。右归饮能改善大鼠一般情况和行为学中旷场试验、垂直得分、抓力等指标(P<0.05)。结论:右归饮对于激素性股骨头坏死具有预防和治疗作用。     

右归饮、鹿马片预防激素性股骨头坏死的实验研究

目的：探讨温补肾阳法（右归饮、鹿马片）对激素性股骨头坏死的预防作用,并判断动物药（鹿马片）和植物药（右归饮）的疗效差别。方法：用外源笥糖皮激素诱导家兔股骨头坏死模型为对象,从ＨＰＡ轴、性激素、组织学角度探讨温补肾阳法对激素性股骨头坏死的预防作用。结果：右归饮能拮抗激素诱导股骨头坏死ＨＰＡ轴的抑制状态,纠正紊乱的性激素水平。鹿马片亦能拮抗激素诱导股骨头坏死ＨＰＡ轴的抑制状态,但加剧性激素水平的紊乱。     

不同浓度右归饮对OC形成分化的影响

目的：探讨不同浓度右归饮对体外培养破骨细胞形成分化的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以地塞米松组、地塞米松组＋不同浓度右归饮的培养液培养破骨细胞,用RT—PCR测定ATPae a3基因相对表达变化,分析破骨细胞骨吸收性。结果：两组间对比,地塞米松组＋30％右归饮组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0．05,P〈0．01）,地塞米松组＋30％右归饮组的ATPase a3基因表达量与其他对照血清组相比明显减少（P〈0．01）.结论：30％右归饮合药血清抑制破骨细胞的形成和分化,抑制破骨细胞的骨吸收活性能力最强。     

右归饮对体外培养破骨细胞分化与功能的影响

目的：探讨右归饮对体外培养破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以空白对照血清、地塞米松＋对照血清、地塞米松＋右归饮血清的培养液来培养破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;采用吖啶橙荧光染色法计数破骨细胞的凋亡率;用RT-PCR测定ATPase a3基因相对表达变化分析破骨细胞骨吸收活性。结果：与空白对照血清组和对照血清＋地塞米松组相比,地塞米松＋右归饮血清组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0.01,P〈0.05）,破骨细胞的凋亡率明显增加（P〈0.01）,ATPase a3基因表达明显减少（P〈0.01）。结论：右归饮可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗激素性股骨头坏死的作用。     

右归饮

右归饮治命门衰,地草怀山枸杞子,左归饮主真阴弱,附桂山萸杜仲施。便溏阳痿服之宜。附桂当除易麦龟。     

右归饮促进骨折愈合的最佳浓度的实验研究

目的:观察右归饮不同浓度促进骨折愈合的效果,获得右归饮治疗骨折的最佳浓度,并获得右归饮治疗的最佳时间。方法:将120只SD雄性大鼠,体质量(250±20)g,随机分为4组:骨折组、低浓度右归饮+骨折组、中浓度右归饮+骨折组、高浓度右归饮+骨折组,每组6只。造模完成后,骨折组用生理盐水灌胃,右归饮组灌服不同浓度右归饮汤剂,于造模后3、7、14、21、28 d处死大鼠取骨痂进行影像形态学及QPCR检测。结果:在各个时间点高、中、低浓度右归饮组均较对照组骨痂量明显增多,VEGF表达量显著升高(P0.01),表达高峰出现时间明显提前、维持时间延长,且与浓度呈一定的正相关。结论:右归饮能明显促进骨折愈合,高浓度为治疗骨折的最佳浓度,并且应在早期即开始使用。     

右归饮含药血清对人骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的影响

目的：观察右归饮对体外人骨髓分化成骨细胞的影响。方法：将右归饮含药血清加入人骨髓基质干细胞诱导分化成骨细胞的培养体系,采用细胞形态学观察、MTT法及细胞内ALP含量检测反映其促进成骨的功能。结果：形态学观察及椰法表明,右归饮对成骨细胞的增殖起促进作用,钙结节染色及细胞内ALP含量测定表明右归饮对成骨细胞的活性有促进作用（P〈0．05）。结论：右归饮对人骨髓基质干细胞诱导分化的成骨细胞的成骨起促进作用。     

右归饮联合金葡液治疗早期激素性股骨头坏死72例

目的:观察右归饮联合金葡液治疗早期激素性股骨头坏死的临床疗效。方法:72例患者口服右归饮,3个月为1疗程,连续服用2个疗程;同时患侧注射金葡液注射液,8周为1疗程,连续注射3个疗程。结果:72例治愈28例,显效31例,有效13例。总有效率100%。结论:右归饮联合金葡液治疗早期激素性股骨头坏死能有效改善患者的症状和体征,在一定程度上促进坏死的修复。     

右归饮的毒性研究

目的:评价右归饮口服给药的安全性,为临床安全用药提供合理的科学依据。方法:1.以右归饮最大药液浓度和小鼠最大灌胃体积,24 h内3次给予小鼠,检测一般体征、血常规、血生化指标以观察14 d内动物的急性毒性反应。2.大鼠灌胃给予60 g/kg右归饮,每天1次,连续90 d,停药后观察30 d,观察大鼠活动、形态、每周体重变化和死亡情况,检测其血常规、血生化和主要脏器大体形态、脏器指数、病理形态。结果:右归饮给药后小鼠在14 d的观察期内未出现死亡和异常情况;与空白组对比,右归饮组体重、卵巢、子宫、胸腺、脾、心、肾、胃、脑等主要脏器指数无显著性差异;血常规和血生化指标均无显著改变。右归饮给药后大鼠在给药期及恢复期内未见死亡;与空白组相比,右归饮组大鼠在各个时间点的外观形态均无显著差异,大鼠体重、脑、胸腺、心、肝、肾、肾上腺、子宫、卵巢、睾丸、附睾等主要脏器的外观形态和脏器系数均无显著差异。给药90 d及停药30 d后,与空白组相比,右归饮组血清中ALT、AST、ALP、ALB、TP、TG、GLU、T-CHO和CREA均无显著差异。给药90 d后,血清中UREA明显降低,CK明显增高;停药30 d后,血清中ALT、AST、ALP、TP、GLU、T-CHO、UREA和CK有显著差异,但都在正常大鼠的生理范围内,血常规各指标无明显变化,脑、胸腺、心、肝、肾、肾上腺、子宫、卵巢、睾丸、附睾等主要脏器的脏器系数及病理学检查均无显著变化。结论:右归饮24小时内3次灌胃给药共计720 g/kg,相当于人临床拟用药量(81 g/kg)的533倍,未见小鼠显著毒性反应;60 g/kg连续灌胃给药90 d,相当于人临床拟用药量(81 g/kg)的44倍,未见大鼠显著毒性反应。提示右归饮口服用药安全性较高。     

针刺联合间充质干细胞移植的实验研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是机体的起源细胞,是形成人体各种组织器官的始祖细胞。因其具有自我复制和多向分化的能力,可在特定条件下转变成为多种构成人体组织或器官的细胞。针刺联合MSCs移植的研究已取得了一定的进展,显示出潜在的应用前景。本文整理、总结了近10年来针刺联合MSCs移植疗法的实验研究文献,以治疗不同种类疾病为切入点,综述目前针刺联合MSCs移植疗法的基础实验研究进展。针刺联合MSCs移植的生物学机制可能与针刺能增加MSCs 的存活率、诱导MSCs定向分化有关。但是,针刺联合MSCs移植要作为一项常规技术应用于临床实践,其内在机制尚需进一步研究阐明。     

黄芪注射液联合间质干细胞对大鼠脊髓损伤修复作用的实验研究

目的研究黄芪注射液与间质干细胞联合应用对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法Wistar大鼠120只随机分成假手术组、模型组、PBS液对照组、黄芪注射液对照组、大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)移植治疗组和rMSCs移植加黄芪注射液治疗组。造模后3 d治疗组经脊髓局部注射rMSCs和脊髓局部注射rMSCs同时加用黄芪注射液腹腔注射,对照组则分别注射PBS液和黄芪注射液。移植后7、14、21、28天分别行(Basso Beattie Bresnahan,BBB)评分法检测大鼠神经功能恢复情况,进一步取脊髓组织作病理学检查,并应用双标免疫组化检测5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记rMSCs的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元中丝蛋白(NF-M)表达情况。结果治疗组较对照组损伤脊髓修复明显,神经功能评分显著提高(P0.05)。rMSCs移植加黄芪注射液治疗组在不同时间点的神经功能评分都高于rMSCs移植治疗组。脊髓组织病理切片显示rMSCs移植加黄芪注射液治疗组较rMSCs移植治疗组组织水肿和炎性细胞浸润减轻更明显,胶质细胞增生更活跃。双标免疫组化显示移植的rMSCs在宿主脊髓中存活,从第7 d开始即有GFAP和NF-M表达并向损伤部位迁移。rMSCs加黄芪注射液治疗组中GFAP、NF-M阳性细胞数目均较rMSCs移植治疗组增多(P0.05)。结论rMSCs移植是治疗脊髓损伤的有效方法;黄芪注射液在体内有诱导rMSCs向神经细胞分化的能力,并有协同rMSCs促进大鼠脊髓损伤修复的作用。     

中药结合骨髓间充质干细胞移植治疗股骨头坏死的研究进展

股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,ONFH）是骨科常见病、多发病,是一种进展性和致残性疾病,主要发生在30～50岁的中青年,约有半数患者累及双侧股骨头,是对髋关节具有特殊破坏性的退行性病变,最终导致髋关节功能障碍,严重影响患者生活质量,造成沉重的家庭和社会负担。其发病机制的学说有很多,但目前尚未完全阐明,因此治疗比较困难。虽然ONFH的治疗方法很多,但尚没有一种适应症合理、疗效确切的方法。     

单纯激素造成犬早期股骨头坏死模型的实验研究

目的单纯使用激素造成杂种犬的股骨头坏死模型,观察单纯激素所造成犬股骨头坏死的特点,并与现有模型及临床进行比较。方法采用健康未成年杂种犬9只,每周2次肌肉注射甲基强的松龙,每个月进行数字X线(CR)及核磁共振(MRI)检查,并于2个月时取股骨头行光镜及电镜观察。结果在部分犬的股骨头发现早期股骨头坏死的组织学表现,这些病理改变发生在股骨头及干骺端的各个部位。结论①单纯使用激素可以造成杂种犬股骨头坏死模型,但并非一定引起股骨头坏死。②激素本身可引起血管内皮的损伤。③激素引起骨坏死的表现要早于软骨的改变,但在软骨面发生塌陷前软骨的损伤已经存在。④生物力学在骨坏死的表现中起到一定作用。     

黄芪联合鞘内移植间充质干细胞对大鼠缺氧缺血性脑损伤修复作用的研究

目的:研究黄芪注射液联合鞘内移植大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)对大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)修复的影响。方法:115只Wistar大鼠随机分成假手术组、模型组、PBS对照组、黄芪注射液对照组、rMSCs治疗组和rMSCs加黄芪注射液治疗组。造模后3天治疗组鞘内注射rMSCs,或同时腹腔注射黄芪注射液,对照组鞘内注射PBS或腹腔注射黄芪注射液,造模后24天行Morris水迷宫实验检测大鼠学习、记忆能力,移植后1、4、7、14、21、28天分别取脑组织作病理学检查,并应用双标免疫组化检测经5-溴-2-脱氧嘧啶(BrdU)标记rMSCs的神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况。结果:治疗组学习、记忆能力较对照组有显著改善(P<0.05),rMSCs加黄芪注射液治疗组第3天平均逃避潜伏期显著低于rMSCs治疗组(P<0.05)。脑组织病理切片显示rMSCs加黄芪治疗组较rMSCs治疗组脑组织水肿、神经细胞变性和坏死程度减轻更明显。双标免疫组化显示rMSCs移植后1天就出现在脑组织,并表达NSE与GFAP。rMSCs加黄芪治疗组BrdU阳性细胞数除移植后14天外均显著多于rMSCs治疗组(P<0.05),NSE阳性率移植后1、7、14天显著高于rMSCs治疗组(P<0.05),GFAP阳性率除移植后14天外均显著高于rMSCs治疗组(P<0.05)。结论:鞘内移植rMSCs是治疗大鼠HIBD的有效方法;黄芪注射液在体内有诱导rMSCs向神经细胞分化的能力,并有协同rMSCs促进大鼠HIBD修复的作用。     

富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死的影响

目的:研究富血小板血浆(PRP)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)对兔股骨头坏死的治疗效果.方法:随机将50只新西兰兔随机分为空白对照组、模型组、PRP(3％)组、BMSCs(1×106/mL)组、PRP与BMSCs联合组.无菌环境下,建立兔股骨头坏死模型,术后4周PRP组1次性注射植入RPR 12 mg,BMSCs组单纯1次性注射植入BMSCs 1 mL,PRP与BMSCs联合组股骨头内髓芯减压后1次性注射植入BMSCs 1 mL与PRP12 mg复合物,空白对照组与模型组不植入任何物质作为对照.造模后第12周,取材.采用HE染色,光镜下观察骨髓腔内骨小梁结构和骨细胞、脂肪细胞的变化情况;蛋白质印迹法(Western blot法)检测损伤的兔股骨髓中血小板衍生因子(PDGF)蛋白的表达水平.结果:与空白对照组比较,模型组骨髓腔内骨小梁变细或坏死,骨细胞减少,骨头疏松,脂肪细胞增多.骨陷窝空缺率高(P＜0.05).与模型组比较,各治疗组骨髓腔内骨小梁变粗,排列整齐,骨细胞增多,脂肪细胞减少.骨陷窝空缺率降低,差异有显著性意义(P＜0.05).PRP组、BMSCs 组、PRP与BMSCs联合组骨髓组织PDGF蛋白表达水平与模型组相比均有明显的提高,其中PRP与BMSCs联合组PDGF蛋白表达水平最高(P＜0.05).结论:PRP,BMSCs在一定程度上可使骨细胞增殖,减少骨陷窝空缺率,抑制骨髓腔内脂肪细胞,增加损伤股骨头中骨髓组织PDGF蛋白表达,促进股骨头再生.     

中药内服联合针刀治疗早期股骨头坏死

目的观察治疗早期中药内服联合针刀股骨头坏死的临床疗效。方法将60例股骨头坏死患者按1∶1随机分为治疗组和对照组,每组30例,对照组服用本院制剂活血生骨止痛汤,治疗组在对照组基础上,加用针刀松解减压治疗,在治疗过程中两组患者均配合康复锻炼,对照。结果治疗组总有效率为86.68%,对照组为63.32%,治疗组明显优于对照组,两组数据经统计学处理后有统计学意义(P0.05)。结论使用中药内服联合针刀治疗早期股骨头坏死能迅速缓解髋关节囊内高压或关节囊积液所引起的疼痛不适,具有较好的近中期疗效,方法简便,费用低廉,值得推广使用。     

骨髓多能干细胞动脉灌注治疗股骨头坏死的实验研究

目的探讨骨髓多能干细胞动脉灌注治疗股骨头坏死的疗效和机理研究。方法利用Shwartzman反应加大剂量甲基强的松龙造成兔股骨头坏死模型,造模成功后在兔股骨抽取骨髓,进行体外分离培养骨髓多能干细胞,使之大量增殖。兔随机分为4组：对照组(注射生理盐水)、丹参组(注射丹参和尿激酶)、干细胞组(注射骨髓多能干细胞)、综合组(注射骨髓多能干细胞、丹参和尿激酶),于治疗后的2、4周分批处死动物后进行各种指标检测,包括X线钼靶摄影、常规HE染色切片、四环素标记荧光显微镜观察、电镜扫描超微结构观察。结果兔造模成功后出现股骨头坏死表现,高选择性旋股内、外动脉插管药物治疗后2、4周,X线表现骨质密度改变明显好转。病理组织学表现空骨陷窝减少,成骨细胞增多,新骨形成。四环素荧光标记显示坏死修复区荧光带鲜亮,边界增宽。电镜扫描下可见坏死区纤维组织杂乱,成骨细胞内细胞器丰富,空骨陷窝减少。经多能干细胞动脉灌注治疗后显示在时间和效果方面更优越。结论高选择性股动脉灌注药物治疗股骨头坏死能加速兔股骨头的再血管化和再骨化进程。骨髓多能干细胞比丹参显效时间更快捷,疗效更显著。     

激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓成骨活性下降的研究

目的：观察激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化为成骨细胞的改变。方法：取激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓，建立人骨髓间充质细胞诱导分化成骨细胞的培养体系，采用观察细胞学形态、MTT法、细胞内ALP含量检测及矿化结节形成，并与正常组进行比较。结果：与正常组相比，MTT测定细胞增殖、矿化结节染色及细胞内ALP含量测定表明激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化成骨细胞的能力及活性下降（P〈0．01）。结论：激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的增殖能力和活性下降。