蛇毒三肽pENW对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究蛇毒三肽pENW对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:用体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,H2O2(300μmol/L,12h)模拟氧化损伤模型;药物处理组分别加入不同剂量的蛇毒三肽pENW(10-4mol/L,10-5mol/L,10-6mol/L)以及阳性对照药依达拉奉(10-5mol/L);用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH-Px)的含量;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:蛇毒三肽pENW(10-4mol/L,10-5mol/L)能够显著抑制H2O2对人脐静脉内皮细胞的氧化损伤作用,降低H2O2诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡,降低LDH漏出率,提高人脐静脉内皮细胞中SOD、GSH-Px活性。结论:蛇毒三肽pENW可降低过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的氧化损伤作用,其保护作用可能与抗氧化及抑制细胞凋亡有关。     

银杏内酯B对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:研究银杏内酯B对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养第4～6代HUVECs,分为空白对照组、H2O2损伤模型组(300μmol/L)、银杏内酯B(1、5、10μmol/L)预处理2 h加H2O2损伤组。用MTT比色法检测HUVECs活力,试剂盒检测丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,一氧化氮合酶(NOS)活性,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧(ROS),流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,模型组细胞活力显著降低、MDA和LDH含量显著增加、NO含量及NOS活性显著下降、细胞凋亡率显著,提示H2O2明显造成HUVECs损伤和死亡。银杏内酯B使内皮细胞增殖活力显著增加、MDA和LDH含量显著减少、NO含量及SOD、GSH、NOS活性显著增加、细胞凋亡率显著降低,提示银杏内酯B可干扰H2O2对内皮细胞的损伤作用。结论:银杏内酯B具有抗氧化作用,能抑制H2O2诱导内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,从而产生保护血管内皮细胞的作用。     

风轮菜乙醇提取物对血管内皮细胞的保护作用研究

目的 研究风轮菜乙醇提取物(EJCT)对血管内皮细胞的保护作用及机制.方法 分别用过氧化氢 (H2O2 )和高糖建立体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型.MTT法检测细胞存活率;用试剂盒方法检测细胞超氧化物歧化酶 (SOD)和乳酸脱氢酶 (LDH)活力;用Griess 法测定上清液中NO2-浓度反映内皮细胞释放的一氧化氮 (NO).结果 不同浓度的EJCT能明显提高H2O2和高糖损伤的内皮细胞存活率,使H2O2 损伤的内皮细胞内低下的SOD活力回升,降低高糖诱导的内皮细胞LDH释放.另外,EJCT(3,10,30,100 mg/L)能增加HUVECs培养液中NO含量.结论 风轮菜乙醇提取物对血管内皮细胞具有保护作用,机制可能与其抗氧化和促进NO的合成有关.     

红景天苷对高糖致内皮细胞表面损伤的保护作用及机制研究

目的:探究红景天苷对高糖诱导下内皮细胞表面损伤的保护作用及机制。方法:对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以高糖诱导其损伤,并用10-6、10-5、10-4mol/L的红景天苷处理,检测并比较HUVECs细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞凋亡、细胞表面血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、ATP、Bcl-2、Bax、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和活性氧(ROS)等指标。结果:与正常对照组比较,模型组细胞活力、SOD、ATP和Bcl-2显著降低(P0.05),LDH、MDA、细胞凋亡率、VCAM-1、ICAM-1、ATP、Bcl-2、Bax、TNF-α、IL-1α、IL-6、MCP-1和ROS显著升高(P0.05)。与模型组比较,红景天苷中、高浓度组细胞活力、SOD、ATP、Bcl-2显著升高,LDH、MDA、细胞凋亡率、VCAM-1、ICAM-1、Bax、TNF-β、IL-1α、IL-6、MCP-1、ROS显著降低(P0.05)。结论:红景天苷对高糖诱导下的HUVECs损伤具有保护作用,其作用呈浓度依赖性,其机理可能与抗氧化、抗凋亡及抑制炎症反应有关。     

槲皮素调控内质网应激抑制H_2O_2诱导脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的研究槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法体外培养脐静脉内皮细胞,H2O2作用于HUVECs诱导其凋亡,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-blot检测GRP78、XBP1及caspase-3蛋白表达。结果 H2O2呈剂量依赖性降低内皮细胞活力,并引起细胞凋亡。其中500μmol/L H2O2作用于细胞后,与正常组相比,细胞活力明显受到抑制,且GRP78、XBP1、caspase-3等蛋白含量明显增加(P0.01);槲皮素预处理后,随着槲皮素浓度增加,细胞活力随之增加;与模型组相比,10μmol/L槲皮素能够显著抑制细胞凋亡,GRP78、XBP1、caspase-3等表达降低(P0.01)。结论槲皮素能抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,该作用可能与下调GRP78、XBP1、caspase-3等表达有关。     

原花青素对过氧化氢损伤内皮细胞SOD、GSH-PX活性的影响

目的 观察原花青素对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组、H2O2损伤组、H2O2+VitC组、H2O2+原花青素5、25、50μmol/L组.将750μmol/L H202作用于加入Vit C及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测原花青素对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用;用流式细胞仪分析-AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;定量检测各实验组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力.结果 内皮细胞H2O2损伤后吸光度(OD)低于空白对照组,原花青素预处理后OD值增加且呈剂量依赖性;H2O2损伤可引起细胞SOD及GSH-PX活性明显降低,原花青素能维持SOD、GSH-PX活性,且呈剂量依赖性,各指标差异有显著性,并且呈剂量依赖性抑制H2O2诱导的内皮细胞的凋亡.结论 原花青素能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤及凋亡,其作用可能与维持SOD、GSH-PX活性有关.     

淫羊藿苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导人脐静脉内皮细胞的损伤及其机制。方法人脐静脉内皮细胞株分别培养在含5.5mmol/L葡萄糖(正常对照组)、5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇(高渗对照组)、30mmol/L葡萄糖(高糖损伤组)、30mmol/L葡萄糖+10μmol/L淫羊藿苷(低剂量淫羊藿苷组)和30mmol/L葡萄糖+100μmol/L淫羊藿苷(高剂量淫羊藿苷组)的培养基中培养48h,分别进行细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶及一氧化氮含量、细胞丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力的测定。结果:高糖损伤组及低、高剂量淫羊藿苷组的细胞活力、乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力与正常对照组比差异均有统计学意义(P<0.01);低、高剂量淫羊藿苷组的细胞活力、乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力与高糖损伤组比差异均有统计学意义(P<0.01)。高渗对照组各项指标与正常对照组相比无显著性差异。结论淫羊藿苷对体外高糖损伤的内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高内皮细胞抗氧化酶活力,维持NO正常水平;减少细胞膜脂质过氧化损伤,维持膜完整性而实现的。     

糖痹康对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察糖痹康大鼠含药血清对高糖造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:以CCK-8法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响;根据实验结果选择葡萄糖浓度为5.55mmol/L组为正常组,葡萄糖浓度为25mmol/L组做为模型组。然后制备正常组,弥可保组,糖痹康组的大鼠含药血清,将含药血清作用于高糖损伤的人脐静脉内皮细胞,分为正常组、高糖模型组、高糖弥可保组、高糖糖痹康低、中、高剂量组,并通过测定培养液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活力,探讨糖痹康对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果:与高糖模型组比较,糖痹康含药血清能减少细胞MDA、LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论:糖痹康对高糖损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用,间接的起到对周围神经的保护作用。     

二苯乙烯苷联合PDTC抗H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为正常对照组、模型组(300 μmol·L-1H2O2)、TSG组(10 μmol·L-1TSG+300μmol·L-1H2O2)、联合预处理组(75μmol·L-1PDTC+10 μmol·L-1TSG+300 μmol·L-1H2O2)、PDTC组(75 μmol·L-1 PDTC+300 μmol·L-1H2O2),采用MTT法检测细胞增殖率,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3,核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,细胞增殖率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达增加,差异均有显著性(P＜0.01).与模型组相比,经TSG或PDTC预处理后,细胞的增殖率增加,细胞凋亡率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达显著减少(P＜0.01).联合预处理组与PDTC组或TSG组相比,细胞活力增加,细胞凋亡率下降;Caspase-3,NF-κB蛋白表达进一步减少(P＜0.01).结论:PDTC或TSG预处理可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,PDTC可联合TSG协同发挥抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其机制与抑制NF-κB、Caspase-3的表达有关.     

加减清营汤对H2O2损伤的人脐静脉内皮细胞ECV304 VEGF表达的影响

目的:观察加减清营汤对H2O2损伤的人脐静脉内皮细胞(ECV304)VEGF表达的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV304),随机分成正常组、模型组、血清对照组、阳性药物对照组、加减清营汤含药血清组。加减清营汤含药血清组用加减清营汤含药血清进行干预。用380μmol/L H2O2损伤细胞,培养24h后收集细胞总蛋白,用Western-blotting法检测VEGF表达水平。结果:氧化应激状态下ECV304 VEGF的表达有所增加,加减清营汤含药血清则能显著提高VEGF的表达以有效应对氧化损伤。结论:加减清营汤能促进H2O2氧化损伤的血管内皮细胞的代偿性修复。